（劳动卫生与环境卫生学专业论文）dfp在大鼠体内的药代动力学研究.pdf

、 ， 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下， 独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本 论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。 对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方 式标明。本声明的法律责任由本人承担。 论文作者签名：丝煌日期：塑坦：么：兰 关于学位论文使用授权的声明 本人完全了解山东大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学 校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论 文被查阅和借阅；本人授权山东大学可以将本学位论文的全部或部分 内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或其他复制手段 保存论文和汇编本学位论文。 ( 保密论文在解密后应遵守此规定) 、心名 uf 乙 l 论文作者签名：丛纽 日 期：划! ：( ：兰 中 英 符 前 材料与方法1 7 结果2 l 讨论4 8 结论5 7 附录5 8 参考文献6 7 致 射7 7 攻读学位期间发表的学术论文目录7 8 c o n t e n t s s y m b o l i cd e s c r i p t i o n l ( ) p r e f a c e 1 2 m a t e r i a l sa n dm e t h o d s 1 7 r e s u l t s 2 1 d i s c u s s i o n 4 8 c o n c l u s i o n 5 7 a d d e n d u m ! ；l ； r e f e r e n c e 6 7 a c k n o w l e d g e m e n t 7 7 p u b l i c a t i o n s 7 8 山东人学硕上毕业论文 d f p 在大鼠体内的药代动力学研究 研究生：巩泉泉 指导教师：刘萍教授 中文摘要 【目的】 去铁酮( d e f e r i p r o n e ，d f p ) 是一种化学合成金属螯合剂，化学名称为1 ，2 二甲基3 羟基4 吡啶酮。去铁酮在临床常用于治疗铁负荷过多的地中海贫血患 者，是目前唯一可以用于口服的金属螯合剂，对铁和铝有较强的螯合作用。低、 中、高三种不同浓度的去铁酮药代动力学、组织分布与血浆蛋白结合率研究国内 外均未见报道。本实验通过建立一种简单、快速、准确的测定大鼠血浆及组织中 d f p 的高效液相色谱紫外检测法，用于d f p 在大鼠体内的药代动力学、组织分 布与血浆蛋白结合率研究，为进一步临床药代学研究和合理用药提供理论依据。 【方法】 1d f p 在大鼠体内的药代动力学实验 1 1 实验动物处理 取w i s t a r 大鼠1 5 只，随机分为3 组：低剂量组、中剂量组、高剂量组。实 验前平衡3 天，饥饿1 2 h 后以灌胃方式分别给d f p 。在给药后不同时间点于颈静 脉窦处取血o 2 5m l ，肝素抗凝，制成血浆，血浆经处理后取2 0 山进样测定。 1 2 色谱条件 色谱柱：d i a m o n s i l ( r ) 钻石c 1 8 ( 2 5 0m m x 4 6m i l l ，5r u n ) 色谱柱；流动相： 乙腈磷酸盐缓冲液( 0 0 5m o l l 1 磷酸氢二钠、5m m o l l j 庚烷磺酸钠和2m m o l l 。1 e d t a ，磷酸调p h = 3 0 ) = 8 ：9 2 ( v v ) 流速：1 0m l m i n 一；检测波长：2 7 8r l l t l ； 检测温度：室温；进样量：2 0 “l 。 2d f p 在大鼠体内组织分布实验 2 1 实验动物处理 将2 0 只大鼠随机分为4 组( 空白组；1 0m i n 组；6 0m i n 组；3 6 0r a i n 组) ， 每组5 只。饥饿1 2h 后，空白组给1m l 生理盐水，其余各组灌胃给d f p 。各组 山东火学硕士毕业论文 于不同时间点断头处死，取其各组织。用生理盐水将组织样品冲洗干净，滤纸吸 干，加入生理盐水制成2 0 的组织匀浆，离心后，上清液经处理后取2 0 “l 进样。 2 2 色谱条件 色谱柱：d i a m o n s i l ( r ) 钻石c l s ( 2 5 0m m x 4 6l 姗，5p r o ) 色谱柱；流动相： 乙腈磷酸盐缓冲液( 0 0 5t o o l l 1 磷酸氢二钠、5m m o l l j 庚烷磺酸钠和2m m o l l 。1 e d t a ，磷酸调p h = 3 0 ) = 8 ：9 2 或1 0 ：9 0 ( v v ) 流速：1 0m l r a i n ；检测波长： 2 7 8n n l ；检测温度：室温；进样量：2 0p l 。 3d f p 的大鼠血浆蛋白结合率实验 3 1 实验动物处理 取健康雄性w i s t a r 大鼠1 0 只，处死，取血，肝素抗凝，制成血浆。透析内 液和透析外液经处理后进样2 0p l 。 3 2 色谱条件 同“2 2 色谱条件”。 3 3 透析袋对药物的吸附实验 于透析袋内加入lm l 空白透析液，放入含有1 0m ld f p 溶液的广口瓶中， 盖紧塞子，3 7 生化培养箱中放置4h 至其平衡，然后测定透析袋外的药物浓度， 计算透析膜对药物的吸附率。 3 4 平衡时间的考察和血浆蛋白结合率的测定 于透析袋中加入lm l 空白血浆，置广口瓶中悬浮于l om l 不同浓度的d f p 透析液中，放置于3 7 的生化培养箱中。于一定时间点，测定透析袋内、外的 d f p 浓度，计算d f p 的血浆蛋白结合率。 4 数据处理与分析 d a s 2 0 药代动力学智能分析软件计算药代动力学参数和房室模型； s p s s l 3 0 版统计学分析软件进行统计描述和，检验。 【结果】 1 d f p 在大鼠体内药代动力学实验结果 1 1 方法学研究结果 取d f p 对照品溶液经光谱扫描，本实验选用2 7 8n n l 为检测波长。d f p 在本 2 山东人学硕士毕业论文 实验条件的保留时间为1 0 8m i n ，在1 1 2 0m g l o 范围内线性良好( 厂= o 9 9 9 9 ) ， 低、中、高三种浓度绝对回收率均大于9 8 7 1 ，相对回收率在9 9 0 4 1 0 0 6 ， 日内变异r s d 均小于o 7 4 ，日间变异r s d 均小于1 1 6 ，于4 c 存放l 周和 2 0 存放1 个月后r s d 均小于1 7 2 ，稳定性较好。 1 2 药代动力学结果 大鼠单次以灌胃方式给d f p 后体内的药动学过程符合二室开放模型。低、 中、高三种剂量的平均吸收半衰期为18 9 0 、1 6 0 8 、1 2 6 9r a i n ，其一级吸收速率 k a 为0 0 5 - 4 ) 1 7m i n ；低、中、高三种剂量的平均分布半衰期t l ，2 旺分别为2 3 3 3 、 2 2 2 2 、2 0 8 8m i n ，其表观分布容积分别为0 7 0 、0 6 2 、o 4 1l k g 1 ；低、中、高 三种剂量的清除率分别为0 0 1 7 、0 0 2 1 、0 0 1 6l m i n q k g 1 ，平均消除半衰期t l 2 p 分别为5 3 3 2 、5 0 8 7 、4 6 3 4m i n ：给低、中、高三种剂量d f p 后，0 - o o 时间内药 时曲线下面积分别为2 3 8 0 1 、3 5 1 9 4 、8 7 8 8 7m g l q m i n 。统计矩法所得低、中、 高三种剂量的平均滞留时间m r t ( o - o 分别为10 9 81 、9 5 2 8 、8 8 7 0r a i n ，血浆末端 清除半衰期t l t 2 z 分别为1 4 0 2 8 、9 3 4 0 、6 3 2 7r a i n ，达到最大血药浓度的时间分 别为3 6 o o 、4 8 0 0 、5 4 0 0m i n ，最大血药浓度c m 舣分别为2 1 6 0 、3 7 1 3 、8 3 2 5m g l ， 表观分布容积v z 分别为2 8 0 、2 4 9 、1 4 1l k g 1 ，清除率c l z 分别为0 0 1 4 、0 0 1 8 、 0 0 1 6l m i n k g 1 ，得到的药时曲线下面积a u c ( 叭) 值分别为2 2 7 6 9 6 、3 5 8 0 5 4 、 8 9 3 3 3 1m g l 1 m i n 。 2 d f - p 在大鼠体内组织分布实验结果 2 1 方法学研究结果 d f p 在小肠的色谱条件下保留时间为1 0 8m i n ，在其他组织的色谱条件下保 留时间为7 8r a i n 。各组织中的d f p 在一定浓度范围内线性关系良好( 厂 o 9 9 9 5 ) ， 低、中、高三种浓度绝对回收率均大于8 6 0 ，相对回收率在9 7 1 - - 1 0 9 6 ， 日内变异r s d 均小于3 3 3 ，日间变异r s d 均小于4 9 8 ，于4 c 存放l 周和 2 0 存放1 个月后r s d 均小于5 4 9 ，稳定性较好。 2 2 组织分布结果 本实验给大鼠单次灌胃7 0m g k g d f p ，1 0m i n 后在包括脑和睾丸的各组织 中，均检测出有d f p 分布。给药1 0r a i n 和6 0m i n 后，胃中d f p 的浓度为2 4 4 8 1 m g k g 1 和5 8 8 6m g k g ，远远高于同组小肠中d f p 含量( 尸 o 0 0 1 ) 。给药6 0r a i n 山东大学硕 ：毕业论文 和3 6 0m i n 后在肝脏中d f p 的平均含量为3 5 9 2 2m g k g 一和5 6 8 0m g k g ，显著 高于其他组织( 尸 o 9 9 9 5 ) t h ea b s o l u t er e c o v e r i e so fd f pw e r em o r et h a n8 6 o a n dt h er e l a t i v er e c o v e r i e sw e r e9 7 1 - 10 9 6 a tl o w , m i d d l ea n dh i 【g h c o n c e n t r a t i o n s t h er s d so fi n t r a - d a yw e r el e s st h a n3 3 3 ，a n dt h o s eo fi n t e r - d a y w e r el e s st h a n4 9 8 t h er s d sw e r el e s st h a n5 4 9 a f t e rs t o r e df o rlw e e ka t4 a n d1m o n t ha t 2 0 t h es t a b i l i t i e sw e r eg o o d 2 2t h er e s u l t so ft i s s u ed i s t r i b u t i o n t h ed f pw a sd e t e c t e di ne a c ho ft i s s u e si n c l u d i n gb r a i na n dt e s t i s10r a i na f t e ri g 7 0 m g k g d f et h ec o n c e n t r a t i o n so fd f pw e r e2 4 4 81m g - k g 1a n d5 8 8 6m g k g li n s t o m a c h10 r a i na n d6 0 m i na f t e ri gd f et h e yw e r er e m a r k a b l yh i g h e rt h a nt h o s ei n s m a l li n t e s t i n ei nt h es a m eg r o u p ( 氏0 o o1 ) t h ec o n c e n t r a t i o n so fd f pw e r e 3 5 9 2 2 m g k g 1a n d5 6 8 0 m g k g 。1i nl i v e r6 0r a i na n d3 6 0r a i na f t e ri gd f p , a n dt h e y w e r er e m a r k a b l yh i g h e rt h a nt h o s ei nt h eo t h e rt i s s u e s ( 尸 0 。0 01 ) t h ec o n c e n t r a t i o n i nk i d n e yw a s10 13 m g k g 。13 6 0r a i na f t e ri gd f p , a n di tw a sr e m a r k a b l yh i g h e rt h a n t h o s ei nt h eo t h e rt i s s u e se x c e p tl i v e r ( p 0 0 5 ) c o m c o l u t i o n s ln eh p l cm e t h o d sw h i c h w e r ed e v e l o p e di nt h i ss t u d yw e r ef o rt h ed e t e c t i o no f d f pi nr a t sp l a s m a , t i s s u eb o m o g e n a t ea n dd i a l y s a t e t h e yw e r eq u i c k ，a c c u r a t e ， s e n s i t i v ea n d g o o dr e p e a t a b i l i t i e s t h e y c o u l db eu s e di nt h es t u d i e so f p h a r m a c o k i n e t i c ，t i s s u ed i s t r i b u t i o na n dp l a s m ap r o t e i nb i n d i n gr a t eo fd f p i nr a t s 2d f ph a sq u i c ka b s o r p t i o n ，w i d ed i s t r i b u t i o na n df a s te l i m i n a t i o ni nr a t sa f t e ri g d r u g n ep h a r m a c o k i n e t i cp r o c e s so fd f p i nr a t sw a st w o - c o m p a r t m e n tm o d e l 3d f pw a sw i d e l yd i s t r i b u t e di nr a t sa f t e ri gd r u g t h e r ew e r ed f pi nm a i nt i s s u e s i ts h o w e dt h a td f pc o u l dp a s st h r o u g hb l o o d b r a i nb a r r i e ra n db l o o d t e s t i sb a r r i e r 4n ep l a s m ap r o t e i nb i n d i n gr a t eo fd f pi sl o w s od f pi sak i n do fl o wp l a s m a p r o t e i nb i n d i n gr a t ed r u g ，a n dm o s to ft h ed r u gm o l e c u l e sa c to nb o d yw i t hf r e et y p e k e yw o r d sd e f e r i p r o n e ( d f p ) ，p h a r m a c o k i n e t i c s ，t i s s u ed i s t r i b u t i o n ，p l a s m ap r o t e i n b i n d i n gr a t e ，h p l c 9 山东大学硕士毕业论文 符号说明 英文简称中文释义 d f p d f o h p l c e d t a a d d e p d p l c s o d l p o p k l g t l 2 a t l 2 l b v l c l a u c a u c ( 0 - t ) a u c ( 0 ) k l o k 1 2 l q l k a t 1 2 k a a u m c ( 0 - t ) a u m c ( 0 - o o ) l ，2 - 二甲基3 羟基4 吡啶酮 去铁胺 高效液相色谱法 乙二胺四乙酸二钠 老年性痴呆 透析性脑病 帕金森氏病 离子对色谱法 超氧化物歧化酶 脂质过氧化物 药代动力学 灌胃 药物分布半衰期 药物消除半衰期 起始稀释房室容积 血浆药物总清除率 药时曲线下面积 o t 时间内药时曲线下面积 0 - o o 时间内药时曲线下面积 由中央室消除的一级速率常数 由中央室向周边室转运的一级速率常数 由周边室向中央室转运的一级速率常数 一级吸收速率常数 药物吸收半衰期 0 - t 时间内一阶矩时间曲线下的面积 0 - o o 时间内一阶矩时间曲线下的面积 l o 山东大学硕：1 ：毕业论文 m r t ( 0 - t ) m r t ( 0 o o ) v r t ( 0 - t ) v r t ( 0 - o o ) t l 2 z t m a x c l z v z c m a x 0 t 时间内药物分子在体内的平均驻留时间 0 - o o 时间内药物分子在体内的平均驻留时间 0 - t 时间内平均驻留时间的方差 0 o o 时间内