（中药学专业论文）细辛中马兜铃酸的炮制脱毒研究.pdf

细辛中马兜铃酸的炮制脱毒研究摘要细辛为马兜铃科植物北细辛、汉城细辛、或华细辛的根及根茎。始载于神农本草经，列为上品。具有祛风散寒、温肺化饮，通窍止痛的功效。细辛被国家医药管理局推荐为重点发展的6 3 种紧缺中药材之一，同时又被列为国家两个重点中药材之一，是国际国内需求量较大的常用中药。据部颁成方制剂标准和中国药典等得不完全统计，处方中含有细辛的中成药有1 7 6 个。细辛作为马兜铃科植物含有马兜铃酸，马兜铃酸有致癌及肾损害作用。“马兜铃酸肾病”曾在国际上引起了轩然大波，2 0 0 0 年5 月3 1 日，f d a 发布了“f d a 对卫生行业的有关含有马兜铃酸植物药物和食品的通告”，并附有相关药物的目录。其中，在可能混杂有马兜铃酸的植物药物( b 类) 中，包括细辛这位药。2 0 0 0 年6 月9 日，f d a 在“至今未收到类似不利事件报告”的情况下，命令停止进口、制造和销售已知含有和“怀疑含有马兜铃酸的原料和成品。至此，含有马兜铃酸的中药材陆续遭到了不同程度的禁用，对我国中药产业产生了极不良影响。为解决细辛及众多含马兜铃酸药材的毒性问题，以去毒存效为目的，根据马兜铃酸的化学性质，采取碱制的炮制手段，将细辛中的马兜铃酸选择性的去除，而对其有效成分得以保留或少流失，在去除毒性成分的前提下，又保证不影响药材的药效。利用h p l c 、g c 手段对药典规定的三个品种、五个不同产地的细辛做了质量评价的研究，筛选出了有效成分含量高、马兜铃酸含量低的品种。对细辛的不同产地、不同入药部位的有效成分和马兜铃酸的含量做了差异比较分析。结果表明，华细辛的马兜铃酸含量最高，汉城细辛的有效成分含量最高。以华细辛为供试品，以马兜铃酸a 含量为指标，从七种炮制方法中筛选出碱制为最佳炮制方法。并通过正交试验确定了碱制的最佳工艺。用h p l c 、g c 法对经碱制最佳工艺炮制后的细辛的毒性成分和有效成分含量做了考察。结果表明，经炮制后细辛中毒性成分马兜铃酸a 含量下降了8 5 左右。马兜铃总酸含量下降了7 4 。细辛脂素含量无明显变化。细辛经炮制后马兜铃酸只痕量存在。说明碱制方法可以有效的去除细辛中的马兜铃酸而使有效成分可以大部份被保留。达到了去毒存效的炮制目的。为了从总体上探究生品与炮制品的化学成分的变化，对炮制前后细辛大中小极性浸出物的含量作了比较。实验结果表明，炮制品较生品四种浸出物百分比含量均有下降。水及乙醇浸出物含量下降最多，环己烷浸出物次之，乙酸乙酯浸出物最少。但浸出物含量的下降与有效成分含量的降低及药效的下降是否相关有待进一步考察。为了考察细辛炮制后的化学成分的具体变化，本文应用了当今国际上普遍承认的指纹图谱技术，对炮制前后的细辛的整体成分做了完整的比较和分析。经碱制后细辛的甲醇提取物部分变化明显。其中马兜铃酸a 峰值减少。有两个峰消失。乙酸乙酯提取物部分有两组峰消失，共有峰峰面积均有减小。环己烷提取物部分无非共有峰，共有峰峰面积减小。关键词：细辛，马兜铃酸，炮制，脱毒s t u d i e so nr e d u c i n ga r i s t o l o c h i ca c i do fh e r b aa s a r ib yp r o c e s s i n gt e c h n i q u ea b s t r a c th e r b aa s a r ii sr o o ta n dr h i z o m af r o ma r i s t o l o c h i ap l a n ta s a r u mh e t e r o t r o p o i d e sf r s c h m i d tv a r m a n d s h u r i c u m ( m a x i m ) k i t a g ，a s a r u ms i e b o l d i im i q v a r s e o u l e n s e ，a n da s a r u ns i e b o l d i im i q ，w e r ee a r l i e s tl i s t e di nt h e ”s h e nn o n g b e n c a o j i n g ”，a ss h a n g p i n w i t hq u f e n g s a n h a - n ，w e n f e i h u a x i n ，t o n g q i a o z h i t o n ge f f e c t a so n eo f6 3k i n d so fc h i n e s eh e r b a lm e d i c i n ei ns h o r t a g e ，a s a r t u nw a sr e c o m m e n d e db yt h es t a t ep h a r m a c e u t i c a la d m i n i s t r a t i o nb u r e a uf o rf o c u sd e v e l o p i n g a tt h es a m et i m ew a sa l s ol i s t e da st w ok e ym e d i c i n e st oo u rc o u n t r y , i sn o wc o m m o n l yu s e dt r a d i t i o n a lc h i n e s em e d i c i n ef o rg r e a td e m a n d a c c o r d i n gt ob u b a n c h e n g f a n gp r e p a r a t i o ns t a n d a r d sa n dt h ec h i n e s ep h a r m a c o p o e i a si n c o m p l e t es u m m a r y ，t h e r ew e r e17 6p r e s c r i p t i o n si n c l u d eh e r b aa s a r i h e r b aa s a f ia sa r i s t o l o c h i a cp l a n t ，c o n t a i n sa r i s t o l o c h i ca c i d ，t h a th a sr e n a lt o x i c i t ya n dc a r c i n o g e n e s i s a r i s t o l o c h i ca c i dr e n a lt o x i c i t yh a sc a u s e dg r e a tt u r b u l e n c ea l lo v e rt h ew o r l d b ym a y31r d2 0 0 0 ，t h ef d ai s s u e da f d an o t i c eo nh e a l t h r e l a t e dp l a n t sc o n t a i n i n ga r i s t o l o c h i ca c i di nd r u g sa n df o o d ，w h i c hf o l l o w e dw i t har e l a t e d - p r e s c r i p t i o nc a t a l o g a m o n gt h em e d i c i n a lp l a n t st h o s em a ym i x e dw i t ha r i s t o l o c h i ca c i dm e n t i o n e d ( b ) ，h e r b aa s a r iw a sl i s t e d b yj u n e9 t h2 0 0 0 ，f d ap r e s s e da no r d e rt op r o h i b i ti m p o r t i n g ，m a n u f a c t u r i n g ，a n ds e l l i n ga n ya r i s t o l o c h i ca c i ds u s p e c t e dm a t e r i a l sa n dp r o d u c t s ，a l t h o u g ht h e yd i dn o tr e c e i v ea n yr e p o r t so fs i m i l a ra d v e r s ee v e n t su n t i lt h e n b yn o w ，t c mw i t h i na r i s t o l o c h i ca c i dw e r ef o r b i d d e nt od i f f e r e n te x t e n t ，c a u s e dg r e a ts i d e - e f f e c tt od o m e s t i ct c mi n d u s t r y f o rr e m o v i n gt h et o x i c i t yi na s a r u ma n do t h e ra r i s t o l o c h i ca c i d - c o n t a i n i n gm e d i c i n e s ，i no r d e rt or e m o v et o x i c i t ya n dm a i n t a i np h a r m a c o d y n a m i ca c t i v i t y ，a c c o r d i n gt ot h ec h e m i c a ln a t u r eo fa r i s t o l o c h i ca c i d ，w ea d o p t e db a s e - p r o c e s s i n gt or e m o v ea r i s t o l o c h i ca c i di nh e r b aa s a r is e l e c t i v e l y ，a n dr e t a i ni t sa c t i v ei n g r e d i e n t s b ym e a n so fh p l ca n dg c ，w es t u d i e dq u e a l i t ys t a n d a r do f3s p i e c e sa n d5d i f f e r e n th a b i t s ，s e l e c t e dah i g hc o n t e n to fa c t i v ei n g r e d i e n t ，a n dl o wa r i s t o l o c h i c a c i ds p i e c e s a n a l y s e de f f e c t i v ec o m p o n e n t sa n da r i s t o l o c h i ca c i di na s a r u mf r o md i f f e r e n th a b i t s ，a n dd i f f e r e n tp a r t so ft h eh e r b t h er e s u l t ss h o w e dt h a t ，t h eh i g h e s tc o n t e n to fa r i s t o l o c h i ca c i dw a sa s a r u ns i e b o l d i im i q t h eh i g h e s tc o n t e n to fa c t i v ei n g r e d i e n t sw a sa s a r u ms i e b o l d i im i q v a t s e o u l e n s e a s a r u ns i e b o l d i im i qu s e da se x p e r i m e n tm a t e r i a l ，a n da r i s t o l o c h i ca c i da si n d e x ，s e l e c t e dn a h c 0 3p r o c e s s i n gm e t h o df r o ms e v e np r o c e s s e sa st h eb e s t ，d e f i n e dt h eo p t i m a lp r o c e s sb yo r t h o g o n a le x p e r i m e n t g ca n dh p l cw e r eu s e dt om e a s u r et o x i c i t yc o m p o n e n t sa n da c t i v ei n g r e d i e n t si nh e r b aa s a r ia f t e rp r o c e s s i n g t h er e s u l ti n d i c a t e dt h a ta f t e rb e i n gp r o c e s s e da r i s t o l o c h i ca c i dai nh e r b aa s a r ih a db e e n8 5 o f f t o t a la r i s t o l o c h i ca c i dd e c r e a s e d7 4 a s a r m i nc o n t e n t sh a sn oo b v i o u sc h a n g e i ti sv e r i f i e dt h a tn a h c 0 3p r o c e s s i n gc o u l dr e d u c ea r i s t o l o c h i ca c i dae f f e c t i v e l ya n dr e m a i na c t i v ei n g r e d i e n t sm o s t l y p r o c e s s i n gp u r p o s ei sa c h i e v e d i no r d e rt os t u d yt h ec h a n g eo fc h e m i c a lc o m p o s i t i o ni nc r u d ea n dp r o c e s s e da s a r u ns i e b o l d i im i q ，w ec o m p a r e dc o n t e n t so fe x t r a c t si nc r u d ea n dp r o c e s s e da s a r u ns i e b o l d i im i qf r o md i f f e r e n tp o l a rs o l v e n t t h er e s u l ti n d i c a t e dt h a tc o n t e n t so fa l lf o u re x t r a c t sh a dd e c r e a s e d t h ee x t r a c t sf r o ma q e o u sa n de t h a n a ld e c r e a s e dm o s t ，c y c l o he x a n el e s s ，a n da c e t i ce t h e rl e a s t t h er e l a t i o n s h i pb e t w e e nd e c r e a s eo fe x t r a c t s c o n t e n t sa n dp h a r m a c o d y n a m i ca c t i o nn e e dt ob ei n v e s t i g a t e di nf u t u r e t oi n v e s t i g a t et h es p e c i f i cc h e m i c a lc h a n g ei nc r u d ea n dp r o c e s s e dh e r b aa s a r i ，t h ee x p e r i m e n tu s e st h ef i n g e rp r i n t st e c h n o l o g yt oc o m p a r ea n da n a l s y s et o t a lc o m p o n e n t so fh e r b aa s a r i a f t e rb e i n gp r o c e s s e d ，m e t h a n o le x t r a c t sh a dc h a n g e do b v i o u s l y a r i s t o l o c h i ca c i da sc h r o m a t o g r a p h i cp e a kv a l u ed e c r e a s e d ，a n dt w oc h r o m a t o g r a p h i cp e a k sv a n i s h e d a c e t i ce t h e re x t r a c t sh a dt w oc h r o m a t o g r a p h i cp e a k sv a n i s h e d c h r o m a t o g r a p h i cp e a kv a l u eo w e db yb o t hh a dd i m i n i s h e d c y c l o h e x a n ee x t r a c t sc h r o m a t o g r a p h i cp e a kv a l u ed e c r e a s e da n dc o m p o s i t i o no fc h r o m a t o g r a p h i cp e a kh a dn oc h a n g e k e yw o r d s ：a s a r u m ，a r i s t o l o c h i ca c i d ，p r o c e s s i n g ，v i r u s - f r e ei v独创性声明奉人声明所鼍交的论文足我个人在导师指导f 进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知除了义叶i 特别加以标注徊致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也小包含为获得吉林农业大学或其它教育机构的学位或证书衙使用过的材料。与我- - i 雨 i l 作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的 兑明并表示了谢意。学位论文作者签名：列糊签字 = 1 翌：翮年莎月7 3h关于论文使用授权的说明本人完会了解占林农业人学有) 乏保留，使用学位论文的规定，即：学校有权保帮送交论义的复印件和磁槛，允r ：论文被镬阋和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保_ = i 字、礼：编学位论文。同意吉林农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位沦文的全部或部分内容。学位论文作者签名：、导师签名：夕签字r 期：力年| ；月侈卜签字| - 】期：力纺矿年多月侈f 11 1 细辛的研究进展第一章研究进展1 1 1 细辛概述细辛( h e r b a ra s a r u m ) 为马兜铃科植物北细辛a s a r u mh e t e r o t r o p o i d e sf r s c h m i d tv a t m a n d s h u r i c u m ( m a x i m ) k i t a g ，汉城细辛n a k a i 或华细辛a s a r u ns i e b o l d i im i q 的根及根茎【l 】。始载于中药学典籍神农本草经，列为上品。中华本草述其味辛、性温、小毒，归肺、肾、心经。具有祛风散寒、通窍止痛、温肺化饮的功效。细辛是一味重要中药，也是吉林省的道地药材之一。早在两千多年前就有药用的记载。自古以来，即作为解热、驱风、发汗、祛痰、镇痛药。用于治疗感冒、哮喘、胸满肋痛、头痛、风湿关节痛；近代又用于治疗鼻炎、喉炎、胃炎以及口腔糜烂等症，均有显著疗效，应用范围极广。细辛的化学成分包括甲基丁香酚、黄樟醚、榄香素、桉油精、细辛醚、细辛脂素、马兜铃酸a 等。现代药理研究表明，甲基丁香酚为主要有效成分。细辛脂素是存在于细辛中的木脂素类化合物，具有抗病毒和抗结核杆菌的作用【2 】。1 1 2 细辛中的马兜铃酸据文献报道【3 】，细辛中的马兜铃酸有致癌及肾损害作用。2 0 0 0 年5 月3 1 日，f d a 发布了“f d a 对卫生行业的有关含有马兜铃酸植物药物和食品的通告”，并附有相关药物的目录。其中，在可能混杂有马兜铃酸的植物药物( b 类) 中，包括细辛这位药。细辛是一味常用中药，据部颁成方制剂标准和中国药典等的不完全统计，处方中含有细辛的中成药有1 7 6 个【4 1 。因此，有必要将马兜铃酸作为细辛毒性成分之一进行研究。关于细辛中马兜铃酸的去除方面的研究几乎处于空白。1 1 3 细辛的药理及毒理研究1 1 3 1 细辛的药理作用( 1 ) 解热、镇痛作用辽细辛挥发油对正常小鼠的体温有降低作用，并且持续时间长【5 1 。陈氏等【6 1 报道，细辛对醋酸致小鼠腹痛、热板法致小鼠足痛均有明显的镇痛作用并能抑制蟾蜍坐骨神经动作电位的传导。( 2 ) 抗惊厥作用辽细辛挥发油可完全对抗电惊厥，可显著延长戊四氮惊厥潜伏期及死亡时间i j 。( 3 ) 抗衰老作用樊氏【8 】采用测定组织过氧化脂质( l p o ) 与超氧化物歧化酶( s o d )的方法，研究发现，细辛能有效的减少氢化可的松造模小鼠组织l p o 含量，能避免有害物质对组织细胞结构和功能的破坏作用。同时也有提高s o d 活性的趋势，增强机体对自由基的清除能力，减少自由基对机体的损伤。栗氏等【9 1 通过观察d 半乳糖所致衰老小鼠脑组织一氧化氮合酶( n o s ) 、血浆一氧化氮( n o ) 、全血过氧化氢酶( c a t ) 、肝组织丙二醛( m d a ) 的随龄变化，同时观察细辛对上述指标的影响，发现老龄小鼠血浆n o 含量，脑组织n o s 、全血c a t 活性在中年期以前随龄上升中年期以后随龄下降，肝组织m d a 含量随龄高。而细辛能够增；0 d n o 含量，提高n o s 、c a t 活性，降低m d a 含量。并论述其抗衰老作用的可能机制是通过提高c a t 、n o s 活性，降低m d a 含量，清除自由基，阻断自由基链锁反应，增加n 0 含量，使其生物学效应能持久地发挥，从而起到抗衰老作用。据文献报道，细辛还能显著提高老龄小鼠心、肝组织中谷胱甘肽过氧化物( g s h p x ) 的活性，进而可以抑制自由基反应l l 。( 4 ) 强心作用细辛水煎液能增强体外培养乳鼠心肌细胞的搏动频率，但对心肌细胞搏动强度无明显影响。提示其对心肌细胞的作用主要是增加心率。细辛水煎液还能使受缺糖缺氧性损伤的心肌细胞释放到培养液中的乳酸脱氢酶( l d h ) 减少。提示细辛对缺糖缺氧性损伤心肌细胞的细胞膜有直接保护作用【l 。( 5 ) 扩张血管、降压作用给药细辛煎剂后，豚鼠腹主动脉下肢灌流与兔耳血管灌流显著增加，蟾蜍肠系膜微血管扩张，血流相对变缓i l 引。( 6 ) 抗炎作用细辛挥发油灌服或注射均有明显的抗炎作用。腹腔注射细辛挥发油，可抑制大鼠棉球肉芽肿形成，并可降低血清及肝组织中锌含量，使铜锌比值显著增高，且血清锌含量减少越显著，抗肉芽组织增生作用越明显【l 引。这种良好的抗炎作用是细辛治疗“风湿痹痛”的药理学基础之一。( 7 ) 抗肾病变作用给予5 周龄雄性大鼠氨基核苷造成肾病变，再腹腔注射细辛素，可抑制尿蛋白排泄增加，并能改变血清生化指标。( 8 ) 抗真菌作用细辛挥发油无论气体熏蒸或直接作用，都有抗真菌作用。细辛挥发油对部分试验真菌只表现抑菌作用，而黄樟醚表现出杀菌作用，其为细辛油抗真菌的主要有效成分，抗菌有效浓度为6m l 5m l c m 3 其杀菌作用较4 0 甲醛强4 倍，比石炭酸强l 倍。1 1 3 2 细辛的毒性作用( 1 ) 急性毒性周氏等【1 4 】就细辛散剂半数致死量( l d 5 0 ) 进行了测定，细辛根散剂的l d 5 0 为6 5 2 2 9g k g ，而细辛全草散剂的l d s o 为1 1 7 0 5 2e c k g ，说明细辛根散剂的毒性较大。( 2 ) 长期毒性细辛挥发油中所含的黄樟醚毒性较大，在大鼠饲料中混入1 黄樟醚，2 年后，可使2 8 的大鼠发生肝癌。混入0 1 也能导致肝肿瘤，如饮食中缺乏维生素b 和维生素e ，致癌作用更强i i 川。( 3 ) 致突变作腹腔注射细辛油i 2 l d 5 0 剂量可增a n d , 鼠骨髓嗜多染色红细胞微核形成率，提示其有致突变作用。21 2 马兜铃酸的研究进展1 2 1 化学结构马兜铃酸( a r i s t o l o c h i ca c i d ，a a ) 是3 ，4 次甲二氧基1 0 硝基菲酸的衍生物，是自然界中发现的第一类含硝基的化合物【1 6 1 。该类化合物都含有菲核，菲核上取代基为羧基、硝基、酯基等，有的为内酰胺或内酰胺甙。主要含有马兜铃酸i ( a a i ) ，马兜铃酸i i ( a a i i )【1 7 】。大鼠口服马兜铃酸i 和i i ，体内主要代谢转化为马兜铃内酰胺i ( a r i s t o l a c t a mi ) 和马兜铃内酰胺i i ( a r i s t o l a c t a mi i ) 1 8 j 。马兜转皱 d 夤l l 妇晶i r c 耐马辩爵馥ia 由b h 蛀c a d dio hn 0 2礓兜锋虢日h a i m k 舶 嗣1 喜凳铮内藏膝a r j 越自曲岍hd 粕o1 2 2 含马兜铃酸的植物及药物自然界含有马兜铃酸的植物达6 0 0 余种，广泛分布在热带和亚热带地区，在我国有4 0余种左右【1 9 1 。我国的马兜铃( 北马兜铃的果实) 、青木香( 马兜铃的根部) 、天仙藤( 马兜铃的茎) 、广防己( 木防己) 、汉中防己( 异叶马兜铃) 、关木通( 木通马兜铃) 、寻骨风( 绵毛马兜铃) 、朱砂莲等，这些植物的主要成分中均含有马兜铃酸【2 0 】。常用的含马兜铃酸的中成药有龙胆泻肝丸、八正丸、纯阳正气丸、大黄清胃丸、当归四逆丸、导赤丸、跌打丸、冠心苏合丸、辛夷丸、十香返生丸、济生结核丸。细辛、威灵仙、追风藤等也含有马兜铃酸【2 l 】。1 2 3 马兜铃酸的药理及毒理1 2 3 1 马兜铃酸的药理作用马兜铃酸具有多种药理作用，利尿，祛痰，扩张支气管，强心，降低血压，抗心律失常，扩张冠脉，镇静催眠，促递质释放，抗菌，抑制肿瘤，抗过敏，抗炎，解热镇痛2 2 。2 3 1 。1 2 3 2 马兜铃酸急性毒性雌雄大鼠口服马兜铃酸的l d s o 分别为1 8 3 9m g k g 和2 0 3 4m g k g ；静脉注射为7 4 6m g k g 和8 2 5m g k g 。雌雄小鼠口服马兜铃酸i 拘l d s o 分别为1 0 6 1m g k g 和5 5 9 m g k g ；静脉注射为7 0 1m g k g 和3 5 4m g k g 。小鼠腹腔注射关木通提取物l d s o为1 9 4e k g 。雄性小鼠i s i 服3 0m g k g ，可降低肾小球滤过率，使血肌酐增加，引起肾衰竭。动物组织病理学特征为胃贲门浅表性溃疡，肾小管坏死，淋巴器官萎缩。马兜铃酸在体内有较大的蓄积作用，每同灌n o 9m g k g 、连续3 d ，第3 d j 在尿中检测出马兜铃酸；口服剂量1 3 5m g k g ，连续5 d ，经尿液、胆汁、唾液排出体外的药量只是给药量的5 3 左右。1 2 3 3 马兜铃酸致癌性2 0 世纪8 0 年代，在马兜铃酸鼠类实验中，发现了强烈的致癌作用，马兜铃酸并被认为是迄今为止对啮齿类动物最强的致癌物质之一b 4 1 。1 2 3 4 基因毒大鼠给予提取物马兜铃酸或马兜铃酸，分析检测到器官组织d n a 中有脱氧腺苷马兜铃内酰胺的d n a j j h 合物，这种特异性加合物是组织癌变前的不可修复的损伤。马兜铃酸肾病患者肾组织中检出脱氧腺苷马兜铃内酰胺的加合物，此加合物有致突变和致癌活性。1 2 3 5 人体毒性口服关木通煎剂可致上腹不适，恶心，呕吐，尿量减少等症，马兜铃酸诱发的间质肾纤维化主要在外侧皮质并有肾小管缺失，这种纤维化迅速进展为晚期肾衰和癌症，即使停止服用，纤维化仍继续进剧2 5 】。1 2 4 马兜铃酸的肾损害1 2 4 1 马兜铃酸肾病的提出马兜铃酸最主要的毒性作用是肾毒性。其造成的。肾损害，医学上最初报道于1 9 6 4 年，吴含松报道了两例因服用大剂量木通导致的急性肾功能衰竭者1 2 6 1 。后陆续有个例报告。1 9 9 3 年比利时学者v a n h e r w e g h e m 儿等报道患者在服含有广防己的中草药减肥治疗时出现进行性肾损害，被称之为“中草药肾病”( c h i n e s eh e r b sn e p h r o p a t h y ，c h n ) 。国内学者认为现阶段“中草药肾病 提法不确切，应称为“马兜铃酸肾病 ( a r i s t o c h i ca c i dn e p h r o p a t h y ，简称a a n ) 1 2 5 】。1 9 9 9 年英国刺穴针杂志又报道了两名妇女因服用了含关木通的草药茶治疗湿疹导致晚期肾衰竭事件。这两起事件在国际上引起了轩然大波，美国f d a 、英国m c a 和比利时政府等采取了严厉措施，对中草药和中成药进行强烈抵制【2 。2 0 0 1 年6 月2 0 日美国食品与药物管理局( f d a ) 发出警告，要求消费者停止服用1 3 种中草药制剂，因为它们含有马兜铃酸，对人体健康不利。f d a 指出这种来自植物的化学物质会引起肾功能衰竭，甚至导致肾脏肿瘤。要求停止使用的药品有：关木通、马兜铃、八珍散、当归四逆汤、导赤散、复方地虎汤、甘露消毒丹、口咽宁、龙胆泻肝汤、排石汤、小蓟饮子、心怡散、养阴消炎汤。近年来龙胆泻肝丸导致肾功能衰竭病例时有发生，已引起社会广泛重视。国家药品监督管理局决定2 0 0 3 年3 月1 日起对含有关木通的龙胆泻肝丸严格按照处方药物管理，在零售商店购买必须凭医生处方。1 2 4 2 马兜铃酸肾毒性作用机理马兜铃酸肾病是由于服用含马兜铃酸的中药引起的肾脏损坏，临床表现为急性或慢性肾小管损伤、间质纤维化、肾功能衰竭等。有文献报道，马兜铃酸a 的毒解代谢产物马兜铃内酰胺，在细胞色素p 4 5 0 和过氧化物酶的激化下，与d n a 形成加合物。马兜铃酸d n a 力i 合物的形成，使d n a 的双链结构受损，进而影响d n a的生物化学功能，出现肾损害。是否由于加合物的形成使细胞生长受抑制尚需研究证实【猫j 。41 3 利用炮制手段去除细辛中的马兜铃酸1 3 1 中药炮制的目的1 3 1 1 消除或降低药物的毒性或副作用例如：川乌、草乌等乌头类药材有毒，其毒性与双酯型乌头碱的含量有密切关系。乌头类药材生品含乌头碱一般在0 1 以上，人内服乌头碱0 2 - - - 1m g 即出现中毒症状，致死量为3 4m g 。乌头碱水解成乌头次碱并进一步水解成乌头原碱，其水解产物同样有效但毒性降低。炮制品的剂量也相应地增加数倍至数十倍，从而表现出其他方面的药理作用如强心作用等。实验证明其他非生物碱成分亦具有药理作用，而生品毒性大，如不炮制而减少剂量必会影响其他成分发挥作用，说明乌头的炮制是必要合理的。1 3 1 2 增强药物作用，提高临床疗效如当归酒炙后可增强温经活血的功效，因为酒本身就有温经活血作用，而且能增加当归脂溶性成分的溶出量；款冬花、紫莞等化痰止咳药经蜜炙能增强润肺止咳作用，因为蜂蜜甘缓益脾、润肺止咳，作为辅料与药物有协同作用而增强疗效。1 3 1 3 改变药物性能如何首乌生用解疮毒、润肠通便，制后则能补肝肾、益精血，用于贫血、神经衰弱。何首乌含有卵磷脂和羟甲基葸醌衍生物，前者是构成细胞膜和神经组织尤其是脑脊髓的重要成分，故可用于神经衰弱和促进血液新生及发育，并有强心作用。但卵磷脂不溶于水而溶于醇，蒸后可使卵磷脂易溶出，同时酒蒸后可破坏结合性葸醌而消除泻下作用。1 3 1 4 便于制剂和贮藏矿物类、贝壳类及动物骨甲类药物，如自然铜、磁石、代储石、牡蜗、石决明、朱砂、龟板、穿山甲等，这类药物质地坚硬，难以粉碎，不便制剂和调剂，短时间内难以煎出有效成分。采用锻、锻淬、砂烫等方法炮制可使其质地酥脆而易粉碎，便于煎出有效成分并利于制成各种剂型。昆虫类、动物类药物经加热处理，如蒸、炒等能杀死虫卵，防止孵化而便于贮存，如桑螵蛸等；植物种子类药物经过加热处理，如蒸、炒、烽等，能终止种子发芽，便于贮藏而不变质，如苏子、莱菔子等；某些含苷类药物经加热处理破坏酶的活性，避免有效成分被酶解损失，可以久贮，如黄连、杏仁等。1 3 1 5 使药物纯净，利于服用并保证临床用药剂量准确如根类药材除去泥沙、枇杷叶去毛、蝉蜕去头足等。1 3 1 6 矫臭矫昧使一些带有特异性臭味的药物便于服用，包括紫河车、乳香、没药等。1 3 2 炮制对毒性的影响在古代医药文献中，早期的“毒药”通常是药物的总称。所谓“毒”主要是指药物的偏性。利用药物的偏性来纠正脏腑的偏胜偏衰。后世医药著作中所称的“毒”则是具有毒性和副作用的药物，用之不当，可导致中毒，与现代“毒 的概念是一致的。药物通过炮制，可以达到去毒的目的。去毒常用的炮制方法有净制、水泡漂、水飞、加热、加辅料处理、去油制霜等。这些方法可以单独运用，也可以几种方法联合使用。如蕲蛇去头、朱砂、雄黄水飞，川乌蒸制，甘遂、芜花醋制，巴豆制霜等，均可去毒。炮制有毒药物时一定要注意去毒与存效并重，不可偏废，并且应根据药物的性质和毒性表现，选用恰当的炮制方法，才能收到良好的效果。否则，故此失彼，可能造成毒去效失，甚至效失毒存的结果，达不到炮制目的1 2 9 1 。1 3 3 炮制对中药化学成分的影响中药的化学成分组成相当复杂，其药理作用是综合性的，有协同也有对抗作用。炮制过程中经加热、水蒸及酒、醋、药汁等辅料处理后，化学成分有量变也有质变，包括无机化合物、生物碱类、糖类与苷类、挥发油类、鞣质、有机酸、油脂、树脂、蛋白质与氨基酸类等成分的变化。其中有些已经被了解，但大多数还有待继续研究。这需要在中医药理论为指导下，应用现代科学方法研究炮制对药物成分的影响，将传统经验提升为科学认识，使中药炮制学继续发展。近年来对中药炮制的研究结果表明，炮制既可以使有效成份含量或溶出量增加，也可以使某些毒性成分减少或消除。药物炮制后当化学成分的量变达到或超过人体剂量时，即出现中药临床应用中的增效效应或减毒效应，初步揭示了中药炮制原理。如对决明子的研究表明炮制对葸醌类成分的含量、煎出效果、水浸出物含量都有一定的影响。决明子在常规煎煮时间内煎液中打碎品游离葸醌比未打碎者多，炒制品比生品多；加热后总葸醌、结合葸醌含量均有不同程度降低，游离葸醌含量则相对升高；水浸物中总葸醌含量有所增加，其中炮制品含量相应高，生品和烘制品较低；煎煮实验也表明决明子经粉碎处理后，炒制品蒽醌类浸出的最佳时间短且浸出量高。另外炮制可以降低原药材中的有毒成分。一些有毒药材中的成分往往具有双重作用，有毒成分即是有效成分。对这些有毒药物往往通过水漂、加热、制霜等方法炮制以减少毒性成分含量。如马钱子含士的宁和马钱子碱，士的宁是主要有效成分也是毒性成分，对脊髓神经有强烈的兴奋作用，过量可致中毒；马钱子碱的含量与士的宁含量和药理作用都接近，但疗效较小。两种物质的稳定性不同，士的宁的分解温度是2 8 6 2 8 8 而马钱子碱的分解温度是17 8 。运用药典砂烫法进行炮制，温度达n 2 5 0 左右时，马钱子碱大部分被破坏，士的宁则仅部分被破坏。这样既减少了毒性成份含量，又保存了士的宁的有效含量，达到了减毒存效目的。但很多中药的有效成分仍不甚明了，而且有些药物中发挥药效的可能不仅是一种或一类物质而是多类成分，目前还难以全面论述炮制原理与化学成分之间的复杂关系。1 4 色谱法在中药炮制方面的应用6色谱法是分析化学领域中发展最快、应用最广的分析方法之一。这是因为现代色谱法具有分离和分折两种功能，能排除组分间的相互干扰。逐个将组分进行定性、定量分析。中药炮制是我国独有的制药技术。历史悠久，内容丰富，是中医用药的一大特点。但由于受历史条件及科学水平的限制，对炮制的机理、工艺方法、相关理论及质量标准的表达太多是经验性的。且各地的炮制方法及标准也不太统一，有待用现代科学技术及手段对其进行深入研究。色谱法的迅猛发展，给中药炮制带来生机和活力。如今薄层色谱法、高效液相色谱法、气相色谱法、气相色谱质谱联用等方法在中药炮制的研究方面得到充分应用。下面介绍近几年来各种色谱法在中药炮制研究中的应用。1 4 1 薄层色谱法薄层色谱法( t l c ) 操作简单，不需昂贵的仪器设备，分析速度快，结果直观，并有较高的分离能力，成为被广泛采用的定性和定量方法。其在中药炮制研究方面的应用，主要是在药用部位及炮制工艺的优选、炮制对有效成分的影响、对质量控制指标的确定等方面。1 4 1 1 药用部位厚朴生长周期长，按传统用药仅取皮人药，对厚朴植物破坏太严重。为探索厚朴叶代替厚朴皮入药的可能性和提高厚朴炮制质量，采用t l c 法对厚朴皮、叶及干皮不同炮制品的酚性成分进行检测和比较，结果厚朴叶中酚性成分含量相当于朴皮的1 5 ，考虑到厚朴叶每年可采集，落叶不伤害植物，提示厚朴叶有供药用的可能【3 0 1 。草果不同部位( 草果、草果仁、草果壳) 的挥发油含量明显不同，果壳与隔膜挥发油含量明显低于果仁，果壳重量占全草果2 8 - - 3 0 ，因此可作为非药用部位或杂质部分除去，以提高用药的准确性【3 1 | 。1 4 1 2 炮制工艺刘伟等以薄层扫描法对生、酒炙、醋炙柴胡中主要成分柴胡皂苷a 、d进行测定。结果表明柴胡皂苷( a + d ) 的百分含量由高到低依次为：酒炙品、生品、醋炙品。经综合评价得出酒炙品优于醋炙品1 32 。李群等以秦皮乙素为指标，应用薄层扫描法对千金子生品及5 种不同炮制品进行含量测定，结果发现千金子经不同方法炮制后。除了冷霜外，秦皮乙素均有所下降。因此为保证临床用药的安全有效，制霜入药，以冷霜为宜1 33 。蒋纪洋等以小蓟炭中的活性成分绿原酸的含量为指标。以炮制火候、出锅温度、炮制时间、炮制程度为考察因素。设计正交实验进行分析，最终优选工艺为：武火加热，控制出锅温度为1 4 0 ，炒3 - - 4 m i n ，使其表面呈黑色，内呈褐色【3 4 | 。1 4 1 3 炮制对成分的影响炮制可以使中药发生质和量的变化。通过比较薄层层析后薄层板上斑点的多少可以了解炮制前后药物是否发生质变，进一步薄层扫描定量可以知道含量的变化。不同炮制方法对成分的影响不同。查文清等测定直序商陆不同炮制饮片中商陆毒素的含量。结果显示清蒸品、醋蒸品及醋炙品中商陆毒素的含量仅分别为原药材的16 7 3 、21 8 8 及4 5 9 5 1 3 5 j 。陈康对青皮不同炮制品中黄酮类成分进行薄层层析比较，并用薄层扫描法测定了炮制品中总黄酮及橙皮苷的含量。结果各炮制品的薄层色谱行为一致，经醋制后总黄酮及橙皮苷的含量均降低，而不同炮制条件的制品两项含量则随炮制温度的升高，时间延长而逐渐碱少说明加热炮制只使青皮中黄酮类成分的含量减少而无明显的质变【3 引。为研究牛膝及其不周炮制品中齐墩果酸的含量，探讨炮制对牛膝质量的影响，姜翠敏采用薄层扫描法对牛膝、盐牛膝、酒牛膝三种样品中的齐墩果酸进行含量测定，结果生牛膝和酒牛膝中齐墩果酸的含量基本相同。而盐牛膝中齐墩果酸的含量偏低i j7 。赵亚男对白芍及其炮制品中主要成分芍药苷进行含量测定，结果含量高低顺序为：生品 麸炒品 炒焦品 醋炒品 酒炒品 土炒品，土炒和酒炒使芍药苷损失最多【3 8 】。1 4 1 4 质量控制中药炮制品种是中成药处方组成中的一个重要内容。构成与方剂配伍的独有形式对中成药的质量和疗效有着极大的影响。因此中成药中，中药炮制品种的质量控制是中成药质量控制的一个重要组成部分。刘斌等通过黄连、吴萸连及香连丸中黄连及其炮制用辅料吴茱萸的薄层层析鉴别、比较黄连和吴萸连分别与木香组成的两类香连丸的异同，采用3 种展开剂的层析色谱图显示，吴黄连提取液比黄连多出1 - 2 个斑点，且多出的斑点又恰是吴茱萸所具有的，同时吴萸连的层析斑点与吴茱萸+ 黄连相同，结果表明吴茱萸制黄连确实吸纳了吴茱萸的某些成分。吴萸连+ 木香比黄连+ 木香多一个斑点，此斑点与吴茱萸水煎液斑点相对应，由此表明黄连和吴萸连分别组成的香连丸有显著差异。但现在许多生产厂家都将其简化为黄连和木香。即黄连不用吴茱萸炮制而直接用生品。这虽然有利于简化生产工艺和降低生产成本。但是否影响香连丸的临床疗效，尚未有人加以考察。通过复方香连丸黄连的薄层层析鉴别，初步认为应用此法控制中成药中炮制品的质量是可行的【3 9 】。1 4 2 高效液相色谱法高效液相色谱法( h p l c ) 以具有适用范围广，分离性能好，分析速度快。流动相可选择性范围宽、灵敏度高、色谱柱可反复使用、流出组分容易收集、安全等特点。广泛应用于中药有效成分的含量测定中。在中药炮制研究方面的应用。主要是在新的h p l c 方法的探索、炮制工艺的筛选、炮制对有效成分的影响等方面。1 4 2 1 新的h p l c 方法在采用反相或正相高效液相法分析中药生物碱时，常受到样品中类似极性成分干扰。周桂生等研究了一种新的分析生物碱类药物的系统，即硅胶拄p h缓冲液系统。因本类方法不同于通常的离子交换方法，暂用“准离子交换色谱”的概念。其色谱行为呈现一定的离子交换特征，但所用固定相非一般离子交换柱，而是利用硅胶表面硅醇基作离子交换中心，分离中药中的生物碱成分。流动相( 甲醇一醋酸铵一醋酸) 中，醋酸是样品中生物碱质子化的基本条件，醋酸铵的铵离子作为生物碱离子的竞争离子，甲醇与水的比例可以调节溶剂传递质子的能力。这种系统的不同组合使固定相硅胶表面硅醇基呈一定的离子化，生物碱离子与铵离子竞争吸附在硅醇基上。产生不同的迁移速度，从而使生物碱分离，而其他酸性及中性杂质成分不被吸附先洗出拄子。不干扰生物碱的测定 4 0 1 。采用硅胶柱准离子交换色谱法对马钱子及其炮制品制马钱子中士的宁含量测定方法进r行研究。并与中国药典收载的计算分光光度法进行统计对比，结果本法简便、准确、重现性好，不受其他成分的干扰【4 。1 4 2 2 炮制工艺为了考察姜制厚朴饮片质量，