（中药学专业论文）乳康巴布剂的研制.pdf

提要 本文对治疗乳腺增生病的中药复方制剂乳康巴布剂做了较为系统的研究。采用 l 。( 3 4 ) 正交试验筛选出肉桂、川芎挥发油超临界c 0 2 提取工艺，肉桂、川芎药渣水煎 煮的提取工艺，赤芍、延胡索醇提的提取工艺，乳香、没药醇提的提取工艺，肉桂、 川芎水煎液醇沉的精制工艺；采用l 9 ( 3 4 ) 正交试验，优选出乳康巴布剂基质的成型工 艺，进一步确定了乳康巴布剂的成型工艺，并以粘着力、赋形性、含膏量对其进行了 检查，结果表明按本文方法制得的巴布剂，检查结果符合有关规定。采用t l c 法对 制剂中的肉桂、川芎、延胡索、乳香、没药、冰片、人工麝香进行了鉴别，采用h p l c 法对制剂中芍药苷的含量进行了测定。初步考察了制剂的稳定性及药效学，结果表明 该制剂稳定性较好，有明显的抗炎、镇痛作用，对皮肤安全无毒。 关键词乳康巴布剂：正交试验；工艺研究；质量标准；药效学 p r e p a r a t i o na n d e v a l u a t i o no f r u k a n g b a b u p l a s t e r s p e c i a l i t y ：p h a r m a c yo f t c m a u t h o r ：q ih o n g n t o r ：l i ng u i - t a o a b s t r a c t s y s t e m a t i c a lr e s e a r c ho ft h ec o m p o u n dp r e s c r i p t i o no ft c mh a sb e e n p e r f o r m e d i nt h i ss t u d y r u k a n gb a b up l a s t e ri su s e dt ot r e a t m a s t i t i s b y o r t h o g o n a lt e s t ，t h ee x t r a c t i o nt e c h n o l o g yo fv o l a t i l eo fl i g u s t i c u mc h u a n x i o n ga n dh o r t a n dc i n n a m o m u m c a s s i ap r e s l ，c o r y d a li s y a n h u s u oa n dp a e o n i a l a c t i f l o r ap a l l ，b o s w e l l i ac a r t e r i ib i r d wa n dc o m m i p h o r am y r r h ae n g li s s c r e e n e d t h ee x t r a c t i o ni sr e f i n e dw i t ha l c o h o l d e p o s i t i o n t h eo p t i m u m p r o p o r t i o no fm a t t i xf o rt h ep r e p a r a t i o np r o c e s so fr u k a n gb a b up l a s t e ri s s e l e c t e db y o r t h o g o n a lt e s t m o l d i n gt e c h n o l o g yo fr u k a n gb a b up l a s t e ri s f u r t h e ra s c e r t a i n e d ac h e c k u pf o ra d h i b i t i o n ，n o n f l o w i n g ，c o n t e n to fc r e a m isf o u n d e d t h er e s u l ts h o w sr u k a n gb a b up l a s t e rw h i c hi sm a d eb yp r e p a r a t i o n c o n d i t i o i lo ft h i st e s ta c c o r d sw i t hc o n c e r n e d r e g u l a t i o n s o fb a b u p l a s t e r l o g i s t i c a lc h u a n x i o n ga n dt t o r t a n dc i n n a m o m u mc a s s i ap r e s l ，c o r y d a l i s y a n h u s u o ，b o s w e l l i ac a r t e r ib i n e l w ，c o m m jr h o r am y r r h a ，b i n g p i a na n dr e n g o n g s h e x i a n g a r e q u a l i t a t i v e l y t e s t e d b y t l c p a e o n i f l o r i ni s q u a n t i t a t i v e l y a n a l y z e db yh p l c p r i m a r ys t a b i l i t ya n dp h a r m a c o d y n a m i c sa r er e s e a r c h e d ，w h i c h s h o w st h a tr u k a n gb a b up l a s t e rh a sg o o ds t a b i l i t y ，i tc a no b v i o u s l ye a s ep a l n ， r e s i s ti n f l a m m a t i o na n dh es a f et os k i n k e y w o r d s r u k a n gb a b up l a s t e r ：o r t h o g o n a lt e s t ；t e c h n 0 1 0 9 i c a ls t u d y ； q u a l i t ys t a n d a r d ；p h a r m a c o d y n a m i c s 原创性声明 y 。6 2 2 5 1 2 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是在导师的指导下独立完成 的，文中除注明引用的内容外，不包含任何其他已经发表的科研成果。 对本文研究做出重要贡献者，已在文中以明确方式表明。本声明的法 律责任完全由自己承担。 论文作者签名刍亟导师签名丝礁翅呸日期出! 纽生。! 关于学位论文使用授权的声明 本人完全了解山东中医药大学有关保留使用学位论文的规定，同 意学校保留或向国家有关部门机构送交论文的复印件和电子版，允许 被查阅和借阅。本人授权山东中医药大学可以将本学位论文的全部或 部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复印 手段保存和汇编本学位论文。 ( 保密论文在解密后应遵守此规定) 论文作者签名刍筮 孔康巴布荆的研制 引言 乳腺增生病为中青年妇女常见病，属祖国医学乳癖的范畴。现有治疗乳腺增生病 的方法，谣医多采用口服激素类药物，副作用较多。中医药在治疗此病有内治、外治、 内外治法等，而外治法则是一种从治标入手，兼顾治本的方法。最近几年乳腺增生病 发病率有上升的趋势。目前中医治疗乳腺增生病的外用制剂剂型大多停留在简单的硬 铅膏、橡皮膏或软膏剂水平，剂型落后、用量大、使用不方便且作用不明显，所以开 发疗效显著、持久、使用方便的外用现代制剂成了治疗此病亟待解决的问题，也是中 药现代化研究的一个重要课题。中药巴布剂是以水溶性高分子化合物或亲水性物质为 基质，与中药提取物或粉末制成的外用贴膏剂，具有载药量大、与药物易混合、对皮 肤无刺激等特点。应用现代制剂技术制备的中药巴布剂尚不多见，因此研制疗效确切、 工艺先进、使用方便的巴布剂将具有较高的实用价值和应用前景。 本文对乳康巴布剂的提取精制工艺、成型工艺、质量标准、初步稳定性及药效学 进行了较深入的研究。 山东中医药大学2 0 0 4 届硕士举住论文 第一部分研究的目的与意义 乳腺增生病为中青年妇女常见病，属祖国医学乳癖范畴。中医认为乳腺增生病的 发生多因冲任失调、肝气郁结导致气滞、血瘀、痰凝阻于乳络，结成核块而成此症“。 西医认为乳腺增生病的发生与内分泌功能紊乱、卵巢功能失调致使体内雌激素水平增 高或活性增强，孕激素水平降低，孕激素与雌激素比例失调有关。近几年随社会竞争 压力加大而致精神紧张，以及高脂肪、高蛋自、高热量等饮食习惯，使乳腺增生病发 病率逐年增高。此病不仅给患者带来较大痛苦，也给家庭和社会造成极大影响。此外， 囊性乳腺增生病存在着发生乳腺癌的危险性，资料显示患囊性乳腺增生病妇女，乳腺 癌的发生率要高出正常妇女的2 倍以上，所以对乳腺增生病的治疗研究，有着十分重 要的现实意义。 现有的治疗乳腺增生病的方法，西医主要采用性激素疗法。如雄激素、孕激素可 对抗雌激素对乳腺组织的作用，并可通过抑制垂体前叶促性腺激素的分泌而减少卵巢 分泌雌激素，从而有效地预防和治疗乳腺增生；又如三苯氧胺为雌激素受体拮抗剂， 可竞争性与乳腺组织上的雌激素受体结合，阻断过高雌激素对乳腺组织发生作用，具 有较好的止痛和散结作用。但西药治疗的副作用较多，主要表现为能引起月经周期紊 乱、月经量减少及胃肠道反应，如恶心呕吐等，影响患者的正常生活，使患者难以接 受。中医根据乳腺增生病发病的机理，采用辨证施治法治疗此病取得显著的疗效，近 几年，中医药在治疗乳腺增生病方面逐渐发挥优势，其治疗方法有内治法、外治法、 内外治法和中西结合法等嘲，而外治法则是一种从治标入手，兼顾治本的方法。中医 药“内病外治”理论历史悠久，积累了大量的良方、验方。透皮给药系统( t r a n s d e r m d e l i v e r ys y s t e mt d s ) ，又称经皮治疗系统( t r a n s d e r m a lt h e r a p e u t i cs y s t e mt t s ) 它是指药物以一定速率通过皮肤经毛细血管吸收进入体循环而产生药效的一类制剂， 是近年来国内外药剂学研究的热点。t t s 系统可以避免肝脏的“首过效应”和胃肠道 的破坏，降低药物的毒副作用，维持稳定、持久的血药浓度，减少给药次数，使用方 便以及发挥全身作用等瑚。巴布剂是一种外用贴剂，在日本有悠久的应用历史。中药 巴布剂是以水溶性高分子化合物或亲水性物质为基质，与中药提取物或粉末制成的外 用贴膏剂。巴布剂采用水溶性高分子材料为基质，它们与皮肤有很好的亲和性，能增 强皮肤的水合作用从而利于药物的透皮吸收“1 。巴布剂比传统的黑膏药、橡皮膏载药 2 乳康b 布剂的研制 量大、透气性好、生物利用度高、刺激性小，避免了铅的存在对人体的危害和环境的 污染；与软膏药相比可避免对衣物的污染；处方中还可加入适宜的辅料，有和于药物 的释放和穿透，发挥速效和长效等作用；且生产中无工业三废，生产条件较制备黑膏 药的好，制剂的质量容易控制，特别适合中药的现代化生产“1 。目前国内治疗乳腺增 生病的中药外用制剂大多停留在简单的铅硬膏、橡皮膏及软膏剂水平，使用不方便， 皮肤刺激性大，药物吸收差，过敏反应多。应用现代制剂技术制备的中药巴布剂尚不 多见，因此研制工艺先进、疗效确切、使用方便的巴布剂将具有较高的学术价值与应 用前景。 第二部分乳康巴布剂的处方设计及文献考证 1 制剂处方组成及中医理论阐述 1 1 处方来源 本处方来源于药蔹启秘中的桂麝散，为治疗乳腺增生病的常用方。 1 2 处方组成 赤芍9 0 9 川芎9 0 9 延胡索9 0 9 肉桂6 0 9 乳香3 0 9 没药3 0 9 冰片l o g 麝香l g 1 3 方解 本方所治病证与肝气郁滞、气滞血瘀有关。肝气郁滞、肝失调达则乳房胀痛或刺 痛；气血失和、血瘀阻于乳络则发为乳核。治应以活血化瘀、行气止痛为主。方中 赤芍苦、微寒，归肝经。有清热凉血、散瘀止痛之功效，行血、破瘀，能散乳中结块 为方中君药。川芎辛通温散，能活血行气、祛风止痛，为“血中气药”，能“下调经 水，中开郁结”。延胡索辛、温，能活血、行气、止痛，如本草纲目所言“能行 血中气滞、气中血滞，故专治一身上下诸痛”。肉桂辛、甘、热，辛通温散，能通行 气血经脉、温经散寒止痛。三药含用活血化瘀、行气止痛以助君药，共为方中臣药。 乳香、没药二药气香走窜而善行，乳香活血，没药散血，皆能消肿止痛生肌，二药合 用，气血并治，共奏宣通经络，消肿止痛之功。麝香活血通经，散寒止痛，冰片清热 止痛，本草纲目为其能“散郁火”，四药共为方中佐药。冰片芳香走窜，能引药上 行，直达病所，兼为使药之用。诸药合用共成活血行气、散瘀止痛之功。 山东中医药大擎2 0 0 4 届硕士学位论丈 2 处方中各药物化学成分和药理现代研究 赤芍：为毛茛科植物芍药p a e o n i al a c t i f l o r ap a l l 的干燥根。味苦、微寒， 归肝经，具清热凉血，散瘀止痛之功效。赤芍含芍药苷2 2 1 3 6 6 ，芍药内酯苷 0 0 6 o 0 7 ，羟基芍药苷0 1 2 o 2 1 等成分。赤芍煎剂给大鼠灌胃，能明显延长 体外血栓形成时间，减轻血栓干重，能使凝血酶原形成时间( p t ) 及白陶土部分凝血酶 时间( k p t t ) 、凝血酶时间( t t ) 延长。赤芍注射液在体外能使兔血浆k p t t 、p t 和t t 延长，并有量效依赖性。口服水浸膏可抑制小鼠由角叉菜胶引起的足士浮溃，醋酸扭 体反应，小鼠耳接触苦氯的皮肤反应、抑制脉鼠的被动皮肤过敏反应及大鼠佐剂关节 炎作用。 川芎：为伞形科植物川芎l i g u s t i c u mc h u a n x i o n gh o r t 的干燥根茎。昧辛、温， 归肝、胆、心包经。具活血行气，祛风止痛之功效。川芎含挥发油约1 ，阿魏酸约 0 2 0 、藁本内酯约0 4 2 ，川芎嗪、川芎内酯、川芎酚等。临床上有明显的扩张冠 脉、增加冠脉血流量、降低心肌耗氧量、抑制a d p 诱导的血小板凝聚，降低血小板的 表面活性等药理作用，对已凝聚的血小板亦有解聚作用”1 。 肉桂：为樟科植物肉桂c i n n a m o m u mc a s s i ap r e s l 的干燥树皮。味辛、甘、热， 归脾、肾、心、肝经，具有补火助阳，散寒止痛，温经通脉的功效。本品辛散温通， 能通行气血经脉、散寒止痛。肉桂含挥发油1 9 8 2 0 6 ，其主要成分为桂皮醛， 肉桂醛具有较强的镇痛、镇静和抗菌作用；肉桂的水煎剂、挥发油及桂皮醛都有扩张 血管作用。肉挂醛、肉挂酸还有抑制血小板聚集和抗凝血酶作用。肉桂能明显抑制内 毒素所致肝瘀血、出血等”1 。 延胡索：为罂粟科植物延胡索c o r y d a l i sy a n h u s u ow t w a n g 的干燥块茎。味辛、 苦、温，归肝、脾、心经。具有活血，行气，止痛之功效。延胡索主含生物碱，其主 要活性成分为异喹啉生物碱。延胡索甲素、乙素( t h p ) 、丑素具有镇痛作用，其中以 左旋延胡索乙素( 1 - t h p ，俗称颅痛定) 的镇痛作用较明显，它是中枢抑制剂，能抑 制中脑网状结构和下丘脑的诱发电位，较大剂量也能抑制防御性条件反射。右旋延胡 索乙素( d l t h p ) 对慢性持续性疼痛效果较好，并有明显的镇静催眠作用，且无成瘾 性，为一非麻醉性镇痛药。t h p 有抑制血小板聚集作用，d l t h p ( 7 5 、1 5 m g k g ，i v ) 对大鼠实验性脑血栓形成有明显的抑制作用，并剂量依赖抑制a d p 、花生四烯酸和胶 原诱导的血小板聚集。d l t h p 抑制脑血栓形成的机制与其抑制血小板聚集性有关呲。 4 乳康巴布卉j 的研制 乳香：为橄榄科乳香树b o s w e l l i a c a r t e r i ib i r d w 的胶树脂。乳香含树脂约6 0 7 0 ，挥发油约3 8 ，树胶约2 7 3 5 等，树脂的主要成分为游离a 、b 一乳香酸、 结合乳香酸和乳香树脂烃。乳香、乳香酸及其衍生物具有抗炎、镇痛、抑制补体系统、 保肝、抑制胆固醇合成等药理作用”1 。乳香乙醇提取物( a e s g ) 在多种急性和慢性炎症 模型上表现出抗炎活性。口服a e s g5 0 2 0 0 m g k g 。1 时，能显著抑制角叉菜胶诱导的 大鼠、小鼠足肿胀和葡聚糖诱导的大鼠足趾肿胀。药理研究表明，挥发性成分为其有 效成分。 没药：为橄榄科植物没药树c o m m i p h o r am y r r h ae n g l 的树脂。没药含树脂约2 5 3 5 ，挥发油约2 5 6 ，5 ，树胶约5 7 6 1 等。没药对多种致病菌有不同程度的抑制 作用；树脂对雄兔高胆固醇血症有降血脂作用，并能防止斑块的形成“。临床多用于 痛经、闭经、胃脘疼痛、风湿痹痛、跌打伤痛及疮痈肿痛、肠痈等证。有资料表明经 超临界提取的乳香、没药萃取物在镇痛和抗炎方面均具较好作用，超临界萃取物主要 为挥发性成分，其为镇痛和抗炎的有效成分之一“。 麝香：为鹿科动物林麝m o s c h u ab e r e z o v s k i i f l e r o w 马麝m o s c h u as i f a n i c u s p r z e w a l s k i 或原麝m o s c h u am o s c h i f e t u sl i n n a e u s 成熟雄体香囊中的干燥分泌物。 麝香味辛、温，归肝、脾经。具开窍醒神，活血通经，散寒止痛之功效。麝香主要含 有大环化合物、c 。甾族化合物、蛋白质、肽类和氨基酸等，其中以麝香酮为主要成 分。小剂量麝香及麝香酮对中枢神经系统里兴奋作用，大剂量则可抑制。麝香还有镇 痛作用，能抑制小鼠醋酸扭体次数。麝香对炎症病理发展过程的血管通透性增加期、 白细胞游走期和肉芽形成期3 个阶段都有影响。麝香酮能增加心肌营养血流量，还有 抗早孕、雄激素样作用和抗肿瘤作用“。因动物物种资源的保护，天然麝香不宜再作 新药的原料，多用人工麝香代替。人工麝香的主要成分为麝香酮，其作用与天然麝香 基本相同。 冰片：为合成龙脑，是无色透明或白色透明的片状松脆结晶。冰片辛、苦、温寒， 归心、脾、肺经。功能开窍醒神、清热止痛。药理研究表明冰片有止痛作用，有利于 冠脉痉挛的防治，可减轻缺血所致的心肌损伤“”。另外冰片还可促进其他药物的透皮 吸收，如利用冰片和水杨酸生成的低共熔物，研究了其对水杨酸透过大白鼠离体皮肤 的影响，结果表明其能明显增加水杨酸透皮吸收“。 山东中医药大学2 0 0 4 届硕士学位论文 3 处方中药物的透皮吸收研究进展 川芎：龙向志采用体外扩散池法对川芎贴膏中川芎的盐酸川芎嚷体外释放进行了 研究，其透皮量结果表明川芎贴膏以氮酮( a z o n e ) 为促渗剂不仅起效快，而且维持 时间长。) j h a z o n e 的川芎贴膏透皮量在试验开始后1 小时为不加促渗剂川芎贴膏的2 0 3 倍，2 小时为2 2 1 倍，加二甲基亚砜( d m s o ) 的对照贴膏透皮量在试验开始后l 小时为 不加促渗剂川芎贴膏的1 5 0 倍，2 小时为1 3 7 倍，这说明川芎贴膏加促渗剂较不加促 渗剂起效快，且以a z o n e 为佳。加l a z o n e 的川芎贴膏透皮量在试验2 4 t b 时为不加促渗剂 川芎贴膏的2 4 7 倍，为对照贴膏的2 2 7 倍。这说明以a z o n e 为促渗剂，其后续药物释 放量较多“。马平勃考察了水溶性氮酮在生发灵酐剂中对阿魏酸透皮吸收的促进作用 并找出晟佳促透浓度。采用双室扩散小室，用h p l c 法分别测定含5 种浓度氮酮的生发 灵酊剂经离体鼠皮透皮吸收1 0h 各时间点阿魏酸的释药量。结果表明当溶液中氮酮含 量为1 5 0 9 、吸收l o h 后累积释药量为2 3 5 6 u g ，释放速率最快为2 4 2 9 u g c m 2h ， 说明氮酮在生发灵酊剂中对阿魏酸的透皮吸收具有促进作用“”。 肉桂：郝美蓉等用h p l c 法观察了狗皮巴布膏中肉桂的体外经皮渗透性，采用两室 扩散模型对脱毛小鼠皮进行了实验观察。肉桂酸透皮量随着药物浓度的增加和时间的 延长而增多，低浓度1 2 5 m g 生药m l 在1 8 0 m i n 时的累积透皮量已不再增加。结果表明狗 皮膏巴布剂透皮吸收的可行性“”。黄蔚霞以痛风洗剂中桂枝的有效成分桂皮醛为测定 指标，采用体外扩散池法，利用大鼠离体皮肤，分别于1 、2 、3 、4 h 取接受液5 m l ，用 t l c 定性法及t l c 定量法测定桂皮醛的含量。结果表明透皮接受液中主要成分为桂皮 醛，其含量随透皮时问的延长而增多。王锐等采用t l c u v 法以桂皮醛为指标，进行 了肉桂浸膏离体鼠皮的透皮吸收实验。对透皮接受液中的桂皮醛进行定性定量测定， 结果表明桂皮醛可以透过皮肤，其累积透过量随透皮时间的延长而增加。皮肤厚薄对 透过量的影响可以通过延长透皮时间来减小“。 冰片：常用于局部皮肤制剂中，起凉爽、止痛、止痒作用。药理研究表明冰片可 促进其他药物的透皮吸收。崔东贤等利用冰片和水杨酸生成低共熔物的性质，探讨了 其透过大白鼠离体皮肤的效果，结果表明透皮吸收量明显增加。另外冰片还可以提高 水杨酸、甲硝唑、氟尿嘧啶的透皮吸收，是一种有效的促渗剂“”。 延胡索：采用灵敏度高的胶束荧光法为检测手段，测定家免1 ：3 服元胡( 3 9 ) 水煮 液2 4 h 后内脏中1 t h p 的含量。结果1 t h p 在肾脏、肝脏、心脏的含量分别为5 1 4 、 6 乳康巴布荆的研制 1 4 0 、0 0 7 9 u g g ；血中仅为0 4 3 u g m 1 ，而肝、肾中滞留量均比血药浓度高出一个数 量级。采用i i p l c 法测定人血浆中l t h p 浓度，5 名健康志愿者单剂量1 t h p 6 0 l l 】g ，p o ， 其血药浓度一时间曲线符合口服二室模型。药物在人体内的吸收比较快，单次给药后 仅1 4 4 h 左右即可达到血药峰值，而其在体内的消除速度较慢，消除t ，：长达9 8 h ，其 表观分布容积较大，提示其在体内广泛分布，故血药浓度较低。此为临床安全合理用 药提供实验依据。 麝香：麝香酮在大鼠体内的药代过程符合二室开放模型，在家兔和狗体内的药代 过程则符合三室开放模型。大鼠i v 麝香酮的t 。m 为1 1 8 i 1 3 1 2 m i n ，家兔和狗的t m e 分别为2 4 9 和3 0 o m i n ；t 。，2 a 分别为3 3 1 9 和3 6 6 4 m i n 。从药代参数看，麝香酮在三种 动物体内的分布和消除较迅速“。 综上所述，乳康巴布剂处方中药物有效成分明确，研究比较深入，为迸一步研究 奠定了基础：各药的药理作用确切，药动学参数表明药物在体内的吸收、分布、代谢、 排泄速度较快，表明将其制成巴布剂给药系统是可行的。 第三部分提取精制工艺的研究 1 提取精制工艺的设计 处方中肉桂、川芎均含有挥发油，亦为二者的活性成分之一，故应提取挥发油。 川芎含阿魏酸、川芎嗪。肉桂含肉桂酸，它们均溶于热水，故提取挥发油后的药渣应 加水煎煮提取。阿魏酸、川芎嗪、肉桂酸易溶于乙醇，可采用乙醇沉淀法对其水煎液 进行精制。 赤芍中芍药苷、延胡索中生物碱均易溶于乙醇，资料亦显示二者以乙醇提取，芍 药苷、生物碱的提取量明显比以水为溶剂提取的量多。故二者应以乙醇提取。 乳香、没药的活性成分为挥发油及树脂，二者均能溶于高浓度乙醇，故二者用高 浓度的乙醇提取。 冰片为非组织类药材、人工麝香为贵重药，为减少损失，故两者粉碎成细粉直接 加到制剂中。 7 山东中医药大学2 0 0 4 届硕士学住_ i 分文 2 实验材料 2 1 仪器 7 6 0 c r t 双光束紫外可见分光光度计( 上海分析仪器总厂) ；h a l 2 1 - 5 0 - 0 5 型超临界 c 0 ：萃取设备( 江苏南通超临界萃取仪器厂) ；l c - i o a 岛滓高效液相色谱仪( 岛津公司) 。 2 2 药材与试剂 川芎、肉桂、赤芍、延胡索、乳香、没药、冰片均购于济南建联药店，人工麝香 购于济南市中药厂，经山东中医药大学中药鉴定教研室教授鉴定为：川芎为伞形科植 物川芎l i g u s t i c u mc h u a n x i o n gh o r t 的干燥根茎：延胡索为罂栗科植物延胡索 c o r y d a l i sy a n h u s u ow t w a n g 的干燥块茎；肉桂为樟科植物肉桂c i n n a m o m u m c a s s i a p r e s l 的干燥树皮；赤芍为毛茛科植物芍药p a e o n i al a c t i f l o r ap a l l 的干燥根；冰 片为合成龙脑，是无色透明或白色透明的片状松脆结晶。以上各药材均符合2 0 0 0 版 中国药典有关规定。乳香为橄榄科乳香树b o s w e l l i ac a r t e r i ib i r d w 的胶树脂；没 药为橄榄科植物没药树c o m m i p h o r am y r r h ae n g l 的树脂。二者质量应符合1 9 7 5 年版 进口药材暂行标准的有关规定。麝香为人工麝香，应符合卫生部药品标准。阿魏 酸对照品( 中国药品生物制品检定所批号：7 7 3 9 2 0 4 ) ；芍药苷对照品( 中国药品生 物制品检定所批号；1 1 0 7 3 6 2 0 0 3 2 0 ) ；甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。 3 川芎、肉桂提取精制工艺研究 。 3 is f e 法提取挥发油 超临界c o ：提取( s f e ) 技术近年来在我国发展较快，它提取速度快，提取率高， 提取温度低，尤其适于对热不稳定物质的和挥发性成分的提取。川芎、肉桂药材中均 含有挥发性成分。预实验表明采用水蒸气提取时，挥发油与水存在乳化现象，挥发油 不易分离，故采用超临界c 0 ：法对其进行提取。影响超临界提取的主要因素有提取压 力、提取温度、解析温度、提取时间等。“，通过k ( 3 4 ) 正交试验，以挥发油得率为指 标。考察各因素对提取效果的影响。考察的因素及水平见表1 。 表1 超临界提取因素水平表 8 乳康巴布荆的研制 3 1 1 试验方法 将肉桂、川芎粉碎成粗粉，分别取肉桂、川芎粗粉各2 5 0 9 ，混匀，共9 份，按 l 9 ( 3 4 ) 正交表的布表组合进行提取，得到深棕色的油状提取物，分别称取挥发油的重 量，计算挥发油的收率。结果见表2 。 3 ，1 2s f e 提取物中阿魏酸含量测定 预实验表明s f e 提取物中含有阿魏酸，又以阿魏酸的含量为指标，考察超临界提 取条件。 阿魏酸含量测定色谱条件：色谱柱：k r o m a s i l c ，。( 4 6 衄3 0c l l l ，5 u r n ) , 流动 相：甲醇一1 醋酸( 3 5 ：6 5 ) ；流速：1 0 m l m i n ：检测波长：3 1 3 n m ；柱温为室温。 理论塔板数按阿魏酸计不少于2 0 0 0 。 对照品溶液的制备精密称取干燥至恒重的阿魏酸2 9 3 m g 置容量瓶中，用无水 乙醇定容至5 m l ，摇匀，即得。 样品溶液的制备精密称取肉桂、川芎s f e 提取物o 1 9 ，用无水乙醇溶解并定 容至5 m l ，混匀，滤过，弃去初滤液，收集续滤液，即得。 标准曲线的绘制分别精密吸取对照品溶液0 2 m l 、0 4 m l 、0 6 m l 、0 8 m l 、1 0 m l 置l m l 容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度。以阿魏酸对照品进样量对峰面积作图，计 算得回归方程：y = 2 4 3 6 3 9 2 7 x 一1 0 3 5 2 8 6 ( x 为阿魏酸对照品迸样量，y 为峰面积) ， r = 0 9 9 9 8 ，说明阿魏酸对照品在2 3 4 4 1 1 7 2 0 u g 范围内有较好的线性关系。标准曲 线见图1 。 嚣2 0 0 0 0 0 0 0 鬟1 5 0 0 ( n 1 0 群1 0 0 0 0 0 0 0 图1 阿魏酸标准曲线 含量测定取各样品溶液少量，用微孔滤膜( 0 4 5 u m ) 滤过，分别取滤液、对照品 溶液各2 0 u l ，注入液相色谱仪，测定，即得。结果见表2 。 9 一 山东中医药大学2 0 0 4 届硕士学位论文 表3 挥发油方差分析表 方差来源 s svm s fp a b c ( e ) 1 5 0 8 0 1 9 6 0 0 3 0 0 7 5 4 0 0 9 8 0 0 1 5 5 0 2 6 7 o ，0 5 6 5 3 3 1 2 2 9 d0 1 8 220 0 9 1 6 0 6 7 p o0 5 = 1 9 0p o o l = 9 9 0 l o 乳康b 布剂的研制 由上表可以看出：对挥发油提取影响较大的因素为提取压力和提取温度，提取时 间和解析温度影响不大，其最佳的提取条件为a 。b 2 c 。d 。，以阿魏酸为指标的最佳提取 条件为a 。b ，c 。d 3 。因本提取方法主要目的是提取挥发油，故仍然以挥发油的提取结果 为超临界提取的条件，即a 3 b 。c ，d 3 。亦即将肉桂、川芎药材粉碎成粗粉，提取压力3 0 m p a 、提取温度4 5 、解析温度4 0 、提取时间为2 5 h 。 3 1 3 验证试验用优选出的工艺条件提取三批肉桂、川芎药材粗粉，结果见表5 。 表5 验证试验结果 结果表明按上文确定的川芎、肉桂s f e 法的提取条件进行提取，挥发油得率较高， 说明此提取条件可行。 3 2 肉桂、川芎煎煮条件的考察 预实验表明经s f e 提取的肉桂、川芎药渣中仍然含有阿魏酸，应进一步提取。因 阿魏酸能溶于热水，故采用煎煮法提取。考察的因素包括溶剂用量、煎煮次数和煎煮 时间。以阿魏酸含量、水浸膏率为指标，采用b ( 3 4 ) 正交试验的方法研究各因素对提 取效果的影响。考察的因素及水平见表6 。 山东中医药大学2 0 0 4 届硕士学位论文 注：溶剂用量是指总的溶剂量；不同煎煮次数溶剂分配比为1 2 ( 8 ：4 ) ，( 6 ：3 ：3 ) ；1 6 ( 1 0 ： 6 ) ，( 8 ：4 ：4 ) ；2 0 ( 1 2 ：8 ) ，( 1 0 ；5 ：5 ) ：煎煮时间为每次煎煮所需时间。 供试液的制备取提取挥发油后的川芎、肉桂药渣4 0 9 ，共9 份，按k ( 3 4 ) 正交 表的布表组合加水煎煮，合并煎煮液，滤过，滤液浓缩，冷却后加水定容至1 0 0 m ， 混匀，即得。 3 2 1 阿魏酸的含量测定 样品溶液的制备精密吸取供试液l o m l ，水浴蒸干，残渣加水2 0 m l 使溶解，加 0 1 m o l 1 盐酸调p h l - 2 ，用乙醚萃取三次( 每次2 0 m 1 ) ，合并乙醚液，水浴蒸干，残 渣用无水乙醇溶解并定容至l o m l ，滤过，弃去初滤液，收集续滤液，即得。 含量测定取各样品溶液少量，用微孔滤膜( 0 4 5 u m ) 滤过，分别取滤液、对照品 溶液各2 0 u l ，注入液相色谱仪，测定，即得。结果见表7 。 3 2 2 水浸膏率测定精密吸取供试液5 m l ，至已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干， 1 0 5 c 烘3 小时，移至干燥器中，冷却3 0 分钟，迅速精密称定重量，以干燥品计算供 试液中水溶性浸出物的含量，得出浸膏率。结果见表7 。 乳隶巴布荆的研静j 表8 肉桂川芎药渣中阿魏酸方差分析表 1 3 山东中医药大学2 0 0 4 届硕士学位论文 由上表可以看出：以阿魏酸含量为指标，最佳煎煮条件为a 。b ：，对结果影响最 大的因素为煎煮时间，其次为煎煮次数，溶剂量影响不大。以水浸膏率为指标。对结 果影响最大的因素为煎煮次数，其次为煎煮时间，溶剂量影响不大。阿魏酸为主要成 分，故以阿魏酸含量为主要指标，最后确定肉桂、川芎药渣水煎煮条件选用a 。b 舡z 。 即加水煎煮两次、第一次加l o 倍量水。第二次加6 倍量水，每次煎煮1 5 h 。 3 2 3 验证试验用优选出的工艺条件加水煎煮三批经s f e 提取后的肉桂、川芎药渣， 结果见表1 0 。 表1 0 煎煮验证试验结果 实验结果表明按上文确定的川芎、肉桂药渣最佳煎煮条件进行煎煮，阿魏酸含量 较高，说明此煎煮条件可行。 3 3 川芎、肉桂精制工艺研究 川芎、肉桂药渣的水煎液中含有一定量的大分子成分，它们不能透过皮肤被吸收 利用，应除去。因阿魏酸、肉桂酸溶于乙醇，故采用乙醇沉淀法除去杂质a 影响醇沉 的因素主要包括：药液浓缩程度、药液含醇量、醇沉时间衄1 ，以阿魏酸含量、醇浸膏 量为指标，采用l 9 ( 3 4 ) 正交试验的方法研究各因素对醇沉效果的影响。考察的因素及 水平见表1 1 。 t 4 乳康巴布剂的研制 3 3 1 醇沉试验方法 取肉桂、川芎药渣l o o g ，加水煎煮两次，第一次加1 0 倍量水，第二次加6 倍量 水，每次煎煮1 5 h ，合并煎煮液，滤过，浓缩至2 0 0 m l ，分别取适量，按k ( 3 4 ) 正交 表的布表组合进行醇沉试验。醇沉液滤过，滤液加相应的溶剂定容至5 0 m l ，混匀， 得到供试液。 3 3 2 阿魏酸含量测定 样品溶液的制备同3 2 1 项下样品溶液的制备方法。 含量测定取各样品溶液少量，用微孔滤膜( 0 4 5 u m ) 滤过，分别取滤液、对照品 溶液各2 0 u l ，注入液相色谱仪，测定，即得。结果见表1 2 。 3 3 3 醇浸膏率测定精密吸取供试液l o m l ，至已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干， 1 0 5 。c 烘3 小时，移至干燥器中，冷却3 0 分钟，迅速精密称定重量，以干燥品计算供 试液中醇溶性浸出物的含量，得出浸膏率。结果见表1 2 。 山东中医药大学2 0 0 4 届硕士擘位论文 111l11 7 0 80 6 9 0 2l2221 6 6 00 4 5 3 3l3331 5 7 l0 6 9 1 421231 6 8 90 6 4 5 522311 5 2 20 6 4 5 623l21 5 5 5 0 7 5 0 73l321 2 2 70 5 9 7 832 131 4 2 50 5 1 9 933 211 3 8 90 5 1 0 k ，1 8 3 3i 9 3 2 1 9 5 9 阿k z 2 0 4 01 6 1 71 6 0 8 魏 酸k s i 6 2 6l ，9 5 01 9 3 2 r0 4 1 40 3 3 30 3 5 l k - 4 9 3 94 6 2 4 4 6 8 8 醇k z 4 7 6 64 6 0 74 73 8 浸 蕾 k 34 0 ，4 1 4 5 1 54 3 2 0 r8 9 81 ，0 9 4 1 8 表1 3 肉桂川芎药渣阿魏酸方差分析表 方差来源 s svm sf p a0 0 2 920 0 1 4 52 9 0 0 0 0 5 b0 0 2 320 0 1 1 52 3 0 0 o 0 5 c0 0 2 6 20 0 1 1 32 6 0 0 o 0 5 e0 ，0 0 1 20 0 0 0 5 1 6 乳康巴布荆的研制 由上表可以看出：以阿魏酸含量和醇浸膏率为指标，对结果影响最大的因素为药 液浓缩程度，其次为醇沉时间，醇沉浓度影响不大。因阿魏酸含量为主要指标，最后 确定肉桂、川芎水煎液醇沉条件选用a ：b 。c 。，即水煎液浓缩至每m 1 药液相当于原药材 1 9 时，冷至室温，加乙醇使其含醇量为7 0 ，醇沉4 8 h 。 3 3 4 验证试验用优选出的醇沉工艺条件进行醇沉试验。结果见表1 4 。 表1 5 醇沉验证试验结果 实验结果表明按上文确定的川芎、肉桂水煎液最佳醇沉工艺条件进行醇沉实验， 结果表明阿魏酸含量较高，说明此醇沉条件可行。 4 赤芍、延胡索提取工艺的研究 4 1 提取溶剂的选择 供试液的制备称取赤芍、延胡索各2 0 9 ，共四份，分别加水、5 0 乙醇、7 0 乙 醇、9 5 乙醇，加热回流提取二次，第一次加l o 倍量溶剂，提取2 小时，第二次 加8 倍量溶剂，提取1 5 小时，合并提取液，滤过，滤液回收乙醇并用相应溶剂定容 至l o o m l ，混匀，即得。 4 ，l 。l 芍药苷含量测定 色谱条件色谱柱：k r o m m i a s i l c 。( 4 6 衄3 0 锄，5u m ) ；流动相：乙腈一水 ( 1 8 ：8 2 ) ；流速：1 o m l m i n ；检测波长：2 3 0 n m ；柱温为室温。理论塔板数按芍药 苷计不应低于2 0 0 0 。 山东中压药大学2 0 0 4 届硕士学位论文 对照品溶液的制备精密称取在五氧化二磷减压干燥箱中干燥3 6 小时的芍药苷 对照品适量，加甲醇制成每l m l 含0 5 8 8 m g 的溶液，摇匀，即得。 样品溶液的制备精密吸取供试液5 m l ，置于2 5 m l 量瓶中，加无水乙醇至刻度， 混匀，滤过，弃去初滤液，收集续滤液，即得。 标准曲线的绘制分别精密吸取对照品溶液0 1 m l 、0 2 m 、0 4 m l 、0 6 m 、1 o m l 置l m l 容量瓶中，用甲醇稀释至刻度。以芍药苷对照品进样量对峰面积作图，计算得 回归方程y = 8 5 6 1 4 1 3 x 一1 6 7 0 2 4 ，r = o 9 9 9 9 9 ，说明芍药苷对照品在1 1 7 6 1 1 7 6 0 u g 之间范围内有较好的线性关系。标准曲线见图2 。 。 图2 芍药苷标准曲线 含量测定取各样品溶液少量，用微孔滤膜( 0 4 5 u m ) 滤过，分别吸取滤液、对照 品溶液各2 0 u l ，注入液相色谱仪，铡定，即得。结果见表1 6 。 4 1 2 延胡索总提取物的含量测定 4 1 2 ，l 方法学考察参考文献延胡索用7 0 乙醇提取时，提取出的有效成分量最 多，本实验采用双波长紫外分光光度法对延胡索提取物的测定进行了方法学的考察。 延胡索溶液的制备称取延胡索2 0 9 ，加7 0 乙醇加热回流提取二次，第一次加8 倍量溶剂，提取2 小时，第二次加6 倍量溶剂，提取l 小时，合并提取液，滤过， 滤液回收乙醇并用7 0 乙醇定容至l o o m l ，混匀，即得。 赤芍溶液的制备称取赤芍2 0 9 ，其余操作同延胡索项下，得到赤芍溶液。 双波长选择精密吸取延胡索溶液、赤芍溶液各5 m l ，水浴蒸干，残渣用7 0 乙 醇溶解，移入2 5 m 1 量瓶中，加7 0 乙醇至刻度，混匀，滤过，弃去初滤液，收集续 滤液，精密吸取续滤液2 m l ，用7 0 乙醇定容至l o m l 。用紫外分光光度法对其进行扫 描，波长范围2 0 0 4 0 0 n m 。从光谱图上可以看到，在3 4 3 n m 、3 5 5 n m 处，赤芍有等吸 收点，此处干扰最小，因此采用等吸收点法对延胡索提取物进行含量测定，双波长分 别为3 4 3 n m 、3 5 5 n m 。光谱图见图3 。 1 8 乳康巴布荆的研制 延胡索提取物标准曲线的绘制精密吸取延胡索溶液5 m l ，处理方法同双波长选 择项下，收集续滤液，得到延胡索对照药材溶液。分别精密吸取延胡索对照药材溶液 1 、1 5 、2 0 、2 5 、3 o m ，用7 0 乙醇稀释定容至l o m l ，采用双波长等吸收点法测 定其中延胡索提取物含量。以延胡索提取物浓度对吸收度差作图，计算得回归方程： y = o 0 4 4 8 5c + o 0 0 1 4 ( c 为延胡索提取物浓度，y 为吸收度差) ，r = o ，9 9 9 9 5 。说明延 胡索在4 - 1 2 m g m l 范围内有较好的线性关系。标准曲线见图4 。 图3 延胡索双波长等吸收点法光谱图 4681 01 2 浓度( 1 1 9 i m i ) 图4 延胡索总提取物标准曲线 4 1 2 2 延胡索提取物的测定精密吸取各供试液5 m ，处理方法同双波长选择项 下。各供试液中延胡索提取物含量见表1 6 。 t 9 啦 划皑攀瞽 一一 生查堡苎苎兰! ! ! ! 量壁主兰竺堡苎 表1 6 赤芍、延胡索提取溶剂的选择 提取溶剂 芍药苷含量( m g g ) 延胡索提取物含量( g g ) 由上表可知，以7 0 7 , 醇为提取溶剂，芍药苷与延胡索提取物的量最多，因此确 定提取溶剂选用7 0 乙醇。 4 2 赤芍、延胡索乙醇提取其它条件的考察 药材粒度，溶剂用量和提取时间是影响提取效果的主要因素。以芍药苷、延胡索 提取物和浸膏量为指标，采用l 。( 3 4 ) 正交试验的方法研究各因素对提取效果的影响。 考察的因素及水平见表l7 。 表1 7 乙醇提取条件考察因素及水平表 注；溶剂用量是指总的溶剂量；提取溶剂的分配1 2 ( 8 ；4 )1 6 ( 1 0 ：6 ) 2 0 ( 1 2 ：8 ) ；提取 时间为每次提取所需时间。 试验方法取不同粒度的赤芍、延胡索各2 0 9 ，共9 份，按b ( 3 4 ) 正交表的布表 组合加7 0 乙醇回流提取，各提取液回收乙醇，浓缩，定容至l o o m l ，得到供试液。 按4 1 2 与4 1 - 3 项下的方法分别测定芍药苷的量和延胡索提取物量。结果见表1 7 。 4 2 1 醇浸膏率测定精密吸取供试液5 m l ，至已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干， 1 0 5 烘3 小时，移至干燥器中，冷却3 0 分钟。迅速精密称定重量，以干燥品计算供 试液中醇溶性浸出物的含量，得出浸膏率。结果见表1 8 。 乳康巴布荆的研制 表1 8 赤芍、延胡索提取条件l 。( 3 4 )