（微生物学专业论文）马尾松、黑松树干内真菌种类及其变化.pdf

捅费 对安徽省不同健康状态马尾松和黑松树干内真菌种类及其变化进行了研究，分析了真 菌与松材线虫病的关系，主要结果如下： 1 对安徽省9 市( 县) 不同健康状态马尾松树干内真菌进行研究。结果表明健康马 尾松树干可分离到真菌4 科6 属9 种，未检测到蓝变真菌，优势真菌为镰刀菌与木霉，分 离得率分别为1 5 和1 2 ；濒死马尾松树干可分离到真菌8 科1 6 属2 4 种，真菌多为半 知菌，优势真菌为长喙壳、未知菌1 和木霉，检出率分别为2 1 、2 6 和2 0 7 ；死亡马 尾松树干可分离到真菌3 科8 属1 3 种，优势真菌为长喙壳、未知菌1 和木霉，检出率分 别为1 7 7 、2 4 和4 4 。优势真菌长喙壳与未知菌l 在濒死马尾松树干内比在死亡马尾 松树干内多，木霉在死亡马尾松树干内最多，在濒死马尾松树干内次之，在健康马尾松树 干内最少。真菌数量在死亡马尾松树干内最多，在濒死马尾松树干内次之，在健康马尾松 树干内最少。 2 对不同时间马尾松树干内真菌研究表明，受松材线虫病侵染的马尾松松干内，优 势真菌长喙壳在前三次采样中数量很高且稳定，检出率分别为8 0 、7 8 、8 2 ，第4 次 采样时检出率降为5 8 ；优势真菌木霉在前三次的数量也很稳定，2 0 0 7 年4 月最高。健 康马尾松树干内真菌数量春季时最高，秋季次之，冬季最低。受松材线虫病侵染的马尾松 树干内真菌种群数量在不同时间变化不大。 3 对马尾松树干内不同真菌与松材线虫病的关系研究表明，不同真菌对松材线虫的 增殖量不同，同属不同种真菌松材线虫在其上的繁殖情况差异也很大；真菌与松材线虫的 共殖分析表明，长喙壳、未知菌1 与松材线虫共殖良好，木霉和镰刀菌不是促进松材线虫 种群扩大的共殖真菌。 4 对不同健康状态黑松树干内真菌进行研究表明，健康黑松树干可分离到真菌3 科 4 属4 种，优势真菌为镰刀菌与木霉，分离得率分别为1 3 和1 9 。濒死黑松树干可分离 到真菌3 科4 属4 种，优势真菌为长喙壳，检出率为2 0 ；死亡黑松树干可分离到真菌3 科4 属4 种，其中，木霉为绝对的优势真菌，检出率为9 5 5 。优势真菌长喙壳在濒死黑 松树干内比在死亡黑松树干内多；木霉在死亡黑松树干内最多，在濒死黑松树干内次之， 在健康黑松树干内最少；真菌数量在死亡黑松树干最多，在濒死黑松树干次之，在健康黑 松树干最少。 关键词：马尾松；黑松；真菌种类；数量；松材线虫 s p e c i e sa n dd e t e c t i o nr a t i o no ff u n g ii s o l a t e df r o ms t e mo f 砌正f s 朋脚口甩缸忍口a n dj 吁咒船咖以刀易p 吒g 豇 a b s t r a c t f u n g is p e c i e sa n dv 撕撕o no fp o p u l a t i o ni nt h es t e mo fd i 疏r e n th e a l 衄g 眦e 尸f 玎淞 历姗d 厅妇刀口a n d 尸历删6 p 馏饼w e r es t u d i e d ，r e l a t i o n s l l i pb e 铆e e n 劬g ia n dp i i l ew o o dd i s e a s e w a sa m l y z e d m a i nr e s u l t sa r ea sf o l l o w s ： 1 f u n g ii i l 1 es t e mo fd i 妇f e r e n th e a l t h ys t a t ep 所鲫d ”砌刀口w e r es t l l d i e da 1 1 dt h er e s u l t s s h o w e dt i 硪t4f a m i l i e s6g e n u s9s p e c i e s 缸1 9 iw e r ei s 0 1 a t e da n di d e n t i f i e d 行o mt h es t e mo f h e a l t h y 尸聊础s d 刀缸刀口，s a ps t a m e d 劬g iw e r e 1 1 0 ti s o l a t e d ，t l l ep r e d o m i n m l ta m g iw e r e 凡l s 口r f “肌s p 趾d 研c 办d 冼删口s p ，o fw 1 1 i c hm ed e t e c t i o nr a t e 、e r e15 a i l d12 r e s p e c t i v e l y 8f a m i l i e s16g e 肌s2 4s p e c i e s 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d e s h o w e dm a t ，恤n 啪b e ro fp r o l i f e r a t i o n sw e r ed i 虢r e n tb e 铆e e nd i 虢r e m 胁g i ，s ow a s b e t 、e e n 击位r e n ts p e c i e sw m c hb e l o n g i n gt 0m es 锄e i l y c o h a b i t a t i o nb e t w e e n 劬g ia n d p i n e 、v o o dn e m a t o d es h o w e dc s p c o u l dc o h 乏山i t a t ew i t h 召甜，百印厅口彪疗c 办“s 五咖乃玎甜jw e l l w l l i l ezs p a n d 胁口r f “掰s p c o u l dn o tc o h a b i 诅t e 谢mb 砂厶矽乃玎淞w e l l 4 f u n g ii 1 1t l l es t e mo fd i 虢r e n th e a l m ys 协t ep 咖“刀6 p 删fw e r es 伽i e da n dm er e s u l t ss h o w e d t l l a t ，3f a m i l i e s4g e n u s4s p e c i e s 劬g iw e r ei s o l a t e da i l di d e n t i f i e d 丘o m 日1 es t e mo f h e a l t h yp 历z f 门6 p ，f ，s 印s t a i n e d 如i 培i 、v e r en o ti s o l a t e d ，t h ep r e d o m i n a n t m g iw e r ef 淞口7 f 姗s p 锄d 乃纪办d 沈删口s p ，a n dt h ed e t e c t i o nr a t ew e r e13 锄d19 r e s p e c t i v e l y 3 i l i e s4g e n l l s4 s p e c i e sf h n g iw e r ei s o l a t e da n di d e n t i f i e d 自o 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e t e c t i o nr a t e 学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下进行的研究工作 所取得的成果尽我所知，除文中已经特别注明引用的内容和致谢的地方外，本 论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果。对本文的研究做 出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式注明并表示感谢。本人完全意 识到本声明的法律结果由泰人承担。 学厶文作者c 枞签名，音 山。扩6 月柙 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解南京林业大学有关保留、使用学位论文的规定，同 意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版( 中国科学技术 信息研究所；国家图书馆等) ，允许论文被查阅和借阅。本人授权南京林业大学 可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以汇编和综合 为学校的科教戍果，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论 文全部或部分内容 保密口，在年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密日。 ( 请在以上方框内打“ 并 ) 学位论文作者( 本人签名 指导教师( 本人签名 致谢 本研究从选题到成文的全过程中得到了导师叶建仁教授的悉心指导、关 怀和鼓励，论文的最终成稿也倾注了导师大量的心血。在三年的硕士学习期 间，导师的严格要求，精心指导，保证了研修任务的顺利完成。在平时的学 习过程中，导师严谨的治学态度、渊博的知识、对事业孜孜以求的精神和求 实创新、精益求精的科研精神将使我受益终生、宽容的胸襟、平易近人的作 风、朴实的风格深深地感染着我，所有这些都将是我今后工作、学习和生活 的财富。值此论文完稿之际，我由衷地感谢叶老师对我的指导和帮助。衷心 感谢吴小芹教授对我的关心与帮助。 在本论文试验的进行过程中，陈凤毛博士后、苏胜荣博士对实验采样提 供了大力的帮助，在此表示衷心地感谢。在试验阶段，朱克恭教授、谈家金 副教授、李玉琴老师也给予了热情帮助。 在研究过程中，还得到了病理组全体研究生的大力支持，黄麟博士、朱 丽华博士、黄任娥博士、刘辉博士、徐超博士、韩颖硕士、瞿红叶硕士、谢 小桃硕士、戴培培硕士、盛江梅硕士、怀意君硕士、龚小峰硕士、周婷硕士 等给予了鼎力相助。2 0 0 3 级本科生吉静同学参与了部分研究工作，在此表示 感谢。 最后，特别感谢我的家人在生活和研究上给予的理解、关心和支持，没 有他们的关心、支持就没有我的今天，祝福他们! 鲁国华 二零零八年六月 - - _ j 一 刖 吾 松材线虫( b 甜坶印办p 跆刀如螂咖办刀淞( s t e i n c r & b u l l r e r ) n i c k l e ) 是毁灭性森林病害 松材线虫病的病原( k i y o h a r a & t o k u s m g e ，1 9 7 1 ) 。由于其危害的严重性，世界上很多 国家已将其列为检疫对象。松材线虫在世界上的分布地区包括北美洲的美国、加拿大和墨 西哥，亚洲东北部的中国、韩国和日本、非洲的尼日利亚以及欧洲的葡萄牙。在日本、韩 国和中国，松材线虫造成大量松树死亡，对北美国家的木材出口业造成很大的损失。 松材线虫病首先在日本发生和发现，在1 9 0 5 年日本九洲的长崎县就有关于松树大量 枯死的记载，现在，日本4 7 个县中除北海道和青森县外，均有松材线虫病发生，疫区面 积占森林总面积的2 5 ，损失十分惨重( 真空靖治，1 9 8 5 ) 。我国自1 9 8 2 年在南京中山 陵园风景区发现该病后，现已逐渐在山东、江苏、安徽、浙江、广东、福建、广西、湖北、 江西、湖南、重庆、贵州、四川、云南、等省市以及台湾、香港和澳门地区蔓延成灾。松 材线虫病不仅对我国林业造成严重的威胁，而且还对许多自然景观和生态环境造成巨大破 坏，给国民经济带来不可估量的损失。 松材线虫病的发生是一个非常复杂的过程，其中牵涉到松墨天牛、细菌、真菌等生物 因素及温度、湿度等非生物因素，目前关于松材线虫病的发生机理还没有研究清楚。真菌 作为松材线虫病发生过程中一个重要的生物因子，真菌能够促进松树内松材线虫的增殖， 增加扩散型幼虫的数量，增大媒介携带松材线虫的数量，真菌还能够为松材线虫在松树内 扩散提供良好的环境。研究松树内栖真菌区系，对研究松树内真菌种群间的演替，不同地 区真菌区系的差异以及这些变化对松材线虫病的影响具有十分重要的意义。 1 松材线虫病研究概况 1 1 松材线虫病病原的研究 第一章文献综述弟一早义陬综尬 1 9 0 5 年日本九州长崎就记载有松材线虫病死松树的症状，但很长时间里，该病被认 为是昆虫危害所致，直到1 9 6 9 年t o k u s h i g e 和k i y o h a r a 将从病树上分离到的线虫注射和 伤口接种到健康松树上，并导致松树出现与自然感病相同的症状，才明确了病因。1 9 7 2 年，m a m i y a 和k i y o h a m 将此线虫报道为新种b “雕印加彪玎拍淞，f j 印f c d ，淞。其实早在1 9 3 1 年，美国学者就从蓝变的原木上分离到了松材线虫，并命名为4 p 加跆以c 加f 沈s 圳d p 办f ，鲫， 但它的病原性质却到1 9 7 9 年才由d r o p k i n 和f o u d i i l 发现并报道。n i c k l e ( 1 9 7 0 ) 研究认 为美国报道的这种线虫具有伞滑刃属的特征，所以将彳p 办p 彪刀c 办d 越绻咖办f 协命名为 b “船印加彪胛幽“s 圳d p 办刀淞，并且通过比较发现这种线虫和日本报道的召甜坶印加彪玎幽甜s ，而印z c d ，驸是同物异名，故将松材线虫学名订正为b z f 坶印抛彪刀c 办姗d 怕p 厅f ，材j ( s t e i n e r & b m 鹏r ，1 9 3 4 ) n i c h l e 。 虽然大量的研究证明了松材线虫病的发生与松材线虫存在着一定的关系，但松树的死 亡到底是被松材线虫单一危害致死，还是松材线虫和寄主体内的微生物共同参与，即关于 松材线虫病的病原问题不同学者的观点不同。目前关于松材线虫的病原存不同看法。 1 1 1 松材线虫是唯一病原 清原和德重( 1 9 7 1 ) 用松材线虫接种1 4 2 5 年生的黑松俨加淞历甜力6 p 删f ) 、赤松 ( p 如门s 枷阳) 和琉球松僻胁砌“p 舢西) ，结果造成三种松树枯死。真宫( 1 9 7 2 ) 用松材线虫 接种了黑松和赤松，结果引起这两种松树死亡。b 0 1 l a 和j o r d e n ( 1 9 8 2 ) 将松材线虫经链 霉素、青霉素等消毒后，经人工培养基培养，最后得到无菌的松材线虫，用它接种松树并 造成松树死亡。黑田庆子和伊藤( 1 9 9 2 ) 用松树线虫接种黑松，一周后黑松的水分输导受 到障碍，但松树体内的微生物和健康松树一样，直至接种5 周后，蓝变菌长喙壳 ( m 幻缈凰s p p ) 才开始出现，细菌也开始增多。因此，认为接种松材线虫能单独引起 松树萎蔫，与其它微生物无关。 1 1 2 松材线虫病由松材线虫和细菌共同引起 河津等( 1 9 9 8 ) 用无菌的松材线虫接种无菌的松苗( 苗龄约1 个月) ，松苗不死亡； 用带细菌的松材线虫在同样条件下作同样处理，可导致无菌松苗萎蔫枯死。经分析鉴定， 这些细菌主要是芽孢杆菌( 肋c f 地ss p p ) ，均是从松材线虫体表分离得到。奥八郎等( 1 9 8 0 ) 2 认为，松材线虫携带细菌的代谢产物能使松树萎蔫。赵博光等( 2 0 0 0 ) 也从松材线虫体表 分离到细菌，同时还研究了抗生素对松材线虫病的影响；他们用松材线虫接种黑松幼苗， 结果用抗生素溶液培养的幼苗未发生萎蔫，而用无菌水培养的幼苗则出现萎蔫症状。 以上研究表明，松材线虫病是由松材线虫和细菌共同引起的，没有细菌存在，松材线 虫单独不能引起松树萎蔫。 1 2 松材线虫病致病机理的研究 1 2 1 酶学说 松材线虫能分泌多种酶，其中最主要的是纤维素酶，纤维素酶能导致松树枯萎。o d 砌 等( 1 9 8 5 ) 研究认为松材线虫能产生纤维素酶。用1 的纤维素酶o 5 m l 注入3 年生赤松 苗内，赤松在7 2 小时内全部枯死；把松材线虫的粗提液注入松苗，出现症状与感染松材 线虫症状相同，在粗提液中检测出了纤维素酶的活性。y 锄锄o t o 等( 1 9 8 6 ) 将松材线虫 保持在o 下1 2 小时，发现其悬浮液的上清液具有纤维素酶活性，其含量在以后3 6 小时 中逐渐增加；将松苗养在上清液中，针叶出现坏死现象，这是松材线虫产生的纤维素酶引 起松树萎蔫的早期症状；他们认为由于纤维素酶的作用，使松树薄壁细胞的细胞壁和细胞 膜遭到破坏，树脂不正常地从树脂道中渗漏并扩散到相邻的管胞中，使水分输导受到阻碍， 导致松树萎蔫。m o r i 和i n o u e ( 1 9 8 6 ) 用松材线虫接种黑松后，黑松体内产生乙烯；以市 售的纤维素酶和冷冻杀死的松材线虫接种松枝，也产生乙烯，而将松材线虫煮沸再接种则 不能产生乙烯，因此他们认为乙烯的形成是松材线虫分泌的纤维素酶的作用。蒋丽雅和王 晓芸( 1 9 9 5 ) 从松材线虫虫体匀浆的抽提液和分泌物中分析出纤维素酶的存在。严东辉和 杨宝君( 1 9 9 7 ) 分析了松材线虫的体外酶，结果发现松材线虫的体外酶不仅有纤维素酶， 还有过氧化物酶、蛋白酶和淀粉酶。 上述研究表明，松材线虫能分泌多种酶，其中最重要的是纤维素酶，纤维素酶可引起 松树萎蔫，症状和松材线虫病的症状相似。 1 2 2 空洞化学说 m y e r s ( 1 9 8 6 ) 研究认为，松树感染松材线虫病后，管胞被气体、松脂或射线组织死 亡时所产生的代谢产物堵塞，形成层和射线组织受到破坏，导致松苗死亡。黑田庆子( 1 9 8 9 。1 9 9 1 ) 研究认为，松材线虫侵入树体后促进了挥发性物质的产生，单萜烯和倍半萜 烯以气化状态进入管胞，引起空洞，使水分运输受到障碍。i k e d a ( 1 9 9 6 ) 用声呐装置探 测了松材线虫病黑松苗内空洞的形成，发现病害分两个阶段：第一个阶段有少量空洞形成， 并逐渐增加；第二个阶段管胞中的空洞大量形成，导致水分输导受阻。 上述研究表明，松树感染松材线虫病后树体内单萜烯及倍半萜烯类物质急剧增加，这 类物质易气化、表面张力低，渗入管胞导致管胞中出现空洞，影响了水分的运输，造成松 树萎蔫。 1 2 3 毒素学说 松树感染松材线虫病后，体内产生有毒物质，引起松树萎蔫。对于毒素的来源，也存 在不同的看法。 1 2 3 1 毒素是寄主松树的异常代谢产物 毒素自上世纪8 0 年代以来一直是研究热点。o k u 等( 1 9 8 5 ) 在人工接种的3 年生松 苗和自然染病的松树里检测到毒素的存在，首次提出松材线虫病使松树迅速枯萎的机制可 能是由于毒素的参与。目前已知至少7 种毒素存在于感染松材线虫的松树里：苯甲酸( b a ) 和儿茶酚( c a ) 在针叶里，b a 、8 羟基香芹鞣酮( 8 一h c a ) 、二氢松柏醇( d c a ) 和 1 0 羟基马鞭烯酮( 1 0 h v ) 于木材中。曹越等( 2 0 0 1 ) 在自然感病未死及人工感病未死 的黑松中，检测到致萎物质苯乙酸( p a ) 和2 甲氧基肉桂酸，而在健康的和自然感病死 后1 年的黑松和马尾中未检测到。除上述7 种毒素外，可能还存在另外一些更重要的有毒 物质没有被发现，仍需进一步深入研究。现已证实，在对松树的毒性方面，苯甲酸、儿茶 酚比二氢松柏醇和8 羟基香芹鞣酮要强。同时，某毒素对松树的毒性显示协同作用。 目前所检测到的毒素中，只有苯甲酸随着病情的发展，在树体内的含量逐渐增加，其 他毒素无规律性的变化。k 抓讹u 等( 1 9 9 6 ) 研究了接种松材线虫后松树木材中成分的变 化。发现3 年生黑松接种后第1 天，苯甲酸葡萄糖酯积累，第7 天含量最高，随后迅速减 少。游离苯甲酸于接种后第7 天开始检测到，随后含量急剧升高。由此推论，苯甲酸在树 体受松材线虫侵染后即可产生，但很快由于树的抗性被代谢成苯甲酸葡萄糖酯，随着苯甲 酸的不断产生，超出了树体本身的代谢能力，造成苯甲酸的大量积累，最终导致松树枯死。 包括苯甲酸在内的7 种毒素都是松树苯丙烷类代谢途径直接或间接的产物。因此，加强苯 丙烷类代谢途径的研究，明确包括苯甲酸在内的毒素在松树里的转化过程，对弄清松材线 虫病致病机理具有重要意义。 现已明确松材线虫本身不能分泌毒素。关于毒素的来源问题主要有2 种观点：一种观 点是松材线虫侵染后松树的异常代谢产物，该观点占主导地位；另一种观点认为是由松材 线虫携带的致病细菌产生。目前对细菌在松材线虫中的作用还未明确，故后一种观点仍需 大量实验证实。 o k u 等( 1 9 8 5 ) 从松材线虫病病树的抽提物中发现多种松树的异常代谢产物，例如 苯甲酸、儿茶酚、8 羟基香芹酮( 香芹酮水合物) 和二羟松柏醇等，用这些物质接种松苗， 松苗萎蔫，而健康松树的抽提物则无此作用。b o l l a 和s h a l l e e n 等( 1 9 8 4 ，1 9 8 6 ) 用感染 松材线虫病的欧洲赤松( 尸呐p s 护妇) 的木质部抽提物接种2 年生和4 5 天生松苗，引起萎 蔫，其症状和松材线虫病的症状一样。经分析，抽提物中有两种主要成分，即l o 羟基马 鞭烯酮和香芹酮水合物。在实验室合成了这两种物质，并用其接种4 5 天生赤松苗，均引 起松苗萎蔫，并且症状和松材线虫病的症状一样。 部分毒素还具有植保素的性质。8 羟基香芹酮和二羟松柏醇分别在浓度高于3 0 g m l 和1 0 肛g m l 时，抑制松材线虫的繁殖。部分毒素在较低浓度时，促进松材线虫的繁殖，8 羟基香芹酮和二羟松柏醇在3 “g m l ，苯甲酸和儿茶酚在1 0 3 0 g m l ，而苯乙酸在浓度为 1 0 0 g m l 以上时促进线虫的繁殖。这些毒素在松树病情由早期转为发展期时，对线虫种 4 群的增长可能起到一定的作用。当然，这些研究局限于离体条件下毒素活性的测定，在松 树体内它们与线虫种群消长的关系仍有待研究。 上述研究表明，感染松材线虫病后，松树体内产生异常代谢产物，如苯甲酸、8 羟基 香芹酮、二羟松柏醇、1 0 羟基马鞭烯酮等，这些产物能引起松树萎蔫，症状和松材线虫 病的症状相同。 1 2 3 2 毒素是松材线虫伴生细菌产生的 河津等人( 1 9 9 6 ，1 9 9 8 ) 从松材线虫体表分离到蜡状芽孢杆菌( 肋c 舭sc p 彤螂) 、 枯草芽孢杆( 口s 甜6 f 玎括) 和巨大芽孢杆菌( b 聊p 朋胞，f 甜聊) 3 种芽孢杆菌，而这些芽孢杆 菌可产生苯乙酸，在细菌的培养物中已发现有苯乙酸，用苯乙酸接种松苗，初期松苗体内 苯甲酸及其同源物大量积累，后松苗萎蔫。用细菌冻干培养液的上清液和苯乙酸分别接种 黑松细胞培养液，开始苯甲酸及其同源物也大量积累，这和用苯乙酸接种松苗的反应是类 似的。同时，黑松感染松材线虫后，在其愈伤组织中也发现有苯乙酸的存在，而且量很大。 以上研究表明，细菌能产生苯乙酸等毒素，苯乙酸能使松树萎蔫与松材线虫造成的症 状相同。 2 松材线虫病与真菌的关系 2 1 松树树干内真菌组成 自1 9 7 4 年，中国、日本和美国等学者对松材线虫侵染的松树树干内真菌区系进行了 研究，研究表明松树树干内真菌种类十分丰富，不同地区受松材线虫侵染的松树树干内真 菌种类有异同，现将松材线虫侵染的松树树干内真菌区系研究概况分述如下。 2 1 1 国内松树树干内真菌种类研究 2 0 0 4 年，张建平等从受松材线虫病侵染的马尾松病死木木质部中分离出了1 1 1 个真 菌菌株，经过鉴定为木霉( 乃纪乃d 沈删口s p p ) 、轮枝霉( 沈，比川f 甜聊s p p ) 、青霉( 凡玎f c f 刀f “聊 s p p ) 、镰刀菌( 胍甜f “聊s p p ) 、曲霉( 彳印p 嚼刀搬s p p ) 、毛壳菌( c 乃口p 幻聊f ”所s p p ) 、茎 点霉( p 办d 坍口s p p ) 、短梗单霉( d 纪d c c “聊s p ) 、头孢霉( 唧厅口肠印d 一“朋s p ) 、交链孢 ( 么抛朋口，妇s p ) 。 赵桂华等( 2 0 0 6 ) 研究了江苏南京和浙江舟山地区松材线虫病木标本，得到1 0 多种 真菌，在天牛的蛹室和虫道中也有大量的长喙壳真菌存在，其中小长喙壳( 印触，s f o 聊口 豇坫) ，木生长喙壳( d 妇订f c d 肠) ，球壳孢( 印厅口p ，d 筇西阳疗c 耙d 肠) ，聚生小穴壳( 肋历f d 彤刀a g 比g 口r 幻) 和月印f d 印d 膨砌聊f 玎d ，出现最多，研究还发现在长喙壳( d s p p ) 和头孢霉 ( c 印办口肠印d ，f “脚刃刀口r “掰) 培养皿中出现大量松材线虫。 曾凡勇( 2 0 0 6 ) 也对松材线虫侵染及健康的松木中的真菌区系进行研究，他从浙江省 松材线虫病疫区采集黑松、马尾松、湿地松及代表性阔叶树样品，于实验室分离样品内栖 真菌，得到包括木霉( zs p p ) 、青霉( 尸p 刀f c 肼f “聊s p ) 、球壳孢( 印乃口p 心筇话s p ) 、葡萄 座腔菌( b d 幻d 印加p ，幻s p ) 、盘多毛孢( 尸p s 砌肠砌) 、交链孢( 彳s p ) 、丝核菌( r 办忍d c 幻刀砌 s p ) 、枝顶孢( 彳c 陀历d 刀f “聊s p ) 、胶帚霉( gs p ) 、短梗霉( 彳甜膨d 6 卯油“聊s p ) 、壳二孢 ( 彳s c d c 矗y 胁s p ) 、镰刀菌( fs p p ) 、么砌阳c d 刀f d 阳s p 、比川里孢( 晚加册砌s p ) 、长喙壳 ( cs p ) 、色串孢( 而，甜阳s p ) 、茎点霉( 尸厅d m 口s p ) 、派伦霉( 尸p 胛疗p 甜卯口s p ) 、壳囊 孢( o 吁d 印d ms p ) 、粘束孢( g ，印厅f ”聊s p ) 和黑盘孢( 心肠刀c d 刀，z ，聊s p ) 等2 1 个属，其 中优势种类为木霉属、青霉属、球壳孢属和葡萄座腔菌属等4 属。研究还表明健康状态不 同，寄主内栖真菌优势种群不同。同一生态系统中，两种感病寄主的内栖真菌区系组成没 有本质的区别。 1 9 9 6 年，颜志恒与曾显雄对台湾松材线虫体表、患病松树、媒介昆虫松墨天牛体表 及其蛹室壁进行真菌区系的研究。在松材线虫体表分离出的，大都为一些常见的真菌，如 曲霉( 彳印e 唧淞s p ) 及木霉( 乃纪厅d 沈删口s p ) 等。而于天牛蛹室壁分离出的真菌，包 括真菌寄生菌、粘帚孢( g ，f d c 肠刃甜聊s p ) 、线虫捕捉菌节丛孢( 彳，砌加6 d 乃岱s p ) 及子囊 菌的无性世代彳c 彤m d 疗f 材朋s p 、b 儿播幻彬) ，c p js p 以及木材常见的腐生菌印办口p 加刀p 聊p 砌s p 等，另有一些腐生真菌如交链孢、毛壳菌( c 乃口p 幻聊f 甜聊s p ) 、弯孢霉( c “w 甜肠，砌s p ) 、 黑孢霉( 伽印d ms p ) 、毛霉( 胁c d ，s p )尸打乃d 印饼js p 等等，一些污染菌曲霉 ( 么印p 曙f 7 f 螂s p ) 、青霉( 尸p 聆f c 册甜聊s p ) 、木霉及真菌寄生菌粘帚霉、能产生节孢子的地 霉( g p d 驴f c 乃“研s p ) 、可引起松树病害的枝孢霉( c 肠咖印d ，f 甜朋s p ) 、拟盘多毛孢 ( p e s t l o t i o p s i ss p 、) 等。 对我国不同地区松树干内真菌区系的研究表明，不同地区受松材线虫侵染的松树树干 内真菌种类差别较大，木霉、曲霉、青霉、拟盘多毛孢等为各地常见真菌。媒介昆虫和松 材线虫体表及昆虫蛹室亦有真菌存在。不同地区松树树干的真菌中总有使松材线虫种群扩 大的种类。 2 1 2 国外松树干内真菌种类研究 1 9 7 4 年小林享夫等对日本黑松树干内真菌进行了研究。结果表明被松材线虫侵染的 松树真菌区系表现出很大的差异性。长喙壳、色二孢( d 印肠妣s p ) 、盘多毛孢( 尸p j 幻肠砌 s p ) 、镰刀菌、交链孢、头孢( c 印办口，d 印d ，f “历s p ) 、大茎点( 勿c ，印办d 删口s p ) 、脚甜肠，切、 木霉、小长喙壳( 殆刀纪纪厶砌p 妇s p ) 、月办比d 印乃口p 阳、枝孢( c 肠如印d r 觑聊s p ) 、刺盘孢 ( c d 眈幻护f c l z 甜聊s p ) 等真菌被分离出来。长喙壳、小轮枝霉等蓝变菌是松材线虫侵染木 中的常见菌，木霉及青霉出现频率也很高。松墨天牛蛹室及虫道的表面的真菌区系组成则 相当的简单，主要由长喙壳组成，松木的表面变成深蓝到蓝黑色，有小蠹虫幼虫的虫道和 蛹室则比没有的更易生长木霉。研究还认为，松材线虫、松墨天牛、长喙壳在松材线虫生 活史中密切相关，蓝变菌和松材线虫被松墨天牛一起传播到健康松树上，当松树被松材线 虫杀死后这类真菌就开始侵入树干中，它们在树中充当线虫的食物，到后期大量的长喙子 囊壳在天牛的蛹室和虫道中形成。 f u k u s m g eh ( 1 9 9 1 ) 对健康和感染松材线虫病的黑松和赤松木材中的真菌进行研究， 他们共分离到1 4 种真菌，即3 种长喙壳菌、镰刀菌、两种小轮枝菌( 殆所c f c 肠坊p 肋s p p ) 、 6 大茎点菌、盘多毛孢、茎点霉、三种木霉、节丛孢( 彳砌幻6 d f 硼s p ) 、青霉和轮枝孢。除 青霉、轮枝霉和一种木霉外，其它均适宜松材线虫的生长，长喙壳菌最适宜。 w i i l g f i e l d 等( 1 9 8 7 ) 也对美国松材线虫侵染的松木中的真菌进行了研究。结果表明， 从天牛蛹室中分离出了长喙壳菌、拟长喙壳菌( m 幻c 粥f 鲫”西) 、粘帚霉( g 肋c 肠旃”聊) 、 节丛孢、青霉、木霉等真菌，而从松材线虫体壁上分离出了节丛孢、胁伊d 印d ，f ”朋；从天 牛体表及体内分离出了，曲霉、交链孢、芽枝霉( 彳甜p d 6 傩砌材所s p ) 、枝孢霉、毛霉( 胁c d ， s p ) 、长蠕孢( 侬砌f 玎砌d 印d 一甜聊s p ) 、青霉、木霉、节丛孢、白僵菌( b p 口训口，切s p ) 、 粘帚霉( g ，面c 口旃甜聊s p ) 、长喙壳。 以上研究表明，松木中存在大量的真菌。健康松中真菌主要是木霉青霉等，被松材线 虫侵染的松木中的真菌主要为蓝变真菌长喙壳、拟长喙壳、小穴壳、色二孢等；松墨天牛 虫道及蛹也存在真菌，真菌组成单一，松材线虫体表也有真菌孢子的存在。不同林分中真 菌不同。众多学者研究认为，真菌与松材线虫的生活史密切相关，松材线虫在松树体内的 增殖与扩散离不开真菌的扩散，真菌为松材线虫提供必要的营养。真菌首先为松材线虫病 的发生创造了一个微生物环境为，并松材线虫病提供营养，因而认为真菌与松材线虫病关 系密切。 2 2 松木中真菌与松材线虫病的关系 2 ：2 1 真菌对松材线虫的增殖作用 研究认为真菌与松材线虫病关系密切，真菌作为松材线虫的营养来源，真菌的分布与 增殖促进了松材线虫的增殖与在松树体内的分布。 黑田庆子和伊藤等( 1 9 9 2 ) 研究了松材线虫侵入黑松的消长动态和病害发展过程中一 些微生物的活性变化后，认为病害的发生与真菌无关。真菌不是该病直接的病原，但是真 菌却在该病的发生起到重要的作用。松材线虫在病树中首先取食松树细胞，并迅速繁殖， 以后则以树内真菌为食( t 啦u m m a m i y a ，1 9 9 4 ；m i c h a e lj & w i n g f i e l d ，1 9 8 7 ； 小林享夫等1 9 7 4 ，1 9 7 5 ；鼬ms 嗍，2 0 0 7 ) 。 f u k u s l l i g e ( 1 9 9 1 ) 利用生长在日本赤松上与发生枯萎病有关的1 4 种真菌接种的松枝 来培养松材线虫，结果表明松材线虫可取食的真菌有灰葡萄孢( 曰d 乃伽c 切p 陀口) 、盘多毛 孢 ( p e s 幻肠f 砌s p ) 、长喙壳菌( 阳幻t ”廊s p p ) 、色二孢菌、镰刀菌( 凡岱口，f 甜聊s p p ) 、 胶霉( g ，f d 以砌“所1 ，加淞) 以及小轮枝菌( 阮形七f c 五砌p 肋s p ) 等，而青霉、轮枝霉和木 霉( 乃而砌d 如删口s p p ) 则不适合松材线虫繁殖。 叶为民等( 1 9 9 3 ) 从健康和感染松材线虫的马尾松及松墨天牛上分离到2 2 种真菌， 其中刺盘孢、拟盘多毛孢、盘单毛孢( 胸以d c 办口p 砌s p ) 、交链孢、长喙壳菌、两种未鉴 定的真菌、拟茎点、粪壳菌( 勋砌，妇) 、镰刀菌、黑孢菌可供松材线虫生长。松材线虫 在某些真菌上的繁殖速度比在灰葡萄孢上还要好。 曾永三( 1 9 9 0 ) 用长喙壳菌、毛壳菌、镰刀菌、灰葡萄孢及盘多毛孢培养松材线虫， 在2 5 下培养1 0 天后检查，线虫的繁殖倍数依次为2 8 2 4 倍、1 4 7 o 倍、1 4 7 6 倍、1 4 4 1 7 倍、2 0 6 倍。 何可佳( 1 9 9 1 ) 从松树木材中分离到1 1 种真菌。它们分别是两种镰刀菌、长喙壳菌、 细基束梗孢菌( c 印厅口肠肛七厅甜聊s p ) 、盘多毛孢、黑孢菌j g 加印d 阳s p 、交链孢菌、弯孢 霉菌c 甜w 甜肠砌、镶孢霉菌c d 胛f d 历p c f “聊s p 、木霉菌、青霉。用这些真菌培养松材线虫， 以灰葡萄孢为对照，在2 5 下培养1 0 天，线虫繁殖倍数见表。 表1 1 松材线虫在不同真菌上的繁殖倍数 i l l b 1 1b r e e d i n gr a t e so f 曰甜，百哆p 厅p 彪胛c 办z ，】嵋9 砷加o nd i f r e r e n tm n g i 杨宝君( 1 9 9 3 ) 用2 8 种真菌培养3 个松材线虫株系。这2 8 种真菌有1 4 种是从松树 上分离的，8 种是从云杉上分离的，从冷杉上分离的有5 种，从铁杉上分离到1 种。其中 适宜松材线虫生长的菌有从松树上分离到的蓝色长喙壳菌( c p 朋幻娜出c d p ，甜z p s 卯瑚 ( m u l l c h ) b a k s m ) 、具毛长喙菌( 印厅如5 f d 珑口p f ，塘阳f r i e s ) 、松壳囊孢( c ：加印d 阳p 加f d e s m ) ，从云杉上分离到的粉红层孔菌( 凡l 聊p j 阳s p 淞( a 1 b e ts c h w e xf r ) c o o k e ) 、克拉 夫特杰夫干酪菌( 黟阳所y c p s 扫仃v 纽v 砌玎“sb o n d a r z e w & p a r i i l a s t oi np a m a s t o ) 、拉普兰干 酪菌( z 锄印o f c 淞( r o m )l o w e ) 和冷杉上分离到的加拿大盘革菌( 彳彪甜加如c 姗 口m o 阳向o “s ( p e r s ) r a b e i l l l ) 。有的真菌仅适合某个松材线虫株系生长，而不适于其它的， 如蠕孢卧孔菌( 乃，砌j “6 v p 删如p d 阳p i l a t ) 、冷杉网孔壳( 如f f d c 弦，淞动把加( c r o u a n ) q o v e s & w 色1 1 s ) 、锈红木层孔菌( p 加刀加姗居玎删刀d s 口( s c h r a d 】f r e x f r ) b o u r d o tg a l z i n ) 和山地刺孢多孔菌( b d 刀如脚w 砌 如力砌聆口( q u e l ) s i n g ) 适合从加拿大新不伦瑞无针叶 树木削片分离到的松材线虫的繁殖，而不适宜加拿大安大略南欧黑( 尸历螂聆卿a m 0 1 d )