（有机化学专业论文）化妆品中多种染料组分同时检测方法研究.pdf

中国农业大学硕十学位论文摘要 摘要 染料是色素的一大类，染料的发现和使用历史悠久。古代人们就已学会提取和应用天然染料， 现代，随着有机合成技术的发展，越来越多的有机合成染料被发明和使用。部分合成染料被证明 有毒性，化妆品中添加的一些染料亦被证明有至敏性、致突变性以及致癌性。欧盟和我国的化妆 品法规均对化妆品中添加的染料进行了限制性使用的规定。 本课题研究了高效液相色谱一二极管阵列检测器对化妆品中的多种染料同时检测的方法。采 用c 1 8 柱，以甲醇和0 0 1 m 的乙酸铵为流动相梯度洗脱，用二极管阵列检测器检测，以保留时问 定性。并以紫外吸收光谱图辅助定性，以外标法定量。检测波长为2 3 0 r i m ，1 5 r a i n 内对9 种染料 进行同时测定，且各化合物都达到基线分离( r i 5 ) 。采用超声提取的方法处理样品对提取溶 剂和时间进行了选择，确定用甲醇一乙酸铵溶液( 体积比2 ：1 ) 作提取溶剂，超声提取2 0 m i n ，提取 后的清液经0 4 5 p , m 微孔滤膜过滤，滤液2 4 h 内上机检测。该方法简单、快速，能有效提取和分 离测定化妆品中9 种染料经测定，方法的平均回收率( 1 f 8 ) 为8 1 0 1 0 5 6 ；相对标准偏差 r s d 为0 7 9 4 8 8 ；检出限( s n = 3 ) 为o 0 1 0 2 p g m l , 定量限( s n = 1 0 ) 为0 0 4 0 6 p g m l 。 通过对3 0 种不同状态，不同品种的国内外化妆品进行检测，效果良好。 本课题建立了同时检测9 种染料的系统方法，方法的线性系数、回收率、相对标准偏差等各 项参数满足实际样品检测需要。通过对多种化妆品实际样品的检测，结果表明，高效液相色谱一 二极管阵列检测器同时检测9 种染料的分析方法可以作为相关检验部门的参考方法。 关键词：高效液相色谱，二极管阵列检测器，染料，化妆品，超声提取 中国农业大学硕士学位论文摘要 a b s t r a c t 1 1 1 ed y ei sak i n do f p i g m e n t s i tj 5o l d - l i n et od i s c a n du i n a r f i f i c i a ld y e s i na n c i e n tt i m e s , t h eh u m a nb e i n g sh a dk n o w nh o wt od i s t i l la n da p p l yi n a r t i f i c i a ld y e s w i i hd e v e l o p i n go fo r g a m c s y n t h e t i ct e c h n o l o g y , m o i a n dm o l 霉a r t i f i c i a ls y n t h e t i cd y e sh a v eb e e ni n v e n t e da n du s e dw i d e l y s o m e o ft h ea n i 6 d a ls y n t h e t i cd y e sh a v eb e e np r o v e dt ob en o x i o u sw h e nt h e ya r eu s e da sc o m p o n e n t si n m e t i c s t h er u l e sg o v e r n i n gc o s m e t i op r o d u c t si nt h ee u r o p e a nu n i o na n dt h er u l e sg o v e r n i n g c o l e t i cp r o d u c t si nc h i n ar e g u l a t ed y e sa sa d d i t i v ei nc o s t a c t i e s ai i c wa n a l y t i c a lm e t h o db a s e do nh i g hp e r f o r m a n c el i q u i de h r o m a t o g r a p h y p h o t o d i o d ea r r a y d e t e c t i o n ( h p l c ，p d a ) h a sb e e ne s t a b l i s h e df o r t h es i m u l t a n e o u sd e t e r m i n a t i o no fn i n ed y e si n c o s m e t i c s a t i e rt h ec o m n e t i e sw a st r e a t e db yu l h a s o r i oe x t r a c t i o nu s i n gm e t h a n o l - 0 o l m o i ln 1 4 a c a q u e o u ss o l u t i o n ( 2 ：1 , v v ) , t h eo b t a i n e dl i q u i ds a m a p l ew a sa n a l y z e db yh p l cu s i n gw a t e r ss y m m e t r y c nc o l u m n “6i d x 2 5 0 m m 5 9 m ) m e t h a n o l - 0 0 l m o l ln h 4 a ca q u e o t l ss o l u t i o nw a su s e da sm o b i l e p h a s ef o rg r a d i e n te i n t i o n n i n ed y e s mc o m p l e t e l ys e p a r a t e dw i t h i n1 5m i l l p d as p e c t r u m ，u s e d f o ra s s i s t a n ti d e n t i f i c a t i o n e x t e r n a ls t a n d a r dm e t h o dw a sa p p f i e df o rq u a n t i t a t i o n ，t h ea v c l l 【g e r e c o v e r i e s ( n = 8 ) w e r ef r o m8 1 0 t o1 0 5 6 w i t hr e l a t i v es t a n d a r dd e v i a t i o n sb e t w e e n0 7 9 a n d 4 8 8 t h ed e t e c t i o nl i m i t s ( s n = 3 ) w e r ei nt h er a n g eo f 0 0 1 0 2 9 9 m l t h em e t h o di ss i m p l e r a p i d ，a c c m a t oa n ds u i t a b l ef o rt h ed e t e r m i n a t i o no f n i n ed y e si nc o s t a e t i cp r o d u c t s t h ea n a l y t i c a lm e t h o df o rt h es i m u l t a n e o u sd e t e r m i n a t i o no fn i n ed y e si ne o s m e t i e sh a s a c c o m p l i s h e d t h ep a r a m e t e ro f l i n e a rc o e f f i c i e n t , a v e r a g er e c o v e r i e sa n dr e l a t i v es t a n d a r dd e v i a t i o n s 戤s a t i s f l e dw i 也d e t e c t i n gc o s m e t i cs a m p l e s 办em e t h o dw a su s e d 幻d e t e c t $ o m ec o s m e t i cs a m p l e s , t h er e s u l t ss h o w e dt h a tt h i sm e t h o dh a sb e e ne f f e c t i v ef o rt h ed e p a r t m e n tt od e t e c tc o s m e t i cr o d u e t s k e y w o r d ：h i g hp e r f o r m a n c eh 删dc h r o m a t o g r a p h y ( h p l c ) ，p h o t e d i o d ea r r a yd e t e c t i o n ( p d a ) ，d y e s ， c 0 e t i c s u l t r a s o n i ce x t r a c t i o n 独创性声明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发 表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国农业大学或其它教育机构的学位或证书 而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明 确的说明并表示了谢意。 研究生签名：海嫡 时间： 2 0 q 年月，日 关于论文使用授权的说明 本人完全了解中国农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留 送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复 制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、 传播学位论文的全部或部分内容。 ( 保密的学位论文在解密后应遵守此协议) 研究生签名：许娟 时间： 如0 7 年月，6 日 导师签名： 杏，啪 时间：扣叫年5 月易日 中国农业大学硕士学位论文第一章概述 1 1 研究背景与意义 第一章概述 染料的安全性问题近些年经常见诸报端，引起社会各界不同程度的关注，也成为各国的研究 热点之一染料的产品种类多，应用范围广，在纺织品、电子产品、食品以及化妆品中都有添加。 关于染料对人体的伤害，早在1 8 9 5 年德国已发现有案例，据医生r e h n 报道，在品红制造 工厂中发现有人得了膀胱癌。1 9 7 4 年，美国职业安全与保健管理局( o s h a ，t h eu s o c c u p a t i o n a l s a f e t ya n dh e a l t h a d m i n i s t a t i o n ) 指明1 4 种有机化合物为致癌物，其中包括7 种染料中间体。在 日本也有类似的限制，并成立了染料对于生态影响的研究机构。1 9 9 4 年7 月1 5 日德国政府颁布 了禁用在特定条件下能分解释放出2 0 种致癌芳香胺的偶氮染料的法令( 德国日用品法第二次修 正案) ，欧共体在其指令6 7 1 5 4 8 附录中不仅重申这个禁令，而且增加了2 种致癌芳香胺，此举 在世界各国产生了强烈的反响。1 9 9 6 年4 月1 日该法令正式生效后，各国的反应更加强烈，禁 用染料的范围随着各国环境和生态保护要求的不断提高进一步拓宽l l j 。2 0 0 2 年9 月“日，欧盟 委员会发出了第六十一号指令，禁止使用在还原条件下分解产生2 2 种致癌芳香胺的偶氮染料， 并规定2 0 0 3 年9 月1 1 日之后在欧盟1 5 个成员国的市场上销售的欧盟自行生产或从第三国进口 的有关产品中所含有的会分解产生2 2 种致癌芳香胺的偶氮染料的含量不得超过3 0 p p m 的限量。 2 0 0 3 年1 月6 日，欧盟委员会进一步发出2 0 0 3 年的第三号指令，规定在欧盟的纺织品、服装和皮 革制品市场上禁止使用和销售含铬偶氮染料，并于2 0 0 4 年6 月3 0 日生效。欧盟在不到半年的时 间内连续二次发出了禁用部分偶氮染料和含铬偶氮染料的指令不仅是其首次将禁用染料形成为 欧盟所有成员国的统一行动，也反应了国际市场上不断竖起“绿色壁垒”的新动向j 。 2 0 0 5 年8 月，由欧盟各成员国的专家组成的委员会一化妆产品消费科学委员会( s c c p , s c i e a f i f i c c o m m i t t e e o n c o n s m n e r p r o d u c t s ) 发布了染发剂中染料禁用草案，该草案列出5 1 种化合 物，包括染料中间体如2 ，3 一萘二酚、2 ，4 二氨基二苯胺，三芳甲烷类染料如碱性艳兰b 、碱性 品红以及偶氮类染料如丽春红s x 、苏丹红g 等( 见附录1 ) 。该草案发布以后化妆品产业界提交 了有关染料的安全性文件供s c c p 评估，这些文件涉及染料的物理特征和遗传毒性等方面。2 0 0 6 年7 月2 0 日，欧委会宣布禁止使用草案中的2 2 种染料( 见附录2 ) ，关于禁用的2 2 种染料相关 产业界未提交任何安全报告。 我国于2 0 0 5 年8 月颁布了9 6 种化妆品中允许使用的染料，并对各种染料在化妆品中的允许 使用范围和限定使用情况做了明确说明，如对染料中问体间苯二酚的适用范围限定在染发剂、发 露和香波中，限量标准为染发剂中添加量不超过5 ，发露和香波中不超过0 5 。“化妆品卫生 规范”中针对染料的法定方法只能检测其中8 种氧化型染料 3 u 。存在着大量的空白，急需建立相应 的检测方法，而目前的检测方法根本无法满足监督的需要。因此，化妆品中多种染料同时测定方 法研究这一课题具有熏要的现实意义。 中国农业大学硕l - 学位论文第一章概述 1 2 染料概要 染料是色素的一大类，色素的特征在于具有在可见光区( 4 0 0 - 7 0 0 h m ) 吸收或发射光的能力。 从欧洲( 西班牙的a l t a m i r a 、法兰西的g r o t t oc h a u v c t ) 、非洲( 津巴布韦) 、古埃及洞穴的岩画 中以及中国西安的兵马俑都可反映出，人们从史前年代就已应用天然色素。史前时期，人们已能 用来自植物和动物( 相对较少) 的天然物质染毛皮、纺织物和其他物质。古埃及的象形文字曾描 述了如何提取及应用天然染料。 染料多为有机合成色素，其分类较广，根据化学结构分类可分为多烯与多次甲基染料、二芳 次甲基与三芳次甲基及其氮杂同系物、氦杂轮烯【1 8 讹和物、硝基及皿硝基染料、偶氮染料、羰 基染料及硫化染料。其中偶氮染料在品种和数量上远远超过其它类染料，是品种晟多、产量最大 的一类染料。偶氮染料可分为阴离子单偶氮染料、分散偶氮染料、冰染染料、阳离子偶氮染料、 金属络合单偶氮染料、直接染料以及活性偶氮染料。也有将其简单分为单偶氮、双偶氮、三偶氮、 四偶氮染料。染料也可以着色为基础来分类，即按应用方法或应用领域来分类。根据其被染色的 基质是蛋白质纤维、纤维素纤维或聚酰胺纤维，将染料分为阴离子染料、直接染料和分散染料 染料在以上两种分类上有时是重叠的，某一类化学结构的染料仅含有一种应用分类的染料是极少 的，反之亦然。 合成色素是相当大的一类有机化学品，不仅可能对环境，而且对人也可能产生不良影响。1 9 7 4 年国酾i 社会建立了染料制造业生态学和毒理学协会，简称e t a ) 协会的宗旨是鉴定和评估由色 素及其中间体引起的潜在的急性和慢性中毒的风险。e t a d 早期的研究结果，急性口服毒性实验 表明：在4 4 6 1 种色素中，有4 4 种( 约1 ) 的染料有毒性。人们在几十年前就已认识到偶氮染 料有潜在毒性，奶油黄在五十多年前由于发现有癌诱变性，从而不再如其名称那样用于奶油着色。 研究人员也发现刚果红所在的联苯胺系的偶氮染料有癌诱变性。上世纪五十年代流行病学研究发 现接触联苯胺的工作人群膀胱癌病例增多p j 。 1 3 化妆品中染料简述 化妆品是一种多组份的混合物，人体和化妆品直接接触，有的是长期性地连续性地接触，因 此化妆品中添加成分的安全性至关重要。化妆品中的口红、眼影、胭脂等彩妆以及染发剂中均添 加有不同种类的染料。近几年由于染发剂的发展，染发已成为一种流行时尚，使用染发剂的消费 群体在不断扩大，关于染发荆的安全问题也成为热门话题。 染发剂可分为氧化型( 永久性) 染发剂，直接型( 暂时性或半永久性) 染发剂，金属盐类染发 剂、天然植物型染发剂等。其中氧化型染发剂以其染色效果好，色调变化宽、维持时间长等诸多 优点而成为最受欢迎的染发剂0 4 。氧化型染发剂的染发原理是在氧化剂作用下，苯胺类物质在染 色过程中被氧化为染料中间体，该中间体又在偶合剂( 苯二酚类) 的作用下发生偶合反应后产生颜 色而染发。用得最多的显色剂有邻苯二胺( 用于染成金黄色) 、间苯二胺( 用于染成紫色) 、对苯二胺 ( 用于染成棕黑色) 州。市售商品采取两剂形式，第1 剂主要成分为氧化染料、碱、表面活性剂等， 氧化染料中有自身的氧化而发色的氧化前驱体( 邻位和对位苯二胺、氨基酚及其衍生物) 和与染料 2 中国农业大学硕士学位论文第一章概述 前驱体组合而形成各种色调的偶合物之问位的苯二胺、氨基酚类、多元酚类，配合碱类是为了提 高染发效果，更有同时将头发中的黑色素颗粒氧化分解使头发达到色调明快的目的。第1 i 剂中的 氧化剂主要是过氧化氢，由于过氧化氢容易分解，所以又配有螫合剂和p h 调整荆等阁。 由于染发剂成分复杂，在美化生活的同时，对健康也会产生一定危害。近年来，实验研究和 流行病学调查表明，染发剂的某些主要成分可能具有致d n a 损伤及致突变作用，对机体会产生一 定的遗传毒效应，并可能与多种肿瘤的发生有关用。有文献报道将染发剂中染料2 ，4 _ 二氨基甲苯 和2 ，4 - - - 氨基苯甲醚喂给动物。会产生致癌作用。研究表明染发剂可使动物肿瘤的发病率增高， 染发剂染毒后的小鼠可以随染发剂类型、染毒部位、施药剂量和时间间隔不同而出现不同类型肿 瘤嘲有研究发现染发剂中某些芳香胺成分可以使膀胱癌、皮肤癌和胰腺癌的发病率增加。王筱 芬等人对家兔经皮进行染发剂染毒实验，发现其肝、脾、淋巴结p 5 3 、p a q a 及b e l 2 免疫组化试 验阳性，3 种组织细胞中出现异倍体细胞群，表明家兔经染发剂染毒6 个月，其肝、脾、淋巴结组 织细胞已发生潜在恶变1 7 i 。另有大量资料表明，绝大部分氧化型染发剂的氧化染料( 氧化前体及偶 合物) 和氧化剂具有致突变性。自1 9 7 5 年a m e s 实验室发现8 9 的氧化型染发剂具有致突变作用后， 染发剂的致突变性研究就引起了人们的关注。广东省疾病预防控制中心的谢晓萍等在2 0 0 5 年按 化妆品卫生规范( 2 0 0 2 年版) 对送检染发剂样品进行急性眼刺激试验、皮肤变态反应试验、鼠 伤寒沙门菌回复突变试验等检测。共检测国内外不同化妆品生产企业提供的染发剂样品9 0 份( 以 氧化型染发剂为主) ，结果检测出不合格样品2 6 份，不合格率为2 8 8 9 ，说明部分染发剂存在潜 在的不安全性嘲。 1 4 染料分析方法综述 文献中报道染料的分析方法有薄层色谱法( 1 1 ) 【9 , 2 9 , 3 0 3 6 、毛细管电泳法( c e ) 【1 0 ，1 1 1 、高效 液相法( 玎岣【1 2 - 1 删捌、高效液相一质谱法( h p l c - m s ) 1 8 - 2 0 , 3 7 , 3 & 4 0 、气相色谱法( g c ) h 丑, 2 2 , 3 2 , 3 9 1 、 气相色谱一质谱( g c - m s ) 2 3 - 2 l 3 3 川以及毛细管电泳一质谱法( c e - m s ) 2 s l 等。针对化妆品中染料 的分析方法研究，国内外研究者主要集中于染发剂中染料的检测，其中又以氧化型染料所占份 额最大。欧盟和日本规定染发剂检验方法采用薄层色谱法。上世纪七八十年代主要使用t l c 法 检测，现在染发剂分析主要使用g c 、h p l c 、g c - m s 及h p l c m s 等。t l c 在染料分离和定性 方面效果较好，但在精确定量方面存在一定困难。g c 法侧重于检测一些可气化的染料及中间体， 也可通过衍生化法将一些极性大、沸点高的化合物转化成低沸点、可气化的衍生物，同时增强 了仪器的响应值，从而提高方法的灵敏度和准确度。由于大多数染料成分的强极性、低挥发性及 不稳定性，采用h p l c 法较为理想。c - c - m s 及h p l c - m s 在通过保留时间定性后，经质谱仪进 一步确证，可防止出现假阳性结果。 欧盟化妆品规范中采用t l c 法检测1 1 种 2 9 1 ( 邻苯二胺、间苯二胺、对苯二胺、3 , 4 - - - 氨基甲 苯，2 , 4 - - - 氨基甲苯、2 ，5 二氨基甲苯、2 冉二氨基苯酚、对苯二酚、a 萘酚、1 , 2 , 3 - = 羟基苯、 问苯二酚) 氧化型染发剂中染料，在2 0 x 2 0 c m x 0 2 5 m m 规格的硅胶板上，在氮气保护下，用以 下四种洗脱液之一展开，晾干后显色，根据r 噬鉴别1 1 种染料。 1 ) a c e t o n e - c h l o r o f o r m - t o l u e n e ( 3 5 ：2 5 ：4 0 b y v 0 1 ) 丙酮氯仿甲苯 2 ) c h l o r o f o r m c y c l o h e x a n e - a b s o l u t e e t h a n o l 一2 5 a m m o n i a ( 8 0 ：1 0 ：1 0 ：1b y v 0 1 ) 3 中国农业大学硕士学位论文 第一章概述 氯仿环己胺无水乙醇2 5 氨 3 ) b t 一i m t a n - 2 o l w a t e r ( 5 0 ：2 5 ：2 5b y v 0 1 ) 苯2 丁醇一水 4 ) n - b u t a n o l c h l o r o f o r m r e a g e n tm ( 7 ：7 0 ：2 3b vv 0 1 ) 正丁醇氯仿彻脚tm 史晓凡、王景翰、张忠伟【卿三人采用t l c 法分析酸性和阳离子染料。他们用相关系数法从 多种展开剂中优选出酸性、阳离子染料薄层色谱分析的最佳展开剂。在相关系数最小的两种展 开剂v ( 正丁醋9 ：v ( 冰乙酸) ：v ( 水) f f i 2 ：1 ：5 和v ( 乙酸乙酯) ：v ( 冰乙酸) ：v ( 水 = 5 0 ：1 5 ：1 0 中，相同颜色的毛、腈纶纤维上的酸性、阳离子染料提取液及不同厂家生产的同一种染料均得到 了很好的鉴别。样品处理方法：将固体染料用v ( d m f ) ：v ( 甲酸户l ：1 的混合液配制成质量浓 度为l g l 的染料液。毛、腈纶纤维上的染料分别用v ( d m f ) ：v ( 甲酸户l ：1 的溶液和甲酸提取 得染料提取液。将染料液和染料提取液分别点到薄层板上，晾干后，分别在上述2 种展开剂中进行 色谱分析结果显示，2 5 种染料和2 6 种纤维样品上的染料在以上两种展开剂系统中得到了很好 的分离。此两种展开剂不仅可将不同的染料及同种颜色纤维上的染料一一区别开，而且可对不同 产地的同种染料进行很好的鉴别。 我国“化妆品卫生规范 中规定了8 种( 邻苯二胺，对苯二胺、对苯二酚、问苯二酚、对氨基 酚、盐酸问氨基酚、4 - 甲胺苯酚、2 , 5 - 二氨基甲苯) 氧化型染料的高效液相色谱检测方法1 3 1 1 该 方法的色谱条件如下，色谱柱：c 1 8 ( 4 6 x 2 5 0 m m ，1 0 m ) ；流动相：将1 0 m l 三乙醇胺加至9 8 0 m l 水中，磷酸调溶液p h 值为7 7 ，再加水至1 0 0 0 m l 。取此溶液9 5 0 m l 与5 0 m l 乙腈混合组成含5 乙腈的磷酸缓冲液；柱温：室温：流速：2 0 m w m i m 波长：2 8 0 r i m ；进样量：5 l ll 等度洗脱。样 品前处理方法为取约0 5 9 样品置于已加入1 0 r o l l 亚硫酸钠溶液的2 5 m l 具塞试管中，加9 5 乙醇至2 5 m l 捆声提取1 5 m i n ，离心，经o 4 5pm 滤膜过滤，滤液作为待测样液利用该色谱条 件在1 5 m i n 内可同时检测9 种氧化型染料，总体效果较好，该方法不足之处在于闻苯二酚和邻 苯二胺两种化和物保留时间一致，两色谱峰重叠，不便于准确定量 彭超盼、邓穗兴、吴玉銮1 4 1 三人利用气相色谱同时测定染发剂中邻位、问位、对位苯二胺。 色谱条件为色谱柱：3 m i n x 2 m 不锈钢柱。内充填1 0 p e g 2 0 m + c h r o m s o t b w a w ( 直径0 1 7 7 0 1 4 9 m m ，经氢氧化钾一甲醇处理) ：柱温：2 0 0 3 2 ，汽化室和检测器温度均为2 5 0 3 2 ：载气 n 2 ：6 0 m l m i n ：h 2 ：5 0 m l m i n ；空气：5 0 0 m l m i n ；迸样量1pl 。样品处理：称取0 0 5 9 试样于 l o m l 离心管中，加5 m l 乙酸乙酯，振荡3 0 s ，加o 1 9 氯化钠，再振荡3 0 s ，于离心机( 1 0 0 0 r m i n ) 中离心3 m i n ，吸出上层有机相，管中试样再用3 m l 乙酸乙酯萃取，吸出有机相，合并萃取液。并用 乙酸乙酯定容至l o m l 。方法线性范围：邻苯二胺0 3 4 0 o g i , 对苯二胺0 2 5 0 o g ：l , 间苯二胺 0 4 7 0 0 9 l ：平均回收率：苯二胺9 4 7 ，对苯二胺9 2 2 间苯二胺9 0 1 。该法灵敏度高、操 作简便、准确 李海涛、吴平谷田1 两人采用气相色谱法分离鉴定1 2 种氧化型染料，包括苯胺、苯酚、邻甲 酚、邻苯二胺、邻苯二酚、间苯二胺、对苯二酚、对苯二胺、问苯二酚、对甲苯二胺、间甲苯 二胺、q 一萘酚。色谱条件如下，色谱柱：c b p w l 0 柱：1 2 m 0 5 3 r a m 1 0 1 1 m ，大口径毛细管柱。 氮气：3 0 m l m i n ，氢气：3 0 m 1 m i n ，空气：3 0 0 m u m i n 。柱温：9 0 3 2 ，2 m i n ! ! ! 竺1 2 0 3 2 1 2 - u n u n 2 5 0 3 2 , s t a i n 。汽化温度：2 5 0 3 2 ，检测温度：2 5 0 3 2 ，进样量：1 0 p l 。样品预处理：称取 4 中国农业大学硕十学位论文第一章概述 样品约o 5 0 9 ，加o 5 9 亚硫酸钠，加9 0 e 乙醇至2 5 m l ，超声提取1 0 m i n 过滤，取滤液在5 0 0 0 r m i n 下离心5 m i n 。方法的最低检出限除a 一萘酚为0 8 p g m l ，其它均为o 5 p g m l 线性范围0 一萘 酚为2 0 - 6 0 0 l g m l ，其余为1 0 - 5 0 0 p g m l 。此文献中提到实验的灵敏度和精确度满足样品检测需 要，但未给出充分的实验数据，其实验条件可供参考。 郑曙昭，李荣专心两人采用毛细管气相色谱法对染发剂中苯酚、邻苯二酚、对苯二酚、问苯 二酚、邻苯二胺、对苯二胺和间苯二胺七种染料进行了分析。该方法的色谱条件为色谱柱：h p - 2 2 5 毛细管色谱柱，5 0 c n p r p h m e s i l o x a n e , 3 0 m x 0 2 5 m m x o 2 5 i t m ；柱温：1 6 5 ，保持1 5 m i n 。以 3 0 c m i n 升至2 0 0 ，保持1 0 m i n ；气化室温度：3 0 0 ；检测器温度：2 9 0 c ：载气：高纯氮气，流量1 0 m l m i n ；氢气：4 0 m l m i n ，空气：4 0 0 m u m i n ：进样量：1 0 u l ：分流比：1 0 ：1 。样品溶液的配制方法： 准确称量0 5 9 样品于l o m l 的具塞试管中，加入无水硫酸钠，加入内标癸酸( 定容后浓度1 o m g m l ) ， 用无水乙醇定容至刻度，超声提取1 5 r a i n ，离心，经0 4 5pi n 滤膜过滤，滤液作为待测样液。实验结 果表明，该方法能在2 1 m i n 内有效地分离这七种染料，其检出限为苯酚5 0 r i g 、邻苯二胺1 6 0 r i g 、对苯 二胺2 4 0 r i g 、邻苯二酚2 8 0 r i g 、间苯二胺1 8 0 r i g 、对苯二酚1 9 0 r i g 、间苯二酚1 8 0 r i g 。方法测定精密 度为2 0 7 4 3 3 ，回收率为9 6 1 1 0 3 3 。通过对实际样品的检测说明此方法适用于染发剂 中染料的检验，且具有操作准确、简便、快速和实用等特点。 李英等田1 采用气相色谱一质谱选择离子存储法( s i s ) 同时测定氧化型染发剂中9 种组分。9 种 染料分别是邻氨基茴香醚、邻苯二胺、对苯二胺、问苯二胺、5 氨基邻甲苯酚、2 ，4 _ 二氨基甲 苯、n 斟一二乙基对苯二胺、d 礤酚、1 3 一萘酚。色谱条件为色谱柱：d b 5 m s 柱，3 0 r e x 0 2 5 m m x 0 2 5 p i n ；柱温：采用程序升温，初始温度1 0 0 c 。保持5 r a i n ，然后以5 c m i n 升至1 5 0 ，保持3 m i n ， 再以2 5 m i n 升至2 5 0 ：进样口温度：2 5 0 ，载气：高纯氦( 纯度 9 9 9 9 9 ) ；流速：1 0 m l m i n ； 分流比；5 ：1 ，进样量：1 0pl 。质谱条件为离子源：e i 源：离子源温度：1 5 0 c ：连接线温度：1 7 0 ：溶剂延迟：6 0 0 m i n ；扫描范围：4 0 4 5 0 a m u ；6 o o 7 7 0 m i n 选择离子工作方式( s i s i ) ，选择离 子范围1 0 7 1 0 9 1 2 2 1 2 4 ；7 7 0 1 1 5 0 m i n 为s i s 2 片段，选择离子范围7 9 8 1 ，1 0 7 1 0 9 ；11 5 0 1 2 5 0 m i n 为s i s 3 片段，选择离子范围9 3 9 5 ，1 2 2 1 2 4 ；1 2 5 0 1 4 0 0 m i n 为s i s 4 片段，选择离子范围 9 3 9 5 ，1 2 0 1 2 2 ；1 4 0 0 1 6 o o m i n 为s i s 5 片段，选择离子范围1 4 8 1 5 0 。1 6 3 1 6 5 ；1 6 0 0 1 8 0 0 r a i n 为s i s 6 片段，选择离子范围1 1 4 1 1 6 ，1 4 3 1 4 5 ；1 8 0 0 2 2 o o m i n 为溶剂延迟。样品处理方 法：称取适量样品于2 5 m 镕量瓶中，加k 1 5 m l g _ , 酸乙酯及0 1 9 氯化钠，超声5 m i n ，用乙酸乙酯定 容至刻度，静置2 m i n ，取上清液进样实验用乙酸乙酯为提取剂来进行超声提取，9 种组分的平均 回收率( n - - 9 ) 在9 6 0 3 1 0 0 4 之间，相对标准偏差( 9 ) 为0 5 1 2 9 8 ，最低检测限为 0 5 m g l 1 0 m g l 。方法简单、快速、准确，可用于实际样品的检测。 朱英等田1 采用气相色谱一质谱法( g c ，m s ) 同时测定染发剂中的8 种氧化型染料中问体，分别为 邻苯二胺、对苯二胺、对氨基酚、问氨基酚、对苯二酚、问苯二酚、2 ，5 一二氨基甲苯硫酸盐及 4 一甲胺苯酚硫酸盐。色谱条件：d b - 2 2 5 气相色谱柱( 3 0 m x o 2 5 m mi d x o 2 5um ) ：程序升温：1 4 0 ( 2 m i n ) i o m i n 2 3 0 ( 3 m 哟：接1 2 1 温度和进样口温度2 3 0 ：载气为高纯氦气，流速0 8 m l m i n ：进样量lu l ：分流比1 0 ：1 质谱条件：电离方式为电子轰击( e i ) ：电子能量7 0 e v ；扫描范 围4 0 3 5 0 u 。样品处理方法：准确称取染发剂样品约0 2 9 , 用乙醇一水溶液( 体积比为l ：1 ) 定容至 l o m l , 混匀，用0 a 5um 滤膜过滤，滤液备用。实验采用已知样品加标的方法测定染料的回收率 ( n ) ，结果表明，8 种染料中间体的回收率为8 3 3 1 0 9 9 。最低检出限( s n = 3 ) 在3 5 m g l 5 中国农业大学硕卜学位论文第一章概述 范围内。该方法可满足化妆品监督管理的需求。 王骏和胡俊呼州采用反相高效液相色谱法测定化妆品中对苯二胺、对氨基酚、对苯二酚、 盐酸间氨基酚、邻苯二胺5 种染料中间体。色谱条件为色谱柱：z o r b a x c 8 柱4 6 m m i d x 2 5 0 m m ；流 动相：将1 0 m l 一：乙醇胺加至9 8 0 m l 水中，加入磷酸调溶液p h 值为7 7 ，加水至1 0 0 0 m l , 取此溶液 9 5 0 m l 与5 0 m l 乙腈混合组成含体积分数为5 乙腈的乙腈缓冲液：流速：2 0 m l m i n ；柱温：室温： 检铡波长：2 8 0 r i m ：样品预处理：取样品约0 5 0 9 置于已加入1 0 m l 质量分数为1 的亚硫酸钠溶液的 2 5 m l 具塞试管中，加乙醇至2 5 m l ，超声提取1 5 m i n ，离心，取上清液通过0 4 5pm 滤膜，滤液作为待 测样液。方法相关系数在0 9 9 9 以上，检出限( s i n = 3 ) 为0 0 1 5 0 0 31 1g ，样品加标测得回收率8 6 1 0 7 ，相对标准偏差1 l s d 为2 3 6 4 ，满足实际样品检测需要。该液相方法与化妆品卫生规范 中8 种氧化型染料中问体的检测方法基本相同。 郑志方【1 1 采用了高效液相色谱法测定染发剂中对苯二胺、邻氨基酚、对苯二酚及间苯二酚 四种染料。色谱条件为色谱柱：1 18 0 n d a p a k c l8 ，3 9 x 3 0 0 m m 检测波长：2 8 0 r i m ；流动相：2 0 1 8 0 = 四 氢呋喃0 0 0 5 m n a h 2 p 0 4 ( 用h 3 p 0 4 调至p h = 3 5 ) ：流速：2 m i j m i n ：进样量：2 0 1 1l ：样品处理方法： 采用9 5 乙醇7 9 = 5 0 5 0 ( 体积比) 作为萃取剂。每1 克左右试样萃取剂用量为1 0 毫升。在试样中加 入1 亚硫酸钠溶液，再加该萃取剂至l o 毫升刻度。室温下进行超声波萃取。避免温度过高而加速 被测组份的变化，莘取时问1 5 分钟即可。经实验测定方法的变异系数为2 4 ，回收率为9 2 1 0 0 ，检测限为0 0 0 1 9 0 0 8 9 毫克克。该法简便快速，具有良好的精密度和准确度，满足实验 要求。 m a r i al u i s ad ig i o i a m 等人先用苯甲醛将对苯二胺衍生再用g c m s 在s i m 条件下分析染 发责玎中的对苯二胺。转化成胺衍生物后仪器的响应度增强，从而提高了方法的灵敏度和准确度。 此法使用稳定的n - 苯亚甲基一4 - 甲基苯胺为内标，线性范围为0 ! 2 5 m g m l , 相关系数为0 9 9 ，回 收率9 7 5 0 9 9 0 6 ，是检测染发剂中对苯二胺的一个有效方法。 朱杰民等人脚建立了化妆品q a 7 种水溶性合成着色剂的高效液相色谱法。7 种常用水溶性合 成色素：c i1 9 1 4 0 ( 黄色) 、c i1 6 1 8 5 ( 红色) 、c 1 7 5 4 7 0 ( 红色) 、c 1 1 5 9 8 5 ( 黄色) 、c i1 7 2 0 0 ( 红色) 、 c i1 6 0 3 5 ( 红色) 和c i4 2 0 9 0 ( 蓝色) 。色谱条件为色谱柱：c l d o d s - 2 5 0 x 4 5 m i n i d ) ，流动相：甲 醇+ o 0 2 m o l l 乙酸铵溶液( p h = 4 ) ，柱温：室温，流速：1 0 m l n f i n ，检测波长：2 5 4 m ，进 样量：1 0ul 梯度洗脱：5 m i n 内甲醇含量由2 0 升至3 5 ，到1 2 m i n 时升至9 8 ，9 8 0 d 农度保持 8 m i n 样品前处理方法：称取基体简单的样品5 0 9 于5 0 m l 比色管中，加入去离子水2 0 m l ，用旋 涡振荡器振荡混匀，用超声清洗器超声水浴提取1 5m i n ，必要时离一c q o n l i n ( 6 0 0 0r n a n ) ，取上 清液用0 4 5 9 m 过滤膜过滤后待测。称取基体复杂样9 5 0 9 于1 0 0 m l 带有螺旋盖棕色玻璃瓶中，加 入甲酵2 5 m l ，混匀，6 0 加热1 5m i n ，冷至室温，超声提取1 0 m i n 。用2 0 m l 甲醇对硅胶固相萃 柱进行活化，样品提取液在真空下通过c - 难胶固相萃柱，弃去头5 m l b y 脱液，收集剩余溶液，在 5 0 6 0 、2 5 3 5 k p a 下，用旋转蒸发器浓缩至约4 m l ，浓缩液备用。7 种常用水溶性合成色素( 顺 序同前) 回收率分别为9 2 5 1 0 8 3 、8 6 4 1 0 3 8 ，8 6 7 1 0 7 9 、8 9 4 1 0 5 8 、8 8 7 1 0 3 7 、8 7 9 1 0 6 8 和9 1 8 1 0 5 4 ，检出限分别为0 2 1 i t g m l 、0 1 8 p g m l 、o 1 1 1 1 9 m l 、0 2 4 i t g m l 、 2 2 2i tg m l 、0 2 2i tg 螂1 2 8i tg m l 。本方法前处理简单，操作简便，有较高的灵敏度和 较广的线性范围，是值得推广的一种色素测定方法。 6 中国农业大学硕七学位论文第二章实验部分 2 1 实验仪器 高效液相色谱仪 化学工作站 超纯水器 离心机 超声波清洗器 电子天平 低温冰箱 瓶口移液器 针筒式微孔滤膜过滤器 溶剂微孔过滤膜 2 2 试剂与材料 2 2 1 标准物质 3 - - - - - 乙氨基苯酚 l ，7 - 萘二酚 2 。硝基对苯二胺 间苯二酚 对苯二酚 番红。 碱性品红 丽春红s x c i 酸性红7 3 第二章实验部分 岛津l c - 2 0 a t , 配有s p d - m 2 0 a - 二- - 极管阵列检测器，s i l - 2 0 a 自动进样器，c t o - 2 0 a 柱温箱，d g u 2 0 a 自动脱气机 l c s o l u f i o n 美国m i l i p o r e 公司 日立c r 2 l g 型 k q - 6 0 0 型( 昆山市超声仪器厂) a b 2 0 4 - s 型( 美国m e t t l e r t o l e d o 公司) 青岛海尔电冰箱有限公司 d i s p e n s e t t eo r g a n i c ( 2 1 0 m l , 1 0 - 6 0 m l , h i r s c h m a n nl a b o r g e r a t e ，德国) 天津腾达过滤器件厂 孔径0 4 5 p m 天津腾达过滤器件厂 含量9 9 含量9 8 含量9 9 含量9 9 含量9 9 含量8 5 ， 各化合物的c a s 登记号、分子式和分子量见表1 a c r o s 公司 a c i s 公司 a l d r i c h 公司 a l d r i c h 公司 a l d r i c h 公司 a c r o s 公司 c h e ms e r v i c , e 公司 东京化成 东京化成 表l ：化合物的c a s 登记号、分子式和分子量 一7 中国农业大学硕七学位论文第二章实验部分 2 2 - 硝基对苯二胺 5 3 0 1 4 - 27 6 0 7 0 c 出7 n 3 0 z 1 5 3 1 5 ，问苯二酚q 鹏l l n l l 4碱性品红6 3 2 - 9 9 - 54 2 5 1 0 q o h l 9 n 3 - h c i 3 3 7 8 4 5爵春红s x4 5 4 8 - 5 3 - 21 4 7 0 0 c l 羽1 6 n 2 岛s 2 ，2 n a 4 7 6 3 8 61 ，7 - 萘二酚5 7 5 - 3 8 - 27 6 6 3 5c l 棚s o = t 6 0 1 6 7c i 酸性红7 3 5 4 1 3 - 7 5 - 22 7 2 9 0 g 2 h 1 6 n 4 q s 2 2 n a 5 5 8 4 9 8 番红0 4 7 7 7 3 - 6 9 3