兽医生物制品监察制度与质量检验 ppt课件.ppt

兽医生物制品监察制度和质量检验,兽医生物制品生产实施监察制度的意义，及其包含的主要内容。兽医生物制品质量检验的项目，其中三大检验项目的内容、方法及其要点。,目标,第一节兽医生物制品的监察制度第二节兽医生物制品的质量检验,内容,一、兽医生物制品质量管理体系二、菌毒虫种和标准品的管理三、防止散毒的原则与措施四、制品的贮存及运输五、新制品的管理六、进口制品的管理,第一节兽医生物制品监察制度,兽药管理条例兽药生产许可证,营业执照,批准文号监察室，中监所兽用新生物制品管理办法进口兽药登记许可证兽药生产质量管理规范,北京中关村南大街8号,用于兽医生物制品制造和检验用的菌种、毒种等均实行种子批和分级管理制度。,种子分三级：原种：由研究单位和中监所负责保管；基础种子：由中监所或中监所委托的单位负责制备、鉴定、保管和供应；生产种子：由生产企业自行制备，按各项规程的规定鉴定后使用。,新制品是指我国创制或首次生产用于畜禽等动物疾病预防、治疗和诊断用的生物制品；对已批准的生物制品所使用的菌毒种和生产工艺有根本改进的，亦属于新制品管理范畴。,第一类：我国创造的制品；国外仅有报道而未批准生产的制品。第二类：国外已批准生产，但我国尚未生产的制品。第三类：对我国已批准的生物制品使用的菌毒种和生产工艺有根本改进的制品。,第二节兽医生物制品的质量检验,一、无菌检验或纯粹检验二、安全检验三、效力检验四、其它检验项目,一、无菌检验或纯粹检验（testorpuritytest）,除特殊规定外，兽医生物制品都不应有外源微生物污染。灭活菌苗、疫苗不得含有活的本菌、本毒。,各类兽医生物制品必须在无菌条件下进行无菌检验或纯粹检验。,（一）检测样品的采集应随机取样，样品应有确切的代表性。,1.制造疫苗用的各种原菌液、毒液和其它配苗组织乳剂、稳定剂及半成品的无菌或纯粹检验，应每瓶（罐）分别抽样进行，抽样量为210mL。2.成品的无菌或纯粹检验应按每批或每个亚批进行，每批按瓶数百分之一抽样，但不应少于5瓶，最多不超过10瓶，分别进行检验。,（二）检验用培养基1.无菌检验厌氧性及需氧性细菌的检验用硫乙醇酸盐培养基（T.G）及酪胨琼脂培养基（G.A）。霉菌及腐生菌检验用葡萄糖蛋白胨水（G.P）。2.活菌纯粹检验用适于本菌生长的培养基。3.灭活检验用适于本菌生长的培养基。,（三）兽医生物制品的无菌检验及纯粹检验1.细菌活菌苗半成品：取样接种于T.G小管以及适宜本菌生长的其他培养基斜面各2支，每支0.2mL，1支置37培养，1支置25培养，均观察35d，结果应纯粹。2.病毒活疫苗半成品：取样接种于T.G小管和G.A斜面各2支，每支0.2mL，1支置37培养，1支置25培养，观察35d，结果均应无菌生长。3.细菌灭活菌苗：各取样0.2mL分别接种于2支适宜本菌生长的培养基，置37培养5d，结果应无菌生长。4.含防腐剂和抗生素的制品：取样品1mL接种于50mlLT.G培养基小瓶中，置37培养，3d后自小瓶中吸取培养物，分别接种T.G小管及G.A斜面各2支，每支0.2mL，T.G小管置37培养，G.A斜面置25培养。另取0.2mL接种1支G.P小管，置25培养。均培养5d，结果应无菌生长。5.细菌性活疫苗：将样品直接接种T.G小管、G.A斜面或适于本菌生长的其他培养基各2支，每支0.2mL，1支置37培养，1支置25培养。另取0.2mL接种1支G.P小管，置25培养。均培养5d。结果应纯粹。,注：如制品允许含有一定数量的非病原菌，则应进一步作杂菌计数和病原性鉴定。,二、安全检验（innocuitytest）,安全性是兽医生物制品最重要的条件，各种制品都必须安检合格方可出厂。,（一）安全检验的内容,1.检验外源性污染：细菌、病毒、支原体2.检查杀菌、灭菌或脱毒情况3.检查残余毒力或毒性物质4.检查对胚胎的毒性,（二）安全检验的方法及要点,1.方法：动物检验。2.动物：应为普通级或清洁级，有些制品要使用SPF级。凡能以小动物做出正确判断者则用实验小动物。禽苗可直接以使用对象动物作安检。无论何种动物，均要选用敏感性高的一定年龄、体重的规定品种、品系的动物。除了动物的敏感性以外，动物的健康状况也与安检结果的正确判断密切相关。试验期间的饲养管理也会影响安检结果的判断。3.剂量：安检剂量通常应高于免疫剂量5-10倍以上。4.外源性病原体检查,（三）安全检查的判断,1.安检期死亡的动物经解剖明确非制品所致者可以重检，如检验结果可疑难以判定时，应以加倍头数的该种动物重检。2.凡规定用多种动物进行安检的制品，均应安全合格。3.用小动物检验不合格者，有的规定可用使用对象动物重检。但使用对象动物检验不合格者，不能再以小动物重检。,三、效力检验（potencytest）,兽医生物制品的效力是指它的使用价值。,（一）效力检验的内容,1.免疫原性2.免疫产生期与免疫持续期3.抗原的热稳定性4.抗原量的测定即最小免疫量:半数保护量（PD50）/半数免疫量（ImD50）,（二）效力检验的方法和要点,1.动物保护力试验定量免疫定量强毒攻击法；定量免疫变量强毒攻击法；变量免疫定量强毒攻击法；被动免疫抗体测定2.活菌计数与病毒量的滴定活菌计数;病毒量的滴定3.血清学方法凝集试验；沉淀试验；中和试验；补体结合试验；抗毒素单位测定;类毒素单位的测定,定量免疫定量强毒攻击法以被检品接种动物，经2-3周后，连同对照动物用相应的强毒攻击，观察动物接种后所建立的自动免疫抗感染水平，即以动物的存活或不受感染的情况来判定制品的效力。,定量免疫变量强毒攻击法把动物分为两大组，一为免疫组，一为对照组，两大组又各分为相等的若干小组，每小组的动物数相等。免疫动物均用同一剂量的制品接种免疫，经一定时间后，与对照组同时用不同稀释倍数强毒攻击，比较免疫组与对照组的存活率。,变量免疫定量强毒攻击法将疫苗稀释为各种不同的免疫剂量并以之接种动物，间隔一定时间待动物的免疫力建立以后，各免疫组连同对照组均用同一剂量的强毒攻击，观察一定时间，用统计学方法计算能使50%的动物得到保护的免疫剂量（PD50）。,被动免疫抗体测定用经高度免疫的动物抗病血清注射易感动物，经一定时间（一般1-3d）用相应的强毒攻击，观察血清抗体被动免疫所引起的保护作用，各种抗病血清的检验均用此法。,四、其它检验项目,（一）物理性状检验（二）干燥制品剩余水分检验（三）真空度测定（四）其他（甲醛与硫柳汞含量的测定等）,（一）物理性状检验,1.液体疫苗和诊断液：外观必须符合其规定要求，同时检查瓶装量是否准确、封口是否严密及瓶签有无差错等。2.冻干疫苗：应为海绵状疏松物，色微白、微黄或微红，无异物和干缩现象。加稀释液或水稀释振荡后，在常温下应在5min内迅速溶解呈均匀一致的悬浮液。3.血清制品：应为微带乳光橙黄色或茶色清朗液体，不应有摇不散的絮状沉淀与异物。若有沉淀时，稍加摇动，即成轻度均匀混浊。装量、封口、瓶签同时检查。,油乳剂灭活疫苗的物理性状检验：视检：应呈乳白色，颗粒均匀的混悬液，无沉淀，无凝块，无其它异物。粘度测定：适于测油乳剂苗用的是流出法，用Saybolt粘度计。但最简易的方法是取内口直径为1.2mm的1mL吸管，在室温下吸满1mL乳剂，垂直放出0.4mL所需时间作为粘度单位，以0.4mL2-6s为合格，不得多于10-15s，否则注射时就比较困难。乳剂稳定性测定加速老化法：疫苗于37贮存10-30d不破乳。离心加速分层法：在一个半径为10cm的离心器中装油乳剂，3000r/min离心15min不分层，相当于保存1a以上不破乳。乳剂类型的测定Robertson的染料法：用“Sudan油溶性染料”和“亮蓝FCF”水溶性染料，分别加入两份乳剂中，轻轻摇动，若是整个乳剂染油溶性染料即外相为油（W/O），若整个乳剂染水溶性染料即外相为水（O/W）。冲淡或滴于冷水表面：此法是根据乳状液搀合的物质（油或水）来确定外相的性质。电导法：因为多数的油皆是不良导体，而水则是良导体，用万能电表把两极分开插入乳剂中，能导电者外相为水，为水包油乳剂；不能导电者外相为油，为油包水乳剂。粒度大小及分布的测定：用显微镜直接观察，或用光散射法和透射法或微计测定之，以直径10um均匀颗粒的乳剂为较好。,（二）干燥制品剩余水分检验-真空烘干法,1.测定前，先将洗净干燥的称量瓶，置150干燥箱烘干2h，放入有无水氯化钙容器中冷却后称重。2.迅速打开真空良好的疫苗瓶，将制品倒入称量瓶内盖好，在天平上称重。3.每批做4个样品，每个样品的重量为100-300mg，称后立即将称量瓶置于有五氧化二磷的真空干燥箱中，打开瓶盖，关闭真空干燥箱后，抽真空在2.67kPa（20mmHg）以下，加热至60-70，干燥3h。4.通入经过氯化钙吸水的干燥空气，待真空干燥箱温度稍下降后，打开箱门，迅速盖好称量瓶的盖，取出所有称量瓶，移入有氯化钙干燥器中，冷却到室温后，称重量。5.再移回真空干燥箱继续烘干1h，两次烘干达到恒重（恒重是指物品连续两次干燥后重量差异在0.5mg以下的重量），减失的重量即为含水量。6.剩余水分计算公式为：样品干前重样品干后重含水量100样品干前重7.冷冻真空干燥生物制品剩余水分均应不超过4.0。,注意事项：1.快速2.干燥环境中进行3.所用工具必须干燥,快速、干燥。,（三）真空度测定,使用高频火花真空测定器对采用真空密封，并用玻璃容器盛装的冻干生物制品，在玻璃容器的外边放电进行检测。如果容器内出现白色、粉色和紫色辉光，则真空度为合格。注意放电火花不应指向容器内的制品部分，否则会损伤制品。,（四）甲醛含量的测定,1.对照品溶液的制备：取已标定的甲醛溶液适量，配成每1mL含甲醛1.0mg的溶液，精密量取5mL于50mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。如被测样品为油乳剂疫苗，则精密量取上述每1mL含甲醛1.0mg的溶液5mL于50mL量瓶中，加20吐温-80乙醇溶液10mL，再加水至刻度，摇匀，即得。2.供试品溶液的制备油乳剂疫苗：用5mL刻度吸管量取本品5mL，置50mL量瓶中，用20吐温-80乙醇溶液10mL，分次洗涤吸管，洗液并入50mL量瓶中，摇匀，加水稀释至刻度，强烈振摇，静止分层，下层液如不澄清，过滤，弃去初滤液，取澄清续滤液，即得。其它疫苗：用5mL刻度吸管量取本品5mL，置50mL量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，溶液如不澄清，过滤，弃去初滤液，取澄清续滤液，即得。3.检验法：精密吸取对照品溶液和供试品溶液各0.5mL，分别加醋酸-醋酸铵缓冲液10.0mL，乙酰丙酮试液10.0mL，置60恒温水浴15min，冷水冷却5min，放置20min后，照分光光度法，在410nm的波长处测定吸收度，计算，即得。4.计算公式：,供试品溶液的吸收度甲醛溶液（40）含量（g/mL）0.25对照品溶液的吸收度,（四）硫柳汞含量的测定,1.对照品溶液的制备：精密称取于硫酸干燥器中干燥至恒重的二氯化汞0.1354g，置100mL量瓶中，加硫酸液（0.5mol/L）使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。每1mL溶液中含1mg的Hg，此液为汞浓溶液。精密量取汞浓溶液5mL于100mL量瓶中，用硫酸液（0.5mol/L）稀释至刻度，摇匀，即得。每1mL溶液中含50ug的Hg。2.测定法油乳剂疫苗消化：用经标定的1mL注射器（附15cm长针）正确量取摇匀的本品1mL，置25mL凯氏烧瓶（瓶口加小漏斗）中，加硫酸3mL、硝酸溶液0.5mL，小心加热，待泡沸停止，稍冷，加硝酸溶液0.5-1mL，再加热消化，如此反复加硝酸溶液0.5-1mL消化，加热达白炽化，直至白炽化加热15min后，溶液与上次加热后的颜色无改变为止，放冷（溶液应无色），加水20mL，放冷至室温，即得。,其它疫苗消化：精密量取摇匀的本品（约相当于汞25-50ug）置25mL凯氏烧瓶（瓶口加小漏斗）中，加硫酸2mL、硝酸溶液0.5-1mL，加热沸腾15min，如溶液颜色变深，再加硝酸溶液0.5-1mL，加热沸腾15min，放冷，加水20mL，放冷至室温，即得。滴定：将上述消化液移入125mL分液漏斗，用水分多次洗涤凯氏烧瓶，