（中药学专业论文）精制狗皮膏制备工艺及质量标准研究.pdf

中文摘要精制狗皮膏由生川乌、防己、山奈、透骨草、延胡索、干姜、辣椒、蟾蜍、樟脑、冰片、薄荷脑、水杨酸甲酯组成，具有舒筋、活血、散寒、止痛的功效，用于筋骨痛，急性挫伤，扭伤，风湿痛，关节痛，胁痛，肌肉酸痛等症本品已有国家部颁标准，标准号为w s 3 一b 1 6 6 5 9 3 ，部分工艺尚未明确，本课题对该制剂的制备工艺、质量标准进行了系统的试验研究一、制备工艺研究在提取工艺条件方面，原标准中已明确用平行试验法以浸齑的提取率为指标，筛选生川乌等七味药材加8 5 乙醇的用量。结果提取工艺条件为：方中生川乌等七味药材加等倍的8 5 乙醇浸润2 4 小时，再加3 倍量的8 5 乙醇煎煮三次，每次1 5 小时。在药液浓缩工艺中，采用低温减压的浓缩方法。保证原标准工艺的要求回流液需经浓缩达到相对密度为1 3 1 3 5 。为保证热敏感物尽可能少受损失，浓缩的温度应在5 6 6 0 ，罐内压力应控制在o 0 6 一o 0 7 m p a 之间。在橡胶膏基质制备工艺中，通过多方试验对各基质的用量有了明确的规定，并对其质量控制也作了相应的规定。为大生产提供了基础。二、质量标准研究为了有效地控制本处方内在质量，确保制剂安全、有效、稳定，制订科学、合理、可行的质量标准如下：采用薄层层析法对制剂中粉防已、廷胡索二味中药进行了鉴别。原标准中防己的薄层色谱鉴别以甲苯一丙酮一乙醇一氢氧化铵( 2 0 ：2 0 ：3 ：1 ) 为展开荆，因甲苯毒性较大，故本草案对展开系统做了修改，以氯仿一丙酮一甲醇一氨水( 2 0 ：3 ：2 ：0 1 ) 为期展开剂。廷胡索所含主要成分为廷胡索乙素，原标准方法简便，验证结果表明，供试品色谱中，在对照药材色谱相应的位置上，均显相同颜色的斑点，而阴性对照在相应位置则无干扰。采用g c 对为樟脑、水杨酸甲酯进行了含量测定，并进行了方法学考察，平均回收率分别为l o o 4 ，9 9 6 8 ，r s d 为1 1 8 ，1 3 2 。证明所用方法准确、可靠，可用于制剂的含量测定。本品每片含樟脑应为6 8 1 2 4 m g ，含水杨酸甲酯应为3 2 5 9 m g 。三、稳定性考察为了药物的安全有效，保证药物存放期间质量稳定，通过对本品的初步稳定性考察，即对三批样品进行正常室温和加速试验研究考察，考察时间为六个月，结果表明本品制备工艺合理、稳定性良好。四、文献综述本文对中医治疗伤骨痛症等病理症状的研究概况进行了论述，系统查阅了相关的文献资料，对我国中医药对骨痛等症外用药物治疗的研究成果作了简要全面的综述，并结合当前研究成果对其开发前景作了展望。关键词：樟脑水杨酸甲酯制备成型工艺质量标准 精制狗皮膏a b s t r a c tj i n g z h i9 0 u p i g a o ，w h i c hi sm a d e 行o mr a d i xa c o n i t i ，r a d i xs t e p h a i l i a et e t 刑n d r a e ，r h i z o m ak a e m p f e r i ，f o l i u mt o u g u ，r h i z o m ac o r ) 订a l i s ，r h i z o m az i n g i b 谢s ，f r u c t u sc 印s i c u m ，v e n e n u mb u f o n i s ，c a m p h o r ，b o m e o l u ms y n t i l e t i c u m ，m e n t l l o l ，i s 锄e f f 酏t i v ep l l e s c r i p t i o no fc o m b i n a t i o no f 廿a d i t i o n a lc h j n e s em e d i c i | l e ，f o rr e l a x i n gm u s c l e sa 工1 dt c n d o n s ，d j s p e lc o l d n e s s ，a c e s o d y n e ，r e m o v i n gp h y s i q u ep a i n ，a c u t ec o n t u s i o n ，s t r a i n ，r h e u m a t a l g 沁a n h m l g 氓h y p o c h o n d a cp a i n ，m u s c l e sp a i n ，a sr e s u l to f ，t h ep m d u c t i o nh a dn 砒i o n a lc r i t c r i o n ，甘l ec r i t c r i o nc a nb es e e ni nw s 3 一b 1 0 5 6 9 l ，b u tt l l em e t h o do f t h es o m ep r e p a r a t i o nh a dn o tb nk n o w ni nt 1 1 eo l dc r i t c r i o n ，t h ea u t h o rh a sm a d es o m e锄e l i o m t i o n ，h a sm a d ea ne x p e r i m e n t a ls t u d yo ni t sp r e p a r a t i o n ，q u a i i t ys t a n d a r d s 1 s t l i d yo f t i l ep r e p 甜砒i o ni nt h ep o i n to fp r c p a r a t i o nt e c h n o l o g y ，w eu s e de x t 翰c t i n gr a t i oo fe x 心a c t i n ga se v a l u a t i n gi n d e x e sa n di n v e s t i g a t e dm eo p t i m u mp r 印a r i n gt i m eb yt h ep a r a l l e it e s t t h eo p t i m 啪e x t r a c t i n gc o n d i t i o nw a s ：s o a k i n gt l l es e v e nh e r b sw i t hs 锄ea m o l u l to f8 5 e 廿l 锄o lf o r2 4h o u r sa n de x t r a c t i n gt h es e v e nh e r b sw i t h8 5 e t l l a n o if o r3t i m e s 姗db o i l i n g5h o u r s ，t h ea m o u n to f e t h a n o iu s e dw a s 3t i m e so f m ed r u gm i x t u r er e s p e c t i v e l y a d o p tt 1 1 ec o n c e n t r a t e dm e t h o do f1 0 wt e m p e r a t u r ed e c o m p r e s s i o ni nt h ei n s p i s s a t i o n so f t l l ec r a f to ft h em e d i c i n el i q u i d 。p m m i s et h ef o r l e rr e q u e s to f s 协n d a r dc r a f t 2 s t u d yo f q u 8 j i t ) ，s t a n d a r df o rc o n 咖l l i n gm i sp r e s c r i p t i o ni n s i d eq u a l i t ya v a i l a b l y i n s u r cap r o d u c ts a f e t y ，v a i i d ，s t a b i l i t y ，e s t a b i i s hs c i e n c e ，r e a s o n a b l e ，v i a b l eq u a l i t ys t a n d a r d 骶f o i i o w s ：t h er a d i xs t e p h a n i a ct e 仃a i l d r a c ，r h i z o m ac o r y d a l i s ，w e r ei d e n t m e db yt l c a n dt h ef o r r n e rr e q u e s to fs t a n d a r dc r a nf o rt h er a d j xs t e p h a l l j a et e m m d r a e 、v a st o l u e n e a c e t o n e - e t h a n o l - 柚m o n i u mh v d m x i d e ( 2 0 ：2 0 ：3 ：1 ) ，t h et o x i c i t vo f e l u a n ti nw a ss e r - o u s ，s ow ec h a n g cht oc h l o r o 岛r m a c e t o n e m e t h a n o l a m m o n i a ( 2 0 ：3 ：2 ：o 1 ) 。t h eb a s i so fr h i z o m ac o r y d a i i si st e 扛a h y d r o p a l m a t i n e ，a n dt h em e t 1 0 di nt h ef o r n l e rr e q u e s lo f s t a 力d a r dc r a rw 8 se a s y ，j tw a sv c r j f j e df h a l ，p r o v j d et ot r ya j la r t i c j ec o j o rt oc o m p o s et 0w i n ，i nc h e c k i n ga g a i n s tt i ep o s i t i o nt h a tt h em e d i c i n em a t e r i a lc o l o rt a b l ec o 盯e s p o n d s ，t h es p o to fa l ls a m ec o l o r ，a n dt h ef e m i n i n eg e n d e rc h e c ka g a i n s tb ec o r r e s p o n d i n gp o s i t i o nt 0t h e nh a v en oi n t e r f e r e n c e 。f o r t b es a k eo f a s s a y so fc 锄p h o ra n dm e t h y i5 a l j c y 】a t e ，t h en e wg cm e 廿l o d sw e r ed e v e l o p e d t h ea v e r a g er e c o v e r yr a t e sw e r elo o 4 4 ，9 9 6 8 w h i l er s dw e r e1 18 ，1 。3 2 a s s a ym e t h o d sw e r ev a l i d a t e di nt h er e s e a r c ho fc o n t e n t 0 nt h eb a s i so ft h ea b o v e m e n t i o n e dq u a n t i t a t i v ca i l a l y s i sm e m o d sf o rc a m p h o ra n dm e t h y ls a “c y i a t e ，t h eq u a l i t ys t a n d a r do fj i n g z i l ig o u p i g a ow a sd r a f t e d t h ec o n t e n to fc 哪p h o ri s6 8 1 2 4 m g ，t h ec o m e n to f m 砒y ls a l i c y l a t ei s3 2 59 i l l gi no n eu n i t 3 r e s e a r c ho nt h es t a b i l 时o f p b a 吼a c e u t i c a lf o rt h es a k eo fs a f b t y 锄da v a i l a b i l 时o f t h em e d i c a t i o n ，e n s u r i n gt l es t a b i l i z a t i o no fq u a l i t yw h e nt l l em c d i c a t i o nb e i n gl e a v ei nc a r e o v e r p a s ss e e i n ga b 伽tt h e 衔n g es t a b i l i z a t i o no f t h em e d i c a t i o n t h er e s u l to f p r e l j m i n a r ys 诅b i l i t yi n d i c a t e dt h a tt h er e s u l to fd l a 阳c t e r s ，i d e n t i 6 c a t i o n s ，t e s t ，c o n t c n td e t e 肋i n a t b nu n c h a n g e di ns l xm o n t h s 。hs h o w c dt h a tt h eq u a l i t yi ss t a b i l i z e d 。4 s u m m a r yo fl i t e r a t u r et h ea r t i c l ee i a b o 眦e dt h er c s e a r c ho f b r i e f i n go fp a t h o l o 影o nh e r b a l i s td o c t o rt r e a t i n gp a i ni nb o n eo rm u s c l e ，w i t hr e f | e rt ot h ec o r r e l a t es 哪m a r yo fl i t e r a t u r ei ns y s t e m ，s 岫m i n gu pe n t i r e l ya n ds i m p i yo n 1 ep r o d u c t i o no ft r c a t i n gp a i ni nb o n eo rm u s c l ew i 廿lt c m m a k e de x p e c t a t i o no nt h ef o r e g r o u n do f e x p l o i t a t i o n k e yw o r d s ：c a m p h o ra n dm e t h y ls a l i c y l a t e ，p r e p a r a t i o nt e c h n o l o g yq u a l i t ys t 醐d a r d s j i n g z i l ig o u p 蟾a 0郑重声明本人的学位论文在导师指导下独立撰写并完成的，学位论文没有剽窃、抄袭、造假等违反学术规范和侵权行为，本人愿意承担由此产生的法律责任和法律后果，特此郑重声明。学位论文作者( 签名) ：弓丞舡二占年；月r 日前言疼痛是损伤后最常见的必有症状，也是许多骨病的主证或伴随症状。损伤可引起人体内部气血、脏腑，经络的功能紊乱，其中首当其冲的是伤及气血。清沈金鳌说：“跌扑闪挫，卒然身受，由外及内，气血俱伤病也。”外伤损伤了皮肉筋骨、脏腑经络，造成骨折、脱位、筋伤及内伤，导致气血运行不畅或血溢于脉外，经络阻滞，不通则痛，这是伤后疼痛发生的主要病机。i l 缶床多以祛瘀血止疼痛，祛风散寒，除湿止痛等法为治“精制狗皮膏”原载于部颁标准中w s 3 b 1 6 6 5 9 3 ，具有舒筋，活血散寒、止痛等功效，其制法鉴别已有相应标准，但部分工艺参数尚未明确。为此，我们对该方的制备工艺及复方制剂的部分质量标准进行研究，并对其稳定性进行了考察，确保制备工艺科学合理，药物制剂安全有效、稳定可控。为将其进一步开发利用提供了依据。实验研究第一部分精制狗皮膏剁备工艺研究1 精制狗皮膏的制备工艺1 1 处方生川乌7 7 4 9防己2 4 8 9山柰2 4 瞻廷胡索1 5 5 9干姜1 2 4 9辣椒3 l g蟾酥4 6 9冰片4 魄薄荷脑9 3 9橡胶松香氧化锌羊毛脂等橡胶膏基质适量透骨草1 5 5 9樟脑1 2 4 9水杨酸甲酯5 9 9共制1 0 0 0 片1 2 剂型：贴剂1 _ 3 制法取以上十二味药材，除樟脑、冰片、薄荷脑、水杨酸甲酯外，蟾酥粉碎成粗粉用7 0 乙醇浸泡至稀糊状，滤过，滤液备用。其余川乌等七味先粉碎成粗粉，用等量的8 5 乙醇润湿，再每次用3 倍量的8 5 乙醇回流，共三次，每次1 5小时，合并滤液，回收乙醇并浓缩至相对密度为1 3 0 l _ 3 5 ( 5 5 6 0 ) 的稠膏与上述滤液合并，加入樟脑等四味，混匀，另取1 7 2 倍重量由橡胶、松香等制成的基质，制成涂料。进行涂膏，切段，盖衬，切成8 锄1 2 c m 小块，制成1 0 0 0 片，即得。工艺流程图如下：工艺流程圈2 精制狗皮膏制备工艺研究资料2 1 药品、试药与仪器2 1 1 药品、试药精制狗皮膏中各味药材均购于武汉银杏饮片药厂，经分析检测鉴定，均符合中国药典2 0 0 0 年版规定。氧化锌凡士林羊毛脂松香橡胶2 1 2 仪器多功能提取器粉碎机2 2 提取工艺路线设计潜山县氧化锌有限责任公司武汉京燕润滑油有限公司上海华亭羊毛脂厂黄石天丰物质有限公司黄石天丰物质有限公司精制狗皮膏由生川鸟、防己、山柰、透骨草，延胡索、干姜、辣椒、蟾蜍、樟脑、冰片、薄荷脑、水杨酸甲酯组成，具有舒筋活血、散寒、止痛的功效，用于筋骨痛，急性挫伤，扭伤，风湿痛，关节痛，胁痛，肌肉酸痛等症【孤。其中生川乌r a d i xa c o n i t i 含总生物碱约0 8 2 一1 5 6 ，其中主要为剧毒的双酯类生物碱，即中乌头碱( m e s a c o i l i t i n e ) 及乌头碱( a c o n i t i n e c 3 4 h 4 0 1 n ) 为o 0 l o 2 3 ，次乌头碱( h y p a c o n i t i n e ) 为o 0 1 o 1 1 。此外，尚含塔拉弟胺( t a l a t i s 锄i n e )及j i i 乌碱甲、乙( c h u a n 、u b a s e a b ) 等。防己r 丑d i xs t e p h a i l i a e t e t 啪d r a e 含多种生物碱，其中主要为粉防己碱( 汉防己甲素t e t r a i l d r i n e ) 、去甲基粉防己碱( 汉防己乙素d e m e t l y lt e t r a t l “n e ) ，轮环藤季铵碱( c y c l a i l o l i n e ) 等。延胡索r k z o m a c o r y d a l i s 含多种生物碱，总量在0 5 9 0 7 4 ( 北京栽培药材) 。其中有d 紫堇碱( d c o 吨l i n e ，即延胡素甲素) 、d 1 一四氢巴马亭( d l t e t r a l l y d r o p a l m a t 妇，印廷胡索乙素) 、原鸦片碱( p m t o p i n e ，即延胡索丙素) 、l一四氢黄连碱( i t c t r a h y d m c o p t i s i n e ，即延胡索丁素) 、d l 一四黄连碱( 即延胡索戊素) 、i 一四氢非洲防己碱( i t e 廿曲y d r o c o l u m b 甜n i n c ，即延胡索已素) 、d 一紫堇鳞茎碱( d c o r y b u l b i n e ，即延胡索庚素) 、d 一海罂粟碱( d g l a u c i n e ，即延胡索壬素及延胡索癸素) 、a 一别隐品碱( a a l l o 一呻p t o p i n e ，即去氢延胡索甲素) 等。延胡索乙素为主要镇痛、镇静成分。去氢延胡索甲素对胃及十二指肠溃疡有疗效。山柰r l l i z o m a k a 咖p f 酬a e 含有龙脑( b o m e 0 1 ) ，对甲氧基桂皮酸乙酯( e t h y ld m e t l o x y t r a i l s c 王r m a m a f e ) ，桂皮酸乙酯，茨烯( c a m p h e n e ) ，烯一3( c a r e n e 3 ) ，对甲氧基苏合香烯( p _ m e t l l o x y s t y r e n e ) 等，又含山柰酚( k 蚴p f e r 0 1 ) ，山柰素( k 丑e m p f c r i d e ) 千姜附l i z o m a 西n g i b e r i s 含挥发油油中主要成分为姜醇( z i l l _ g i b c r 0 1 ) 、姜烯( z 证g i b c r c n c ) 没药烯、a 一姜黄烯、a 和p 一金合欢烯、芳樟醇、桉油素等。姜的辣味成分为姜辣素( 姜酚g i i l g e m l ) 及分解物姜酮( z i l l g e r o n e ) 、姜烯酚( s h 0 2 a 0 1 ) 此外，尚含多种氨基酸5 卅。本品已有国家标准，标准号为w s 3 - b 1 6 6 5 、9 3 。从各药味所含主要有效成分的理化性质、提取工艺，采用先分别粉碎，蟾蜍加7 0 乙醇浸润，生川乌等加8 5 乙醇回流，滤液真空浓缩成稠膏是合理可行的能有效提取各药味中的有效成分，减少有效成分的损失，其工艺参数基本上是明确的，仅部分工艺参数需进一步明确。如生川乌等加8 5 乙醇用量仍不明确，为此，以浸膏量的提取率为指标，筛选生川乌等加8 5 乙醇用量。2 3 提取工艺条件的研究2 3 1 生川鸟、防己等七味药材8 5 乙醇浸润工艺依据药粉润湿的特性，药粉在装器前一定要先加规定量的溶剂润湿，并密闭放置一定时间，使粉末充分吸液膨胀，以免在器内膨胀，造成药粉过紧或上浮。一般一份药粉约用一份溶剂润湿，放置1 5 分钟至6 ，j 、时即可。故将生川乌、防己等七味药材清洗后烘干( 烘干温度 内聚力粘合力 快粘力这一总要求为达到这一要求，制定基质常用的辅料通常由橡胶2 4 2 6 ，松香2 7 3 0 ，氧化锌3 l 一3 4 ，凡士林6 8 ，羊毛脂5 6 ，其它约l o 。上述各种基质的配比因工艺等不同而略有差异【4 1 。2 4 2 基质组合原理橡胶其弹性，能溶于汽油易成胶浆，加入松香使基质增加粘性，用氧化锌增加内聚力作填充剂，以辅助基质与裱背粘牢，由于氧化锌能与松香酸生成盐，故可减轻其对皮肤的刺激性此外氧化锌还具收敛作用凡士林、液状石蜡作基质的软化剂，增加柔软性和耐寒性防止成品硬化，保持膏药的粘着性，液状石蜡可增强膏面的光亮性，羊毛脂具吸水性，可使皮肤蒸发的水分即时吸收。2 4 _ 3 制备工艺橡胶膏剂的基质具有成熟的工艺，把橡胶切成块状后或炼胶机轧成网状薄片。置洁净容器中，加1 2 0 号汽油浸泡不少于2 4 小时，使橡胶溶胀成凝胶状，橡胶充分溶胀后即可进行搅拌制膏。先将橡胶搅拌2 小时，然后加入氧化锌搅拌l 小时，再加入松香搅拌l 小时，待松香溶解后，加羊毛脂、凡士林搅拌半小时，最后加入全部药物及中药浸膏混合搅拌3 小时。搅拌结束，胶浆通过8 0 目筛滤过，滤过完毕取样检验，检验合格后将胶浆收入不锈钢桶中密封静置2 4 小时以上。静置后的胶浆经涂胶机涂在基材上，经烘道加热挥汽油，烘道内室温度控制在6 0 6 5 ，速度为3 5 米分钟，控制含膏量，收卷、切条、复衬、切片、抽样检验、包装，即得2 4 4 制剂主要工序质量控制表2 制剂主要工序质量控制2 5 小结根据处方中所含主要成分的性质，并结合部颁标准中相应的工艺要求，确定了本制剂药材的提取工艺路线，即方中生川乌等七味药材加等倍量8 5 乙醇浸泡2 4 小时后，加3 倍量的8 5 乙醇煎煮3 次，每次1 5 小时。并对药液浓缩工艺及橡胶膏基质的制备工艺进行了进一步的说明。明确其工艺路线。第二部分成品质量标准的研究1 精制狗皮膏的质量标准草案精制狗皮膏 处方】生川乌7 7 4 9防己2 4 8 9山柰2 4 始透骨草1 5 5 9廷胡索1 5 5 9于姜1 2 4 9樟脑1 2 4 9辣椒3 1 9蟾酥4 6 9冰片4 6 9薄荷脑9 3 9水杨酸甲酯5 9 9橡胶松香氧化锌羊毛脂等橡胶膏基质适量 制法】取以上十二味药材，除樟脑、冰片、薄荷脑、水杨酸甲酯外，蟾酥粉碎成粗粉用7 0 乙醇浸泡至稀糊状，滤过，滤液备用。其余川乌等七味先粉碎成粗粉，用等量的8 5 乙醇润湿，再每次用3 倍量的8 5 乙醇回流，共三次，每次1 5小时，合并滤液，回收乙醇并浓缩至相对密度为l - 3 0 一1 3 5 ( 5 5 6 0 ) 的稠膏与上述滤液合并，加入樟脑等四味，混匀，另取1 7 2 倍重量由橡胶、松香等制成的基质，制成涂料。进行涂膏，切段，盖衬，切成8 c m 1 2 c m 小块，制成1 0 0 0 片，即得。【性状】本品为淡黄色的片状橡胶青；气芳香。【鉴别】( 1 ) 取本品4 片，置l o o l n l 圆底烧瓶中，加7 0 乙醇5 0 r n l ，加热回流l小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇l m l 使溶解，作为供试品溶液。另取粉防己碱对照品，加氯仿制成每1 m l 中含1 m g 溶液，作为对照品溶液照薄层色谱法( 中国药典2 0 0 0 年版一部附录v tb ) 试验，吸取上述两种溶液各5 u l ，分别点于同一硅胶g 薄层板上，以氯仿丙酮。乙醇氢氧化铵( 2 0 ：2 0 ：3 ：1 ) 为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。( 2 ) 另取廷胡索对照药材o 5 9 ，加7 0 乙醇2 0 m l ，置水浴上加热回流0 5小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇3 m l 使溶解，作为对照药材溶液照薄层色谱法( 中国药典2 0 0 0 年版一部附录v ib ) 试验，吸取【鉴别】( i ) 项下供试品溶液及上述对照药材溶液各5 u l ，分别点于同一硅胶g 薄层板上，以正丁酵一冰醋酸一水( 7 ：l ：2 ) 为展开荆，展开，取出，晾干，置紫外光灯( 3 6 5 n r n ) 下检视供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。 检查 按中国药典2 0 0 5 年版一部附录i i 贴膏剂项下规定，对样品的含膏量、重量差异、耐热性、微生物限度、重金属、砷盐进行了检查，结果符合药典规定。照橡胶膏剂含膏量测定法( 中国药典2 0 0 0 年版一部附录iq ) 测定，用氯仿作溶剂。每1 0 0 c m 2 应不少于1 5 9 。 含量测定】照中国药典2 0 0 0 版一部气相色谱法( 附录e ) 测定( 1 ) 樟脑、水杨酸甲酯的含量测定色谱条件与系统适应性试验：毛细管柱( p e g 2 0 m ，3 0 r n o 3 2 1 1 1 】nxo 2 5 啪，) ；分流比1 ：1 0 ；柱温为1 6 5 ；理论板数按内标物萘峰计算应不低于5 0 0 0 ；各色谱峰之问分离度应符合要求。内标溶液的制备取萘适量，精密称定，加甲醇溶解并稀释成每1 m l 含3 0 m g的溶液，摇匀，作为内标溶液；对照品溶液的制备另取樟脑4 0 m g 、水杨酸甲酯约2 6 m g ，精密称定，置l o m l 容量瓶中，精密加入内标溶液1 m l ，用甲醇稀释至刻度，摇匀，取o 5 1 u l注入气相色谱仪，按峰面积计算校正因子。供试品溶液的制备取本品6 片，除去盖衬，剪成小块，置2 5 0 m 1 具塞烧瓶中，精密加入甲醇1 0 0 i i l l ，称定重量，置8 5 水浴上团流2 小时，放冷，再称重，加甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤。精密量取内标溶液l m l 置1 0 m l 量瓶中，加续滤液稀释至刻度，摇匀。取o 5 1 肛l 注入气相色谱仪，测定，计算，即得。测定法本品每片含樟脑( c l o h l 6 0 ) 应为6 8 1 2 4 m g 、含水杨酸甲酯( c 3 h 8 0 3 ) 应为3 2 5 9 m g 【功能与主治】舒筋，活血、散寒、止痛。用于筋骨痛，急性挫伤，扭伤，风湿病，关节痛，胁痛，肌肉酸痛等症。【用法与用量】贴患处【注意l 凡对橡胶膏过敏、皮肤破裂、糜烂者不宜贴用。【贮藏】密闭，置阴凉处。2 精制狗皮膏质量标准起草说明2 1 药品、试剂与仪器2 1 1 药品、试药樟脑对照品( 供含量测定用)( 中国药品生物制品检定所批号：7 4 7 - 2 0 0 1 0 6 )水杨酸甲酯对照品( 中国药品生物刘品检定所批号：7 0 7 2 0 0 1 0 6 )粉防己碱对照品( 中国药品生物制品检定所批号：7 1 1 。9 3 0 4 )延胡索对照药材( 中国药品生物制品检定所批号：9 2 8 9 0 0 1 )萘( 分析纯)甲醇( 分析纯上海化学试剂采购供应五联化工厂)2 1 2 仪器岛津g c 1 4 c 气相色谱仪，浙江大学n 2 0 0 0 色谱工作站；梅特勒a g l 3 5 电子天平毛细管柱p e ( - 2 0 m ，3 0 m o 3 2 m m o 2 5 啪( 中科院兰州物理研究所)毛细管柱f f a p ，3 0 mx0 3 2 m m o 3 3 u m( 中科院兰州化学物理研究所)2 2 鉴别方法的建立本文通过多次试验后建立了制剂中所含防己、廷胡索2 味中药药材的t l c鉴别方法。92 2 1 防己的鉴别1 4 1 6 】防己的薄层色谱鉴别，本实验参照卫生部药品标准中药成方制剂第八分册精制狗皮膏鉴别( 1 ) 的方法制订。原标准中防己的薄层色谱鉴别以甲苯一丙酮乙醇一氢氧化铵( 2 0 ：2 0 ：3 ：1 ) 为展开剂，因甲苯毒性较大，故本草案对展开系统做了修改方法( 1 ) 供试品溶液的制备：取本品4 片，剪碎，置1 5 0 1 l l l 具塞烧瓶中，加乙醇5 0 m l ，超声处理4 5 分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇l m l 使溶解，作为供试品溶液。对照品溶液的制备：取粉防己碱对照品适量，加氯仿制成每1 m l含1 m g 的溶液，作为对照品溶液。空白对照溶液的制备：取无防己的空白样品同供试品溶液的制各方法，制成防己的空白对照溶液。照薄层色谱法( 中国药典2 0 0 0 年版一部附录v i b ) 试验，吸取上述供试品溶液、对照品溶液、空白对照溶液各5 h l ，分别点于同一硅胶g 薄层板上，以氯仿一丙酮一甲醇( 6 ：l ：1 ) 为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液供试品色谱中，供试品溶液、空白对照品溶液有拖尾现象方法( 2 ) 供试品溶液的制备：取本品4 片，置1 0 0 m l 圆底烧瓶中，加7 0乙醇5 0 m l ，置水浴上加热回流l 小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1 1 i l l 使溶解，作为供试品溶液。对照品溶液的制备：取粉防己碱对照品适量，加氯仿制成每1 m l 含1 m g 的溶液，作为对照品溶液。空白对照溶液的制备：取无防己的空白样品同供试品溶液的制备方法，制成防己的空白对照溶液。照薄层色谱法( 中国药典2 0 0 0 年版一部附录v i b ) 试验，吸取上述供试品溶液、对照品溶液、空白对照溶液各5p 1 ，分别点于同一硅胶g 薄层板上，以氯仿一丙酮一甲醇一氨水( 2 0 ：3 ：2 ：o 1 ) 展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。空白对照溶液在该处无干扰斑点。精制狗皮膏中粉防己碱能得到较好地分离，r f值适中，斑点显色清晰，大小适中，易于观察和判断。方法( 3 ) 供试品溶液的制备：取本品4 片，置1 0 蝴圆底烧瓶中，加7 0乙醇5 0 m l ，置水浴上加热回流1 小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇lr n l 使溶解，作为供试品溶液。对照品溶液的制备：取粉防己碱对照品适量，加氯仿制成每1 m l 含1 m g 的溶液，作为对照品溶液。空白对照溶液的制备：取无防己1 0的空白样品同供试品溶液的制备方法，制成防己的空白对照溶液照薄层色谱法( 中国药典2 0 0 0 年版一部附录v i b ) 试验，吸取上述供试品溶液、对照品溶液、空白对照溶液各5 l ，分别点于同一硅胶g 薄层板上，以正己烷一醋酸乙酯一氨水( 4 ：4 ：o 2 ) 为展剂，展开，取出，晾干，碘薰显色。供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上有拖尾现象，且空白对照溶液有干扰。故本标准草案收载方法( 2 ) 为防己的鉴别方法依法检验三批样品：检验结果均符合规定。薄层色谱图见彩照( 1 ) 。2 2 2 延胡索的鉴别【】3 】延胡索的薄层色谱鉴别，本实验参照卫生部药品标准中药成方制剂第八分册精制狗皮膏鉴别( 2 ) 的方法制订。供试品溶液的制备：取本品4 片，置1 0 0 i i l l 圆底烧瓶中，加7 0 乙醇5 0 m l ，置水浴上加热回流l 小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1 m l 使溶解，作为供试品溶液。对照药材溶液的制备：取廷胡索对照药材o 5 9 ，加7 0 乙醇2 0 m l ，置水浴上加热回流o 5 小时，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇3 m l 使溶解，作为对照药材溶液。空白对照溶液的制备：取无延胡索的空白样品同供试品溶液的制备方法，制成延胡索的空白对照溶液。照薄层色谱法( 中国药典2 0 0 0 年版一部附录v i b ) 试验，吸取供试品溶液、对照药材溶液及空白对照溶液各5 “l ，分别点于同一硅胶g 薄层板上，以正丁醇冰醋酸一水( 7 ：1 ：2 ) 为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯( 3 6 5 m ) 下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。空白对照溶液在该处无干扰斑点。供试品溶液中延胡索能较好地分离，置紫外光灯( 3 6 5 m ) 下检祝，荧光斑点清晰，r f 值适中，易于观察和判断。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点，故仍采用。依法检验三批样品：检验结果均符合规定。薄层色谱图见彩照( 2 ) 。2 3 樟脑、水杨酸甲酯含量测定方法的建立2 3 1 供试品溶液的制备取供试品2 0 片，除去盖衬，称重，剪碎，精密称取6 片重量，置于圃底烧瓶中，加甲醇1 0 0 m l ，水浴回流1 2 0 分钟后，放冷，再称重，加甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤，精密量取内标溶液l m l 置1 0 m l 量瓶中，加续滤液稀释至刻度，摇匀，即得。2 3 2 对照品溶液的制备内标溶液的制备精密称取萘0 7 5 9 ，加甲醇溶解并定容至2 5 m l ，制成内标溶液精密称取樟脑对照品4 0 m g 、水杨酸甲酯对照品2 6 m g ，置l o m l 量瓶中，加甲醇适量使溶解，精密加入内标溶液l m l ，加甲醇稀释至刻度，作为对照品溶液2 _ 3 _ 3 阴性样品溶液的制备按处方比例称取除樟脑、水杨酸甲酯以外的其余药味，按制备工艺制成缺樟脑、缺水杨酸甲酯的阴性样品，按上述供试品制备方法制成缺樟脑、缺水杨酸甲酯的阴性对照溶液2 3 4 色谱柱及色谱条件的选择氢火焰离子化检测器，进样口温度为1 9 0 ，检测器温度为2 0 0 ，载气( n 2 )压力为5 0 k p a ，氢气压力为5 0 k p a ，空气压力为5 0 k p a ，检测器灵敏度r 锄g e 为1 ，进样量为1 l ，分流比l ：1 0 采用填充柱时，柱温较低( 7 5 ) ，分析时间较长( 约需4 5 分钟色谱峰才能出蜂完成) ，柱效较低经摸索选用毛细管柱、高柱温( 1 6 5 柱温) 能缩短分析时间并能较好地分离各组分，各组分能在1 0 分钟内较好地分离，主成分峰出峰顺序为樟脑( 4 4 7 分) 、薄荷脑( 4 9 1 分) 、冰片( 异龙脑5 3 2 分、龙脑5 6 5 分) 、水杨酸甲酯( 6 6 0 分) 。内标物质( 萘) 出峰( 6 3 2分) 在水杨酸甲酯之前，且与各组分分离良好。故试验选定p e g 2 0 m 毛细管柱为测定用色谱柱。对照品溶液及供试品溶液色谱图见图1 图1 2 。2 3 5 提取方法的选择取供试品2 0 片，除去盖村，称重，剪碎，精密称取6 片重，共3 份：甲醇1 0 0 m l ，超声提取6 0 分钟；甲醇1 0 0 m l ，水浴回流6 0 分钟；甲醇1 0 0 m l ，水浴回流1 2 0 分钟。上述样品溶液9 m 1 分别加内标液ln l l ，照含量测定方法测定含量，结果见表3 。表3 提取方法的选择结果：以上提取方法测定樟脑及水杨酸甲酯的含量差异较大，故选择提取效果最好的方法，即加入甲醇1 0 0 m l ，水浴回流1 2 0 分钟作为该样品的提取方法。2 _ 3 6 色谱专属性考察吸取阴性对照溶液l u l 进样，观察阴性对照溶液在樟脑、水杨酸甲酯峰的保留时间处是否有干扰峰。测定结果表明：在对应樟脑、水杨酸甲酯保留时间处无明显杂质峰干扰。见色谱图3 。2 3 7 线性关系考察2 3 7 1 樟脑取浓度为3 8 9 2 4 n 1 m l 樟脑对照品溶液，分别精密量取o 5 、l 、3 、5 、l o 、1 5 、2 0 i n l 于2 5 甜量瓶中，分别加内标液1 m l ，加甲醇稀释至刻度，撂匀，即得如下浓度的樟脑对照品溶液，分别进样lu l ，按拟定的色谱条件测定，以峰面积比值为纵坐标，樟脑进样量( 曲为横坐标绘制标准曲线，计算得回归方程：y= 0 1 4 9 7x - 0 0 1 0 6 ，r = 0 9 9 9 9 。结果见表4 。表4 樟脑线性关系考察实验表明樟脑进样量在0 7 7 8 5 3 1 1 4 u g 范围内呈良好的线陛关系。线性关系图如下所示。6藿4_ | | l 囊201 02 03 0进样量( u g )图1 樟脑标准曲线图4 02 3 7 2 水杨酸甲酯取浓度为3 7 6 8 3 m 咖1 水杨酸甲酯对照品溶液，分别精密量取0 5 、l 、3 、5 、1 0 、1 5 、2 0 r n l 于2 5 m l 量瓶中，分别加内标液1 m l ，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得如下浓度的水杨酸甲酯对照品溶液，分别进样1 “l ，按拟定的色谱条件测定，以峰面积比值为纵坐标，水杨酯甲酯( “g ) 为横坐标绘制标准曲线，计算得回归方程：y = o 1 0 5 4 x 加0 0 7 l ，产o 9 9 9 9 。结果见表5 。表5 水杨酸甲酯线性关系考察实验表明水杨酸甲酯进样量在0 7 5 3 7 3 0 1 4 6 m g 范围内呈良好的线性关系。线性关系图如下所示。1 42 _ 3 8 精密度试验及稳定性试验取供试品溶液，分别于o 、2 、4 、8 、l o 、1 2 小时进样一次，连续进样6 次，结果樟脑峰面积与蔡峰面积比值平均为1 2 7 5 2 ，r s d 为1 8 ；水杨酸甲酯峰面积与萘峰面积比值平均为o 3 1 3 0 ，r s d 为1 4 。结果见表6 表6精密度试验结果实验结果表明，供试品溶液在1 2 小时内稳定且仪器的精密度良好。2 3 9 重复性试验取批号为2 0 0 4 0 5 0 l 的供试品5 份，照含量测定方法测定5 次，樟脑平均含量为9 8 1 m g ，片，r s d 为o 6 4 ；水杨酸甲酯平均含量为3 7 9 l m 片，r s d 为1 2 ；结果见表7 、表8 。表7樟脑重复性试验结果结论：从以上试验可知，本方法的重复性良好。2 3 1 0 加样回收率试验取批号为2 0 0 4 0 5 0 3 的供试品( 樟脑含量为3 3 8 3 m g ，g 水杨酸甲酯含量为1 3 0 7 m g ，g ) 9 份，每份供试品约3 片按供试品溶液的制备方法测定含量，精密加入对照品适量( 分别相当于样品含量的8 0 、1 0 0 、1 2 0 ) ，照含量测定方法精密加入内标液1 m l ，用提取液定容至l o m l ，依法测定。结果樟脑平均回收率为l o o 4 ，r s d 为1 2 ，n = 9 ；水杨酸甲酯平均回收率为9 9 6 ，r s d 为1 3 ，n - 9 。结果见表9 、表1 0 。1 6表9 樟脑回收率试验结果称样量样品含樟加入樟脑实测樟脑回收率平均值r s d17( g )脑量( m g ) 量( m g ) 量( m g )( )( )( )l8 6 1 2 52 9 1 3 62 3 3 1 05 2 8 1 91 0 1 6 028 4 5 2 72 8 5 9 52 3 0 4 65 1 8 0 2l o o 6 938 5 6 2 32 8 9 6 62 3 1 8 45 2 5 2 61 0 1 6 28 + 4 0 1 72 8 4 2 32 8 8 6 35 7 4 - 3 31 0 0 5 18 6 0 3 38 5 9 l o8 2 6 7 38 2 8 9 68 3 7 3 82 9 1 0 42 9 4 1 25 8 4 6 69 9 8 31 0 0 4 41 1 82 9 0 6 32 9 0 5 55 8 5 9 51 0 1 6 42 7 9 6 83 3 5 6 26 l o 0 49 8 1 22 8 0 4 43 3 6 5 36 1 4 7 89 9 3 52 8 3 2 83 3 9 9 46 2 5 3 91 0 0 6 4表l o 水杨酸甲酯回收率试验结果2 3 1 1 样品测定结果及含量限度取精制狗皮膏1 0 批：2 0 0 4 0 5 0 1 、2 0 0 4 0 5 0 2 、2 0 0 4 0 5 0 3 、2 0 0 4 0 5 0 4 、2 0 0 4 0 5 0 5 、1 72 0 0 4 0 5 0 6 、2 0 0 4 0 5 0 7 、2 0 0 4 0 5 0 8 、2 0 0 4 0 5 0 9 、2 0 0 4 0 5 1 0 ，照含量测定方法依法测定，测定结果见表1 1 1 0 批样品樟脑含量在其