（内科学专业论文）wwoxstat3与cmyc在非小细胞肺癌中的表达及相关性分析.pdf

j i i i i i i 删l m ! i l l i 0 y 17 8 4 7 7 4 w w o x ，s 仉虹3 与c m y c 在非小细胞肺癌中的 表达及相关性分析 摘要 目的：研究w w o x ( w w d o m i n c o n t a i n i n go x i d a s e r e d u r a s e ) 、信 号转导与转录激活因子3 ( s i 印a 1t r a n s d u c e r a n da c t i v a t o ro f t m s c r i p t i o n3 ，s t a t 3 ) 、c m y c 在非小细胞肺癌( n o n s m a uc e l ll u n g c a n c e r ，n s c l c ) 与肺正常组织中的表达及三者在非小细胞肺癌中的 相互关系。方法：应用免疫组织化学s p 法，检测w w o x 、s t a t 3 与c m y c 在4 0 例非小细胞肺癌组织、2 0 例正常肺组织中的表达情况， 并分析其与各临床病理指标之间的关系。n s c l c 组织均为手术切除 获得，术前未作任何放疗或化疗。其中男性2 9 例，女性1 1 例，年龄 3 5 7 8 岁，其中 3 锄者2 6 例；高中分 化者3 0 例，低分化者1 0 例，i i i 期者2 4 例，i i i 期者1 6 例。将 标本组织固定，脱水，浸蜡后制成组织蜡块，常规4 岬连续切片。 切片常规脱蜡水化后，蒸馏水冲洗，磷酸盐缓冲液( p h o s p h a t eb u 仃e r s a l i n e ，p b s ) 浸泡，高温抗原修复，3 h 2 0 2 阻断内源性过氧化物酶 活性，并用正常山羊血清封闭交叉反应。滴加抗( s t a t 3 兔抗人 多克隆抗体，鼠抗人w w o x 单克隆抗体，鼠抗人c m y c 单克隆抗体) 孵育，p b s 冲洗后滴加生物素标记二抗孵育，p b s 冲洗后滴加辣根 酶标记链霉卵白素工作液( s a h r p ) 孵育，p b s 冲洗，d a b 显色， 苏木素复染，透明，封片观察。以胞浆或胞核内出现棕黄色颗粒、网 织状或棕褐色团块为阳性细胞。其中w w o x 蛋白的阳性表达信号主 要在细胞浆中；s 吖汀3 蛋白在n s c l c 组织中的阳性信号表达主要位 于细胞浆中，少数位于细胞核中；c 1 n y c 蛋白的阳性表达信号主要位 于细胞浆中。三者均采用半定量积分法判断结果，即每张切片观察 1 0 个高倍视野，每个高倍视野阳性细胞所占百分比与着色深浅进行 打分：( 1 ) 根据阳性细胞所占百分比评分：阳性细胞数s 5 为o 分， 6 2 5 为1 分，2 6 5 0 为2 分，5 l 7 5 为3 分， 7 5 则为4 分，( 2 ) 根据着色强度进行评分：无显色为o 分，淡黄色为1 分，棕黄色为2 分，棕褐色为3 分取( 1 ) ( 2 ) 项评分的和值作为染色 结果的评判标准：o 分为阴性( 一) ，1 3 分为弱阳性( + ) ，4 5 分为 阳性( + + ) ，6 7 分为强阳性( 卅) 表达。结果：m x 在非小细胞 肺癌组织中阳性表达为3 0 ，明显低于肺正常组织( 7 5 ) ；s t a t 3 在非小细胞肺癌组织中阳性表达为9 2 5 ，明显高于肺正常组织( 2 0 ) ；c m y c 在非小细胞肺癌组织阳性表达为9 0 ，明显高于肺正常 组织( 1 5 ) 。经过统计学分析，它们各自在肺癌组织和正常肺组织中 的表达差异有显著统计学意义( p o 0 1 ) 。w w o x 基因的表达与年 龄、性别以及组织类型、t n m 分期、肿瘤大小及肿瘤组织分化程度 无相关性，与是否有淋巴结转移相关( p o 0 5 ) 。结论：s t a t 3 蛋白在n s c l c 中的表达增高， 显著高于正常肺组织，同样，在n s c l c 中c n l y c 蛋白的表达也是增 高的，并且显著高于正常肺组织，说明过度表达的s 雕汀3 蛋白和 c m y c 蛋白可能均参与了非小细胞肺癌的形成过程。w w o x 蛋白在 n s c l c 组织中呈低表达，可能也参与了肺癌的形成机制。w w o x 基因的表达与是否有淋巴结转移显著相关，在有淋巴结转移的肺癌组 织中表达更少，其表达缺失或减少可能与肿瘤的侵袭性有关。s t a t 3 、 c m y c 表达水平与非小细胞肺癌组织学类型有关，在腺癌组织中的表 达明显高于鳞癌，与患者的年龄、肿瘤大小、组织分化程度、淋巴结 转移和t n m 分期无关，组织学类型不同，其影响机制也不同，提示 它们可能只在肿瘤发生过程中发挥作用，而与肿瘤进展、侵袭和转移 无关。s t a t 3 蛋白与w w o x 蛋白的表达呈负相关，在s t a t 3 表 达越高的肺癌组织中，w w o x 的表达越少或表达缺失，两者可能有 相互拮抗作用。在n s c l c 组织中s t a t 3 蛋白和c m y c 蛋白的表 达无相关性，说明c m y c 并没有通过s a t t 3 通路诱导肿瘤的形成和 发展。c m y c 与w w o x 的表达也无相关性，它们可能是通过两条 不同的途径影响肺癌的发生与发展。 关键词：信号转导与转录激活因子3 ；包含氧化还原酶的w w 域；c m y c 蛋白；非小细胞肺癌 t h e r e l a t i o n s h i pa n de x p r e s s i o no fv 7 w o x ，s 1 a t 3 a n dc m y ci n h u m a nn o ns m a uc e ul u n gc a n c e r a b s t r a c t ： o b j e c t i v e ：t o i n v e s t i g a t e t h e e x p r e s s i o n o f s 1 a t 3 ，w w o xa n dc - m y ci nn o ns m a l lc e l ll u n gc a n c e 印呵s c l c ) a n d t h e i r c l i n i c a l s 适n i f i c a n c e ，a n ds t l l d y t h e i r r e l a t i o n s h i p m e t h o d ： i n h n u n o h i s t o c h e i i l i s t 巧s pm e t h o dt od e t e c tv 州o x ，s t a t 3 ，c m y ci n 4 0c a s e so fn o n - s m a l lc e l ll u n gc a n c e ra n d2 0n o m a l l u n gt i s s u e s ，a n d a n a l y z ei t sr e l a t i o n s h i pw i t hc l i n i c o p a m o l o g i c a lp a r a m e t e r s n s c l c ， s u 玛i c a lr e s e c t i o nw e r eo b t a i n e dw i t h o u ta n yp r e o p e r a t i v er a d i o t h e r a p yo r c h e m o t h e r a p y 2 9c a s e sw e r em a l ea n d1 1f b m a l e ，a g e d35t o7 8y e a r s ，o f w h i c h 3c m2 6c a s e s ；3 0c a s e so fh i g hg r a d e ，p o o r l y d i 自陀r e n t i a t e d1 0c a s e s ，i i i ，2 4c a s e s ，i i i 一o f16c a s e s t h es p e c i m e n t i s s u ef i x a t i o n ，d e h y d r a t i o n ，t r a 【n s p a r e m ，m a d eo ft i s s u ea r e rp a r a m nw a x b l o c k ，c o n v e n t i o n a l4 u ms e r i a ls e c t i o n s a r e rr o u t i n ed e w a x i n gs e c t i o n s h y d r a t i o n ，d i s t i l l e dw a t e r ，p h o s p h a t eb u f 强贸( p h o s p h a t eb u f 蚤玎s a l i n e ，p b s ) i m m e r s i o n ， h i g ht e m p e r a m r e叫i g e nr e t d e v a l ， 3 h 2 0 2b l o c k e n d o g e n o u sp e r o x i d a s ea c t i v i t y a n dc 1 0 s e dw i t hn o m l a lg o a ts e m m 5 c r o s s - r e a c t i o n d r o p p i n ga na n t i 一( s t a t 3r a b b i ta n t i - h u m a np o l y c l o n a l a n t i b o d y m o u s e觚t i h u m a nw w o xm o n o c l o n a la n t i b o d y m o u s e a n t i h u m a n c - m y cm o n o c l o n a la i l t i b o d y )i n c u b a t i o n ， p bsw a s h e d d r o p p i n gi n c u b a t e dw i mb i o t i n y l a t e ds e c o n d a 叮a n t i b o d i e s ，p b sw a s h e d d r o p p i n gh o r s e r a d i s he n z y t n el a b e l e ds t r e p 伽i d i nw o r k i n gn u i d ( s a h r p ) i n c u b a t i o n ，p bsw a s h i n g ，d a bc o l o r ，h e m a t o x y l i n ，t m n s p a r e n t ， -o ，noo r e n g p l a no b s e r v a t l o n _ loo c c u rw l t h l nt h ec 吼o p i a s mo rn u c l e u so 士b r o w n p a n i c l e s ，s h 印eo rb r o w r l lr e t i c u l a t e dp o s i t i v ec e uc l u n l p s w h i c hw w o x p r o t e i nm a i n l yi nt h ec y t o p l a s m ，t h ee x p r e s s i o no fp o s i t i v es i g n a l so f s n 气t 3p r o t e i ni nn s c l ct i s s u em a i n l yi nt h ec y t o p l a s m ，af e wi nt h e n u c l e u s ，t h ee x p r e s s i o no fc - m y cp r o t e i nw a sm a i n l yf o u n di nt h e c y t o p l a s m ；t h r e ec a u g h tb ys 谢一q u a n t i t a t i v ei n t e g r a t i o nm e t h o dt oj u d g e t h er e s u l t s ，t h e0 b s e r v a t i o no f e a c hs e c t i o n1o h i g hp o w e rf i e l d ，c e l l sp e r h i 曲p o w e rf i e l di nm i n dt h ep e r c e n t a g er a t ea n dc o l o rd 印t hf o r ：( 1 ) p o s i t i v ec e l l sa c c o r d i n gt ot 1 1 ep e r c e n t a g eo fp o s i t i v ec e l l sr a t i n g ：冬5 p o s i t i v ec e l l sw a sos c o r e ，6 t o2 5 f o r1s c o r e ，2 6 t o5 0 f o r2s c o r e ， 51 t o7 5 f o r3s c o r e ， 7 5 c o m p a r e dw i t h4s c o r e ，( 2 ) a c c o r d i n gt o c 0 1 0 ri n t e n s 匆s c o r e ：n oc o l o ri sop o i m s ，1p o i n t ，y e l l o w b r o 、釉f o r2 s c o r e ，b r o w nf o r3s c o r e a c c e s s ( 1 ) ( 2 ) o ft h es c o r ea 1 1 dv a l u ea st h e y a r d s t i c ks t a j n i n g ：oi n t on e g a t i v e ( - ) ，1 2d i v i d e di n t ow e a kp o s i t i v e ( + ) ， p o s i t i v e ( + + ) ，3t o5w e r ed i v i d e di m o6 7i sd i v i d e di n t os t r o n g l yp o s i t i v e ( 卅) e ) 币r e s s i o n r e s u l t s ：t h ee x p r e s s i o no fw w o xi nn o n s m a n 6 c e l l l u n gc a n c e ri s3 0 ，s i 鲥f i c a n t l y1 0 w e rt h a nn o m a ll u n gt i s s u e ( 7 5 ) ；t h ep o s i t i v ee x p r e s s i o no fs r 3i nn o n - s m a l lc e l ll u n gc a n c e r w a s9 2 5 ，s i g n i f i c a n t l yh i 曲e rm a nt h en o m a l l u n gt i s s u e ( 2 0 ) ；t h e p o s i t i v ee x p r e s s i o n o f c - m y c i nn o n s m a l lc e l l l u i l g c a n c e ri s 9 0 ，s i g n i 丘c a n t l yh i g h e rt h a nt h en o m a ll u n gt i s s u e ( 15 ) a r e r s t a t i s t i c a la n a l y s i s ，t h e ya r ei nt l l m o rt i s s u ea n d n o m a l l u n gt i s s u e sw e r e s t a t i s t i c a l l ys i 印i 丘c a n td i 跪r e n c e ( p o o1 ) t h ee x p r e s s i o no fw w o x w a s n tc o r r e l a t e dw 沛a g e ，g e n d e r ，删s t a g e s ，t u m o rs i z ea 1 1 dt 1 1 m o r d i 疏r e n t i a t i o n ，w h i c hi sr a l a t e dt ow h e t h e rl y m p hn o d em e t a s t a s i si n n s c l c ( p o o1 ) ，w i t h1 ) ，l n p hn o d em e t a s t a s i sn o n s m a l lc e ul u n gc a n c e r l o s so fw w o xg e n ee x p r e s s i o no r l o w e re x p r e s s i o n t h e1 e v e l so f s t a r 3a n dc m y cw e r er e l a t i o nw i t hh i s t o l o g i c a l t y p e si nn o n s m a l lc e l l l u n gc a n c e r ，i na d e n o c a r c i n o m aw a ss i g n i f i c a n t l yh i g h e rt h a ns q u a m o u s c e l l c a r c i n o m a ( p o 0 5 ) t h el e v e l so fs t a t 3 p r o t e i na n dw 、o xi nn o n - s 呦l lc e l l l u n g c a n c e rw a s n e g a t i v e l y c o m l a t e d ( r = 一o 4 4 3 ，p 7 5 则为4 分( 2 ) 根 据着色强度进行评分：无显色为o 分，淡黄色为1 分，棕黄色为2 分， 棕褐色为3 分取( 1 ) ( 2 ) 项评分的和值作为染色结果的评判标准：o 分 为阴性( ) ，1 3 分为弱阳性( + ) ，4 5 分为阳性( + + ) ，6 7 分为强阳 性( 卅) 表达。 4 5 统计分析 采用s p s s l 3 o 统计软件进行分析。等级资料的两样本比较用秩和 检验，双变量资料的等级相关性用s p e 撇a n 等级相关作统计分析。尸 o 0 5 有统计学意义，尸 o 0 1 有显著统计学意义。 挂晕 耋口7 i 弋 l啪x 、s t a t 3 、c - m v c 在非小细胞肺癌和正常肺组织中的定位 与表达情况 1 1w w o x 在非小细胞肺癌组织和正常肺组织中的表达情况 1 1 1w w o x 在非小细胞肺癌组织中的表达情况 w w o x 蛋白在n s c l c 组织中的阳性表达信号主要位于细胞浆 中，见图片1 2 。在4 0 例n s c l c 组织中，w w o x 蛋白阳性表达1 2 例( 其中弱阳性1 2 例，阳性o 例，强阳性o 例) ，阴性表达2 8 例， 阳性表达率为3 0 。 1 1 2w w o x 在正常肺组织中的表达情况 在2 0 例正常肺组织中，w w o x 蛋白阳性表达1 5 例( 其中弱阳性4 例，阳性7 例，强阳性4 例) ，阴性表达5 例，阳性表达率为7 5 。见一 图片3 1 1 3w w o x 在n s c l c 组织和正常肺组织中的表达比较 w w o x 蛋白在n s c l c 组织和正常肺组织中表达比较，经过统计 学分析，两者有显著性差异( 尸 o 0 1 ) ，它在n s c l c 组织中的表达水 平明显低于正常肺组织，见表1 。 表1 啪x 蛋白在n s c l c 组织和正常肺组织中的表达 t a b l e1 e x p r e s s i o no fw w o xp r o t e i i li i ln s c l ct i s s u c 锄dn o n l l a l1 蚰gt i s s u e 注：a 尸 o 0 1v s 正常肺组织 1 2s t a t 3 蛋白在非小细胞肺癌组织和正常肺组织中的表达情况 1 2 1s t a t 3 蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达情况 s t a t 3 蛋白在n s c l c 组织中的阳性表达信号主要位于细胞浆， 少数位于细胞核，见图片4 5 。在4 0 例n s c l c 组织中，s t a t 3 蛋白 阳性表达3 7 例( 其中弱阳性表达8 例，阳性表达8 例，强阳性表达2 1 例) ，阴性表达3 例，阳性表达率为9 2 5 ， 1 2 2s t a t 3 蛋白在正常肺组织中的表达 在2 0 例正常肺组织中，s t a t 3 蛋白阳性表达4 例( 其中弱阳性2 例， 阳性2 例，强阳性无) ，阴性表达1 6 例，阳性表达率为2 0 。见图片6 。 1 2 3s t a t 3 蛋白在n s c l c 组织和正常肺组织中的表达比较 s t a t 3 蛋白在n s c l c 组织和正常肺组织中的表达比较，经过统 计学分析，差异有显著性意义( p o 0 1 ) ，s t a t 3 在n s c l c 组织中的 表达水平明显高于正常肺组织，见表2 。 表2s n 盯3 蛋白在n s c l c 组织和正常肺组织中的表达 t a b l e2 e x p r e s s i o no fs n 盯3p r o t e i ni nn s c l c t i s s u ea n dn o m a l 1 1 l l l gt i s 跚e 注：4 p 0 0 1v s 正常肺组织 1 3 c m y c 蛋白在非小细胞肺癌组织和正常肺组织中的表达情况 1 3 1c - m y c 蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达情况 c m y c 蛋白在n s c l c 组织中的阳性表达信号主要位于细胞浆中， 见图片7 8 。在4 0 例n s c l c 组织中，c m y c 蛋白阳性表达3 6 例( 其中 弱阳性1 2 例，阳性1 0 例，强阳性1 4 例) ，阴性表达4 例，阳性表达率 为9 0 。 1 3 2 c - m y c 蛋白在正常肺组织中的表达情况 在2 0 例正常肺组织中，c m y c 蛋白阳性表达3 例( 其中弱阳性3 例， 阳性o 例，强阳性o 例) ，阴性表达1 7 例，阳性表达率为1 5 。见图片 9 1 3 3c - m y c 蛋白在n s c l c 组织和正常肺组织中的表达比较 c - m y c 蛋白在n s c l c 组织和正常肺组织中表达比较，经过统计 学分析，两者有显著性差异( p o 0 1 ) ，它在n s c l c 组织中的表达 水平明显高于正常肺组织，见表3 。 表3 蚴y c 蛋白在n s c l c 组织和正常肺组织中的表达 t a b l e3 e x p r e s s i o no fc m y cp r o t e i i li nn s c l ct i s s u e 锄dn o 衄a 1l u i l gt i s s u e 注：4 尸 o 0 1v s 正常肺组织 2 w w o x 、s t a t 3 、c m y c 的表达与临床各病理指标的关系 2 1w w o x 在n s c l c 组织中的表达与n s c l c 各临床病理因素的关 系 w w o x 基因的表达与淋巴结转移显著相关( p o 0 5 ) 。见表4 。 2 2s 仉盯3 蛋白在n s c l c 组织中的表达与n s c l c 各临床病理因素的 关系 s t a t 3 表达水平与非小细胞肺癌组织学类型有关，在腺癌组织中 的表达明显高于鳞癌( p o 0 5 ) ，见表5 。 2 3c m y c 蛋白在n s c l c 组织中的表达与n s c l c 各临床病理因素的 关系 。 c m y c 表达水平与非小细胞肺癌组织学类型有关，在腺癌组织中 的表达明显