（参考课件）BKV病毒的检测.ppt

BK病毒的检测,1,1971年，在肾移植接受者的尿液样本中首次发现；多瘤科病毒，BKV、JCV及SV40是目前所知的多瘤病毒家族所有成员；人体的肾、肺、眼、肝、脑等器官都可作为BK病毒的生长部位，并引起相关的疾病；无包膜，含有二十面体、直径45nm的衣壳，病毒基因组为5300bp的环形双链DNA。其基因组可分为调控基因、早期基因、晚期基因三部分；许多证据表明，BK病毒与出血性膀胱炎、肾炎相关，BK病毒容易侵犯免疫缺陷患者，特别是实体器官移植和骨髓移植的接收者。,BK病毒简介,2,在儿童早期病毒血清阳性率60100。原发性BKV感染常发生于45岁时，成年人抗体阳性率为46%94%；儿童感染一般无症状，典型症状是发烧和非特异性上呼吸道感染；初次感染后，此病毒在正常人体内呈潜伏状态，在器官移植病人中，BKV病毒经常激活导致疾病；传播途径：暴露的体液，例如唾液，或是通过胎盘传播。,BK病毒简介,3,感染肾：表现为出血性膀胱炎（出血性膀胱炎则增加住院时间和病人死亡率）、非出血性膀胱炎、输尿管狭窄和肾炎；感染肺：肺炎和急性非特异性上呼吸道感染；在各种肿瘤样本中检测到BKV病毒，主要是神经胶质和神经元脑瘤；中枢神经系统疾病；到目前为止，关于眼部感染仅有的报告为双侧非典型视网膜炎。,BKV相关疾病,4,免疫抑制状态下，潜伏在体内的BKV可再次激活；肾移植术后BKV再次激活发生率高：10%68%，BKV相关肾病患病率：17%；移植肾丧失功能几率高：50%的BKVN会导致移植肾失功；BKV和JCV具有75%的同源性，区分BKV和JCV还是非常重要的，因为JCV很少引起多瘤病毒相关肾病，与肾脏损伤不相关。BKV感染在临床上经常被误诊为急性排斥或是药物毒性。,BK病毒相关肾病,5,BKV相关肾病筛查、诊断、干预,DeepaliKumar,AtulHumar,et.al.TheASTHandbookofTransplantInfections,1stedition.2011,51-54.,6,尿液BKV-DNA荧光定量pcr法,VS,尿液Decoy细胞,人员要求不高，易于培训灵敏度高、特异性强可实现自动化，客观性强重复性好,需要有经验的病理学专家，主观性较强依据形态不能区分BK病毒和其他病毒感染，例如：JCV灵敏度低特异性差,7,美国器官移植手册建议：肾移植后，成人两年内至少每3个月检测一次；儿童前六个月每月检测一次，两年内每3个月检测一次；BKV-DNA浓度107copies/mL，建议三个月内复查。BKV-DNA浓度107copies/mL，建议检测BKV病毒血症。BK病毒尿是病毒开始活动复制的第一标志。早期检测对控制BK病毒的复制，早期干预具有重大意义。研究发现，尿BKV阳性出现在血BKV阳性之前，约有33的肾移植受者中会发现有BK病毒尿症。,尿液BKV-DNA检测,注：拷贝数阈值可以根据所使用的测定法而变化,DeepaliKumar,AtulHumar,et.al.TheASTHandbookofTransplantInfections,1stedition.2011,51-54.,8,所谓decoy细胞指脱落尿中的含有病毒包涵体的移行细胞。在沉渣尿涂片巴氏染色下,decoy细胞很容易辩认。含病毒包涵体的细胞核有三种表现:典型最多见为不透明的毛玻璃(或冻胶)样改变,或颗粒状嗜硷性包涵体占据整个细胞核,周围无明显的晕圈;或仅核周围存在高密度的染色质;少见可出现鹰眼样改变即核中央出现着色过深的包涵体。尿细胞学检测与尿液BKV-DNA荧光定量PCR对BKVN的筛选一样具有重要临床意义，但是灵敏度和特异性较低。,尿液Decoy细胞检测,9,在组织学检查阴性而PCR阳性的病人最终约有半数以上病人发展为BKVAN,一般认为从血PCR阳性到组织学证实BKVN有一个数周至数月的窗口期。,PCR法检测血浆BKV-DNAVS组织活检,10,美国器官移植手册建议：肾移植后，成人前3个月至少每月检测一次，之后两年内每3个月检测一次；儿童前六个月每月检测一次，两年内每3个月检测一次；浓度104copies/mL,一个月之内重复检测；推荐减少免疫抑制剂用量，建议进行活检。浓度104copies/mL，推荐减少免疫抑制剂用量。至少每两周检测一次血浆BKV-DNA，建议进行移植物活检。监测血浆中BKV病毒的负荷量可作为调查免疫抑制剂用量、维持治疗时间的一项临床指标。,血浆BKV-DNA,DeepaliKumar,AtulHumar,et.al.TheASTHandbookofTransplantInfections,1stedition.2011,51-54.,注：拷贝数阈值可以根据所使用的测定法而变化,11,临床上,确诊BKVN必须通过肾穿刺标本的组织学检查。光镜下表现为由浸润的单核淋巴细胞、小管炎和核内包涵体组成的间质性肾炎。免疫组化可用于检测石蜡包埋、冰冻组织或细胞学标本中的BKV,组织学检查和免疫组化,12,目前对BKV感