（动物营养与饲料科学专业论文）鹅胰岛素样生长因子i（igfi）基因克隆测序及多态性研究.pdf

范莉：鹅胰岛素样生长因子- i ( ，g b ，) 基因克隆测序及多态性研究 箜 扬州大学学位论文原创性声明和版权使用授权书 学位论文原创性声明 本人声明：所呈交的学位论文是在导师指导下独立进行研究工作所取得的研 究成果。除文中已经标明引用的内容外，本论文不包含其他个人或集体已经发表 的研究成果。对本文的研究做出贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。 本声明的法律结果由本人承担。 学位论文作者签名：哟如 签字日期： 矽夕年r 月；口日 学位论文版权使用授权书 本人完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留并向 国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子文档，允许论文被查阅和借阅。 本人授权扬州大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索， 可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同时授权中国科学 技术信息研究所将本学位论文收录到 j i 限少胰岛素 。弼f 珊则不与胰岛素结合，且对粥f f - 仃功亲和力远远大于j ，。血清中绝 大部分j 凹是以j 7 卯结合蛋白( 粥捌妒) 的形式存在。目前已发现6 种形式的，g f 8 p 。即配f b p l 6o 2 2 孵f ，的生物学功能 2 2 1j - 6 b ，对物质代谢的影响 _ g 弘，作为一个重要的有丝分裂原，能激活鼢蚺聚合酶等的活性，促进非组 蛋白的磷酸化，增加m r n a 水平，从而刺激r n a 和d n a 的合成，促进细胞的生 长分化。鉴于j 弭，受到昭的调节，d 卸曲a d a y 等最早提出，钮对外周组织上 的作用可能通过j f g b ，来完成。体外试验显示，g h 促进成骨细胞增殖的作用可 被粥f ，的抗血清所抑制，其抑制的程度呈剂量依赖。虽然此后的事实表明，础 具有双重作用，其本身也可以促进细胞的增殖，但在骨骼发育过程中，g 经由粥弘 歹介导的效应是占主导地位的 】。 弘，对糖代谢的作用与胰岛素相似，可促进组织摄取葡萄糖，诱导磷酸果 糖和丙酮酸脱氢酶的活性，促进葡萄糖的氧化，促进糖原合成，抑制肝糖输出， 降低胰岛素水平，上调胰岛素受体敏感性，从而降低血糖。目前已用j ，治疗 糖尿病，效果显著【1 0 1 。 对蛋白质代谢作用的早期研究表明，蛋白性营养不良总是伴随着低水平的 粥b ，。同样，体外培养的肝细胞，在氨基酸浓度只有正常2 0 的条件下，j 弭 ，的表达量只有正常对照的一半1 1 2 1 。m a i t e r 等【1 3 】实验发现，大鼠经过1 2 h 和2 4 h 扬州大学硕士学位论文 8 一 的蛋白限制，血清j 弭，分别下降5 8 和6 6 ，而肝细胞g 日结合位点的数量仅 减少1 5 和2 0 。在补充g 日后并不能逆转这种低水平j g b ，的状态。m a l m l o f 掣1 4 】给大鼠注射地塞米松，先造成负氮平衡，然后再分别给予重组j g b ，或重组 鲫后发现，由地塞米松造成的蛋白合成减少、能量消耗增加及尿氮排出增多的现 象可被j f 弘，所对抗，明则无此作用，表明粥b ，的合成效应是完全独立的， 不依赖明的作用。对禁食4 8 h 的动物分别补充j ，和胰岛素时发现，两者都 能降低蛋白质的消耗，但j ，能增加骨骼肌组织的蛋白合成，且粥b ，促进肝 脏合成的作用明显强于胰岛素l l 引。 对脂肪代谢的作用方面，动物和人体实验均发现r g b ，能明显降低血清胆固 醇水平【幡1 7 1 。低密度脂蛋白胆固醇受体( 说，) 的数量及活性直接影响胆固醇的 代谢，s t r c i c h e r 掣1 8 】试验证实瓜正，和胰岛素均能增加三三吧，m r n a 的表达，揭 示了j 弭，影响血清胆固醇水平的可能途径。但j 强，对脂代谢的调节普遍认为 是其综合作用的结果。 2 2 2j i 讧，对体增重的影响 作为促生长因子，j i 弭，对动物出生后生长发育起着重要的作用。将人的- g b ，基因转到鼠体内后发现体重呈明显增长【1 9 】，而全身j ，基因被敲除的鼠则生 长缓慢，且不能发育成熟，成年体重仅为正常鼠的三分之一【2 0 1 。张根华【2 1 】对肉鸡 和蛋鸡早期发育阶段胰岛素样生长因子水平进行了比较，认为蛋鸡血清j 弭，水 平随体重增加而增加，并且l0 日龄时蛋鸡血清j 6 社，水平显著高于肉鸡。b e c c a v i n 也发现鸡早期体增重的快慢和肝脏j 6 社，m r n a 的水平和血液粥f ，的水平相 关瞄】。同时j g 社，对鸡胚也有促进其生长和分化的作用【2 5 。2 6 1 。外源性j g | b ，和 伽刺激动物生长的模式不同，伽处理使动物各器官匀称地生长，而j 弭，处理 则选择性地导致肾、脾、腺体等的更显著增长【2 3 1 ，这可能与此泸结合蛋白对j f 弭 ，的运输和调节作用有关【2 4 】。 血液j f 强，水平与生长密切相关，如b r e i e r 【2 刀和s i d d i q u i 等【2 8 1 分别在牛和鼠 上都进行了证实。但又有研究表明循环中的j 阻，水平并不反应个体生长状况。 肝脏部位徭b ，基因被敲除的小鼠，血清粥b 厂f 降7 5 ，但并未引发生长障碍， 储备库中剩余2 5 的佑f ，经粥f 结合蛋白的介导，足以提供循环j 珏，与组 范莉：鹅胰岛素样生长因子- i ( ，g b ，) 基因克隆测序及多态性研究竺 织j ，的平衡【2 9 1 。机体为何保持相对高浓度血粥弘，的原因，尚有待进一步探 讨。 2 2 3j - ( 珥，对骨骼生长的影响 j g 孔，最初被称为“硫化因子”，是由于它能促进3 5 s 进入培养的软骨细胞，促 进软骨生长。j 诼，是骨组织中含量很高的生长因子之一，它主要由软骨细胞与 成骨细胞分泌，大多数骨细胞均能表达粥b ，佑f ，是调节骨细胞功能和代谢 的重要因子，不仅能减少骨胶原退化，增加骨质沉积，促进骨细胞的增殖、分化， 还可以通过不依赖促有丝分裂的途径促进骨基质的合成和矿化，它以自分泌和旁 分泌的形式调节骨骼细胞的功能，影响骨代谢【3 0 】。s c h o e h l e 等的实验结果表明， 给垂体切除的大鼠灌注纯化的j ，6 天后能增加大鼠胚骨骺宽度【3 l 】。对鸡注 射砌j g b ，后发现，j ，对公鸡胫骨和大腿骨的影响极显著大于母鸡，但j r g f - ，对骨骼矿物质沉积无影响【3 2 1 。n a t h 粕【5 1 】等在2 0 0 7 年4 月6 日的s c i c n c e 杂志 封面文章中指出，小型品种犬与大型品种犬之间有差异的基因组区域包括粥乒， 基因，小型品种犬都普遍存在一个g b ，基因单核苷酸多态位点，而该位点在大 型品种犬中基本上不存在，据此说明j g b ，基因在决定犬体型大小方面起着重要 的作用。 2 3 粥b ，基因的研究进展 2 3 1j ，基因的特点 关于j ，及其基因的研究主要集中在哺乳动物上，而家禽上的研究又集中 在鸡上。鸡佑弘，基因位于l 号染色体短臂近着丝粒处 3 3 1 ，尼f ，的基本特征与脊 椎动物相似，同样包括4 个外显子和3 个内含子，核苷酸片段全长约为5 0 k b ，而人 和鼠的粥b ，基因则大于7 0 k b 。其内含子序列远远长于外显子部分，其中外显子2 和外显子3 编码7 0 个氨基酸的j 7 弭，多肽，而外显子1 和外显子4 分别编码n 端和c 端肽以及一些非翻译序列【3 4 1 。从肝脏得到的佑b ，c d n a ( 2 6 k b ) 编码合成1 5 3 个 氨基酸，该翻译产物与哺乳动物的粥b ，a 蛋白较为相似，其中成熟肽( 7 0 氨基酸) 中的6 0 个氨基酸在鸡、大鼠和人之间完全一致3 5 1 。由于外显子4 含较长的非翻译区， 鸡j 珏，基因的c d n a 比较长，y o s h i t a l a 等【3 4 】证实在鸡体内检测出长分别为2 6 k b 和1 9 k b 的转录物，并且前者含量较高；f a w c e 仕等【3 6 】贝u 在肉鸡肝脏中检测到3 种j i g b 扬州大学硕士学位论文 1 0 ，的r i l 】埘a ，长分别为2 3 、0 8 6 和o 2 k b ，可能是因为前导肽编码区域存在不同剪 接机制所造成的【37 3 9 1 。 目前关于鹅g b ，基因的研究很少，如肖翠红等【加】克隆了鹅强，基因的 m r n a 序列并研究了其在组织中的表达情况，发现鹅j g b ，基因的m r n a 序列与 鸡、鸭的序列相比同源性分别达到9 7 6 和9 9 3 ；王雷等【4 1 ，5 5 】克隆了鹅j g b ，基 因的5 调控区，发现与鸭、鸡的同源性分别为9 8 1 和9 3 o ，编码区与鸭、鸡同 源性分别为9 9 6 和9 8 1 。说明禽类j ，i 弭，基因呈高度保守，也为本实验的开展 提供了依据。 2 3 2 厮b ，基因与生产性状相关的多态性研究 国内外均对弭，基因的多态性做过大量研究，但在家禽上相对较少，且主要 集中在鸡的5 和3 非编码区。a m i l l s 等【4 2 】用p c r - i 强l p 法检测到了j f 弭，基因5 非 编码区月j i 酶切多态位点，并分析了它与生长和饲料利用率的关系，发现该位点 只与一些零星的生产性状相关，如1 0 7 天时的日增重，4 7 ，7 3 ，1 0 7 天的饲料转化 率等。z h o u 等【4 3 】同样对该突变位点进行了更详细的研究，发现它与4 、6 、8 周龄体 重等生长性状，胸肌重、腿肌重、心脏重等屠体性状，血浆中t 3 、t 4 浓度等代谢 指标及骨密度、胫骨长等骨骼指标显著相关。雷明明等】分析了j ，基因3 非 编码区的一个却1 1 9 l 酶切多态位点与生产性能的关系，发现该多态位点与腹脂 重、胸肌重、胸深、胸宽、胸角宽、初生重等极显著相关( p 0 0 1 ) ，与屠宰活 重、屠体重、全净膛重、半净膛重、头颈重以及8 4 日龄体重呈显著相关( p 0 0 5 ) 。 k i m 【4 5 】、欧阳建华等1 分别分析了佑b ，基因5 非编码区a fi 酶切位点多态性与 鸡的产蛋性状和体重之间的关系，结果发现此位点在增加体重和提高产蛋性能方 面都存在促进作用。闵令江等【4 7 】分析了佑弘，基因5 非编码区内i 酶切多态与寿 光鸡1 0 周龄体重和部分屠体性状时发现，基因型对半净膛重和胸肌重有显著影响 ( p 0 0 5 ) ，在研究指标中寿光鸡的b b 基因型效应均大于a b 和a a 基因型。李长 春等【4 8 】对鸡j g b ，基因5 非编码区的脚i 酶切位点和届咿i 酶切位点进行多态性 分析发现基因型或单倍型组合对初生重、2 周龄体重和胫围、7 周龄体斜长以及1 6 周龄胫围有显著或极显著影响( p 0 0 5 或p 0 0 1 ) 。张建峰等【4 9 】发现鸡粥弘，基 因启动子上游7 k b 处一内i 位点多态性与骨代谢指标如骨钙素、碱性磷酸酶显著 相关，有一定的优良骨质指针作用。颜炳学等印】在鸡g b ，基因启动子区发现一 范莉：鹅胰岛素样生长因子i ( ，g 丹，) 基因克隆测序及多态性研究旦 处c a 颠换，该突变位点与一些生长、屠体性状相关显著，突变型个体的性状均值 都比野生型个体性状均值高，因此推测该突变可能导致，g r ，基因的转录、表达 水平发生变化。周锦玉【5 6 】在鹅j j g b ，基因外显子l 上发现一处研四，该位点与鹅的 产绒性状有关。 本实验室在鸡j 强，基因的多态性研究方面也做了大量工作。范刚【5 2 】分析了 新扬州鸡船只，基因脚i 酶切位点与生长和产肉性能的关系，发现无论公母鸡均 有- 基因型鸡平均体重高于+ + 基因型的趋势，1 2 周龄屠体性状则受到性别和基因 型的双重影响。王强【弱j 用p c r - s s c p 方法在鸡粥b ，基因5 u t r 、外显子l 和 3 - u t r 检测出4 个多态位点，并分析了这些位点与肉用性状的相关关系，发现除个 别指标外其余均表现为b b 型和a b 型有优于a a 型的趋势。万秋蓓【5 4 j 分析了鸡 粥b ，基因5 调控区腑i 和脚彤i 酶切位点突变和蛋用性状间的相关关系，发现 风fi 位点基因型对开产性状、产蛋数、产蛋量及蛋品质有显著影响( p o 0 5 ) ， 脚矿i 位点基因型则对5 0 周产蛋数、5 0 周产蛋量及蛋品质有显著影响( p 0 0 5 ) 。 3 本研究目的、意义 我国是鹅生产及需求大国，近年来人们不仅对鹅及其加工产品的数量要求越 来越大，对其品质的要求也越来越高，如何进一步提高鹅的生长速度、改善肉等 产品的品质已成为育种工作者关注的问题。但目前对禽类的研究主要集中在鸡上， 对鹅的研究仍处于起步阶段，特别是在分子生物学领域。 很多研究表明，基因和生长、屠体性状等很多经济性状呈高度相关， 是一个很有潜力的遗传标记。在禽类的鸡上，粥b ，基因的结构、功能已被深入 研究，筛查出了一些与生产性状有显著或极显著关联的单核苷酸多态，对分子标 记育种在实际生产中的运用有很大参考价值。由于该基因在家禽上呈高度保守， 鹅佑b ，基因可能和鸡有相似的调控机制，因此把它作为候选基因在鹅上进行研 究很有价值。但是在鹅上，对j 弭，的研究才刚刚起步，国内外鲜见相关报道。 本研究在前人包括本实验室对鸡佑f ，基因研究的基础上，克隆了鹅j 弭， 基因组序列，为鹅佑b ，基因研究的继续开展提供了基础素材，并对其部分序列 进行了多态性筛查，旨在初探，基因作为影响鹅生产性状候选基因的可行性。 扬州大学硕士学位论文 旦 参考文献： 【l 】n 0 帆it ，m 0 s h 盯m e ，n a t o r i s ，甜以a p h e n y l a l 撕鹏f o r 辩r i i l esu _ b s t i t u t i i i l 恤ps u b u i l i t o f e s c h 商c l l i ac o l if l - a r p a a 仃鳅sd 印e n d e n o fi t sa c t i v 姆0 nd i v a l 舶tc a t i o 璐叨jb i o lc h e i i l 1 9 8 4 ，2 5 9 ( 1 6 ) ：l 0 0 7 l 1 0 0 7 5 【2 】o r 妇m1 w a h 嘲h ，勋i l a 蹦w ah ，甜口，d c 惦c t i 锄o fp 0 1 ) 吼。印l l i 锄so fh u m 狮d n ab yg e l e l e c t r o p h 0 佗s i s 勰s i n g l e s 咖dc o n f o n n a t i o np o l y n m r i 蚰s m s 叨p r o cn a t la c a ds c iu s 1 9 8 9 ，8 6 ： 2 7 6 每之7 7 0 【3 】o 池m ，s 豫瞄ys e l 【i y at ，甜口f a m p i d 孤d 湖s i t i v ed e t e i c t i o f p o i n tm u 枷哪粕dg e n e t i c p o l 肿。印1 1 i 锄璐啦p o l y i i l e r a s ec l l a i n a c t i o n 们g 钮锄i c s 1 9 8 9 ，5 ：8 7 扣8 7 9 刚h o s l l i s ，k i m u ma f u l ( u d ay 甜口，p 0 l y m e r 雒ec h a i n 把a c t i o n s i n 西e - s t 豫：n dc f o m l 撕o n p o l y m o 叩h i s m 锄a l y s i s0 f p o l y m o r p h i s mi nd p a l 觚dd p b lg 如e s ：as i m p l e ，e c o n 伽a i c a l ，觚dr a p i d m e n l o df o rl l i s t i d c 锄p a t i b i l 毋t e s t i n g 【j 】h 岫i 咖u l ，1 9 9 2 ，3 3 ( 2 ) ：9 8 1 0 7 【5 】s a 】m o nwd ，d 烈l g l l a ( 埘wh ah o n n o n a l l yc o i 心o l l e ds e n 瑚胁0 r 砌c hs t i m u l a t e ss u l 彘i l e i n c o r p 0 硼衄b yc a r t i l a g ei nv i h d 忉jl a bc l i nm e d ，l9 5 7 ，4 9 ：8 2 5 8 3 6 【6 】p i e r s o nrw 儿t e m i nhm ，甜口，i p 硎a 1p 嘣f i c a t i 伽觚nc a l f n 皿o f a 舳c t i 叩、) l ，i t h m u n i p l i c 砸i o n s t i i i l u l 砒i n ga c t i v 时矗叮c l l i c k 蛐肋r o b l a s t si nc e uc u l t u 聆a n d 丽n ln o n - s u p p 抡s s i b l e i i l s u l i n 1 船a c t i v 姆叨jc e l lp h y s i o l ，1 9 7 2 ，7 9 ( 3 ) ：3 1 9 q 3 0 【7 】m o l 姗s ，b a y l i i l l 【dj ，p e 牡i sjl ，甜讲e d i t o 翰1 ：i l l s u l n l i k eg r o w t l l 觚0 r ( i g f ) b i n d i n gp r o t e i n s i m e n 瑚d ot h e yh a v ea d d i t i o n a lr o l e sb es i d e sm o d u l a t i n gt l l e 锄d o c r i i l ei g fa c t i o n s 阴jc l i i l e n d o c r i n o lm e t a b ，1 9 9 6 ，8 l ( 9 ) ：3 8 1 7 3 8 2 0 【8 】g l u c k m 锄pd ，d o u g l 弱rg ，n b l e rg 甜甜t h e 如d o c r i r o l eo fi i i s u l i n - l i k eg r 0 、 r t h 向阳r 1 【j 】a c t ap d i a t rs c 觚d ，1 9 9 l ，3 7 2 【s u pp l 】：9 7 1 0 5 【9 】d 跚曲a d a y w h ，p h i l l i p s ls ，m 鹏l l e r m c ，甜讲t h ee f r 鳅s o f i n 鲫l i n a n d 舯w c h h o m e 恤r e l e 私eo f s 伽at 0m e d m yt h ei s o l a 钯d 均ll i v e r 【j 】e n d o c r i i l o l 9 科，1 9 7 6 ，9 8 ( 4 ) ：1 2 1 4 1 2 1 9 【1 0 】路聪哲i g f 1 与i g f b p l 在g m ，e s 病糖代谢中的作用明国外医学内分泌学分册，2 0 0 l ， 2 l ( 4 ) ：2 1 2 2 1 3 【1 l 】e m s tm ，f m e s c he c 的叭hh 咖0 n ed e p e n d e n ts t i m u l 撕彻o fo s t e o b l a s tl i k e c e l l si n m m - 舶ec u l t u r e sv i a1 0 c a ls y m h e s i so fi n 驯l i l l - l i k e 伊o 、枷1 缸加rl 川b i o c h e mb i o p h y sl l 嚣 c 伽l i i l u n ，1 9 8 8 ，1 5 1 ( 1 ) ：1 4 2 1 4 7 【1 2 】1 1 1 i s s jep 吡i l o w s k ajb ，u n 如n v 0 0 dle d i 腩r e 确a l 他g i d a t i o no fi i l s u l i i l l i k eg r o w i l l 范莉：鹅胰岛素样生长因子i ( j g p ，) 基因克隆测序及多态性研究旦 缸t o rl ( i g f - 1 ) 锄di g fb i n d i i l gp r o t e i i l lm e 螂rm o n u c l e i c i d sb y 锄i i l o i da v a i l a b i l 畸 粕dg w c hh o n 鹏i i l 眦h e 倒d c 妒p m l a i yc u l t 嘴川e n d o c 咖0 1 9 以l9 9 4 ，l3 4 ( 6 ) ：l5 7 肛15 7 6 【1 3 】m a i 钯rd ，m a m ，u n d e r v v o o dld ，e f 耐。e 龇i yc h 锄g e si n m mc o 眦钮t r a 旺0 璐o fs o m a t o m c d i i l ci n d u c e db yd i e t a 哆p r o t e i nd 印r i v a 垃o ni i lr a t s ：c 训b t i t i 伽坞o f 掣的w 吐lh 啪l o n e 坞c e p t o r a n dp o s tr e c e p 研d e f e c t s 忉je n d o c m 0 1 1 9 8 8 ，1 1 8 ( 1 ) ：n 3 1 2 0 【1 4 】m a l i n o fka m l e l l i l l s 帅b e 喀vs 觚e r h o l th ，甜口，t h em l eo fi i l s u l i i l ，i i l s l l l i i l - l i k eg r o w 吐l f a c t o rl 锄d 伊o w t l lh o m ei nc o u m e r a c t i n gd e x 锄e m 弱o n e 砌u c di l i 仃0 9 e nw a s t i l 坞i nm 招川 h 洲lm e t a br - c s ，l9 9 7 ，2 9 ：2 0 ，2 4 【1 5 】s a l 伽锄f c 瑚rc ，h e s pr 甜以t h ee 虢c t so f 仃e a n i l e n tw i t hr e c 锄b i a n th 啪锄 g r o w 1h o n n o n e0 nb o d yc o m p o s i t i o n 柚dm e t a _ b o l i s mi i la d u l 馏、i mg r o w c hh o 眦o n ed e f i c i e n c y 【j 】 n e n 哲jm e d 1 9 8 9 ，3 2 l ( 2 2 ) ：1 7 9 7 1 8 0 3 【1 6 】l ohc ，h i o 姗md ，k 矗t s c hk 甜以g r o w mh o 咖0 n e0 ri 璐u l i nl i k eg r o w 1 蠡l c t d f1 i i l c m 嬲e sf 缸o ) 【i 洲锄dd e c r e 嬲e sp r o t e i no x i 捌o nw i t h o u t 捌i l ge n e 理叩n d i t i l r ei n p 啪n t 啪坶伽r a 乜【j 】jc l i l ln 妇，1 9 9 7 ，6 5 ( 1 1 ) ：1 3 8 4 1 3 9 0 【1 7 】o s c a r s s o nj ，l m 幽锄u ，g u s t a 6 s c ，甜讲r e c 吣b i n 趾th 啪锄i i l s u l i nl i k eg r o w t h 缸盼l d e 仃e 嬲e ss c r 哪l i p o p r o t e i nc o n c 咖m t i o 璐i nn 0 咖a la d u l tm e n 叨c l i ne n d o c r i n o l ，l9 9 5 ，4 2 ( 3 ) ： 6 7 3 6 7 6 18 】s 骶i c h e rrk 诎aj s r e b p1 咖d i 咖a c t i v 撕0 no f 也el o wd e n s 时l i p o p r o t e i nr e c 印t o r p r o m o t e rb yi m u l i n 锄di n s u l i i ll i k e 妒d w 吐l 鼬0 r1 【j 】jb i o lc h 锄，1 9 9 6 ，2 7 1 ( 1 8 ) ：7 1 2 8 7 1 3 3 19 】m 酬h e w sls ，h 锄姗e rrl ，d 讲( 衲w t l le n h 锄c 锄e n to f 们n s g e n i ci i l i c ee x p 陀s s i n gh 啪锄 i i l s u l n l i k eg r o w m 缸加r - 1 叨e n d o c r i n o l o 黟1 9 8 8 ，1 2 3 ( 6 ) ：2 8 2 7 屹8 3 3 【2 0 】s i d d i q u ira ，m c c u t c h e o nn ，b l a i rh t g w t l la l l 鲫e t 叮o fo 玛a n s ，m u s c l e s 锄db o n e si i l i n i c e 台o ml i 鹏sd i v e r g e n t 坶l e c t e do nt h eb 勰i so fp l a s m ai l l s u l i i l - l i k e 印w c h 蠡l 鼬o r - l 【j 】d e va g i g ， l 钙 2 5 6 ：5 3 6 0 【2 1 】张根华，陈伟华，赵茹茜肉鸡和蛋鸡早期生长阶段胰岛素样生长因子水平的比较叨 南京农业大学学报，1 9 9 7 ，2 0 ( 4 ) ：7 l w 【2 2 】b e c c a v i l lc ，c h e v a l i e rb ，c 0 9 b 啪l 讲i i l s u l n l i k e 印讹白咖r s 锄db o d y 印w i l li n c l l i c k e 璐d i v e 玛e m l y l e c t e df o rh i g l l0 rl o wg r o w f hm t e 【j 】je n d o 嘶n o l o 鼢2 0 0l ，l6 8 ：2 9 7 3 0 6 【2 3 】华益民，林浩然胰岛素样生长因子( i g f s ) 研究概况明中山大学学报( 自然科学版) ，1 9 9 6 ， 3 5 ( s 2 ) ：1 0 5 l l o 扬州大学硕士学位论文 坚 【2 4 】l i ujl i v e 瑚d ，l e l 的汕d i 璐u l i i ll i k eg r o w i l l 向咖卜1 i se s 鲫f i t i a l 矗mp o s 缸l a t a lg r o 、砌li n 碍s p o n t 0g 咖) i ，l l lh 0 蛐o 明e n d o c 凼o l o 鼢1 9 9 4 ，1 4 0 ( 1 1 ) ：5 1 7 8 5 1 8 4 【2 5 】g i r b 肌m ，c 0 m 既j 八甜讲i 璐u l i n l i k e 锄d i g f - l b 0 i t hs t i m u l 砒e m 溅l i s m 锄d 伊删l i i l 恤 p o s m e 唧l ac h i c k 锄b 巧。阴e n d o c l i l ，1 9 8 7 ，1 2 l ：1 4 7 7 1 4 8 2 【2 6 】b 勰s 鹤l ，l 龉i l i a kma ，s e 啪n oj d e v e l o p l 雕n t a l 佗g u l a t i o fi 璐l l l i i l 柚dt y p ei i m u l i i l l i k eg r o w t hf - a c t o rr e p 幻f s 锄da b s o f t y p e r e c e p t o 硌i nc l l i c k e n 豇n b d ，ot i s s 眦：s 【j 】 d a b 酏e s ，1 9 8 8 ，3 7 ：6 3 7 6 4 4 【2 7 】b 佗i 盯bh ，g l u c k m 觚pd ，b 豁sjj p l 嬲m ac 伽c e i 岫n o mo f i l l s u l i i l l i k e 掣o w mf i l c b d r - l a n di i l s u l i ni nt t 坨i i l 蠡m tc a l o m o g e n y 锄di n f l 鹏n o f a l t e i 蜘n 叻砸o n e n d o c r i o i l l ，1 9 8 8 ，1 1 9 ( 1 ) ： 4 3 5 0 【2 8 】s i d d i q u ira m c c u t c h e o nn ，b l a i rht g m w c ha l l o m 哪o fo 增m s ，m u s c l e sa n db o n e si i l l i c e 舶ml i m sd i v e r g e n t l ys e l e 曲e do n 廿l eb 嬲i so fp l 嬲m ai i l s u l i n - l i k e 孕o w t l lf 配t 0 卜1 g r o w n l 【j 】 d e v a g i g ，19 9 2 ，5 6 ：5 3 缶0 【2 9 】r 0 湖cj ，k u r l 锄des ，v e 坞鲫i td ，百以舡s o c i a t i o nb e 帆e n 咖i g f 一1 锄das i i i l p l e s e q u e n c er 印e 砒i i l 吐坞i g f - lg e n e ：i l n p l i c 砒i o m 矗”g e n e t i cs t u d i e so fb m d 【j 】c i i i le n d o c r i i 的l m 比l b ，1 9 9 8 ，8 3 ：2 2 8 6 2 2 9 0 【3 0 】c e l n 【e r a 侣l 锄s c ( 胍p a r i s o fs e 九l mi i 姗l i nl i k eg r o w c hf i l c 自o r1a n dg r o w c l lh o n l l o n e l e v e l si n o s t e o p 0 t i c a n dn 一 o s t e o p o 硎cp 0 s tm e n o p a u s a lw 伽e l l四r h e 啪a t o l l o g y i n t e m 撕o n a l ，2 0 0 0 ，1 9 ：2 0 5 2 0 8 【3l 】s c h h l ee i m u l i n - l i k eg r o 、v t hf ；l c t o f _ ls t i i i l u l a l e sg r o w c hi i lh y p o p h y s e 咖m i 髓dr a t s 叨 n a n 鹏，1 9 8 2 ，2 9 6 ：2 5 2 2 5 3 【3 2 】k o c 锄i sh ，y 撕y n ，b r o w ncu ，甜讲。e 位c to f i i lv i v 0a d i n i i l i s t 豫：c i 0 i l0 f i n s u l h 卜l i k eg r o w t h 缸t o r - l0 nc 锄p o s i t i o n 锄dm e c h a l l i c a lp 哪r t i e so fc h i c k e nb e 【刀p 0 u l n ys c i ，2 0 0 0 ，7 9 ： 1 3 4 5 1 3 5 0 3 3 e i ns ，m o r r i d 凡l j 锄ghs g e n e t i c 锄dp h y s i c a lm a p p 咄o f t l l ec i l i c k e nl g f ig e n et 0 c h r o m o s 伽ela n dc 0 邶e n ，a t i o no f 踟m e n 时、j i ，i t l lo l e rv e n e h 她g e n 啪e 阴jh e 刚i t y ，l9 9 6 ，8 7 ： l o 3 4 y 0 s h i t a l ( ak 萄i l i i o t o ，p e t e rr o t 、 ，e i n s t n 劬鹏o f t l 圮c h i c k e ni 璐u l i n - l i k eg r o w i l lf ；i c t o rig e 鹏 v 蒯sc o 璐e r y e d 肿锄o t e re l 锄e 舳明jb i 0 1c i 崩鸭1 9 9 1 ，2 6 6 ：9 7 2 4 9 7 31 【3 5 】k 萄i i i l o t oyr 肿帅i l lp s m l c t i l r e 锄de x p 他s s i o no fac l l i c k i m u l h 卜l i k eg r o w c h 蠡i c t o ri 范莉：鹅胰岛素样生长因子- i ( ，g b ，) 基因克隆测序及多态性研究竖 p 糟c u r s o r 叨m o le n d o c r i l l 0 i ，1 9 8 9 ，3 ：1 9 0 7 1 9 1 3 【3 6 】f a w 斌tdh ，b u l f i e l dg m o l e c u l 盯c l o n i n 岛s e q u 蚰锄a i y s i sa n d 麟p 他s s i 0 fp l l t a l i v e c l l i c k 锄i 璐u l i n - l n 呛g r o w c l l 向北。广ic d n a s 【j 】jm o le n d o 嘶l ，1 9 9 0 ，4 ( 3 ) ：2 0 l 2 l1 【3 7 】聂庆华，张细权，杨关福鸡生长轴相关基因的研究进展叨农业生物技术学报，2 0 0 3 ， 1 1 ( 3 ) ：3 0 5 3 1 2 【3 8 】孙汉，欧阳建华，王文君，等鸡胰岛素样生长因子一i 的研究进展阴江西农业大学学 报，2 0 0 3 ，2 5 ( 1 ) ：1 3 3 1 3 6 【3 9 】欧阳建华鸡生长轴基因的s n p s 分析及c g h r 基因第八、九内含子的克隆测序研究：【博 士学位论文】【d 】湖南：湖南农业大学，2 0 0 4 4 0 】肖翠红，李馨，佟春玉，等鹅胰岛素样生长因子一i 基因的克隆及其m r n a 在组织中的 表达量变化阴中国兽医科学，2 0 0 6 ，3 6 ( 3 ) ：2 1 6 2 1 9 【4 1 】王雷，王宝维，贾晓晖，等鹅i g f - l 基因5 调控区序列的克隆与分析阴中国畜牧兽医， 2 0 0 7 ，3 4 ( 3 ) ：7 l 7 3 【4 2 】a m i l l sm ，j i m 锄e zn ，l l a l b ad ，砑以i d 明t i f i c a t i o no f 廿l r s i n 弭en u c l e 甜d ep o l y r n o 叩l l s i m s i nt h ec h i c k 明i n s u l i n - l i k eg r o w c h 伽咖r1 锄d2g e m 锄dt h e i r 勰s o c i 撕o m 、) l ，i 旺lg r 0 、t 1 1a n d f e e d i n g n 嘶协叨p o u n r ys c i ，2 0 0 3 ，8 2 ( 1 0 ) ：1 4 8 5 1 4 9 3 【4 3 】z h o u h ，j i m e z n ，l l 扔乱d ，甜甜i d e 崩f i c 嘶o ft h i e es n pi i ln 圮c l l i c k e ni g f 1 粕d i g f - 2g e n e 锄dt l l e i r 鹊s o c i a ：c i o n sw i t h 掣o w t l l b o d yc 锄p o s i t i o l l ，s l 汜l e t o n i t 倒够锄dm e t a b o l i c 缸嘶协i nc h i c k e 眦阴p o u l n ys c i ，2 0 0 5 ，8 4 ：2 1 2 2 1 9 【4 4 】雷明明，张德祥，杨关福，等i g f s 和i g f b p - 2 基因的单核苷酸多态及其与鸡生长、屠宰 性能的相关分析中国畜牧兽医学会2 0 0 4 年学术年会论文集 c 】，2 5 9 2 6 3 【4 5 】k i i i lmh ，s e ods ，k oyr e l a t i o n s h i pb e 觚e e g gp r o d u c t i v 时锄di m u l n l i k eg 删l 觚o r 1g e 螂si 1 1k o 掀mn 撕v e 0 9 0 lc l l i c k e 璐阴p 0 u l 仃ys c i ，2 0 0 4 ，8 3 ：1 2 0 3 1 2 0 8 【4 6 】欧阳建华，孙汉，林树茂，等鸡胰岛素样生长因子- l 基因的遗传多态性与其体重的关系 阴畜牧兽医学报，2 0 0 3 ，3 4 ( 6 ) ：5 2 5 5 2 9 【4 7 】闵令江，潘庆杰，陈宏，等寿光鸡i g f - 1 基因多态性与体重及屠体性状关系的研究四 畜牧兽医学报，2 0 0 5 ，3 6 ( 7 ) ：6 4 5 6 4 8 【4 8 】李长春，李进，李奎，等藏鸡i g f - i 基因的s n p s 检测及与生长性状的关联分析阴畜牧 兽医学报，2 0 0 5 ，3 6 ( 1 1 ) ：l1 1 l 一1 l1 6 【4 9 】张建峰鸡i g f - i 对成骨细胞功能的影响及其基因多态性与蛋鸡骨代谢相关性的研究： 扬州大学硕士学位论文 1 6 【博士学位论文】【i 阴江苏：南京农业大学，2 0 0 5 【5 0 】颜炳学鸡类胰岛素样生长因子i 基因单碱基突变对该基因转录、表达以及对生长、屠 体性状的影响：【博士学位论文】【d 】北京：中国农业大学，2 0 0 5 【5 l 】n a 土h 趾bs ，c a r l o sdb ，k e v i nc ，甜讲as i i 珂e 删a l l e l ei sam 萄0 rd e t e m l i 舶mo f s m a l l s i 髓i nd o g s 【j 】s c i ，2 0 0 7 ，31 6 ：1 1 2 1 1 5 【5 2 】范刚i g f 1 基因5 非编码区多态性与新扬州鸡早期生长和产肉性能的关系研究【d 】江苏： 扬州大学，2 0 0 5 【5 3 】王强鸡i g f - i 基因p c r _ s s c p 分析及其与肉用性状关系的研究：【硕士学位论文】【d 】江 苏：扬州大学，2 0 0 6 【5 4 】万秋蓓鸡类胰岛素样生长因子一i ( i g f - i ) 基因多态性与蛋用性状关系及其表达的研究： 【硕士学位论文】【d 】江苏：扬州大学，2 0 0 7 【5 5 】王雷，王宝维，贾晓晖，等鹅i g f - l 基因cd _ n a 的克隆、分析与原核表达【j 】中国畜牧 杂志，2 0 0 8 ，4 4 ( 1 ) ： 【5 6 】周锦玉吉林自鹅i g f - i 基因的s n p 与产绒性状的相关性研究：【硕士学位论文】【d 】吉林： 吉林农业大学，2 0 0 7 范莉：鹅胰岛素样生长因子- i ( j | g 丹，) 基因克隆测序及多态性研究旦 第二章鹅粥b ，基因的克隆与序列分析 1 实验目的 目前对于家禽g b ，基因的研究主要集中在鸡上，关于鹅的研究很少，大部 分非编码区序列的报道仍为空白；本研究在已发表的鸡、鸭、鹅等物种j 阻，基 因序列的基础上，克隆了鹅j i 弭，的部分基因组序列，对前人得出的序列进行了 补充并首次获得了内含子序列，为鹅，g b ，基因的进一步研究提供了依据。 2 材料与方法 2 1 试验动物 本研究以扬州鹅为试验材料，随机挑选江苏高邮扬州鹅繁育基地一正常个体， 翅静脉采血2 m l ，肝素抗凝并置于- 2 0 保存备用。 2 2 主要仪器设备与试剂 2 2 1 主要仪器 美国m j 公司：p t c