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文档简介

实训六.病毒液收取与血凝试验（HA）,一.试验的目的,掌握鸡胚培养病毒的收集方法掌握微量血凝试验的整个操作过程,二.试验原理,一些动物红细胞(如鸡、豚鼠等)以及人“O”型血红细胞上有流感病毒受体，遇流感病毒可产生红细胞凝集现象，简称血凝。,三.实验材料,鸡胚或病毒液、恒温箱、蛋盘、镊子、酒精灯、3%的碘酊棉球、75%的酒精棉球、无菌瓶子、96孔微量血凝反应板、微量移液器、吸头、微量震荡器、生理盐水、病毒阳性血清、1%的鸡红细胞等。,四.方法步骤,1收毒：将蛋胚放在冰箱内冷冻半日或一夜，使血管收缩，以便得到无胎血的纯尿囊液。用碘酒消毒气室处的卵壳，并用灭菌剪刀除去气室的卵壳。切开壳膜及其下面的绒毛尿囊膜，翻开到卵壳边上。将鸡卵倾向一侧，用灭菌吸管吸出尿囊液。一个蛋胚约可收获6ml左右尿囊液。若操作时损伤了血管，则病毒会吸附在红细胞上，影响后续实验。收获的尿囊液经无菌试验后可在4以下的温度中保存。观察鸡胚，看有无典型的症状。,2.血凝试验操作步骤,1)在96孔V形微量反应板上进行,自左至右各孔加50ul生理盐水。2)于左侧第1孔加50uL病毒原液或收获液,混合均匀后,吸50ul至第2孔,混合均匀后至第3孔,依次倍比稀释,至第11孔,吸弃50ul。稀释后病毒稀释度为第1孔1:2,第2孔1:4,第3孔1:8.最后一孔为对照。3)自左向右依次向各孔加1%鸡红细胞50ul，置微型混合器上振荡1分钟或以固定转圈震荡反应板,使血球与病毒充分混合,在37摄氏度温箱中作用15-30分钟,待对照孔红细胞已沉淀可观察结果。4)判断结果:以100%凝集的病毒最大稀释孔为该病毒血凝价,即一个凝集单位,不凝集者血细胞沉于孔低成点状。没有凝集的红细胞沉积在V形孔的底部，把96孔微量血凝反应板倾斜适当角度时成线状流下，凝集的红细胞成絮状在V形孔的壁上，不成线状流下。,15-分钟,15-分钟,血凝试验流程图,振荡min后,五.结果与分析,凡能使鸡血红细胞完全凝集的病毒最高稀释倍数，称为该病毒的血凝度。,正确读出血凝结果,补充.实验报告的撰写,一.实验目的二.实验原理(可
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