内毒素检查的常见干扰及消除.ppt

细菌内毒素检查的常见干扰及消除,湛江安度斯生物有限公司2009年3月,BET干扰的普遍性,一项对人用药品与鲎试验相容性的研究证实了干扰的影响范围，在所研究的品种中仅30%的药品可以不经任何处理直接进行BET；有97%的干扰问题可以通过稀释供试品的方法去消除。,2019/11/29,Page2,Http:/,干扰的表现,凝胶法FDA的鲎试验指南中规定，同一标准内毒素的阳性对照与阳性样品对照系列的反应终点存在显著差异时，即可确定为存在干扰。CP2005规定无干扰条件：0.5Es2；0.5EsEt2EsUSP27规定无干扰条件：0.5Es2；0.5Et2光度法CP、USP规定无干扰条件：50%R200%FDA规定无干扰条件：50%R150%,2019/11/29,Page3,Http:/,最理想的无干扰状况,表a,不符合CP要求，但符合USP要求,符合CP要求，但不符合USP要求,2019/11/29,Page4,Http:/,表b,表c,出现表b或表c的极端情况均为不适宜的实验结果，需要检查实验条件。,干扰的类型,抑制供试品含有的内毒素浓度2倍检测试剂的灵敏度，但检测结果仍为阴性，称之为假阴性增强供试品含有的内毒素浓度低于检测试剂灵敏度的1/2，但检测结果仍为阳性，称之为假阳性,2019/11/29,Page5,Http:/,抑制的来源,由内毒素激活的酶反应受抑制pH值不适宜二价阳离子不足酶的改良及活性不足内毒素损耗吸附损耗,2019/11/29,Page6,Http:/,抑制的解决办法,鲎试验的正常反应需要中性的pH值、一定浓度的钠离子及二价阳离子；用BET水稀释供试品可以解决绝大多数的抑制pH值鲎试验的反应混合液（TAL+供试品）的pH值应在68范围内用BET水在容许范围对供试品进行稀释用缓冲液制备样品稀释液用酸、碱或缓冲液来调节pH,2019/11/29,Page7,Http:/,二价阳离子在含有鳌合剂的样品制备中使用MgSO4或CaCl2缓冲剂可维持Ca+、Mg+离子的浓度蛋白和酶的改良血浆和血清中的丝氨酸蛋白酶可经加热处理使其变性；某些蛋白的变性或酶的抑制原料需要用超滤方法去除内毒素损耗在标准内毒素制备及使用过程，需要经常旋涡混合其溶液避免使用对标准内毒素有吸附作用的实验器具,2019/11/29,Page8,Http:/,增强的来源和解决方法,来源-葡聚糖是造成鲎试剂结果假阳性的一个已知来源。美国药典BET法的要求：“除了内毒素，鲎试剂还与某些-葡聚糖反应。一些经特殊制备的鲎试剂不会与-葡聚糖反应，应使用这种鲎试剂检测含葡聚糖的样品”解决方法湛江安度斯公司的TAL可以抵抗一般水平的-葡聚糖干扰。用湛江安度斯公司的抗增液复溶鲎试剂可以消除（1-3）-D葡聚糖的干扰。,2019/11/29,Http:/,Page9,E0.03,E0.3,E3.0,NC,每个浓度的标准内毒素溶液分别与抗增液复溶的鲎试剂及BET水复溶的鲎试剂反应,2019/11/29,Page10,Http:/,0.1Mg/ml葡聚糖（抗增液）,0.1Mg/ml葡聚糖,0.1Mg/ml葡聚糖+E0.3（抗增液）,0.1Mg/ml葡聚糖+E0.3,2019/11/29,Page11,Ht