（水生生物学专业论文）泥鳅的血液学及湖北省泥鳅群体的遗传多样性研究.pdf

1叫，鼍鼍1。、1勺，l：q嗣薯，一， 1 j，ll， 华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书1 1 1 i i j j l i h i i i i h i i l l i i 。l l f 丫17 9 9 4 6 9 学位论文 雷 如需保密，解密时间年月 日 是否保密 独创性声明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发 表或撰写过的研究成果，也不包含为获得华中农业大学或其他教育机构的学位或证书 而使用过的材料，指导教师对此进行了审定与我一同工作的同志对本研究所做的任 何贡献均已在论文中做了明确的说明，并表示了谢意 研究生挠岛辞 帆剐q 年月，。日 学位论文使用授权书 本人完全了解华中农业大学关于保存、使用学位论文的规定，即学生必须按照学 校要求提交_ y - 位论文的印刷本和电子版本；学校有权保存提交论文的印刷版和电子版， 并提供目录检索和阅览服务，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位 论文本人同意华中农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播_ y - 位论文的全 部或部分内容，同时本人保留在其他媒体发表论文的权力 注：保密学位论文( 印涉及技术秘密、商业秘密或申请专利等潜在需要提交保密的论 文) 在解密后适用于本授权书。 学位论文作者签名：，岛鹉导师签名：刁懒 签名日期：扣( b 年6 月( 。日 签名日期： 沙( 口年占月f 。日 华中农业大学2 0 1 0 届硕士学位论文 目录 摘要。i a b s t r a c t i i i 第一章文献综述l 1 鱼类血液组成成分研究1 1 1 红细胞2 1 2 白细胞2 1 3 红细胞大小与染色体倍性的关系4 2 鱼类遗传多样性及研究方法。6 2 1 鱼类遗传多样性6 2 2 遗传多样性研究方法6 2 3 微卫星标记在遗传多样性研究中的应用8 3 泥鳅倍性和遗传学研究现状。9 3 1 泥鳅遗传学研究进展9 3 2 泥鳅的多倍性现象。l o 3 3 天然三倍体泥鳅的产生1 l 4 本研究的目的与意义1 2 第二章不同倍性泥鳅血液学指标分析1 3 1 前言。1 3 2 材料和方法1 4 2 1 材料鱼来源及三倍体的培育1 4 2 2 采样。1 4 2 3 血液指标测定和显微观察1 4 2 4 数据分析。15 3 结果1 5 3 1 倍性鉴定1 5 3 2 外周血细胞的形态1 6 3 3 血细胞计数和血细胞体积19 3 4 血液指标差异比较2 0 4 讨论2 2 第三章养殖和野生泥鳅的血液生理生化指标差异比较2 5 泥鳅的血液学及湖北省泥鳅群体的遗传多样性研究 1 前言2 5 2 材料与方法2 6 2 1 实验鱼来源2 6 2 2 血液学及生化分析2 7 2 3 统计分析2 7 3 结果2 8 3 1 血液学分析2 8 3 2 血清生化分析2 9 3 3 判别分析2 9 4 讨论3l 第四章湖北地区泥鳅群体的遗传多样性分析。3 3 1 前言3 3 2 材料与方法3 4 2 1 采样3 4 2 2 泥鳅倍性鉴定3 4 2 3 样本d n a 提取3 4 2 4 微卫星引物的筛选3 5 2 5p c r 扩增3 7 2 6 非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳与染色3 7 2 7 数据分析3 8 3 结果3 8 3 1 等位基因多态性3 8 3 2 连锁不平衡分析3 8 3 3 观测杂合度3 8 3 4 种群遗传结构4 0 4 讨论4 2 4 1 我国野生泥鳅遗传多样性4 2 4 2 群体结构4 3 4 3 泥鳅生境破碎与泥鳅保护4 4 参考文献4 5 致谢。5 9 华中农业大学2 0 1 0 届硕士学位论文 摘要 泥鳅( m i s g u r n u sa n g u i l l i c a u d a t u s ) 是我国常见的小型淡水鱼类，其肉质细嫩、 味道鲜美，营养丰富，且具有较高的药用价值，被誉为“水中人参”。近年来，随着 人们消费观念的转变，泥鳅的市场需求量日益增加。但由于多年的过度捕捞，加上 天然水域生态环境日益恶化，我国野生泥鳅的产量正面临枯竭。自上世纪9 0 年代 开始，泥鳅的繁育和养殖业在我国逐步得到发展，泥鳅目前已经成为我国重要的水 产经济鱼类。血液是动物体内循环系统的重要组成部分，具有物质运输、生理调节 及生理防御等重要功能。因此，鱼类的血液指标被广泛地用来评价鱼类的健康状况、 营养状况以及对环境的适应状况，是良好的生理、病理和毒理学指标。本研究通过 对不同倍性以及不同生活环境泥鳅的血液学进行比较研究，以探讨倍性差异和生活 环境差异对泥鳅血液指标的影响。此外还分析了湖北省内二倍体泥鳅的遗传多样 性，以期为泥鳅的种质资源保护提供数据基础。主要研究结果如下： 1 二倍体、三倍体和四倍体泥鳅的血液学比较 将天然四倍体泥鳅早与二倍体泥鳅8 杂交产生三倍体泥鳅，将天然二倍体和四 倍体泥鳅分别自交产生二倍体和四倍体泥鳅，将此二、三、四倍体泥鳅在完全相同 的环境下养殖7 个月后进行血液指标比较分析。结果表明，三倍体和四倍体泥鳅的 血细胞明显比二倍体大；四、三、二倍体泥鳅的红细胞和白细胞( 嗜中性粒细胞和 血小板) 间的大小比值均为4 ：3 ：2 。红细胞数目随倍性的升高而降低，总血红蛋白量、 细胞体积、平均血红蛋白量和平均血红蛋白含量随倍性升高而升高，不同倍性泥鳅 间的血容未见显著性差异。红细胞渗透脆性随倍性升高而降低，表明多倍体泥鳅的 红细胞比二倍体有更强的抗渗透压能力。从以上结果可以推测，多倍体泥鳅的血液 较二倍体有较强的抗逆性。 2 野生和养殖泥鳅的血液生理生化指标比较 在泥鳅的快速生长季节( 5 8 月) 分析了野生和养殖泥鳅的血液生理生化指标 差异，以探讨营养状况和生境差异对泥鳅生理生化指标的影响。结果表明，养殖和 野生群体的泥鳅在血红蛋白浓度、胆固醇含量、总蛋白、肌氨酸酐和尿酸等方面存 在显著性差异( n - - - - 5 6 ，护5 4 ，p 0 0 5 ) 。养殖泥鳅的红细胞数目、葡萄糖、甘油三酸 酯和尿素氮含量明显高于野生群体，而白细胞数目明显低于野生群体( n = 5 6 ，d r = - 5 4 ， p o 0 1 ) 。这些差异表明，生活环境和营养状况会影响鱼类的能量代谢和健康状况。 泥鳅的血液学及湖北省泥鳅群体的遗传多样性研究 3 湖北省内泥鳅群体的遗传结构分析 对采自长江中下游水系的1 2 个群体泥鳅的1 3 个具有多态性的徼卫星位点进行 了遗传分析。结果表明，每个位点的等位基因数在2 到8 个之间，平均每个位点有 华中农业大学2 0 1 0 届硕士学位论文 a b s t r a c t t h ed o j ol o a c hm i s g u r n u sa n g u i l l i c a u d a t u s ( c o b i t i d a e ，c y p r i n i f o r m e s ) i sa s p e c i e se n d e m i ct oa s i a , m a i n l yi n h a b i t ss t r e a m s ，d i t c h e sa n dr i c ep a d d yf i e l d s ， p r e f e r a b l yw i t has o rm u d d yb o t t o m i ti sp o p u l a ri nc h i n aa sat r a d i t i o n a lc h i n e s e m e d i c i n ei nf o l kr e m e d i e sf o rt r e a t m e n to fh e p a t i t i s ，o s t e o m y e i t i s ，c a r b u n c l e s ， i n f l a m m a t i o n sa n dc a n c e r s ，a sw e l la sf o rr e s t o r a t i o nt oh e a l t hi nd e b i l i t i e sc a u s e db y v a r i o u sp a t h o g e n sa n da g i n g h o w e v e r , t h ew i l dp o p u l a t i o n so fm a n g u i l l i c a u d a t u s a l m o s tc o l l a p s e dd u et ot h ei n t e n s i v ef i s h i n ga n dw a t e rp o l l u t i o n si nt h er e c e n ty e a r s ， p r o m p t i n gt h ed e v e l o p m e n to ft h ec u l t u r ep r a c t i c e so ft h i ss p e c i e s t h ec u l t u r es y s t e m i m p l y i n gt h ec o m p l e t e l i f e c y c l e w a s d e v e l o p e d i n19 9 0 sa n d c u r r e n t l y 膨 a n g u i l l i c a u d a t u so c c u p i e sas i g n i f i c a n tp o s i t i o ni nf r e s h w a t e rf i s hc u l t u r ei nc h i n ab o t l l f o rf o o da n dc o m m e r c i a lp u r p o s e t h ea n a l y s i so fb l o o di n d i c e sh a sp r o v e dt ob ca v a l u a b l eg u i d ei na s s e s s i n gt h eh e a l t hs t a t u so fa q u a t i co r g a n i s m sa si tp r o v i d e sar e l i a b l e i n d e xo ft h e i r p h y s i o l o g i c a lc o n d i t i o n s h o w e v e r , t h e r e i sl i m i t e d d a t ao nt h e c o m p a r a t i v eh e a m a t o l o g i c a ld i f f e r e n t i a ea m o n gd i f f e r e n tp l o i d yl e v e l s ，a n da l s ob e t w e e n c u l t u r e da n dw i l dt y p e so fl o a c ht h a ts h a r et h es a m ee c o l o g i c a lz o n ew h i c hu s e dt oa s s e s s t h ep l o i d yl e v e la n dl i v i n gc o n d i t i o n si n f l u e n c e so nt h ee n e r g ym e t a b o l i s ma n df i s h h e a l t h t h em a i no b j e c t i v e so ft h i ss t u d yi n c l u d e ： 1 h e m a t o l o g i c a lc h a r a c t e r i z a t i o no fl o a c h 膨a n g u i l l i c a u d a t u s ：ac o m p a r i s o n a m o n gd i p l o i d ，t r i p l o i da n dt e t r a p l o i ds p e c i m e n s t od e t e r m i n ew h e t h e rd i p l o i d ，t r i p l o i da n dt e t r a p l o i d 肱a n g u i l l i c a u d a t u sd i f f e r e di n t e r m so fm a i nh a e m a t o l o g i c a la n dp h y s i o l o g i c a lc h a r a c t e r i s t i c s d i p l o i da n dt e t r a p l o i d f i s hw e r ep r o d u c e db yc r o s s i n go fn a t u r a ld i p l o i d s ( 2 n 2 n ) a n dn a t u r a lt e t r a p l o i d s ( 4 n 4 n ) ，r e s p e c t i v e l y t r i p l o i df i s hw e r ep r o d u c e db yh y b r i d i z a t i o nb e t w e e nd i p l o i dm a l e s a n dt e t r a p l o i df e m a l e s t h eb l o o dc e l l sw e r es i g n i f i c a n t l yl a r g e ri np o l y p l o i d sa n dt h e v o l u m e t r i cr a t i o so fe r y t h r o c y t e sa n dl e u c o c y t e s ( t h r o m b o c y t ea n dn e u t r o p h i l ) i n t e t r a p l o i d s ，t r i p l o i d sa n dd i p l o i d sw e r ec o n s i s t e n tw i t ht h ep l o i d yl e v e lr a t i oo f 4 ：3 ：2 n o s i g n i f i c a n td i f f e r e n c e sw e r eo b s e r v e di nh a e m a t o c r i ta m o n gp o l y p l o i d s t h ee r y t h r o c y t e c o u n td e c r e a s e dw i t hi n c r e a s e dp l o i d yl e v e l ，w h i l et o t a lh e m o g l o b i n ，m e a nc e l lv o l u m e ， 泥鳅的血液学及湖北省泥鳅群体的遗传多样性研究 m e a nc e l l u l a rh e m o g l o b i nc o n t e n t , a n dm e a nc e l lh e m o g l o b i nc o n c e n t r a t i o na l li n c r e a s e d w i t hi n c r e a s ei np l o i d yl e v e l e r y t h r o c y t eo s m o t i cb r i t t l e n e s sd e c l i n e di np o l y p l o i d ss o t h a tp o l y p l o i de r y t h r o c y t e sw e r em o r er e s i s t a n tt oo s m o t i cs t r e s st h a nd i p l o i do n e s o v e r a l l ，l o a c hw i t hh i g h e r p l o i d yl e v e l ss h o w e de v i d e n c eo fs o m ea d v a n t a g e si n h e m a t o l o g i c a lc h a r a c t e r i s t i c s 2 c o m p a r i s o no fh a e m a t o l o g ya n ds e r u mb i o c h e m i s t r yo fc u l t u r e da n dw i l dm a n g u i l l i c a u d a t u s h e a m a t o l o g i c a lp a r a m e t e r sa n ds e r u mb i o c h e m i s t r yd i f f e r e n t i a ew e r es t u d i e da n d c o m p a r e db e t w e e nc u l t u r e da n dw i l dc c o t y p e so fd o j ol o a c h 膨a n g u i l l i c a u d a t u sd u r i n g t h em o s ti m p o r t a n tf i s h e r i e ss e a s o ni e m a y - t o a u g u s t d a t aw e r ea n a l y z e df o rt h e i m p a c to ff e e d i n gr e g i m ea n do t h e re c o l o g i c a lc o n d i t i o n so nt h ep h y s i o l o g yo ff i s h t h e r e s u l t sr e v e a l e dt h a tt h ec o n c e n t r a t i o n so fh a e m o g l o b i n ，c h o l e s t e r o l ，t o t a l p r o t e i n ， c r e a t i n i n ea n du r i ca c i di nt h et w oe c o t y p e sw e r es i g n i f i c a n t l yd i f f e r e n t ( n = 5 6 ，q 睁5 4 ，p 0 0 5 ) f u r t h e r m o r e ，t h er e db l o o dc e l l s ，g l u c o s e ，仃i g l y c e r i d ea n du r e an i t r o g e nl e v e l si n c u l t u r e di n d i v i d u a l sw e r es i g n i f i c a n t l y ( n = 5 6 ，d f = 5 4 ，p 0 01 ) h i g h e rt h a ni nt h e i rw i l d c o u n t e r p a r t s o nt h ec o n t r a r y ，t h ew h i t eb l o o dc e l l s l e v e l i nt h ec u l t u r e df i s hw a s s i g n i f i c a n t l y ( n = 5 6 ，垆5 4 ，p 0 o1 ) l o w e ra sc o m p a r e d t ow i l do n e s t h e s ed i f f e r e n c e s c a l lb ea t t r i b u t e dt op h y s i o l o g i c a la c c l i m a t i z a t i o no ft h ef i s ht ot h e i rl i v i n gc o n d i t i o n sa n d f e e d i n gr e g i m e ，w h i c hi n f l u e n c e st h ee n e r g ym e t a b o l i s ma n ds u b s e q u e n t l y ，f i s hh e a l t h 3 g e n e t i cd i v e r s i t ya n dp o p u l a t i o ns t r u c t u r eo fc h i n e s e 膨a n g u i l l i c a u d a t u s w e i n v e s t i g a t e d t w e l v el o a c h p o p u l a t i o n so r i g i n a t i n g f r o mm i d d l e - l o w e r m a i n s t r e a ms u b - b a s i na n dt h eh a n j i a n gs u b b a s i no ft h ey a n g t z er i v e r t o t a lt h i r t e e n m i c r o s a t e l l i t el o c i w i 廿iv a r y i n gl e v e l so fp o l y m o r p h i s mw e r ee m p l o y e dt oe x a m i n e g e n e t i cd i f f e r e n t i a t i o na n dp o p u l a t i o ns t r u c t u r eo f t h es p e c i e sw i t h i ns a m p l i n gl o c a l i t i e s t h en u m b e ro fa l l e l e sp e rl o c u sv a r i e db e t w e e n2a n d8w i t ha na v e r a g eo f4 6a l l e l e sp e r l o c u s o b s e r v e dh e t e r o z y g o s i t yv a r i e df r o mb e l o w0 3 8u pt oam a x i m u mo f0 9 5 ；o v e r a l ll o c it h ea v e r a g eo b s e r v e da n de x p e c t e dh e t e r o z y g o s i t yw a s0 5 7a n d0 5 6 ，r e s p e c t i v e l y s i g n i f i c a n td e v i a t i o n sf r o mh a r d y - w e i n b e r ge q u i l i b r i u m ( 尸 0 01 ) w e r eo b s e r v e di n a b o u t5 0 o ft h et o t a ll o c u s - p o p u l a t i o nc o m b i n a t i o nt e s t sw i t ha p p a r e n th e t e r o z y g o t e d e f i c i t s t h i s h e t e r o z y g o t e d e f i c i tm i g h tb ea t t r i b u t e dt o f i s h i n gp r e s s u r e a n d i v 华中农业大学2 0 1 0 届硕士学位论文 m i g r a t i o n - d r i f td i s e q u i l i b r i u m a m o v aa n a l y s e si n d i c a t e dt h a tm o s to ft h ev a r i a n c e e x i s t e da m o n gt h ei n d i v i d u a l s ( 9 0 5 0 ) r a t h e rt h a na m o n gp o p u l a t i o n sw i t h i ng r o u p s ( 9 0 3 ) b a s e do np a i r w i s ef s r a n du n b i a s e dg e n e t i cd i s t a n c e ，s i g n i f i c a n td i f f e r e n t i a t i o n w a sf o u n da m o n gt h es a m p l e sf r o ms c a t t e r e dh a b i t a t sw i t l ld i f f e r e n tc o n n e c t i o n st ot h e y a n g t z er i v e r t h eu p g m ad e n d r o g r a mc l u s t e r e dt h ep o p u l a t i o n so n t ot w om a j o r b r a n c h e s ，s u r p r i s i n g l yf o l l o w i n gt h e i ri c h t h y o g e o g r a p h i cd i s t r i b u t i o ne x c e p tz i ga n d x g np o p u l a t i o n sw h i c hg e n e t i c a l l yd e p a r t e df r o mt h e i r g e o g r a p h i c a lo r i g i n t h e c o m b i n e da n a l y s e ss h o w e das i g n i f i c a n tp o p u l a t i o ng e n e t i cs t r u c t u r i n ga ts u b b a s i nl e v e l o v e r a l l ，t h ep r e s e n ts t u d yr e v e a l e dt h a tc h i n e s el o a c hi n h a b i t i n gt h ec e n t r a lc h i n ai s g e n e t i c a l l y d i f f e r e n t i a t e di n t ot w od i s t i n c t g e o g r a p h i c a lg r o u p s t h ee x i s t i n g d i f f e r e n t i a t i o ni nl o a c hp o p u l a t i o n si sa t t r i b u t e dt ot h ec u r r e n td e m o g r a p h i cc o n f i g u r a t i o n o ft h er e g i o n ，n o n m i g r a t o r yb e h a v i o ro ft h el o a c ha n dr e d u c e df l o o d i n gi nt h ey a n g t z e r i v e rw h i c hr e s t r i c t e dt h eg e n ef l o wa m o n gl o a c hp o p u l a t i o n si nr i p a r i a ne c o s y s t e m s k 锣w o r d s ：m i s g u r n u sa n g u i l l i c a u d a t u s ；h a e m a t o l o g y ；p l o i d yl e v e l ；c u l t u r e da n dw i l d ； g e n e t i cd i v e r s i t y ；m i c r o s a t e l l i t e v 华中农业大学2 0 1 0 届硕士学位论文 第一章文献综述 1 鱼类血液组成成分研究 与其它高等脊椎动物一样，鱼类的血液系统不仅肩负着运送细胞和组织新陈代 谢所需要的氧、运走代谢后产生的二氧化碳的任务，同时还肩负着输送激素以调节 机体各部分生理机能以及防御外界细菌、病毒等各种毒害物质侵害有机体的作用。 比如，鱼体血液中的白细胞是其重要的免疫细胞，直接参与鱼类机体的免疫应答及 其相关过程，因此，鱼类的白细胞在鱼类的疾病研究及其防御中起着重要的作用 ( c a s t i l l oe ta 1 ，1 9 9 8 ；d a l m oe ta 1 ，1 9 9 7 ) 。此外，鱼类的血细胞及其成分的变化也直 接反映了鱼体自身的生理状态变化，外界环境因子的刺激以及环境的变化对鱼体健 康状况的影响可以直接通过检测其血液指标而得到了解( e l l i s ，1 9 7 7 ；袁仕取 等，1 9 9 8 ) 。利用血液学以及血液生理生化指标来研究鱼类的生理状况的研究，目前 国内外已经有大量的报道，但由于目前在鱼类中的研究水平还比较低，因此，各研 究间特别是关于血细胞的分类以及血细胞的功能方面的研究，在各学者之间还存在 一定的争议。然而，现代分子生物学方法与技术已经在鱼类血细胞逐步得到应用， 之前存在争议的一些问题已经相继达到了澄清( s c a p i g l i a t i e ta 1 ，2 0 0 0 ；p a r t u l a , 1 9 9 9 ) 。 鱼类的血液也是由血浆以及悬浮于血浆中的血细胞构成。与其它高等脊椎动物 相比，鱼类的白细胞占血细胞的比例很小，因此，鱼类血细胞的比容( 每1 0 0 m l 血 液中血细胞所占的比例) 主要由红细胞的数量和大小决定。一般而言，运动能力强 的鱼，血细胞的比容就比较大，比如金枪鱼的血细胞的比容为4 0 左右：而那些活 动能力相对较差的鱼类血细胞的比容就比较低，鳐的血细胞的比容还不到1 0 。鱼 类的血细胞比容与其生理状态也密切相关，鱼体在患病期间的血细胞比容要比正常 状态下低。此外，其它环境因子的变化如季节变化、温度变化、盐度变化以及营养 条件的变化也都会引起血液比容的变化。 参照哺乳动物的血细胞分类的命名方法，按照形态和功能的不同，鱼类的血细 胞也包括红细胞、白细胞和血栓细胞，其中白细胞又包括淋巴细胞、单核细胞、嗜 酸性白细胞、嗜中性白细胞和嗜碱性白细胞。 泥鳅的血液学及湖北省泥鳅群体的遗传多样性研究 1 1 红细胞 除极少数南极鱼类如短腹冰鱼( c h a e n o c e p h a l u sa c e r a u s ) 没有红细胞或红细胞很 少外( 冯怀亮等，1 9 9 1 ) ，绝大多数的鱼类血液中都含有大量的红细胞( 占总量的9 0 以上) ( s c a p i g l i a t ie ta 1 ，2 0 0 0 ) 。与高等哺乳动物的无核红细胞相比，鱼类的成熟红 细胞都有一个长椭圆形的核( 袁仕取等，1 9 9 8 ；傅莉娟等，1 9 8 8 ) 。鱼类红细胞的随着鱼 的种类、d n a 含量以及生活环境的不同而有很大的差异。一般说来，活动能力较 差营潜伏于水底层生活的鱼类如泥鳅( 肖义军等，2 0 0 1 ) 、黄鳝( 王杨科等，2 0 0 2 ) 等红细 胞体积比较大，红细胞数量相对较少，而一些活动量较大营上层生活的鱼类如黄鳍 金枪鱼、鲣、鲐等，其红细胞体积相对较小( 尾崎久雄，1 9 8 2 ) 。 透射电镜下，鱼类的红细胞呈长椭圆形，表面光滑。细胞核卵圆形，有明显可 见的核膜和核孔，核膜内的异染色质在内测分布呈带状、在中间分布呈片状。细胞 质分布均匀，内有少量的线粒体、高尔基体、核糖体、粗面内质网和滑面内质网以 及囊泡等结构( 袁仕取等，1 9 9 8 ) 。某些鱼类在其红细胞膜的下方，有与细胞膜呈平 行排列的维管束，一般认为，这些维管束具有维持红细胞正常形状功能( 傅莉娟等， 1 9 8 8 ) 。 红细胞的主要成分是血红蛋白，血红蛋白具有在氧分压高时结合氧、氧分压底 时释放氧的特性，因此，它是有机体内最适宜于担任输氧功能的成分。鱼类血红蛋 白的含量也会随着鱼的种类、营养状况和季节的不同而有所不同，一般而言，硬骨 鱼类的较软骨鱼类的营养条件好的鱼类较营养条件差的鱼类有更多的血红蛋白含 量，血红蛋白含量多，运动能力强的鱼类较运动能力弱的鱼类的血红蛋白含量多。 1 2 白细胞 与其它高等脊椎动物相似，鱼类的自细胞也包括淋巴细胞、粒细胞、血栓细胞 和单核细胞，其中粒细胞又包括嗜酸性粒细胞、嗜中性粒细胞和嗜碱性粒细胞 1 - 2 1 淋巴细胞( l y m p h o c y t e ) 淋巴细胞是鱼类内含量最多的一种白细胞。鱼类的淋巴细胞呈不规则的圆形， 细胞表面有较多的突起，细胞的中间有一个大的呈椭圆形或马蹄形的细胞核，核质 2 华中农业大学2 0 1 0 届硕士学位论文 比大于2 ( e l l i s ，1 9 7 7 ；冯怀亮等，1 9 9 1 ；p a r i s he ta 1 ，1 9 8 6 ) 。很多研究( r o w l e yc ta 1 ， 1 9 8 8 ；赵海鹏等，2 0 0 5 ) 在描述鱼类淋巴细胞时将其分成大小两类分别描述，但 b a r b e re ta 1 ( 1 9 8 2 ) 等发现许多淋巴细胞的体积是连续变化的，不应该用“大”和“小” 来界定，而且也没有任何迹象表明淋巴细胞的功能是与其体积有关的。e l l i s ( 1 9 7 7 ) 等指出，将淋巴细胞分为“大”“小 是武断的，因为它们可能代表了同一种细胞 的不同功能状态，而不大可能是具有不同功能的两种细胞，应统一归为淋巴细胞。 1 2 2 血栓细胞( t h r o m b o c y t e ) 血栓细胞是鱼体内在数量上仅次于淋巴细胞的白细胞( p a r i s he ta 1 ，1 9 8 6 ) 。鱼类 的白细胞常以群体的形式存在，集结成纺锤形或泪滴形，表面有粗钝的突起，有一 个较大的细胞核位于群体的中央。 鱼类的血栓细胞在功能上类似于哺乳动物的血小板，具有凝血的功能。从细胞 发生的角度研究，一些学者认为鱼类的血栓细胞应该不具有吞噬的功能，但另有一 些学者研究发现，在实验鱼的静脉或腹腔中注射胶碳颗粒后，血栓细胞表现出了一 定的吞噬胶碳颗粒的现象( 袁仕取等，1 9 9 8 ) 。关于血栓细胞的形态以及形态和发育 时期、功能状态的关系存在着争议，有待进一步研究。 1 2 3 单核细胞( m o n o c y t e ) 鱼类的单核细胞的大小仅次于巨噬细胞和一些大型嗜碱性粒细胞。鱼类的单核 细胞呈球形、梨形或不规则形状，表面有类似于伪足样的细长突起，细胞核小，呈 马蹄形或肾形，偏于细胞的一侧( e l l i s ，1 9 7 7 ；f u j i m a k i & i s o d a ，1 9 9 0 ) 。透射电镜下， 单核细胞的胞质内有大量的线粒体以及粗面型内质网、核糖体、高尔基体以及被吞 噬的衰老细胞等。 同其它高等脊椎动物一样，鱼类的单核细胞具有很强的吞噬能力，在鱼体内发 挥着重要的保护功能，它可以通过活跃的变形运动产生的伪足样胞突捕捉并融合外 来物质以及自身的衰老细胞从而达到吞噬的功能( 袁仕取等，1 9 9 8 ) 。鱼类的单核细 胞对环境因子的变化也非常敏感，研究发现，生活在严重污染水体中的鱼的单核细 胞数量比生活在正常水体中的鱼的含量高出近5 0 倍；一些被寄生虫感染或人为地 注入胶碳颗粒的个体也比其它健康鱼体内的单核细胞含量高得多( w a r t , 1 9 7 6 ) 。因 此，有人认为，通过检测单核细胞的变化情况，可初步了解鱼体的健康状况及其生 活环境的水体质量。 泥鳅的血液学及湖北省泥鳅群体的遗传多样性研究 1 2 4 嗜中性颗粒细胞( n e u t r o p h i l s ) 嗜中性粒细胞是鱼体血液中数量最多的一种粒细胞。嗜中性粒细胞的外形不规 则，细胞核椭圆形或马蹄形，成熟的细胞呈分叶状，一般三叶的较多见，位于细胞 的一侧，有时甚至与核膜相贴。细胞质内有大量的粗面内质网、液泡以及各种形态 的颗粒，如圆形、类晶体形和纤维状等2 - 3 种。 由于鱼类的嗜中性粒细胞数量较多，也非常活跃，因此，也是鱼体内的一种非 常重要的非特异性免疫细胞。研究发现，如果在鱼体腔内注射脂多糖、佐剂或接种 病原生物后，其血液中的嗜中性粒细胞的数量则会明显增加( e l l i s ，1 9 7 7 ) 。另外， 鱼类的嗜中性粒细胞还有一定的趋化性和化学发光作用等( 陈昌福，1 9 9 8 ) ，能够参与 鱼类机体的炎症反应( 陈昌福，1 9 9 8 ) 。 1 2 5 嗜酸性颗粒细胞( e o s i n o p h i l s ) 华中农业大学2 0 1 0 届硕士学位论文 得到科研人员的广泛青睐。 鱼类多倍体倍性的鉴定方法主要有形态学鉴定0 3 0 n a rc ta 1 ，1 9 8 8 ；杨天棋， 1 9 9 4 ) 、染色体计数( a r a ie ta 1 ，1 9 9 1 ；f l a j s h a n s ，1 9 9 7 ) 、d n a 含量测定( t h o r g a a r de ta 1 ， 19 8 2 ；b u m se ta 1 ，19 8 6 ；m a l i s o ne ta 1 ，19 9 3 ；m a l i s o n & g a r c i a - a b i a d o ，1 9 9 6 ) 、现代生 物技术( a l i a he ta 1 ，1 9