（分析化学专业论文）荧光分析法在测定尼古丁及洛美沙星中的应用.pdf

摘要 摘要 荧光分析法具有仪器简堆、方法快速、灵敏度高等的特点，比相应的紫外光度分析 灵敏度要高2 3 个数量级，因此在分析领域得到了广泛应用。本文就荧光分析法在香烟 中尼古丁及药物中洛美沙星的含量测定作了一些应用研究，本文共分以下四个部分： 第一章：综述了近年来烟草中尼古丁的浸提萃墩、超临界流体萃取、液膜萃取和 离子交换提取方法，评述了尼古丁的重量法、滴定法、光度法、电位分析法、色谱法和 毛细管电泳等分析测量方法及洛荚沙星的光度分析方法，共引用相关文献3 3 篇。 第二章：利用荧光黄荧光法测定香烟巾尼古丁的含量。在p h = 7 3 的水溶液中，尼 古丁与荧光黄( f l ) 由于静电吸引而发卜缔合反应，使荧光黄k 、k m = 4 5 0 5 1 0n m 的 荧光增强，据此建立了荧光黄荧光光度测定尼古丁的新方法，尼古丁含量在o 2 8 o m g l 时，荧光黄的荧光增强程度与尼古丁的含量成线性关系，方法检出限为0 1 2m g l ， 可用于各种不同晶牌香炯中尼古丁含量的测定，平行6 次测定回收率为9 1 1 1 0 8 8 ，相对标准偏筹为1 8 4 8 ，结果满意。 第三章：利用荧光黄一碱。f ，# 藏仡红能量转移体系测定香烟巾尼古丁的含量。荧光黄 ( f l ) 与碱性臧仡红( r t ) 之m 能够发生有效的能罱转移，使荧光黄的荧光下降碱性 臧花红的荧光增强。尼古丁的加入可以破坏该能量转移反应，使能量转移过程受到逆转， 造成荧光黄的荧光增强，据此建立了能量转移荧光测定尼古丁的新方法，尼古丁含量住 o 2 7 0m g l 时，荧光强度与尼古丁的含量成线性关系，该方法检出限为0 1 8m g l ， 可川于各种不同品牌香烟中尼占丁含量的测定，平行6 次测定回收率为9 9 0 1 0 5 o ，n x , h , , j t 准偏差为1 1 4 8 ，结果满意。 第四章：利用f e ( i i i ) 、洛荚沙星与四溴崾红三元络合物荧光猝灭法测定豁酸洛美沙 星。弱酸性条件下，在f e ( 1 1 1 ) 存在时，盐酸洛美沙犀( l m x ) 对四澳曙红的荧光有猝 灭作用，表明形成了f e l m x 一四溴曙红三元络合物，其荧光猝灭程度与l m x 含最呈讵 比，据此建立了利用四溴曙红荧光猝灭测定l m x 的新方法。在k 。儿m = 3 4 8 5 4 0n m 时 测定，l m x 在7 7 6 9 7 0i ，, g l 范围内与四溴曙红荧光猝灭程度晕良好的线性关系，测 定ll 份空白溶液，检出限为l1 4p l 。平行六次测定，回收率为8 5 7 5 l l1 2 5 ， 相对标准偏差为1 3 7 2 1 。用于测定不同厂家或批n - l m x 片剂中l m x 含量，结 摘要 果满意。 关键词荧光光度法能量转移尼古丁洛美沙星荧光黄 ab s t r a c t a b s t r a c t t h ef l u o r e s c e n c ea n a l y s i si sc h a r a c t e r i z e db ys i m p l ei n s t r u m e n t ，r a p i dm e t h o da n d h i g h s e n s i t i v i t y t h em e t h o dh a s2 - 3o r d e r so fm a g n i t u d eh i g h e rs e n s i t i v i t yt h a nu va n a l y s i s t h e r e f o r e ，i ti sw i d e l yu s e di n a n a l y s i sf i e l d t h i sp a p e rh a sc a r r i e do nt h es t u d yb y f l u o r e s c e n c ea n a l y s i sd e t e r m i n a t i o no fn i c o t i n ei nc i g a r e t t ea n dl o m e f l o x a c i ni nd r u g s t h i s p a p e rc o n s i s t so ff o u rc h a p t e r s ： c h a p t e ro n e ：w es u m m a r i z e dm e t h o d sf o re x t r a c t i o no fn i c o t i n ef r o mt o b a c c os u c ha s t h ed i y e s t i o n e x t r a c t i o n ，s f e ，t h el i q u i df i l me x t r a c t ，i r o ne x c h a n g ea n dr e v i e w e dg r a v i m e t r i c m e t h o d ，t i t r a t i o nm e t h o d ，p h o t o m e t e rm e t h o d ，t h ee l e c t r i cp o t e n t i a la n a l y t i c a lm e t h o d ， c h r o m a t o g r a mm e t h o da n dc ea n a l y t i c a lm e t h o do fn i c o t i n ew i t h3 3r e l e v a n tl i t e r a t u r e si n r e c e n ty e a r s c h a p t e rt w o ：t h i se x p e r i m e n tp u r p o s e dan e wm e t h o df o rd e t e r m i n a t i o no fn i c o t i n ei n c i g a r e t t e su s i n gf l u o r e s c e n c ew i t hf l u o r e s c e i n i tw a ss h o w nt h a t i nt h ew a t e rs o l u t i o n c o n s i s t i n go fn i c o t i n ea n df l u o r e s c e i na tp h = 7 3 ，t h ef l u o r e s c e n ti n t e n s i t yo ff l u o r e s c e i na t k x k m = 4 5 0 510n li n c r e a s e da sar e s u l to fe l e c t r o s t a t i ca t t r a c t i o na n da s s o c i a t i o nr e a c t i o n b a s e do nt h i sp h e n o m e n o n ，an e wm e t h o df o rd e t e r m i n a t i o no fn i c o t i n ew a se s t a b l i s h e d t h e c o n c e n t r a t i o no fn i c o t i n ea n df l u o r e s c e n ti n t e n s i t yo ff l u o r e s c e i nw a sl i n e a rw i t h i nt h er a n g e o f0 2 8 0m g l t h ed e t e c t i o nl i m i tw a s0 12m g l t h i sm e t h o do fd e t e r m i n a t i o no f n i c o t i n ec o u l db ei m p l e m e n t e di nv a r i o u sb r a n d so f c i g a r e t t e s a m o n gs i xp a r a l l e l d e t e r m i n a t i o n s ，t h er e c o v e r yw a s9 1 1 10 8 8 a n dt h er s dw a s1 8 4 8 r e s u l t s w e r es a t i s f a c t o r y c h a p t e rt h r e e ：n i c o t i n ei nc i g a r e t t e sw a sd e t e r m i n e db yt h em e t h o do ff l u o r e s c e i n s a f r a n i n etf l u o r e s c e n c ee n e r g yt r a n s f e r t h ee x p e r i m e n ts h o w e dt h a t ：e f f i c i e n te n e r g yt r a n s f e r h a p p e n e di nt h em i x t u r eo ff l u o r e s c e i n ( f l ) a n ds a f r a n i n et ( s t ) ，n i c o t i n ec o u l dd a m a g ea n d i n h i b i tt h ee n e r g yt r a n s f e rr e a c t i o n a sar e s u l t ，t h ef l u o r e s c e n c eo ff lw a si n c r e a s e d w e e s t a b li s h e dt h en e wm e t h o df o rd e t e r m i n a t i o no fn i c o t i n eb yf l u o r e s c e n c e t h ec o n c e n t r a t i o n o f n i c o t i n ei n0 2 7 0m g l ，t h er e l a t i o no fn i c o t i n ea n df l u o r e s c e n ti n t e n s i t yw a sl i n e a r ；t h e i l i a b s t r a c t d e t e c t i o nl i m i tw a s0 18m g l i tc a nb eu s e di nt h ed e t e r m i n a t i o no fn i c o t i n ei nv a r i o u s b r a n d so fc i g a r e t t e s t h er e c o v e r yw a s9 9 0 10 5 0 a m o n g6d e t e r m i n a t i o n sa n dt h e r s dw a s1 1 4 8 r e s u l t sw e r es a t i s f a c t o r y c h a p t e rf o u r ：am e t h o dh a sb e e n e s t a b l i s h e df o r q u a n t i t a t i v ed e t e r m i n a t i o no f l o m e f l o x a c i nh y d r o c h l o r i d eb yf l u o r e s c e n c eq u e n c h i n go ff e ( i i i ) 一l o m e f l o x a c i n e o s i n i nt h e a c i dm e d i u m ，t h ef l u o r e s c e n c eo fl o m e f l o x a c i n - e o s i nc o u l db eq u e n c h e db yt h ef e ( i i i ) ，w h i c h i n d i c a t e dt h ef o r m a t i o no faf e ( i i i ) 一l o m e f l o x a c i n e o s i nc o m p l e x b a s e do nt h el i n e a r r e l a t i o n s h i pb e t w e e nf l u o r e s c e n c ei n t e n s i t ya n dl o m e f l o x a c i nc o n c e n t r a t i o n ，w ee s t a b l i s h e da n e wm e t h o df o rt h ed e t e r m i n a t i o no fi o m e f l o x a c i ni nt h er a n g eo f7 7 6 9 7 0p lw i t h k x k m = 3 4 8 5 4 0a m t h ed e t e c t i o nl i m i to ft h i sm e t h o dw a s11 4 “l t h er e c o v e r i e sw e r e 8 5 7 5 1 1 1 2 5 a n dt h er s dw a s1 3 7 2 1 ( n = 6 ) t h em e t h o dc o u l db ea p p l i e di n t h ed e t e r m i n a t i o no fl o m e f l o x a c i ni nt a b l e t sp r o d u c e db yd i f f e r e n tc o m p a n i e sw i t ha s a t i s f a c t o r yr e s u l t k e y w o r d s ：f l u o r o m e t r y ：f l u o r e s c e n c ee n e r g yt r a n s f e r ：n i c o t i n e ：l o m e f l o x a c i n ：f l u o r e s c e i n i v 河北大学 学位论文独创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导帅指导下进行的研究工作及取得 的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他 人已经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得河北大学或其他教育机构的学位或证书 所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文巾作了明确 的说明并表示了致谢。 作者签名：国丝 日期：墟年上月丛一f 1 学位论文使用授权声明 本人完全了解河北大学有天保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保宦f 并向国 家有关部门或机构送交沦文的复印件和电子版，允影 ：论文被奄阅和借阅。学校可以公伟 论文的伞翔5 或部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制于段保存论文。 本学位论文属于 l 、保密口，在年月日解密后适用本授权声明。 2 、不保密。 ( 请在以上相应方格内打“、”) 保护知识产权声明 本人为申请河北大学学位所提交的题目为懒荧勉汤涨鱼蝌魃耥j 学 位论文，是我个人在导师( 女腿) 指导并与导师合作下取得的研究成果，研究工作 及取得的研究成果足在河北大学所提供的研究经费及导师的研究经费资助f 完成的。本 人完全了解并严格遵守中华人民共和困为保护知识产权所制定的各项法律、行政法舰以 及河北人学的相关规定。 本人声明如下：本沦文的成果归河北大学所有，未经征得指导教师和河北大学的二传 面同意和授权，本人保证不以任何形式公开和传播科研成果和科研工作内容。如果违反 本声明，本人愿意承担相j 粒法律责任。 声明人：因星竺日期：玺丝年互月丘日 作者签名：! 垫墨丝 导师签名： 日期：丝翌年厶月上日 日期：域年乙月尘日 第l 章综述 第1 章综述 烟草中尼古丁及盐酸洛美沙星的分析方法研究 摘要：综述了近年来烟草中尼古丁的浸提一萃取、超临界流体萃取、液膜萃取和离子交 换提取方法，评述了尼古丁的重量法、滴定法、光度法、电位分析法、色谱法和毛细管 电泳等分析测量方法及洛美沙星的光度分析方法，共引用相关文献3 3 篇。 关键词：尼古丁；提取；分析法；洛美沙星；烟草 尼古丁是烟草中生物碱的主要成分，化学名称1 甲基2 ( 3 吡啶基) 吡咯烷，分子式 c l o h l 4 n 2 ，结构式见图1 1 。纯品为无嗅、无色或淡黄色油状液体。尼古丁密度在2 0 。c 时为1 0 0 7 1 ，沸点2 4 7 。c 7 4 5m m h g ，沸腾时部分分解，呈强碱性反应。在6 0 。c 以下与 水结合成水合物，可与水任意比例混合。易溶于酒精、乙醚、氯仿等许多有机溶剂，能 随水蒸汽挥发而不分解。由于分子中两个氮都显碱性，故一般能与两摩尔的酸形成盐。 据报道炯碱有剧毒，少量f 及入对中枢神经有兴奋作用，量大时能抑制中枢神经系统，使 心脏麻痹，以致死亡。 、产 吣 1 1 尼古丁的提取方法 1 1 1 浸提一萃取法 金秋云川等将烟叶用0 5m o l l 盐酸浸提后，将p h 调至1 0 ，加热煮沸抽滤，然后用 氯仿萃取2 次，蒸除氯仿即可得到9 7 3 含量的尼古丁。此法提取速度快，适用于实验 室提取，但需要严格操作。刘本发【2 1 等采用二次萃取蒸馏法提取烟草中的烟碱：先用石 灰水浸提烟草中的烟碱，然后在p h = 1 1 0 的条件下，经三氯乙烯二次萃取，再常压蒸馏 获得炯碱粗品，最后在压力为4 0 6 5k p a 温度为1 6 0 1 7 0 。c 条件下减压蒸馏，可得 河北人学理! 学硕十位论文 到纯度达9 8 5 以上的烟碱。 1 1 2 超临界流体萃取 f i s c h e r 等3 1 研究了用超临界流体提取烟草中烟碱的最佳条件，烟草粉术的粒径在 1 2 5 3 5 5g m 范围内，最佳的萃取时间为1 5m i n ，流体的最佳流速为3m l m i n ，且微 粒粒径的大小不影响烟碱的回收率；同时在超临界c 0 2 中加入8 的甲醇作为改性剂可 以提高烟碱在其中的溶解度。用超临界流体进行萃取，产品纯度高且对环境友好，但设 备成本较高。 1 1 3 液膜萃取 王献科等4 1 用液膜法提取烟草中的烟碱，得到了纯度在9 9 以上的产品。采用n ，n 二仲辛基乙酰胺和仲辛醇作流动载体，双烯丁二酰亚胺作表面活性剂，磺化煤油作溶剂， 硫酸水溶液作内相试剂，制成油包水型的乳状液膜。外相料液中的烟碱透过液膜进入内 相，与内相中的硫酸形成硫酸烟碱，富集在内相中，然后采用高压静电进行破乳。此法 操作比较简单，得到的烟碱纯度高。 1 1 4 离子交换法 韩芳然等5 1 采用稀硫酸浸泡烟草废渣，过滤后经h n 2 6 8 型阳离子交换柱，然后用 n a o h 沈脱烟碱，再用煤油进行萃取，硫酸反萃取，可获得较高的萃取率。该法能耗低， 避免了有机溶剂的污染，但足离子交换树脂的处理和再生比较麻烦。 1 2 尼古丁的分析方法 目前，测定烟草中烟碱的方法主要有重量法、滴定法、光度法、电位分析法等。对 烟草中的多种生物碱同时进行分析的方法主要有气相色谱法、液柑色谱法、毛细管电泳 法等。 1 2 1 硅钨酸重量法 硅钨酸重量法f 6 1 由b e r t r a n d 和j a v i l l i e r 于19 0 9 年报道，是c o r e s t a 推荐分析炯碱 的方法。它是利用烟碱与水蒸气共挥发的性质，在碱性条件下用水蕉气将烟碱带出，然 后与硅钨酸形成品形沉淀，灼烧沉淀后采用重量法求出烟碱含量。硅钨酸莺晕法不使用 基准试剂和容量器皿，因而分析结果比较准确。但其分析时问长，不能区分烟碱和降烟 碱，而且易受无机盐的干扰。 第1 章综述 1 2 2 滴定法 滴定法的原理是酸碱中和反应。会秋云等分别以水和盐酸为浸取荆，以氯仿为萃 取剂提取烟碱，将所得产物用蒸馏水溶解后，用标准硫酸溶液进行滴定测定。滴定法简 便、经济、快速，但相对标准偏差较大。 1 2 3 光度法 基于尼古丁的化学性质，如尼古丁可与甲基橙、铬蓝黑、溴甲酚绿等显色剂反应生 成难溶于水的显色络合物；烟碱在中性及弱碱性条件下可与c u 2 + 生成浅监色沉淀；烟碱 在酸性条件下，可形成带讵电倚的质子化炯碱，它与甲基橙反应生成不易溶于水但易溶 于苯的有色缔合物，且该缔合物町在苯中稳定存在。测定尼古丁的光度法在国内外有很 多报告，其中紫外分光光度法灵敏度较高，简便易行，但试剂空白值较高，且染料缔合 物的形成需要有机溶剂，容易造成环境的污染，光度法测定尼古丁的研究见表l l 。荧 光法测定尼古丁的方法迄今未见报道。由尼古丁结构可知尼古丁可与酸性荧光染料发生 反应。利用这一性质可用荧光法测黾尼古丁浓度。与其他光度法卡h 比，荧光法具有分析 简便，灵敏度高，准确度和重现性好，不需要有机溶剂的优点。 表l l 光度法测定尼古丁 t a b1 - 1d e t e r m i n a t i o no f n i c o t i n eb yp h o t o m e t e r 线性 0 1 0 7 办程 ( c ：m l )测定范网竺测限平冀：#率r。sd(mgl)mgl)，测定样品萎蓑 ( ) w 文献 y = 0 0 5 9 8 + 0 o o l l c r = 0 9 9 9 6 a = i 6 6 x 1 0 。3 + 1 2 x 1 0 。3 c r = 0 9 9 9 7 y = 2 3 1 6 c + 5 1 r = 9 9 9 9 5 a = 0 0 9 0 2 c + 0 0 2 4 4 r = 0 9 9 9 8 各类人群 一0 8 18 0 4 1 3 80 1 3 8 【7 】 尿液 0 1 38i109 4 1 废煳末 8 】 0 0 1 60 0 69 8 i 0 0 0 1 1 3 ：烟草 【9 】 0 1 20 5 29 2 1 0 32 i 2 8 烟草 【l o 】 河北人学理学硕f j 学何论文 a = 0 0 7 6 7 + 0 0 2 9 l c 3 3 5 r = 0 9 9 9 3 a = 0 0 9 0 2 c + 0 0 2 4 4 0 1 2 r = 0 9 9 9 8 1 59 8 1 0 31 4 将通烟草 【1 i 】 0 4 39 l 1 0 52 1 2 8 普通烟草 【1 2 】 1 2 4 电位分析法 电位分析法是利用膜电极把被测离子的活度表现为电极电位而进行测定的方法，它 的主体是离子选择电极。杨俊等【1 3 】以硅钨酸为活性物质，邻苯二甲酸二辛酯为增塑剂， 在p h 玻璃电极表面涂敷一层对烟碱敏感的p v c 膜，构成烟碱选择电极。以该电极作 指示电极，双液接饱和甘汞电极作参比电极，测定了烟：节和烟气粒相物中的烟碱含量。 电位法选择性好，简便快速，且无污染，但实验的重复性较差，且电极制备要求较高。 1 2 5 填充柱气相色谱法 填充柱气相色谱是指柱内填充固定相的气相色谱，固定相分为极性和非极性2 种。 在用填充柱气相色谱测定烟草中的生物碱时，最常用的极性固定相足聚乙烯乙二醇。 1 9 7 7 年，b u m s 等用填充了极性的聚乙二醇和2 0m o l l 氢氧化钟的色谱柱定量分析 了烟草中的生物碱。 1 2 6 毛细管气相色谱法( c g c ) c g c 具有高效、快速、吸附及催化性小等特点。y a n g 等搭1 采用c g c 测定了烟草 中主要的生物碱，采用固相微萃墩对样品进行预处理，所用的同相为涂句了聚甲基硅氧 烷的纤维，但是这种方法只适于半定量分析。之后改用2 ，4 吡啶的甲醇一二氯甲烷溶液 进行萃取，并通过增加分流比解决了猝火现象，色谱柱为1 0m x 0 1 8m m i d o 4g m 的 d b 1 7 0 1 硅酸毛细管柱( 用内径只有0 1 8m m 的毛细管柱可以提高灵敏度和分析速度) 。 1 2 7 气相色谱一质谱联用( g c m s ) 许燕娟等【1 6 】用g c m s 测定烟草中烟碱、降烟碱、麦斯明、二烯烟碱、新烟碱等8 种主要生物碱，方法是先将烟草样品用氨水超声提取，再用二氯甲烷甲醇( v v = 3 ：1 ) 萃墩，经d b 5 m s 毛细管柱分离，由g c f i d 检测定量，m s 定性，该方法前处理操作 简单，完成一个样品的分析只需约2 0m i n ，重现性好，回收率较高，便于对不同产地、 不同等级烟叶的组成和含量进行比较、归纳。 4 第1 章综述 1 2 8 高效液相色谱法( h p l c ) h p l c 具有快速、分辨率高、重现性好等特点，是分析烟草中生物碱的重要手段。 t r o j e 等1 1 7 】用固相萃取法( s p e ) 提取烟草中的生物碱，h p l c u v 定量分析烟碱和降烟碱 的含量，流动相为乙酸甲醇溶液，检测波长2 5 4n m 。采用s p e 对样品进行预处理，快 速、重现性好、省时、经济。 1 2 9 离子色谱( i c ) 烟碱分子中含有2 个氮杂坏和1 个不对称碳原子，是弱二级碱，最多可以捕获2 个 质子，囚此烟碱可以以游离念、单质子念和双质子念3 种形态存在。当p h 5 0 时，烟 碱主要以双质子化状念存在。基于炯碱的这种性质，c i o l i n o 等i 8 1 采用反相离子对色谱 法分析了鼻烟和卷烟巾的炯碱，结果满意。 1 2 1o 超临界流体色谱( s f c 、) s f c 是以超临界流体作流动相，以同体吸附剂或键合到载体卜的高聚物为固定相， 其分离机理与g c 和l c 是一样的，是分析难挥发、易热解物质的有效方法。w u 等 以氯仿为萃取剂，采用s f c 与i m d ( i o nm o b i l i t yd e t e c t o r ) 联用分卡厅了市场上流通的卷烟 和烟叶中的烟碱。用超临界流体色潜分析烟草中的则碱、烟碱代谢物及其它的乍物碱足 一种非常有发展前途的分析方法。 1 2 11 毛细管电泳( c e ) c e 具有高效、高分辨率、分析时j 1 i j 短、消耗样品少、选择性高等优点，且对环境 友好。r a l a p a t i 等俐在19 9 7 年第一次采用c e 法测定烟草中的生物碱，分析在2 5m m o l l 1 的磷酸钠缓冲液( p h = 2 5 ) 中进行，采用u v 检测器，检测波长为2 6 0a m ，烟碱与其它 成分的分离比较好，这个方法被用于监测炯草产品中的烟碱含量。 1 3 盐酸洛美沙星 喹诺酮类药物是一类全合成的广谱抗生素。目前，国内滥用抗牛素的情况非常普遍。 按标准，抗菌药使用比例应占整个药品使用量的2 0 以下，但在我国，抗菌药使用比 例普遍超过了4 0 ；而滥用抗菌药物所产生的最直接后果便是细菌耐药性同益增强， 长此以往，患者将血i 临无药可用的局面。此外，滥用抗菌药也会容易造成菌群紊乱，导 致药源性疾病发生，从而引起更难以治愈的疾病。 气 河北人学理硕十。何论文 盐酸洛美沙星是新一代喹诺酮类广谱抗菌素，对革兰氏纠性菌、革兰氏阳性菌及部 分厌氧菌、金黄色葡萄菌、流感杆菌及大肠杆菌都有很强的杀火作用，对尿路感染及呼 吸系统效果很好，目前已占世界抗感药品销售市场的1 5 ，结构见图1 2 。由于喹诺酮 分子有较大的共轭体系和平面刚性结构，具有较强的内源荧光，并且分子中含有相邻的 羧基和酮基，容易与金属离子形成络合物引起药物的荧光猝灭。文献报道的测定盐酸洛 美沙星的方法有紫外光度法，荧光分光光度法。 0 h c r3 c o o h ，h c 【 图i 一2 盐酸洛美沙星的结构 f i g 1 2 t h es t r u c t u r eo fl o m e f l o x a c i n 1 3 1 紫外光度法在测定盐酸洛美沙星中的应用 普通u v 法是通过测定被测物质在特定波长处或一定波长范围内的光吸收度，对 该物质进行定性和定量分析的方法。其基本原理是单色光辐射穿过被测物质溶液时，被 该物质吸收的量与该物质的浓度和液层的厚度( 光路长度) 成正比，即朗伯比尔定律。 紫外光度法在测定盐酸洛美沙星中的应用见表1 2 。用紫外光度法测盐酸洛美沙星的灵 敏度高，可达1 0 4 1 0 西m g l ：准确度高，相对标准偏差为0 4 2 4 ，简单，快 速，便于普及。此法只适于大类成分的含量测定，如总黄酮、总蒽醌、总生物碱等。但 与荧光光度法比较，其专属性不强、干扰较大，灵敏度一般较低，所以测定受到一定的 限制。 第l 章综述 1 3 2 荧光光度法在测定盐酸洛美沙星中的应用 荧光光度法指某些物质受i 叮见光照射激发后能发射出比激发光波长较长的荧光。当 激发光强度、波长、所用溶剂及温度等条件固定时，物质在一定浓度范围内，其发射光 强度与溶液中该物质的浓度成j f 比关系。荧光共振能母转移是一种通过荧光物质l 自j 发生 荧光能量传递进行分析的实验方法。利用胶束的三维结构特性并利用与能最转移体系使 其的应用范围及灵敏度进一步提高，与常规荧光法和共振光散射相比具有受瑞利散射光 干扰小，重现性好的特点，该方法已被广泛应用于食品工j 瞅生物、药物研究等领域。 光度分析具有简单、快速、灵敏的特点。因此历年来一直受到广大分析检验工作者 的关注，而且仪器操作简单、便宜、易于推广。所以开发某些物质的光度分析法，对于 样品的现场分析尤为重要。荧光光谱分析法除了具备光度分析的优点以外，还具有比紫 外可见光淆分析法灵敏度更高，专属性更强，干扰更小，选择性更好的优点。荧光光 度法在测定盐酸洛美沙星中的应用见表1 3 。 表i 一3 荧光光度法在测定盐酸洛荚沙星中的应h i t a b1 3t h ep h o t o m e t r i ca p p l i c a t i o no fl o m e f l o x a c i n 河北人王哩硕十学位沦文 1 3 3 化学发光法在测定洛美沙星中的应用 连宁，唐江宏，贺香红等例利用洛美沙星( l f l x ) 在紫外光照射下易发生光化学降 解反应，光解产物与t b 3 + 形成的配合物对c e ( i v ) s 0 3 2 。化学发光体系有较强的增敏作用， 与光解前体系的化学发光强度相比，增大近5 倍。据此建立了光化学能最转移化学发 光法测定l f l x 的新方法。该方法的线性范围为8 o l o 。1 0 2 o 1 0 一m o l l ；检出限为 2 5 1 0 。1 0 m o l l ；相对标准偏差( n = 1 1 ，c s = 5 0 x 1 0 。8 m o l l ) 为2 8 。利用该法测定了 生物样品中l f l x 的含量，结果满意。并在实验的基础上，对其光化学增敏反应机理进 行了合理的推测。郭玉华，郁有祝，周杰等【3 1 1 ，在酸性条件下，利用赫酸洛荚沙星对 c e ( i v ) n a 2 s 0 3 微弱化学发光体系具有很强的增敏作用，据此建立了测定盐酸洛美沙星 的新方法，该方法对盐酸洛美沙星的榆出限为0 0 0 5 0m g l ，线性范幽是0 0 1 1 0 0 m g l ，相对标准偏差( n = 1 0 ，c = 1 0m g l ) 为1 1 ，对盐酸洛美沙星的两种胶囊的测 定结果较为满意，四l 收率在9 6 1 0 6 之问。李建军，剧杰，张勋【3 2 1 等在酸性条件下 利用盐酸洛美沙星可与c e ( i v ) 产生化学发光反应，罗月+ 明6 g 射该反应有较强的增敏 作用。据此建立了流动注射化学发光法测定盐酸洛美沙星的新方法。该方法的线性范 幽为0 1 0 1 5 0m g l ，检出限为o 0 6m g l ，相对标准偏差( n 等1 1 ，c = 1 0 0m g l ) 为1 2 ，回收率为9 5 1 0 2 ，可用于胶囊中盐酸洛荚沙星含量的测定。周杰，李建军， 屈凌波等i 3 3 j 在碱性条件下用虢酸洛美沙星对l u m i n 0 1 k 1 0 4 钙黄绿素发光体系有强烈的 抑制作用。建立了流动注射化学发光抑制法测定盐酸洛美沙星的新方法。该方法的线性 范围为1 0 2 0m g l ，检出限( 3 0 ) 为0 3 0m g l ，相对标准偏差( n = 1 0 ；p = 5 0r a g l ) 为0 9 。用于胶囊中赫酸洛美沙星的测定，回收率为9 5 1 0 6 。 1 4 展望 提取及分析烟草中生物碱的方法各有优缺点。在烟碱的工业化生产过程中，要获得 纯度较高的产品的同时考虑到对环境的影响，超临界流体法有较好的发展前景，另外， 液膜法因可得到高纯度的产品而具有广泛的应用前景。在对生物碱的分析测定中，光度 法的应用较少，尤其足荧光分析的应用更少。因此建立快速简便的荧光分析法显得尤为 重要。喹诺酮类药物的分析测定大多足用色谱法，但对一些简单样品的分析完全可以用 光度分析代替。 第2 章荧光黄荧光法测定香炯中尼 j 的含艟 第2 章荧光黄荧光法测定香烟中尼古丁的含量 摘要：在p h = 7 3 的水溶液中，尼古丁与荧光黄( f l ) 由于静电吸引而发生缔合反应， 使荧光黄l e x ) , e m = 4 5 0 5 1 0n m 的荧光增强，据此建立了荧光黄荧光光度测定尼古丁的 新方法，尼古丁含量在0 2 8 0m g l 时，荧光强度与尼古丁的含量成线性关系，方法 检出限为0 1 2m g l ，可用于各种不同品牌香烟中尼古丁含量的测定，平行6 次测定回 收率为9 1 1 1 0 8 8 ，相对标准偏差为1 8 4 8 ，结果满意。 关键词：荧光黄；荧光法；尼古丁；香烟 2 1 引言 烟碱即尼古丁【3 ( 1 甲基2 吡咯烷基) 吡啶】分子式为cx o h l 4 n 2 ，足一种主要存在于 烟草中的生物碱，在烟草中的含量一般为1 2 ，占烟草总植物碱的9 5 ；是导致人 吸烟上瘾的主要冈子。动物诱变实验证明尼古丁具有协同致癌作用，而其业硝化衍! l 物 是确定的器官专属性致癌物。细胞实验表明高剂量的尼古丁会诱导c h o 细胞染色体畸 变率和姐妹染色单体交换频率显著提高，提示尼古丁可能具有一定的遗传毒性。尼古丁 对一些生物情活性存在显著的影i i j j 3 4 , 3 5 】。 我困足香烟，卜产大国，也足香烟消费人国。测定香烟中尼古丁含黾具有重大的经济 和社会意义。近年来，尼古丁的分析方法不断发展。除传统的化学法和容量法之外i l 】， 电化学法【3 6 】，原子吸收光谱法【3 7 1 ，气相色潜法【3 8 】，分光光度法【3 9 】，高效液相色谱法【4 0 1 都曾用于测定尼古丁，用荧光黄染料荧光测定尼古丁含量的方法未见报道。研究表明 4 1 , 4 2 1 通过盐酸浸提、二氯甲烷萃取可从香烟中将尼古丁分离，分离后的尼古丁可用荧光 黄染料直接荧光法可以进行尼古丁含量的测定，该测定具有以下优点：分析速度快，方 法简便，准确度好，灵敏度高。 2 2 实验部分 2 2 1 仪器与试剂 r f 5 4 0 荧光光度计( 日本岛津) ；p h s 3 c 型酸度计( 上海雷磁分析仪器厂) 。 2 0 0m g l 标准尼古丁水溶液( n c t ) ：用l - 尼占丁( 纯度高于9 9 ) 准确配置避光保 存，用时适当稀释：2 o 1 0 击m o l l 荧光黄水溶液( f l ) 。所用试剂均为分析纯，水为二 河北人。理。z 硕十学位论文 次蒸馏水。 2 2 2 实验方法 于1 0m l 比色管中，依次加入2 0m l2 0 x1 0 击m o l l 荧光黄溶液，0 4m lo 0 0 1m o l l n a o h 溶液，适量的各品牌香烟尼古丁提取液或尼古丁标准溶液，用二次去离子水稀释 至刻度。震荡摇匀，静置2 0m i n 后，将试液置于1 0c m 石英比色皿中，在增益4 ，激 发波长为4 5 0n r l l ，发射波长5 1 0n l n 处测定其荧光强度或扫描荧光光谱，同时做试剂空 白，激发和发射狭缝均为1 0n m 。 2 3 结果与讨论 2 3 1 荧光光谱 按实验方法绘制荧光黄及尼古丁与荧光黄荧光光谱见图2 1 。由图可知n c t - f l 曲 线与f l 曲线比荧光增强，说明n c t 能与f l 反应，使5 1 0n n l 处的荧光强度增加，试 验表明其增加程度与n c t 浓度呈直线关系，据此可建立f l 荧光测定尼古丁含量的新 方法。 图2 1荧光黄利尼古j 荧光光谱图 f i g 2 一l f l u o r e s c e n c es p e c t r ao ff la n dn c t k x k m = 4 5 0 5 1 0n m ；c f l = 2 0 x 1 0 m o l l ；c n c t = 2 0 m l ( 1 ) f l ； ( 2 ) f l + n c t 第2 章荧光黄荧光法测定香烟中尼- 山丁的含f 遗 2 3 2p h 的影响 按实验方法操作改变溶液酸度，结果见图2 2 可知，p h 在6 9 7 4 时体系荧光强 度最大且不受酸度影响，囚此本试验选择测定最佳酸度为7 3 。尼古丁结构具有两个含 氮杂坏( 吡啶环和吡咯环) 的官能团均属于叔胺型，所以易被质子化，碱性较强，荧光 黄属于酸性阴离子染料，因此两者很容易由于静电引力作用形成离子对络合物足荧光强 度增强。 4 0 3 5 3 0 与2 5 2 0 1 5 1 0 5 8 6 26 67 0 7 4 p h 图2 - 2 p h 对荧光黄体系的影响 f i g 2 2 t h ee f f e c to f a c i d i t yo nt h es y s t e m k 。k m = 4 5 0 5i0n m ；c f l = 2 0 x 10 m o i l ；c n c t = 8 0m g l 2 3 3 缓冲溶液的选择 在p h = 7 3 时分别配置b r 缓冲液、t r i s h c l 缓冲液、k o l t h o f 缓冲液进行各种不 同用黾的实验，发现用这些缓冲液时导致空自值荧光强度增火，而促使测量体系中a f 值减小，导致测量灵敏度降低，故本实验不使用缓冲液。 2 3 4 荧光黄用量的选择 按实验方法操作改变荧光黄的用量，结果发现，荧光黄用量在1 5 3 5m l 时体系 荧光强度最大且稳定。故本试验选定荧光黄用量为2 0m l2 0 x 1 0 击m o l l 溶液，此时溶 液中荧光黄浓度为2 0 1 0 m o l l 。 河北人学理学硕 ：学何论文 2 3 5 反应时间的影响 按实验方法操作，测定不同反应时i q 下荧光强度，可见，当反应时间在1 0m i n 时， 已经反应完全且荧光强度稳定，6 0m i n 内荧光强度不变，本试验控制反应时问为2 0m i n 。 2 3 6 干扰试验 测量5 0m l 的尼古丁时1 0 倍浓度的己烯、二硫化碳、丁醛、2 ，5 二甲基呋喃、 甲苯、辛酮、环戊酮、乙酸、糖醛、氯代丙酮、l ，2 一环氧十四烷、1 ，2 ，4 一三甲基苯 乙酮；1 0 0 倍的n 0 3 、c i 、s 0 4 厶、i 。；5 0 倍的p b 2 + 、m 9 2 + 、c a 2 + ；2 0 倍的c 0 2 + 、l i + ； 1 0 倍的c u 2 + 、f e 2 + 均不干扰测定。 2 3 7 工作曲线和检出限 在实验选定的最佳条件下，改变尼古丁标准液的用量，以荧光差值( z f ) 与尼古 丁浓度绘制标准曲线，见图2 3 。其线性回归方程为彳f = 一1 0 8 7 1 + 9 1 6 6 0 c ( c ：m g l ) ， 相关系数厂= o 9 9 7 5 ；尼古丁浓度在o 2 8 0m g l 服从比尔定律；测定1 1 份空白溶液， 按3 a k 法计算该方法检出限为0 1 2m g l 。 n e t ( m g l ) 图2 - 3 荧光素测定尼古丁的一i ：作曲线 f i g 2 3 t h ed e t e r m i n a t i o no f n i c o t i n ew o r k i n gc u r v eo ff l 2 3 8 试样的测定 准确称取0 5 0g 某一品牌香烟烟丝，置于1 0 0m l 锥形瓶中，加入2 5m l o 5m o l l 盐酸，在不断震荡下煮沸5m i n ，冷却后用6 0m o u l 氢氧化钠中和至p h = 1 0 ，加热煮 第2 章荧光黄荧光法测定香州中尼。 f j 的含馈 沸，趁热过滤，用o 0 5m o l l 盐酸溶液清洗残渣2 3 次，将沈液合并于滤液中，将浸 取液置于1 5 0m l 分液漏斗，加入1 5m l 二氯甲烷萃取2 次，每次震荡5m i n ，合并二 氯甲烷溶液，然后依次用1 5m l ，1 0m l 二次去蒸馏水沈涤，洗至p h - - 1