分子生物学试题.pdf

1、 名词解释（25） AFLP RFLP CAP genome mRNA in situ hybrization STS SNP SSR 基因芯片 FISH EST 还 有一个二、基因突变的概念及可能的途径（25） 1）化学诱变 2）物理诱变 3）t-dna插入突变 4）插入、缺失 5）碱基修复的概念三、cDNA文库的构建（25） 1） cDNA的合成 2） cDNA克隆 3） 文库质量的概念四、 试述一条反向遗传克隆功能基因的途径（25） 08中科院分子生物学试题 1、表观遗传，及调控方式，还有蛋白质通过哪些共价修饰调控其功 能？ 2、蛋白质与DNA结合的方法和比较，EMSA和DNase1足迹法？ 3、密码子改造研究新蛋白药物，原理，关键和方法 4、设计研究未知基因（预测两个跨膜区域）功能的实验方案（不低于4 个） 5、质粒改造原则 6、诱导全能干细胞的方法，实验方案等。（去年的nature上发表的） 个人认为除了第二和五题之外，其它的题目都属于一骑绝尘的，要么 会，要么不会，想蒙是绝对没门的。 这门专业课能及格，我想都不错了，特别是1，3，6题。 不知道大家做的如何，反正第一题，我是意思都没看懂，不知道连续的 3问是不是指1个东西。还是最后1问是单独的，与前面的2问无关 2008年中科院动物所生物化学与分子生物学 博士题 一 名词解释 密码子的变偶性 程序性死亡 冈崎片断 单克隆抗体 基因治疗 SD序列 移码突变 Z型DNA 蛋白质组学 反向PCR 二 大题 简述真核生物5帽子结构和功能。 简述NO作为信号分子的调节作用。 运用你所学的知识和可能的实验经验，研究一个新基因的生理功能。 已知A和B蛋白质作用于同一生理功能，至少用三种方法证明A和B之间 有无相互作用，并给出所用原理。 结合当前科学前沿，阐述真核生物基因表达调控。 2008年浙江大学分子生物学考博试题 问答题：双向电泳的原理及应用 三种分子标记方法 描述两种大规模研究的方法 年诺贝尔生理与医学奖授予什么技术，该技术的应用 人类基因组中有一基因为，提到的基因组为微克， 计算该基因的含量 名词解释：免疫沉淀，剪切，核糖开关，分子伴侣， 浙江大学2006秋博分子生物学考题 分子生物学（甲） 名词解释（每个4分） 原位杂交、顺式作用元件、信号肽、选择性剪接、C-值矛盾（c-value paradox） 问答题（每个20分） 1、RNAi的优缺点，如何避免改正 2、何为正向遗传学、反向遗传学，阐述一条反向遗传学研究功能基因 的方法 3、真核生物基因表达调控的途径 4、近年分子生物学中诺贝尔奖有哪些，请举二例，说明内容和意义 2008年华中科技大学生化与分子考试试题 生化与分子共七道题： 1. 蛋白质的结构原则 2. 进化中为什么选择蛋白和RNA作为酶 3.关于盐浓度对蛋白与DNA结合能力的影响（具体的题太长，叙述难免 出错，所有把考点给出来大家斟酌） 4.基因功能的研究方法，简述3类及原理 5.真核与原核细胞的启动子的结构和功能及翻译起始的差异与共同点 6.关于基因CDNA克隆和蛋白表达的方法的实验设计题！有一植物中共 有的基因与某重要功能有关。请设计试验并叙述相关试验技术和方法， 在烟叶中克隆该基因的CDNA全长，并获得用于获取抗体的蛋白！ 7.基因靶向技术的原理和意义！（这个话题这两年很火，情理之中，呵 呵！） 2008年最新协和医科大学博士生入学专业分子生物学考试试题 第一部分：填空 疯牛病的致病原因 什么是原病毒 SD序列 信号肽识别序列的组成-部分和-部分 乳糖操纵子的调控序列 第二部分：大题，2道 1.给了一段序列要求涉及合适的引物，扩增出改序列，（考点为引物设 计原则） 2.给了一个质粒序列，和一段待插入的基因组DNA片段，然后酶切后电 泳，酶切后电泳，三个泳道有三种不同的条带，分析其产生情况（考点 为克隆部分） 第三部分： 1.紫外线过度照射后容易引发皮肤癌，正常机体通过何种机制修复 2.介绍酵母双杂交的原理和应用 3.举例说明小RNA在发育中的作用和意义 4.目前一种观点认为“转录后调控”这种说法不妥，你认为呢 5.（1）转座子和内含子序列是不是“垃圾序列” （2）随着表观遗传学和小分子RNA的研究进展，许多人认为“中心法 则”已经过时，请谈一下你对此观点的看法 中科院微生物所分子生物学（专业） 一、英文缩写，要求写出英文全称，共15个， RT-PCR、MHC、EST、AUS、 二、解释并比较，共5个，全是英文名词。 1。antigenic shift 和 antigenic drift 其他的记不得了 三、简答题6个 2。因子和因子在转录过程中的作用。 3。16SrRNA的分子大小、结构特点和生物学作用。 4。在古细菌和动物细胞中各有一种蛋白质，已知它们的cDNA 3端序 列，设计试验分别找出其5端序列。 6。什么是宏基因组？基本研究路线策略如何？ 四、问答题4个 2。已知某质粒中寺艘欢涡蛄校-D），这段序列两端为两个不同的酶 切位点（同尾酶S、D位点），序列附近的质粒序列中有另外一个酶切 位点，请设计试验，克隆出四个首尾相连的S-D序列的质粒。 第三军医大学2001年分子生物学（博士） 一、 名词解释： 1 SNP 2 Cistron 3 Competent cell 4 Tm 5 cDNA 二、 简要说明下列实验原理 1 PCR 2 Lowry法测蛋白质浓度 3 SDSPAGE 4 紫外线吸收法测核酸浓度 三、 说明下列酶的作用特点与性质 1 DNA连接酶 2 DNA内切酶： 3 光复合酶： 4 大肠杆菌DNA聚合酶 四、 问答题 1 试述蛋白组学研究对医学可能产生的影响。 2 试总结将外源基因导入细胞的各种方法并简要评价它的优缺点。 3 假如从一个成人的正常饮食中仅去除核酸成份一年后，对此人会有 那些影响，试根据核酸代谢的知识说明判断的理由。 第三军医大学2000年分子生物学（博士） 一 名词解释： 1 调节酸： 2 受体下向调节： 3 RTPCR： 4 Northern blot： 5 cDNA文库： 6 hnRNA： 7 分子克隆： 8 ATP泛素蛋白质 降解系统： 二 二 问答题： 1 试举例说明蛋白质的结构与功能关系： 2 试述糖异生原料的来源，糖异生途径的调节及其意义？ 3 试述真核细胞基因表达转录水平调节机制？ 中科院遗传所博士研究生入学考试试题 一九九六年分子遗传学 一、 请说明高等动植物的基因工程与大肠杆菌基因工程的异同。什么是当前 真核生物基因工程的前沿？你认为目前动植物基因工程进一步发展的瓶 颈是什么？（20分） 二、 在遗传学的发展中模式生物的应用起了重要的作用，请用一种你最熟悉 的模式生物，较为系统地阐述应用该模式生物进行研究对分子遗传学的 贡献。（15分） 三、 从突变产生的机制看能否实现定向突变？试从离体和活体两种情况予以 说明。（15分） 四、 什么是基因组大小与C值的矛盾？造成这种矛盾的因素有哪些？如何估 计真核生物基因组的基因数目？在进化过程中自然选择是否作用于基因 组的大小，请阐述你的观点。（15分） 五、 水稻黄矮病毒含有负链RNA基因组，在完成对该病毒核衣壳蛋白基因 （N）序列测定的基础上，将N的编码序列置于水稻Actl基因（是一种组 成性表达的基因）的启动子下游，通过基因枪方法导入一个水稻的粳稻 品种，研究结果表明转基因的水稻植株在攻毒试验中表现出对黄矮病毒 的抗性。请你进一步设计实验，证明以下两点： 1 转基因水稻的抗性确实是由于N基因导入水稻基因组表达的结果，而不 是在转化过程中由于突变造成的； 2 转基因水稻的抗性是由于N基因的转录产物造成的，而不是该基因的翻 译产物造成的。（20分） 六、 限制性核酸内切酶在分子遗传学中广泛地用于各类研究，请具体地说明 限制性内切酶在研究工作中的应用范围。 （15分） 1997年博士研究生入学试题 分子遗传学（A卷） 一、在通过测序获得一个基因组克隆的DNA序列后，怎样才能了解该序 列可能具有的基因功能，请提出你的研究方案。（20分） 二、请简单介绍你的硕士论文研究（或相当于硕士论文研究）的工作。 如果这些工作涉及分子遗传学，请提出你深入研究的设想；如果你以前 的工作与分子遗传学无关，也请你提出深入到分子水平的设想。（20 分） 三、请指出目前阶段基因工程技术的局限性，并分析这些局限性的原因 （你可以在人类基因冶疗，动物基因工程和植物基因工程三个方面任选 一个来回答，也可以都回答）。（20分） 四、请说明基因组计划与生物技术的关系。（20分） 五、请说明真核生物染色体的结构和组成在分子水平上的特征。（20 分） 1997年博士研究生入学试题 分子遗传学（B卷） 一、请简单介绍你的硕士论文研究（或相当于硕士论文研究）的工作。 如果这些工作涉及分子遗传学，请提出你深入研究的设想，如果你以前 的工作与分子遗传学无关，也请你提出深入到分子水平的设想。（20 分） 二、请说明真核生物染色体的结构和组成在分子水平上的特征。（20 分） 三、目前在遗传图谱和物理图谱的研究中使用哪些分子标记？请说明每 种标记的性质和特征。（20分） 四、在与遗传学有关的许多研究工作中都需要使用核酸的分子杂交技 术，请举出这些研究工作及相应的分子杂交技术（至少三个），并尽你 的可能，给以较具体的说明（如原理，关键技术和存在的问题等）。 （20分） 五、请介绍人工产生突变的各种方法，并举实例说明突变在分子遗传学 研究中的重要作用。（20分） 1998年博士学位研究生入学考试试题 分子遗传学 A卷? ，B卷? 注： A卷考生可从六题中选五题回答，每题满分为20分； B卷考生可从六题中选四题回答，每题满分为25分。 一、什么是DNA的半保留复制和半不连续复制？它们是如何被证明的？ 真核生物染色体的DNA复制与大肠杆菌的DNA复制有哪些不同？请具 体说明。 二、在分子遗传学的研究中，被克隆的基因有两种不同的形式， genomic基因和cDNA基因，请问在这二者之间可能会有哪些不同？为什 么？从方法学的角度看，在基因的结构与功能的研究中，二者各有什么 作用？可以举例说明。 三、什么是基因转录水平上的顺式调控成分与反式调控因子？它们与近 代遗传学中的基因概念“顺反子”有何差异或联系？如何鉴定一个基因表 达的顺式调控成分与反式调控因子？最好能举例说明。 四、在基因组研究中应用哪些分子标记？请说明这些标记的生物化学性 质和遗传学特征。并进一步回答以下两个问题：1、为什么在比较基因 组研究中常用RFLP标记，而不用其他标记？2、为什么在个体、品系和 品种的鉴别中一般不用RFLP标记？ 五、在人类中线粒体DNA是母系遗传的，Y染色体是父系遗传的，因此 有人说通过对线粒体DNA的研究可以追溯到人类共同的祖先母亲?夏 娃，通过对Y染色体DNA的研究可以追溯到人类共同的祖先父亲?亚 当。请你提出较为具体的技术路线。如你不同意上述看法，也请提出自 己的设想和技术路线。 六、如何证明在转基因的动植物中导入的外源基因在宿主染色体上的整 合？如果导入外源基因的功能是在研究之中的，你如何证明在转基因动 植物中表现的新性状是外源基因决定的？你可以任选某种动物或植物举 例说明。 1999年博士学位研究生入学考试试题 分 子 遗 传 学 注: A卷考生可以六题中选五道题回答，每题满分为20分， B卷考生可以六题中选四道题回答，每题满分为25分。 一、请简单介绍DNA双螺旋结构的变性、复性、构象和超螺旋化。并回 答以下二个问题： 1. 在活体条件下，DNA的变性、复性、构象和超螺旋化与DNA复制及 基因表达有何关系？（最好能举例说明） 2. 在离体条件下，如何利用DNA的变性复性进行分子遗传学研究？ 二、rRNA基因、tRNA基因与一般的编码蛋白质的基因在结构组成和转 录上有哪些不同的特征？为什么rRNA基因可以用于系统发育和分子进 化的研究？在实验室中是如何运用rRNA基因进行分子进化研究的？ 三、有哪些研究说明真核生物基因组的稳定性只是相对的？请举一例较 详尽地说明真核生物基因组流动性的分子机制。 四、在未知基因产物的情况下，如何从高等动物或植物中克隆一个行使 某种可观察的功能的基因？请就你所了解的一篇文献上的实例对有关的 技术路线进行剖析，并说明该研究成功的技术关键。 五、在普通遗传学和细胞遗传学中提到的各种现象，概念和假设中，已 有不少在分子遗传学中被进一步阐明，请举例说明。请问在普通遗传学 和细胞遗传学中，我们对哪些重要的现象、概念或假设的理解，迄今仍 未上升到分子水平？ 六、在真核生物的基因中哪些区段的序列、哪些核苷酸的变异会显著地 影响该基因编码和蛋白质的功能？为什么？这些变异是如何影响蛋白质 的功能的？可以举例说明。 2000年博士研究生入学考试 分子遗传学试题 （A卷考生回答下列五题，每题20分；B卷考生可任选四题回答，每题 25分） 一、“一个基因一个蛋白”的假说是如何提出来的？从今天的观点看该假 说有哪些问题？应该如何表述才比较确切？最好能举实例说明。 二、在真核生物的基因工程中，有时会出现这样的情况：通过Southern 分析证明了携带外源基因的载体已整合到转化受体的基因组中，但是在 转基因受体的当代或后代个体中未能检测出该外源基因的表型。请问有 哪些原因会导致这种负的结果？如何分析才能判断该基因不产生表型的 原因？ 三、目前有哪些电泳技术可用于DNA的分析？请说明这些技术是如何推 动分子遗传学研究的。 四、南京大学孙乃恩等编著的分子遗传学是1990年出版的高等学校 试用教材，迄今已过去10年了，如果要对该著进行修改补充，你觉得有 哪些研究进展的内容是必须补充的？有哪些内容是可以基本上不变的？ 请说明你的理由。 一、 五、我国是一个历史悠久的大国，在北京周口店曾发现五十万年前 的“北京人”头盖骨化石，在长江流域多次发现6000年至8000年前墓葬中 的稻谷。为了证明“北京人”就是现代中国人的祖先，墓葬中的稻谷就是 现代的水稻品种的原始材料，你觉得有没有必要提供遗传学的证据？为 什么？请你任选上述二个问题中的一个，提出你设计的研究方案。 博士学位研究生2001年入学考试 分子遗传学试题 （A卷考生必须回答下列五题，每题20分；B卷考生任选四题回答，每 题25分） 一、 Crick在1958年提出了中心法则，请对以下四个方面进行论述： 1. 中心法则对分子遗传学研究的理论意义和指导作用； 2. 中心法则的修正； 3. 中心法则面临的挑战； 4. 你对中心法则的看法。 二、 目前已被阐明基因组全序列的生物有哪些？请在这些生物中选择你最熟 悉的一种，提出如何用分子遗传学的方法来揭示该基因组中序列已知、 但功能未知的某个基因的功能。 三、 请解释以下概念：操纵子、诱导物、阻遏物、正调控、负调控。并详细 地说明乳糖操纵子和色氨酸操纵子的调控机理。 四、 请举出5种不同的基因文库，说明文库的载体组成、性质、特点和应用 范围，并用实例说明。 五、 就你所熟悉的一种生物的基因工程，提出使异源基因高表达的具体策 略，可以举例说明。 分子遗传学2002年博士入学考题 注：1、A卷考生必须回答下列5题，每题20分。 B、卷考生任选四题回 答，每题25分。 一、请举出细胞中的各种RNA分子的名称、特征和功能。如何从RNA 出发开展功能基因组的研究。 二、真和生物的基因表达控制（control of gene expression）和信号传导 （signal transduction）有密切的关系，请举出一个你熟悉的例子分别说 明这两个概念的含义及其联系。 三、目前已经有一些现成的软件用来预测基因组全序列中的基因。为了 设计这些软件，你觉得哪些关于基因和基因组的分子遗传学知识是必须 的？请说明理由。 四、在真核生物中转座子可以分为几种类型？请分述每种类型的结构和 特征。如何利用转座子进行分子遗传学的研究和功能基因组的研究。 五、自从克隆的多利羊诞生以来，报界经常传播所谓克隆动物的缺陷， 有一种说法是克隆动物会早衰，有人推测早衰的原因可能是：（1）被 克隆的体细胞核的染色体端粒变短或（2）被克隆的体细胞核的基因表 达程序已经处在发育上成熟的阶段。现在请你从染色体DNA复制的角度 作支持第（1）种可能的阐述，并从基因表达调控的角度做反对第（2） 中可能的阐述。 中国科学院遗传与发育生物学研究所 博士研究生遗传学入学试题 2003年 一、今年是DNA双螺旋模型发表五十周年。请回答以下问题（20分）： 1、在双链DNA分子中A+T/G+C是否等于A+C/G+T ？（4分） 2、DNA双链的两条链中是否含有相同的遗传信息？为什么？（4分） 3、大肠杆菌的基因组DNA的长度约为1100微米。请根据DNA模型估计 其基因组的碱基对数目。（4分） 4、如果两种生物基因组DNA在四种碱基的比率上有显著差异，那么预 期在它们编码的tRNA、rRNA和mRNA上是否也会在四种碱基的比率上 呈现同样的差异？（8分） 二、在一牛群中，外观正常的双亲产生一头矮生的雄犊。请你提出可能 导致这种矮生的各种原因，并根据每种原因提出相应的调查研究的提纲 （注意整个调查研究工作必须在两个月内完成）。（20分） 三、请给出以下6种分子标记的中文全称、定义、检测方法及其在遗传 分析中的特征。（20分） RFLP , microsatellite , STR , SSLP , SNP , InDeL . 四、在普通遗传学中，非等位基因间的相互作用有哪几种？请举例说明 其中的两种相互作用？请从分子遗传学和分子生物学的角度对非等位基 因间的相互作用的分子机制进行阐述，并举例说明。（20分） 五、有哪些诱变剂可以诱发基因突变？基于突变被辨认的方法，可以将 突变分为哪几种类型？哪些类型的突变对功能基因组的研究最有意义？ 为什么？对一个已完成基因组测序的真核生物，如何构建一个突变体 库，以揭示基因组中预测基因的功能？（20分） 中国科学院遗传与发育生物学研究所 博士研究生遗传学入学试题（2004年） 注意：（1）答题必须简明扼要。如有必要，可以图示辅助说明； （2）答题时可以不必抄题，但需注明题目序号； （3）所有答题不要写在试卷上，请全部书写在答题纸上； （4）第一题为选答题，第二至五题为必答题。 一、 选答题：请在第1与第2题间选答一题。若两题均答，只按其中得 分最低的一题记入总分。（每题20分） 1. 列举动物遗传研究中常见的两种模式实验动物，它们各有哪些特点？ 对遗传学的发展有哪些主要贡献？ 2. 在植物遗传研究中，经典遗传学实验材料常采用豌豆和玉米，而现代 遗传研究则更趋向利用拟南芥菜和水稻，试述发生这种转变的主要原 因，以及它们在植物遗传学发展史上的主要贡献。 二、 对于突变体的诱导有许多种方法，请分别列举一种化学的、物理 的以及生物的突变体诱变方法。 对于表型相同的一组突变体，请设计 一遗传试验，验证这些突变属于相同位点（alleles）突变还是不同位点 (non-alleles)的突变。（20分） 三、 转座(transposition)与易位(translocation)有什么不同？它们各自有哪 些类型？对于基因组的进化各有哪些意义？（20分） 四、 简述你所从事过的一项最主要研究工作。如果给你以足够的研究 条件，以及3-4年的时间，你将如何进一步深化你的研究工作？（20 分） 五、 负调控在生命活动中有重要的意义，除经典的操纵子模型以外， 近年来还发现有泛素（ubiquitin）介导的蛋白质降解机制和micro RNA(miRNA)介导的转录和翻译抑制机制，请从后两者中任选一种举例 说明其作用机制与生物学意义。（20分） 中国科学院遗传与发育生物学研究所 博士研究生遗传学入学试题（2005年） 注意：（1）答题必须简明扼要。如有必要，可以图示辅助说明； （2）答题时可以不必抄题，但需注明题目序号； （3）所有答题不要写在试卷上，请全部书写在答题纸上。 （4）每题20 分。 一、试述有丝分裂和减数分裂对于保持物种稳定以及遗传多样性的意 义。 二、基因组学研究是近年来生命科学领域的热点之一。简述结构基因组 学与功能基因组 学的概念，以及利用模式物种进行基因组学研究的意义。 三、已知某物种的两个连锁群如下图所示： cM cM 图中的数字为相应遗传学位点的遗传距离（cM）。 试回答： （1） 杂合体AaBbCc 可能产生的配子类型和比例； （2） 设计一个实验验证另一基因X 是否位于图示中的两个连锁群上。 四、转录因子包括什么主要的功能结构域？其主要的结构特点与功能是 什么？ 五、下述是一个虚拟的分子遗传学问题。 表皮毛具有重要的生物学意义。典型的表皮毛结构包括一根主干(main stem) 以及 主干顶端的三个分枝(branches) 组成。形态学研究表明如果主干生长过 长，通常导致顶 端分枝减少至两个或更少。相反，如果主干生长过短导致分枝增加。因 此主干的长度与 顶端的分枝数目成负相关。 为了研究表皮毛发育的机制，某研究生筛选到一个表皮毛发育异常的突 变体。该突 变体的表皮毛主干较野生型长，且只有两个分枝。该突变体被命名为 abnormal branching (abc)。遗传分析表明abc 是一个核基因隐性突变。之后，该研究生克隆 了ABC 基因， 发现ABC基因编码一个转录因子。DNA测序分析发现在abc突变体中， 一个单碱基的突 变导致了在一个富含碱性氨基酸的区段（5 个连续的赖氨酸或精氨酸） 中的一个赖氨酸 突变为甘氨酸。 该研究生制备了抗ABC 蛋白的多克隆抗体。通过原位免疫荧光技术， 该研究生发 现在野生型中ABC 蛋白完全定位在细胞核中，而在abc 突变体中ABC 蛋白同时定位在 细胞质和细胞核中。 为了更深入的研究表皮毛发育的机制，该研究生又筛选了abc 突变的抑 制子突变 (suppressors of abc; sab)。sab 突变能够抑制abc 突变体的表型（即abc/sab 双突变体的 表型为正常）。但在野生型背景下(即sab 单突变)，表皮毛变短，分枝 增多（46 个分 枝）。分子遗传学实验证明SAB 基因编码一个F-box 蛋白(F-box protein)。该研究生 证明在体外和体内(both in vitro and in vivo) ABC 均与SAB 互作 (interaction)。Western blot 表明ABC 蛋白在sab 突变体细胞中高水平富集。 根据上述结果，简要回答下述问题（第14 小题，答案请勿超过50 个 字；第5 小题请勿超过200 字）： （1） 该研究生可能通过什么方法制备了抗原（即用于制作抗体用的 ABC 蛋白）？ （2） 请解释为什么部分ABC 突变蛋白（即赖氨酸突变为甘氨酸后）会 定位在细 胞质中而不是完全定位与细胞核中？ （3） 过量表达ABC 基因的可能表型是什么？ （4） 过量表达SAB 基因的可能表型是什么？ （5） 请提出一个模型解释ABC 和SAB 在调控表皮毛发育中的作用机 制。 2006 协和生物化学与分子生物学专业 博士试题 (记忆版) 一、填空 （24空24分） 1.-年，由-和-（英文姓）首次提出了dna的双螺旋模型，其结果发表在-杂志，他们提出的实 验依据是-和-。 2.蛋白质浓度测定在-nm, 原因是-但有时候也在220nm处测量，原因是- 3.表皮生长因子受体具有-酶的活性， 4.嗅觉、视觉、味觉和细胞膜上的-蛋白结合，这种受体具有-的结构特点，产生的第二信使是- 二、名词解释 （4题16分） 1. CpG island 2.CTD of RNA Pol II 3. SiRNA 三、问答题 （4题40分） 1. 基因组DNA有时会产生G:T错配，DNA复制时有时会发生A:C错配，他们产生的原因是什么，各怎么修复？（12分） 2. 大肠杆菌的启动子（或操纵子）活性有无强弱之分，如果有，决定其强弱的因素什么？（10分） 3. 什么是基因印记（imprinting）,它是怎么遗传的？举例说明。（10分） 4. 为什么说ribosome is a ribozyme”? （8分） 四，名词解释 4题8分 1. 酵母双杂交 2.细菌人工染色体 五，简述题 2题12分 1. 给定一个组织，简述如何构建Cdna文库。 2. 简述基因敲除小鼠模型的策略 协和医科大学2004年分子生物学（博士） 1.名解翻译并且解释名词: 同工酶 互补 RT-PCR 染色质 核基质 转化 密码子的偏嗜性 基因簇 chromatin chromosome 2.简答 为什么核酸和蛋白都是有方向的? 信号转导的cAMP通路,CAMP激活蛋白激酶的分子机制? 紫外线造成皮肤细胞DNA何种损伤?如何修复? 使肽键形成的酶叫什么名字?其化学本质是什么?存在于细胞的 什么位置? 3.论述题 什么是内切酶的星号活性？影响因素是什么？ 已知一个蛋白质的全长CDNA,设计一个实验步骤从CDNA开始提纯此蛋白. 4.判断对错,说明理由 细菌的操纵基因总在启动子的后面. 乳酸操纵子模型中,阻遏蛋白与RNA聚合酶结合阻止启动子启动. 5.论述 给定一个cDNA序列,如何表达,纯化到蛋白质 6.填空 协和生物化学系主任-(19?-1959)对我国的科学事业贡献巨大. (这道题好变态) 科学家-首次证明DNA是遗传物质,该证明实验是- 能够进行可逆磷酸化的氨基酸是(3个)- 蛋白在280NM最大的吸收峰,因为其含有哪三个蛋白- 核酸在nm有最大的光吸收,因为_ 维持DNA双螺旋的力是-和- 经典中心法则认为信息是从-到-再到- 真核细胞核糖体大亚基的-rRNA与原核细胞-同源. Plindromatic sequence 又叫-,定义是:- 协和医科大学2003年分子生物学专业试题（博士） 1 质粒的不相容性和相容性的分子基础机制 2 HIV病毒的生活史 3 肿瘤病毒致病的机制，试举例说明 4 目前在真核生物基因表达调控方面提出一个“UNIFIED THEORY”，这是理论调控研究的一大进展，你是如何理解它 的？ 5 计算DNA碱基组成（含过程） 6 RNA INTERFERENCE 7 ATTENATOR 8用微球菌核酸酶酶解染色质，然后进行电泳，发现200bp、400bp、600bp、800bp。的条带，试问从该现象可以得 出什么结论？图1所示的条带不是非常狭窄，试解释其原因 1 名词解释 基因组图genome map)基因图能通过显示基因及其他明显特征的位置为 测序提供指导。 物理作图：(physical mapping)应用分子生物学技术来直接分析DNA分 子，从而构建能显示基因在内的、序列特征的位置图。 遗传作图：（genetic mapping ）应用遗传学技术构建能显示基因以及其 他序列特征在基因上位置的图。 克隆重叠群：(clone contig) 基因组被打断为可处理的片段，每个片段长 度为数百或数个。然后通过鸟枪法分别对每个片段测序。一旦一个片段 的序列测定完成，就能将其定位在基因组图上正确的位置。 定向鸟枪法：（directed shotgun）这种策略是用基因组图上的显著特征 作为界标，直到将应用鸟枪法获得大量段序列拼接成主序列。 放射杂交体：（radiation hydrid）含有第二个基因组不同片段的啮齿类 细胞系的集合，通过放射有关的技术构建并用作作图材料，细胞经X线 照射染色体断裂成碎片段与 仓鼠细胞融合杂交细胞体 EST（expressed sequence tag）表达序列标记：一段已经测序的cDNA， 可用于更快地得到基因组上的基因。或：是在生物体特定时空表达基因 的一段cDNA序列。为基因定位、基因克隆、基因表达分析的有力工 具。 酵母双杂交系统（yest two-hybrid system）:是一种鉴定相互作用的蛋白 质的技术。一个完整的酵母转录因子GAL4可以分为结构上可以分开 的、功能上相互独立的两个区域：位于N端1-147位氨基酸区段的DNA 结合域（DB）和位于C端768-881位氨基酸区段的转录激活域（AD）。 BD能够识别位于GAL4效应基因的上游激活序列(UAS)，并与之结合， DNA-AD则是通过同转录机（Transcription Mashinery）中的其他成分之 间的结合作用，以启动UAS下有的基因进行转录。BD和AD单独分别作 用并不能激活转录反应，但是当两者在空间上较为接近时，则呈现完整 的GAL4 转录因子活性并可激活UAS下游启动子，使下游启动子报告基 因得以转录。 噬菌体展示技术（Phage Display techniquences PDT）：一种用于筛选和 改造功能性多肽、蛋白质强有力的生物技术。广泛应用于研究蛋白质的 结构与功能，蛋白质间的识别与作用，分离体内特异蛋白质与基因以及 实验进化等多个分子生物学领域。 核酶（ribozyme）：本质为RNA或以RNA为主含有蛋白质辅基的一类具 有催化功能的物质。分子伴侣（molecular chaperone）：能帮其他蛋白 质折叠的蛋白质叫分子伴侣。 泛素(ubiquitin)：能结合并介导另一个蛋白降解的由76个氨基酸组成的 蛋白质。 复制叉：复制时DNA双链解开分成二股单链新链沿着张开的二股单链 生成，复制中形成的这种 Y 字形的结构称为复制叉。 端粒（telomere）：染色单体顶端部位 ，是染色体末端的标志，据此细 胞可以区分真正的染色体末端和断裂所形成的断端。维持染色体的稳定 性，维持DNA复制的完整性。 端粒酶(tolemerase):端粒酶是一种由蛋白和RNA组成的酶，它是通过合 成端粒重复序列维持真核染色染色体末端稳定性的酶。 冈崎片断（Okazaki fragment）：双螺旋滞后链复制中以RNA作为引物 合成的DNA小片段。 半保留复制（semiconservative replication）：当DNA进行复制时，双螺 旋结构解开成两条单链，各自作为模板合成与之互补的新链。在子代 DNA双链中，一条是来自于亲代，另一条完全重新合成。这种复制方式 称为半保留复制。 正调控：某基因或基因产物是一种激活物，使转录打开或增强。 负调控：由于某基因或基因产物的存在，导致转录不能进行，即酶的合 成受抑制。 诱导(induction)：诱导物与阻遏物结合，使之变构不再与操纵子结合， 从而开启操纵子。 阻遏(repression): 终产物结合到阻遏物上，改变后者的构象，使其能结 合到操纵子上，关闭操纵子。 诱导物(inductor)：在自然状态下有些阻遏蛋白一般结合在DNA分子上， 无诱导物存在时，阻遏蛋白与操纵基因牢固结合，阻止DNA聚合酶进入 启动子区域。当有诱导物存在时，诱导物与阻遏蛋白结合，促使后者空 间构象改变，使阻遏蛋白与操纵子亲和力下降而解离下来，RNA聚合酶 能进入启动子区域，结构基因转录表达。 阻遏物(repressor)：与操纵基因结合，使其转录关闭或转录水平降低的 物质。 RNA编辑：转录后向RNA在RNA编码区通过化学修饰发生碱基的加 入、丢失或转换等现象。 2 试述用于遗传作图的DNA标记的种类及其各自的检测技术或方 法 （1）限制性片段长度多态性RFLP(restriction fragment length polymorphisms)用同一限制性内切酶消化DNA时，在同种生物的不同个 体中会出现不同长度的限制性片段类型，此称为限制性片段长度多态性 （RFLP）。 检测方法： Southern杂交（Southern hybridization ) 限制性内切核酸酶酶切产 生的DNA片段通过琼脂糖凝胶电泳而互相分离，待研究的片段用探针杂 交检测。 聚合酶链反应(PCR) 在DNA经限制性酶处理之前，先将台RFLP的DNA 区域扩增成多拷贝。然后RFLP可通过用溴化乙锭对载有限制性片断的 琼脂糖凝胶染色而看到。 RFLP的特征: 处于染色体上的位置相对固定; 同一亲本及其子代相同位点上的多 态性片段特征不变; 同一凝胶电泳可显示不同多态性片段,具有共显性特点。 （2）简单序列长度多态性SSLPs(Simple sequence length polymorphisms) SSLP 产生重复序列的可变排列,同一位点重复次数不同,表现DNA序列 长度变化;与RFLP 不同,具有多等位性;小卫星(minisatellite)和微卫星 (microsatellite)序列都可用于遗传作图,但微卫星更普遍。 检测方法： （3）单核苷酸多态性SNP(single nucleotide polymorphisms) 以寡核苷酸杂交分析为检测方法，寡核苷酸杂交能区分一个SNP的两个 等位基因，筛选策略包括：DNA芯片技术 基因芯片技术是指通过微阵列(Microarray)技术将高密度DNA片段阵列 通过高速机器人或原位合成方式以一定的顺序或排列方式使其附着在如 玻璃片等固相表面，以荧光标记的DNA探针，借助碱基互补杂交原理， 进行大量的基因表达及监测等方面研究 动态等位基因特异的杂交 3 简述物理作图的三种类型 （1）限制酶作图(Restriction Mapping) 它是将限制性酶切位点标定在DNA分子的相对位置,其只能应用于较小 的DNA分子,其上限取决于作图分子中限制酶位点的频率.通常采用的6碱 基对识别顺序的限制酶仅适合50Kb以下DNA分子的精确作图. （2）依靠克隆的基因组作图(clone-based mapping) 将分子标记与完整染 色体杂文来确定标记的位置。 （3）荧光原位杂交(Fish, Fluorescent in situ hybridization) 通过对基问组 片段进行PcR和(或)杂交分析，来对短序列进行定位作图。 4试述限制酶作图的基本方法、限制因素及其解决办法。 （1）方法: 用两种限制酶中的种对DNA分子进行消化，产生片段的 大小通过琼脂糖凝放电泳来检测。 第二种酶消化DNA分子，再用琼脂糖凝胶电泳检测片段大小。这些结 果可以使我们弄清每种酶的限制位点数目，但切点之间的相对位置还不 能确定。 将DNA分子用两种酶同时进行切割可以获得更多的信息。 作部分限制性酶解。这样会产生套更复杂的产物，除了完全消化 的，还含部分消化产物。通过测定一个不完全消化片段的大小，构造出 正确的图谱。 缺点 ：通常，部分限制酶消化为构建完整的图谱提供了必需的信息。 如果有多个限制位点集中、这种分析方法就显得笨拙，因为要考虑的不 同片段太多。 改进方法：在部分消化前将放射性或其他类型的标记物加到要分析的 DNA分子两端，结果很多部分限制酶消化产物成为不可见的，因为它们 不含有末端片段，因此在琼脂糖凝胶上对标记物进行筛选时不会显现。 我们可以利用“可见的”部分限制片段的大小，确定出那些未定位的切点 与DNA分子末端的相对位置。 （2）限制因素 酶切位点的数目 限制酶作图的规模受限于限制片段的大小：50KB （3）限制酶作图的改进 脉冲凝胶电泳(pulsed-field gel electrophoresis) 稀有切点限制图绘制 具有7个或8个核等酸识别序列的酶；识别序列包含靶DNA中稀少基序 的酶。 基因组明显缺少某些基序：例如，人类基因组中5GC3序列很稀少，这 是因为人类细胞中含有一种酶，能够向这一序列中的胞嘧啶核苷的5位 碳原于添加甲基基团，产生的5甲基胞嘧啶不稳定容易脱氨基产生胸 腺嘧啶。 对稀有限制性内切核酸酶切接过的检测： 电泳：正交交变电场凝胶电泳，等高钳位均匀电场和倒转电场凝胶电 泳。 直接在显微镜下观察检测限制位点。有两种方法制备光学作图所需DNA 纤维：凝胶拉伸和分子梳理 6.试述序列标记位点的特征和来源 （1）序列标记位点（STS）：是一段短DNA序列，通常长度在100- 500bp，易于识别，且在待研究的染色体或基因组中只出现一次。作一 套STS图需要收集来自单条染色体或一个完整基因组的重叠的DNA片 段。 任何一个唯一的DNA序列均可作为STS。这个序列必须是已知的；STS 必须在待研究的染色体上有唯一的定位。 （2）获得STS：表达序列标记（EST）：同过互补DNA（cDNA) 克隆 分析获得的短序列。SSLPs: 可在遗传学图谱核物理学图谱之间提供联 系。 随机基因组序列：可通过对克隆的基因组DNA的随机小片段进行测序或 数据库中搜寻储存序列获得。 5. 什么是作图试剂，简述获得作图试剂的方法。 用于STS作图的可覆盖待研究的染色体或基因组的DNA片段群，这样的 片段也称作图试剂（mapping reagent）。 通过两种途径来获得作图试剂：克隆文库和放射杂交体。 （1） 放射杂交体：人类细胞放射处理后，染色体断裂成片段。将 一个经过放射处理的人类细胞与未处理的仓鼠细胞融合后产生了放射杂 合体。 （2） 克隆文库可来自基因组DNA为代表全基因组，也可以来自某 一类染色体以产生染色体特异性文库。可利用流式细胞计数仪来分离单 独的染色体，以实现后一个目的。 6. 试述连续DNA序列组装的三种方法。 (1) 通过鸟枪法拼接序列：不需要事先了解基因组的信息，直接从单 个测序反应中得到的短序列通过检测重叠区推导出完整序列。 (2) 通过克隆重叠群法拼接序列：克隆重叠群可通过染色体步查建 立，即从基因文库的一个克隆开始，然后确定出插入片段与第一个克隆 重叠的第二个克隆，再继续确定出第三个克隆，依此类推。 克隆指纹图谱和限制性图谱、重复DNA指纹图谱、重复DNA的PCR、 STS含量作图，为更新更快的克隆重叠群组装方法。 （3） 全基因组鸟枪法测序：最少用两个克隆文库，载体用不同类 型的载体构建，载体与片段的不相容性使得载体不能携带这些片段扩 增。应用此法可避免产生错误。 9简述进行克隆重叠群组装连续DNA序列的一些基本技术 搭建克隆DNA片段重叠群的最简单的方法从文库中的一个克隆开始， 然后分离出插入 片段与第一个克隆重叠的第二个克隆，再继续分离出第三个克隆，依此 类推，这就是染色体步查(chromosome walking)的基础，它是为组装克 隆重叠群设计的最早的方法 最初，使用噬菌体或黏粒载体制备的克隆文库，染色体步查只能沿 DNA分子移动较短距离。最直接的方法就是以起始克隆中的插入片段为 杂交探针，筛选文库中的所有其他克隆。 插入片段与探针重叠的克隆会给出阳性杂交信号，再用这些插入片段作 为新的探针继续步查 如果已经测序知道了插入片断的末端序列，我们可以用PCR来快速鉴 定相互重叠的克隆。按照末端序列设计引物，与文库中的所有其他克隆 进行PCR。能够得到正确产物长度的克隆一定含有与初始克隆相互重叠 的序列。为进一步加速这一过程，将一组克隆混合一起，仍然能清楚地 分离出重叠的克隆。 克隆指纹图谱：克隆指纹图谱技术提供克隆的DNA片段的部分物理特 征，这些物理信息或“指纹 与其他克隆的相关信息作比较，找出相似 的地方，这里就可能包含相互重叠的序列。一般使用下列技术中的 一 种或几种联合使用： 限制指纹图谱：克隆经多种限制性内切核酸酶消化后在琼脂糖凝胶上分 离消化产物而得到的 重复DNA指纹图谱：是将一系列限制片段印迹后用特异针对于一类或 多类基因组范围内重复的探针进行southern杂交而获得。 重复DNA的PCR或散布重复元件PCR：用在基因组范围内重复序列处退 火的寡核苦酸作引物，扩增两个相邻重复片段间的单拷贝序列 STS含量作图：它可以将克隆重叠群定位于标有STS的物理图谱上 10如何通过序列筛查来定位基因？ 编码蛋白的基因含有可读框（ORF），寻找以ATG开始，以终止密码子 结束的ORF序列是寻找基因的一种方法。成功寻找ORF的关键在于终止 子在DNA序列中出现频率。最简单的ORF的扫描方式是将100个密码子 作为假定基因长度的下限，并记录所有大于此值的ORF 单一ORF扫描对高等真核生物DNA效果不佳，人类和其他高等真核生物 基因组的基因被内含子断开，在DNA序列中没有连续的ORF，因此对 ORF扫描进行了三项改良：密码子偏倚倍计算在内外显子内含子 边界可因其具有特定的序列特征而被搜索到上游调控序列可用来定位 基因起始区 同源性搜索为序列筛查提供了一个有力的补充：同源性检索目的是判断 新序列是否与已知基因具有整体上的相似性，若相似，则所查序列就可 能与匹配序列同源。 11试述进行基因定位的一些实验技术 杂交试验可检验某一片断是否含有转录序列：研究转录序列最简 单的方法是杂交分析 DNA测序有助于对DNA片断进行基因作图，将c DNA序列与基因 组DNA序列相比较，就可以描述相应基因的定位并揭示外显子内含子 边界 精确定位转录物末端方法：反转录PCR（RT-PCR）、快速扩增c DNA末端法（RACE）；另一种转录精确作图的方法是异源双链分析 准确定位外显子内含子边界：寻找外显子方法是外显子捕获 12如何利用计算机来分析基因的功能 同源性检索通过把DNA序列与数据库中所有的DNA序列进行比较后得 到基因定位，发现新基因。同源性反映了进化关系， 同源基因有共同 的进化祖先、基因间序列相似、这些相似性是分子系统进化的基础。 同源分析可以提供整个基因或基因片段的功能信息：同源性检索可以用 DNA序列来进行，但通常在搜索前先将基因序列片段转换为aa序列，常 用BLAST分析软件，分析仅需登陆DNA数据库的一个网站将序列输入 在线搜索工具 13用实验分析确定基因功能 通过基因失活进行功能分析，那么相应的策略就是进行基因突变，确定 该基因所导致的表型改变，这就是用于确定未知基因功能的技术基础。 灭活特定基因的方法有赖于同源重组：通过将基因的染色体拷贝与一段 和靶基因有相同序列的DNA进行同源重组来进行 非同源重组的基因失活：转座子标记就是转座元件插入目的基因使其失 活 基因表达也可以用来探索功能：人为造成生物体被检测基因比正常基因 更具有活性来观察表型的改变。 14简述用酵母双杂交系统，噬菌体展示来研究蛋白质间相互作用的原 理和方法 噬菌体展示技术 原理： 噬菌