（作物遗传育种专业论文）小偃麦种质系的鉴定及其抗病基因的染色体定位和SSR分子标记.pdf

英文缩略词 a b b r e v i a t i o n a f l p ：a m p l i f i e df r a g m e n tl e n g t hp o l y m o r p h i s m ，扩增片段长度多态性 a p a g e ：a c i dp o l y a c r y l a m i d eg e le l e e t r o p b o r e s i s ，酸性聚丙烯酰胺凝胶电泳 a p r ：a d u l tp l a n tr e s i s t a n c e ，成株期抗性 d i g ：d i f o x i g e n i n ，地高辛 d n a ：d e o x y r i b o n u c l e i ca c i d ，脱氧核糖核酸 e s t ：e x p r e s s e ds e q u e n c et a g s ，表达序列标签 f i s h ：f l u o r e s c e n c ei ns i t uh y b r i d i z a t i o n ，荧光原位杂交 g i s h ：g e n o m i ci ns i t uh y b r i d i z a t i o n ，基因组原位杂交 h m w - g s ：h i g l lm o l e c u l a rw e i g h tg l u t e n i ns u b u n i t ，高分子量麦谷蛋白亚基 h p c e ：h i g h - p e r f o r m a n c ec a p i l l a r ye l e c t r o p h o r e s i s ，高效毛细管电泳 m a s ：m a r k e ra s s i s t e ds e l e c t i o n ，标记辅助育种 m e - f i s h ：m u l t ic o l o rf i s h ，多色荧光原位杂交 n t s ：n u l l i s o m i c t e t r a s o m i c s ，缺体一四体系 p c r ：p o l y r n e r a s ec h a i nr e a c t i o n ，聚合酶链式反应 r a p d ：r a n d o ma m p l i f i e dp o l y m o r p m cd n a ，随机扩增多态性d n a r g a p ：r e s i s t a n c eg e n ea n a l o g sp o l y m o 州s m ，抗性基因同源序列多态性 r f l p ：r e s t r i c t i o nf r a g m e n tl e n g mp o l y m o h i s m ，限制性片段长度多态性 r p - h f l c ：r e v e r s e d - p h a s eh i g h - p e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h y ，反向高效液相色谱 s c a r ：s e q u e n c ec h a r a c t e r i z e da m p l i f i e dr e 画册，特异序列扩增区域标记 s d s p a g e ：s o d i u md o d e c y ls u l f a t ep o l y a c r y l a m i d eg e le l e e t r o p h o r e s i s ，十二烷基磺酸钠 一聚丙烯酰胺凝胶电泳 s n p ：s i n g l en u c l e o f i d ep o l y m o 删s m ，单核苷酸多态性 s s r ：s i m p l es e q u e n c er e p e a t s ，简单序列重复 s t s ：s e q u e n c et a g g e ds i t e ，序列标签位点 w m c ：w h e a tm i c r o s a t e l l i t ec o n s o r t i u m ，国际小麦微卫星协会 关于学位论文原创性和使用授权的声明 本人所呈交的学位论文，是在导师指导下，独立进行科学研究所取 得的成果。对在论文研究期间给予指导、帮助和做出重要贡献的个人 或集体，均在文中明确说明。本声明的法律责任由本人承担。 本人完全了解山东农业大学有关保留和使用学位论文的规定，同意 学校保留和按要求向国家有关部门或机构送交论文纸质本和电子版， _ 允许论文被查阅和借阅。本人授权山东农业大学可以将本学位论文的 全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其 他复制手段保存论文和汇编本学位论文。 保密论文在解密后应遵守此规定。 论文作者签名：心 导师地1 日 山东农业大学博士学位论文 中文摘要 长穗偃麦草( e l y t r i g i ae l o n g a t a ，2 n = 7 0 ，s t s t s t s t e e e e e b e b e x e x ) 是小麦的野生近 缘种，具有许多优良性状，是小麦的三级基因库和小麦性状改良的优异外源基因供体之 一。小偃麦种质系山农8 7 0 7 4 来源于长穗偃麦草( 2 n = 7 0 ) 与普通小麦品种鲁麦5 号和济南 1 3 的复合杂交( 长穗偃麦草鲁麦5 号济南1 3 ) 后代，山农1 9 、山农2 0 和山农1 2 2 是 利用十倍体长穗偃麦草和普通小麦直接杂交创制的小偃麦中间类型。本研究综合利用抗 性接种鉴定、细胞学、生物化学、s s r 分子标记和基因组原位杂交( g i s h ) 等方法技 术，对山农8 7 0 7 4 衍生的l o 个种质系山农8 7 0 7 4 - - 5 1 3 、- - 5 1 9 、- - 5 2 6 、- - 5 4 1 、- - 5 5 1 、 - - 5 5 4 、- - 5 5 5 ，- - 5 5 7 、- - 5 6 5 和- - 5 7 6 和3 个小偃麦中间类型山农1 9 、山农2 0 、山农 1 2 2 进行了鉴定；对小偃麦种质系的抗病基因进行了染色体定位和s s r 分子标记分析； 利用回收特异p c r 扩增片段法回收克隆了长穗偃麦草的特异s s r 片段，并制备成特异 探针应用于基因组原位杂交。获得以下主要结果： l 、利用细胞学方法对山农8 7 0 7 4 的1 0 个衍生种质系和3 个小偃麦中间类型进行了 鉴定，结果表明：1 0 个种质系均为小偃麦异染色体系，其中山农8 7 0 7 4 - - 5 1 9 是双体异 附加系( 2 n = 4 4 ，p m cm i 染色体基本构型为2 2 1 1 ) ；山农8 7 0 7 4 - - 5 1 3 、- - 5 2 6 、- - 5 4 1 、 - - 5 5 1 、- - 5 5 4 、- - 5 5 5 、- - 5 5 7 、- - 5 6 5 和- - 5 7 6 等9 个种质系为双体异代换系( 2 n = 4 2 ， p m cm i 染色体基本构型为2 1 i i ) ；3 个小偃麦中间类型山农1 9 、山农2 0 和山农1 2 2 为 新型八倍体小偃麦，它们分别携带有长穗偃麦草的1 个染色体组。经田间试验和人工接 种鉴定证明，这些八倍体小偃麦或小偃麦异染色体系综合农艺性状较好，具有对小麦条 锈病或白粉病良好的抗性，或多花多实等优良特点，在小麦遗传改良中具有重要利用价 值。 2 、分别以假鹅冠草( 2 n = 1 4 ，s t s t ) 和二倍体长穗偃麦草( 2 n = 1 4 ，e e ) 总基因组 d n a 为探针对异附加系山农8 7 0 7 4 - - 5 1 9 的根尖细胞染色体进行了原位杂交，鉴定结果 显示，在以假鹅冠草总基因组d n a 为探针的根尖细胞4 4 条染色体中有2 条出现黄绿色 杂交信号，而且杂交信号遍布整条染色体；以二倍体长穗偃麦草总基因组d n a 为探针 的根尖细胞染色体未观察到杂交信号。表明山农8 7 0 7 4 5 1 9 附加的2 条染色体来自长穗 偃麦草的s t 染色体基组，是一个附加了长穗偃麦草l 对s t 染色体的双体异附加系。 利用小麦s s r 引物进行的s s r - - p c r 扩增鉴定证明，在1 7 0 对小麦s s r 引物中有 l 对引物b u 比1 6 5 5 a l 能在山农8 7 0 7 4 - - 5 1 9 与其亲本问揭示特异性差异，特异片段 小似麦种质系的鉴定及其抗病基因的染色体定位和s s r 分子标记 大小约2 7 0 b p ，记为b a r c l 6 5 2 7 0 ，它可用于山农8 7 0 7 4 - - 5 1 9 的鉴定。利用回收特异p c r 扩增片段法回收克隆长穗偃麦草的d n a 特异重复片段b a r c l 6 5 2 7 0 ，经测序分析其碱基 序列全长为2 6 8 b p ，命名为b a r c l 6 5 2 6 8 ，并将该序列提交g e n b a n k 注册( g e n b a n k 登 录号e f 3 9 7 4 3 5 ) 。将该重复序列制备为探针进行原位杂交鉴定，结果显示，山农8 7 0 7 4 - - 5 1 9 的根尖细胞染色体出现很强的黄色点状杂交信号，而在普通小麦中没有观察到杂 交信号。结合以假鹅冠草( 2 n = 1 4 ，s t s t ) 总基因组d n a 为探针的g i s h 鉴定结果，推 测特异重复序列b a r c l 6 5 2 6 8 是s t 染色体基组的特异重复序列，可用于检测小麦遗传背 景中的长穗偃麦草遗传物质。 应用s d s p a g e 技术对山农8 7 0 7 4 - - 5 1 9 的鉴定表明，其附加的染色体上没有编码长 穗偃麦草特异亚基带型的基因位点。 3 、利用s s r 分子标记技术对9 个异代换系山农8 7 0 7 4 - - 5 1 3 、- - 5 2 6 、- - 5 4 1 、- - 5 5 1 、 - - 5 5 4 、- - 5 5 5 、- - 5 5 7 、- - 5 6 5 和- - 5 7 6 进行了鉴定分析。结果表明，从5 9 2 对小麦s s r 引物中获得9 对引物能在异代换系中扩增出长穗偃麦草的特异带，进一步证明它们携带 有长穗偃麦草遗传物质。9 对特异引物扩增的s s r 分子标记中，标记b a r c 0 6 6 2 3 0 和 b a r c 0 2 3 2 7 0 可用于鉴定山农8 7 0 7 4 - - 5 1 3 ；b a r c l 4 8 2 4 0 、b a r c 0 6 6 2 3 0 、b a r c l 6 8 1 5 0 ，l 、 b a r c 2 3 2 4 5 0 、b a r c l 9 5 2 0 0 和b a r c 0 2 3 2 符等可用于8 7 0 7 4 - - 5 2 6 的鉴定；b a r c l 4 8 2 4 0 、 b a r c 0 9 9 1 5 0 、b a r c 2 3 2 4 5 0 、b a r c 0 2 3 2 7 0 等可用于山农8 7 0 7 4 - - 5 4 1 的鉴定；b a r c l 4 8 2 4 0 、 b a r c 0 9 9 1 5 0 、b a r c 0 4 0 1 8 0 、b a r c 0 2 3 2 7 0 等可用于鉴定8 7 0 7 4 5 5 1 ；b a r c l 4 8 2 4 0 、 b a r c 0 4 0 1 s o 、b a r c 0 2 3 2 7 0 等可用于鉴定山农8 7 0 7 4 - - 5 5 45b a r c l 4 8 2 柏和b a r c 2 3 2 4 5 0 可用于山农8 7 0 7 4 - - 5 5 5 的鉴定；b a r c 0 6 6 2 3 0 、b a r c 0 4 0 l s o 、b a r c 0 2 3 2 7 0 等可用于山 农8 7 0 7 4 - - 5 5 7 的鉴定；b a r c l 0 0 1 5 0 、b a r c 0 4 0 n o 、b a r c 2 3 2 4 5 0 等可用于山农8 7 0 7 4 - - 5 6 5 的鉴定；b a r c l 4 8 2 4 0 、b a r c 0 6 6 2 3 0 、b a r c 0 2 3 2 7 0 等可用于鉴定山农8 7 0 7 4 - - 5 7 6 。 利用a p a g e 和s d s p a g e 技术对9 个异代换系的鉴定结果表明，它们被代换的 染色体不属于第1 部分同源群染色体。进一步利用一套中国春缺体一四体系对9 个异代 换系中代换染色体的同源群归属进鉴定结果表明，定位于2 b 染色体的引物s w e s 2 4 0 能扩增出l 条大小约4 0 0 b p 的差异带，此特异带在长穗偃麦草、二倍体长穗偃麦草、山 农8 7 0 7 4 5 1 3 、- - 5 2 6 、- - 5 4 1 、一5 5 l 、- - 5 5 4 、- - 5 5 5 、- - 5 5 7 和- - 5 7 6 、中国春2 b 缺 体2 d 四体系( n 2 b t 2 d ) 中均不存在，而在假鹅冠草、中国春、其余2 2 个中国春缺体一 四体系、普通小麦亲本鲁麦5 号和济南1 3 、山农8 7 0 7 4 - - 5 6 5 中均出现。推断山农8 7 0 7 4 - - 5 1 3 、- - 5 2 6 、- - 5 4 1 、- - 5 5 1 、- - 5 5 4 、- - 5 5 5 、- - 5 5 7 和- - 5 7 6 等8 个异代换系染色体 2 山东农业大学博士学位论文 基组中的l 对小麦2 b 染色体被1 对长穗偃麦草的2 e 染色体所代换，它们为2 b 2 e 双 体异代换系。 4 、p m cm i 染色体构型分析结果表明，山农2 0 和山农1 2 2 的染色体基组构成相同， 它们与前入选育的小偃6 8 的染色体基组可能为同一类型；山农1 9 的染色体基组构成不 同于山农2 0 、山农1 2 2 、和前人选育的小偃6 8 、小偃6 9 3 和小偃7 4 3 0 的染色体基组。 分别以十倍体长穗偃麦草、二倍体长穗偃麦草和假鹅冠草总基因组d n a 作探针进行 g i s h 鉴定证明，山农1 9 附加的长穗偃麦草染色体组为s t ；山农2 0 和山农1 2 2 附加的 长穗偃麦草染色体组可能为e 基组。综合上述结果，可将山农1 9 的染色体基组确定为 a b d s t ，山农2 0 和山农1 2 2 的染色体基组记为a b d e 。 5 、综合运用抗性接种鉴定、细胞学分析、s s r 分子标记和g i s h 等技术在山农8 7 0 7 4 的衍生种质系中鉴定了来源于十倍体长穗偃麦草的3 个抗性基因，即抗小麦条锈病基因 y r s t 和y r 2 e 以及抗小麦白粉病基因p m 2 e ，并初步将y r s t 定位在偃麦草的s t 染色体上， 将y r 2 e 和p m 2 e 定位在偃麦草的2 e 染色体上，推测它们可能为新的抗病基因。 以种质系山农8 7 0 7 4 - - 5 5 7 辉县红的f 2 分离群体为材料，应用s s r 分子标记技术对 山农8 7 0 7 4 - - 5 5 7 中的抗病基因进行了标记分析。5 9 2 对小麦s s r 引物中有2 对引物 x g w m 3 4 4 和b a r e 0 7 4 与山农8 7 0 7 4 - - 5 5 7 中的偃麦草染色体2 e 有连锁关系，其中标记 x g w m 3 4 4 1 2 0 m o 与抗白粉病基因p m 2 e 和抗条锈病基因y r 2 e 连锁，标记b a r c 0 7 4 1 5 0 与抗 叶锈病基因连锁。 关键词：长穗偃麦草；小偃麦；异附加系；异代换系；抗病基因；染色体定位； s s r 分子标记 3 小偃麦种质系的鉴定及其抗病基因的染色体定位和s s r 分子标记 i d e n t i f i c a t i o no ft r i t i e l y t r i g i ag e r m p l a s m ，t h ec h r o m o s o m a l l o c a t i o na n ds s rm o l e c u l a rm a r k e ro fi t sr e s i s t a n tg e n e a b s t r a c t e l y t r i g i ae l o n g a t ai sap e r e n n i a lp a r t i a la u t o a l l o d e c a p l o i ds p e c i e s ( 2 n = 1 0 x = 7 0 ，p r e v i o u s l y d e s i g n a t e dw i t hg e n o m e ss t s t s t s t e e e e e b e b e x e x ) ，t h a ti sap o t e n t i a l l yu s e f u ls o u r c eo fa n u m b e ro fg e n e sf o rw h e a ti m p r o v e m e n t ，i n c l u d i n gr u s tr e s i s t a n c e ，p o w d e r ym i l d e w r e s i s t a n c e s ，l o w - t e m p e r a t u r ea n dd r o u g h tt o l e r a n c e ，h i g hp r o t e i n , 缸i n c r e a s e dn u m b e ro f f l o r e t sp e rs p i k e t r i t i e l y t r i g i as h a r m o n 9 8 7 0 7 4 ，s h a r m o n g l 9 ，s h a n n o n 9 2 0a n ds h a r m o n 9 1 2 2 a l la l en o v e lg e r m p l a s mc r e a t e db yt h eh y b r i d i z a t i o nb e t w e e nd e c a p l o i de l y t r i g i ae l o n g a t a a n dc o n m l o nw h e a t s h a n n o n 9 8 7 0 7 4i sa p r o g e n yf r o mh y b r i dc r o s so f e l y t r i g i ae l o n g a t aa n d c o m m o nw h e a tl u m a i 5a n dj i n a n l 3 ，t h et e nl i n e ss h a n n o n 9 8 7 0 7 4 - 5 1 3 ，一5 1 9 ：5 2 6 ，- 5 4 1 ，5 5 1 ， 一5 5 4 ，5 5 5 , - 5 5 7 ，5 6 5 ，5 7 6a l la r ed e r i v e d 丘o mt r i t i e l y t r i g i as h a r m o n 9 8 7 0 7 4 ；s h a r m o n g l 9 ， s h a r m o n 9 2 0a n ds h a r m o n 9 1 2 2a l l a r eo c t a p l o i d t r i t i e l y t r i g i at y p e s t h e i n o c u l a t i o n a s s e s s m e n t ，c y t o l o g i c a la n a l y s i s ，b i o c h e m i s t r ya s s a y , s i m p l es e q u e n c er e p e a t ( s s r ) m o l e c u l a r m a r k e rt e c h n i q u e ，a n dg e n o m i c ns i t u h y b r i d i z a t i o n ( g i s i ) w e r ee m p l o y e di n t h e i d e n t i f i c a t i o no ft r i t i e l y t r i g i ag e r m p l a s m ；t h es p e c i f i cr e p e a ts e q u e n c eo f d e c a p l o i de l y t r i g i a e l o n g a t aa m p l i f i e db ys s r w a sr e t r i e v e da n dc l o n e d ，a n dw a sp r e p a r e da st h es p e c i f i cp r o b e u s e di nt h eg i s h t h er e s u l t sa r ea sf o l l o w i n g ： 1 t h ec y t o l o 西c a li d e n t i f i c a t i o ni n d i c a t e dt h a ts h a n n o n 9 8 7 0 7 4 - 5 1 9w a saa l i e nd i s o m i c a d d i t i o nl i n e w i t h4 4c h r o m o s o m e si nr o o tt i pc e l l sa n db a s i cc h r o m o s o i i l a lc o n f i g u r a t i o no f p m cm i2 n = 2 2 i i ，s h a n n o n 9 8 7 0 7 4 5 1 3 ，5 2 6 ，5 4 1 , - 5 5 1 ，一5 5 4 ，5 5 5 ，一5 5 7 , 5 6 5 ，5 7 6 a l lw e r e a l i e nd i s o m i cs u b s t i t u t i o nl i n e s w i m4 2c h r o m o s o m e si nr o o tt i pc e l l sa n db a s i cc l l r o m o s o m a l c o n f i g u r a t i o n o fp m cm i2 n = 2 1 i i ，a n dt h e t h r e e t r i t i e l y t r i g i a i n t e r s p e c i e s s h a n n o n 9 1 9 ，s h a n n o n 9 2 0a n ds h a r m o n 9 1 2 2a l lw e r en o v e lo c t a p l o i dt r i t i i e l y t r i g i ac o n t a i n i n g ag e n o m eo fe l y t r i g i ae l o n g a t a t h em o r p h o l o g i c a lc h a r a c t e r i z a t i o na n dd i s e a s er e s i s t a n c e e v a l u a t i o ns h o w e dt h a tt h e ya p p e a r e dw e l la g r o n o m i cc h a r a c t e r i s t i c ，p o w d e r ym i l d e w r e s i s t a n c eo ry e l l o wr u s tr e s i s t a n c e ，l n o r ef l o r a sp e rs p i k e t h e yw i l lp l a ya ni m p o r t a n tr o l ei n t h ew h e a tg e n e t i ci m p r o v e m e n t 2 t h eg i s hi d e n t i f i c a t i o no f t h ea d d i t i o nl i n es h a n n o n 9 8 7 0 7 4 5 1 9w i t hr o o tt i pc e l l sw a s c o n d u c t e db yu s i n gp s s t r i g o s a ( 2 n = 1 4 ，s t s t ) a n de e l o n g a t a ( 2 n = 1 4 ，e e ) t o t a lg e n o m i cd n a a s p r o b er e s p e c t i v e l y i ts h o w e dt h a tt w oc h r o r n o s o m e sw i t hg r e e n - y e l l o wh y b r i d i z a t i o ns i g n a l w e r eo b s e r v e da m o n gt h e4 4c 1 1 r o m o s o m e s ，w i t ht h es i g n a lc o v e r i n gt h ew h o l ec 1 i r o m o s o m e i nt h eg i s hp a t t e r nw i t ht h ep s s t r i g o s aa sp r o b e ；n os i g n a lw a so b s e r v e dw i t ht h ee e l o 鸭a | a 4 山东农业大学博士学位论文 a sp r o b e i ti n d i c a t e dt h a ts h a n n o n 9 8 7 0 7 4 5 1 9w a so n ea l i e nd i s o m i ca d d i t i o nl i n ew i t ht w o a d d e dc h r o m o s o m e sb e l o n g i n gt 0g e n o m es to f e l y t r i g i ae l o n g a t a t h es s rt e c h n i q u ew a sf u r t h e ra p p l i e dt ov e r i f ys h a n n o n 9 8 7 0 7 4 - 5 1 9 w i t h1 7 0p r i m e r p a i r s t e s t i f i e d 1 1 1 er e s u l t si n d i c a t e dt h a ts h a n n o n 9 8 7 0 7 4 5 1 9c o n t a i n e dg e n e t i cm a t e r i a l t r a n s f e r r e df r o me t y t r g ae l o n g a t a ；t h ep r i m e rp a i r sb a r c l 6 5o nc h r o m o s o m e5 a lc o u l d s h o wt h ed i v e r s i t yb e t w e e ns h a n n o n 9 8 7 0 7 4 5 1 9a n di t sp a r e n t s ，a n dt h es p e c i f i cs e g m e n to f e t y t r g ae l o n g a t ac o u l db es t a b l ya m p l i f i e di ni t sd n a p c r p r o d u c t s ，w h o s es i z ew a sa b o u t 2 7 0 b p ，a s s i g n e d 勰b a r c l 6 5 2 1 0t e m p o r a r i l y t h em o l e c u l a rm a k e rb a r c l 6 5 2 7 0c o u l db e u s e di nt h ev e r i f i c a t i o no f s h a m a o n 9 8 7 0 7 4 5 1 9 s u b s e q u e n t l y , t h es p e c i f i cr e p e a ts e g m e n to f e t y t r i g i ae l o n g a t aw a sr e t r i e v e da n dc l o n e d d n a s t a rs o f t w a r ea n a l y s i ss h o w e dt h a tt h e n u c l e o t i d es e q u e n c el e n g t ho fs p e c i f i cs e g m e n ti s2 6 8 b p t h e nt h em a r k e rw a sd e s i g n a t e da s b a r c l 6 5 2 6 $ ，a n dt h er e p e a ts e q u e n c ew a ss u b m i t t e dt ot h eg e n b a n kw i t ht h ea c c e s s i o n n u m b e re f 3 9 7 4 3 5 b a r c l 6 5 2 6 8w a sp r e p a r e da ss p e c i f i cp r o b ei nt h eg i s hi d e n t i f i c a t i o n ， s t r o n gy e l l o wd o th y b r i d i z a t i o ns i g n a lw a so b s e r v e di nc h r o m o s o m eo fs h a n n o n g $ 7 0 7 4 5 1 9 ， b u tn o ti nt h ec o t b r n o bw h e a t c o n s i d e r i n gt h eg i s hp a r e mb yt h ep r o b es li tw a si n f e r r e d t h a tt h es p e c i f i cr e p e a ts e q u e n c el i k e l yc o n c e n t r a t e do nc h r o m o s o m es t , a n di tw a st h e s p e c i f i cr e p e a ts e q u e n c eo fg e n o m es t t h er e p e a ts e q u e n c ec o u l db eu s e da sav a l u a b l e m a r k e rt oi d e n t i 匆t h eg e r m p l a s mo f e l y t r i g i ae l o n g a t ai nc o l i l n l o nw h e a tb a c k g r o u n d t h ei d e n t i f i c a t i o no fs h a n n o n 9 8 7 0 7 4 - 5 1 9b ys d s - p a g es h o w e dt h a tn os p e c i f i cl o c u s c o d e dt h ee 1 y t r i g h 7e l o n g a t ah w m - g sl o c a t e do nt h ea d d e dc h r o m o s o m es t 3 5 9 2p r i m e rp a i r sw e r ea m p l i f i e di nt h e i d e n t i f i c a t i o no ft h en i n ea l i e ns u b s t i t u t i o n s s h a r m o n 9 8 7 0 7 4 - 5 1 3 ，- 5 2 6 ，- 5 4 1 ：5 5 1 ，- 5 5 4 ：5 5 5 ：5 5 7 , - 5 6 5 , - 5 7 6b ys s r m o l e c u l a rt e c h n i q u e n i n ep r i m e rp a i r sa m o n gt h e mc o u l da m p l i f yt h es p e c i f i cb a n do f e y t r i g i ae l o n g a t ai np c r p r o d u c t so ft h en i n es u b s t i t u t i o n s ，w h i c hi n d i c a t e dt h es p e c i f i cd i f f e r e n c eb e t w e e nt h e s u b s t i t u t i o n sa n dt h e i rp a r e n t s ，a n df u r t h e rv e r i f i e dt h a tt h es u b s t i t u t i o n sw e r et h ep m g e n y f r o me l y t r i g i ae l o n g a t a t h en i n ep r i m e rp a i r sc o u l db eu s e da sm o l e c u l a rm a r k e r si nt h ei d e n t i f i c a t i o no ft h en i n e a l i e ns u b s t i t u t i o n s ，s u c ha s ：b a r c 0 6 6 2 3 0a n db a r c 0 2 3 2 7 0o f s h a n n o n 9 8 7 0 7 4 51 3 ， b a r c l 4 8 2 4 0 ，b a r c 0 6 6 2 3 0 ，b a r c l 6 8 1 s o i s 0 ，b a r c 2 3 2 4 5 0 ，b a r c l 9 5 2 0 0a n db a r c 0 2 3 2 7 0o f s h a n n o n 9 8 7 0 7 4 - 5 2 6 ，b a r c l 4 8 2 4 0 ，b a r c 0 9 9 1 s o ，b a r c 2 3 2 4 5 0 a n d b a r c 0 2 3 2 7 0 o f s h a n n o n 9 8 7 0 7 4 - 5 4 1 ， b a r c l 4 8 2 ，b a r c 0 9 9 1 5 0 ，b a r c 0 4 0 i a n db a r c 0 2 3 2 7 0 o f s h a r m o n 9 8 7 0 7 4 - 5 5 1 ，b a r c l 4 8 2 4 0 ，b a r c 0 4 0 1 8 0a n db a r c 0 2 3 2 7 0o fs h a n n o n 9 8 7 0 7 4 5 5 4 ， b a r c l 4 8 2 柏a n db a r c 2 3 2 4 s oo fs h a n n o n 9 8 7 0 7 4 5 5 5 ，b a r c 0 6 6 2 3 0 ，b a r c 0 4 0 1 9 0a n d b a r c 0 2 3 2 7 0o fs h a r m o n 9 8 7 0 7 4 - 5 5 7 ，b a r c l 0 0 1 5 0 , b j 蟠汇0 4 0 l s oa n db a r c 2 3 2 4 s oo f 5 小偃麦种质系的鉴定及其抗病基因的染色体定位和s s r 分子标记 s h a n n o n 9 8 7 0 7 4 5 6 5 ，b a r c l 4 8 2 4 0 ，b a r c 0 6 6 2 3 0a n db a r c 0 2 3 2 7 0o f s h a n n o n 9 8 7 0 7 4 - 5 7 6 t h ei d e n t i f i c a t i o no ft h en i n ea l i e ns u b s t i t u t i o n sb ya p a g ea n ds d s p a g es h o w e dt h a t t h es u b s t i t u t i o n sc o n t a i n e dg e n e t i cm a t e r i a lo fe t y t r g ae l o n g a t a ，a n dt h es u b s t i t u t e d c h r o m o s o m ed i dn o tb e l o n gt ot h ef i r s th o m o l o g o u sg r o u p o n es e to fc h i n e s es p r i n g n u l l i s o m i c - t e t r a s o m i cl i n e sw e r eu t i l i z e dt of u r t h e rv e n f yt h eh o m o l o g o u ss u b s t i t u t i o n c h r o m o s o m e t h er e s u l t ss h o w e dt h a t ，t h ep r i m e rp a i rs w e s 2 4 0o n2 bc h r o m o s o m ec o u l d a m p l i f yo n es p e c i f i cs e g m e n ti nt h ep c rp r o d u c t st od i s t i n g u i s ht h ed i f f e r e n c e sa m o n gt h e t e s t e dm a t e r i a l s 。w i t ht h es e g m e n ts i z ea b o u t4 0 0 b p ；t h es p e c i f i cb a n dc o u l dn o tb ea m p l i f i e d i nt h ep c r p r o d u c t s o f e l y t r i g i ae l o n g a t a ，e e l o n g a t a ( 2 n 2 1 4 l s u b s t i t u t i o n s s h a a n o n 9 8 7 0 7 4 5 1 3 ，一5 2 6 ，- 5 4 1 ，- 5 5 1 ，5 5 4 ，- 5 5 5 ，5 5 7 ，一5 7 6 ，a n d t h e2 bn u l l i s o m i c s2 d t e t r a s o m i c s ( n 2 b t 2 d ) o fc h i n e s es p r i n g ，b u ta p p e a r e di np s s t r i g o s a ，c h i n e s es p d n g ，t h e o t h e r2 2c h i n e s es p n n gn 山l i s o m i c t e t r a s o m i cl i n e s ，g o m m o nw h e a tl u m a i 5a n dj i n a n l 3 ， s u b s t i t u t i o nl i n es h a n n o n 9 8 7 0 7 4 5 6 5 i tc o n c l u d e dt h a tt h e2 bc h r o m o s o m e so ft h ee i g h t l i n e s s h a n n o n 9 8 7 0 7 4 5 1 3 ，5 2 6 ，一5 4 1 ，- 5 5 1 ，5 5 4 , - 5 5 5 ，- 5 5 7 ，一5 7 6 w e r es u b s t i t u t e d b y 2 e c h r o m o s o m eo fe l y t r i g i ae l o n g a t a , t h ee i g h tl i n e sw e r ea l i e nd i s o m i cs u b s t i t u t i o n sw i t h 2 b 2e _ 4 t h cc h r o m o s o m a lp a i r i n gb e h a v i o ro fp m cm io ft h et h r e eo c t a p l o i dt r i t i e l y t r i g i aw a s a n a l y z e da n dt h e r e s e t ss h o w e dt h a ts h a n n o n 9 2 0a n ds h a n n o n 9 1 2 2h a dt h