（动物学专业论文）蜂毒对心肌收缩力和血脂的影响及有关机制的研究.pdf

南开大学学位论文版权使用授权书 本人完全了解南开人学关丁收集、保存、使用学位论文的规定，同意如下各项内 容：按照学校要求提交学位论文的印刷本和电子版本；学校有权保存学位论文的印刷 本和电子版。并采j j 影印、缩印、扫描、数字化或其它手段保存论文：学校有权提供 目录检索以及提供本学位论文全文或者部分的阅览服务；学校有权按有关规定向国家 有关部门或者机构送交论文的复印件和电子版；在不以赢利为目的的前提下，学校可 以适当复制论文的部分或全部内容用于学术活动。 学位论文作者签名：粼袭 娜年j 月刀日 经指导教师同意，本学位论文属于保密，在歹年解密后适用 本授权书。 指导教师签名： 澎穆 学位论文作者签名： 獭囊 解密时间： 伽b 年y 月加日 各密级的最长保密年限及书写格式规定如下： ￥m “* m “ _ m h “”“。h ”“n * ”“”“1 。14 9 j “。n 。、“”h ；内部5 年( 最长5 年，可少于5 年) 秘密1 0 年( 最艮l o 年，可少于l o 年) 机密2 0 年( 最艮2 0 年，可少于2 0 年) 南开大学学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师指导下，进行 研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本学位论文 的研究成果不包含任何他人创作的、已公开发表或者没有公开发表的 作品的内容。对本论文所涉及的研究工作做出贡献的其他个人和集 体，均已在文中以明确方式标明。本学位论文原创性声明的法律责任 由本人承担。 学位论文作者签名：撕茨 砷黾年箩只 摘要 摘要 蜂毒是工蜂毒腺和副腺分泌出的淡黄色透明毒液，具有广泛的药理学作用。 为探讨蜂毒对心肌收缩力和血脂的影响及其机制，本研究进行了两个系列的实 验： 1 蜂毒对蟾蜍离体心脏心肌收缩力的影响及其机制：用离体蛙心灌流的方 法，以含蜂毒1 5 x1 0 。3g l 、3 7 5 x1 0 一g l 、7 5 1 0 4g l 三个浓度的任氏液 对模型心脏进行灌流，观察蜂毒对心脏的节律性收缩效应及心肌组织乳酸脱氢 酶( l d h ) 活性、丙二醛( m d a ) 含量、n a + k + - a t p a s e 和c a 2 + m g + - a t p a s e 活 性的影响，以及蜂毒分别对用倍他乐克和酚妥拉明处理的模型心脏节律性收缩 效应的影响。结果表明，3 个浓度的蜂毒均能使心肌收缩力增强，其中以中等浓 度( 3 7 5 1 0 弓g l ) 效果最明显。倍他乐克能阻断蜂毒的强心作用，而酚妥拉明 不能。另外，蜂毒处理的心肌组织l d h 活性升高，而m d a 含量降低，与对照 组比较，差异显著( p 0 0 5 ) ，而n a + k + a t p a s e 和c a 2 + m g + - a t p a s e 的活性与 对照组比较无显著差异。结论：蜂毒有一定的强心作用，机制可能与其能作用 心肌细胞肾上腺素1 3 。受体，同时能提高l d h 活性而减少m d a 含量有关。 2 蜂毒对小鼠高血脂症的预防作用及其机制：将5 0 只小鼠分为5 个组：即 正常对照组、高脂模型组、低、中及高剂量蜂毒组。正常对照组饲喂普通饲料， 高脂对照组和低、中、高剂量蜂毒组均饲喂高脂饲料。高中低剂量蜂毒组注射 浓度分别为1 1 0 一m g m l 、2 x1 0 叼m g m l 和4 x1 0 3 m g m l 蜂毒生理盐水2 0 0 t t l ， 而正常和高脂对照组每天腹腔注射等量的0 9 生理盐水。持续处理3 0 d 。摘眼 球取血，冰浴开颅取脑。用比色法和电泳法分别检测血脂和脂蛋白的含量。用 蛋白免疫印迹和免疫组化方法分别检测血清和大脑皮层中生长抑素( s s ) 的含 量。结果表明，饲喂高脂饲料的小鼠血脂水平明显高于正常对照组。注射蜂毒 的三组小鼠甘油三酯( t g ) 和低密度脂蛋白( l d l ) 含量低于高脂模型组，而总胆 固醇( t c ) 和高密度脂蛋白( h d l ) 含量高于高脂模型组。高中低剂量蜂毒组的小鼠 血清和大脑皮层s s 含量均显著高于高脂模型组( p 0 0 5 ) 。结论：蜂毒能够有 效降低饲喂高脂饲料的小鼠血液t g 和l d l 水平，提高其h d l 水平，对高血脂症 的形成有抑制效应；蜂毒降血脂的作用可能与其能影响体内生长抑素的代谢有 关。 关键词：蜂毒心肌收缩力血脂生长抑素 a b s t r a c t a b s t r a c t b e ev e n o mi sat r a n s p a r e n tl i g h ty e l l o wl i q u i df i o mt h ep o i s o ng l a n da n d a c c e s s o r yg l a n do fw o d ( e rb e e i th a sw i d e l yp h a r m a c o l o g i c a le f f e c ta n db r o a d m e d i c i n a lv a l u e i np r e s e n tp a p e r , t w os e r i e so fe x p e r i m e n t sw e r eu s e dt os t u d yt h e e f f e c t so fb e ev e n o mo nc a r d i a lr h y t h m i cc o n t r a c t i o na c t i o n ，b l o o dl i p i da n dt h e m e c h a n i s mi n v o l v e d 1 t h ee f f e c to fb e ev e n o mo l lc a r d i a lr h y t h m i cc o n t r a c t i o na c t i o no fi s o l a t e d t o a dh e a r ta n dt h em e c h a n i s mi n v o l v e d ：i s o l a t e dt o a dh e a r tw a sp e r f u s e dw i t h r i n g e r ss o l u t i o nc o n t a i n i n g1 5 x1 0 je e l ，3 7 5 x1 0 。la n d7 5 x1 0 jg lb e ev e n o m r e s p e c t i v e l y t oo b s e r v et h e c h a n g e o fm y o c a r d i a lc o n t r a c t i o n f o r c e ，a n d m a l o n d i a l d e h y d e ( m d a ) l e v e l ，a c t i v i t i e s o fl a c t a t e d e h y d r o g e n a s e ( l d h ) ， n a + k _ a t p a s ea n dc a 2 + m g e + a t p a s eo fm y o c a r d i a lt i s s u e t h ee f f e c to fb e ev e n o m o nr h y t h m i cc o n t r a c t i o na c t i o no fi s o l a t e dt o a dh e a r tp r e v i o u s l yt r e a t e db yb e t a l o co r p h e n t o l a m i n ew a sa l s oo b s e r v e d r e s u l t ：a 1 1t h et h r e ec o n c e n t r a t i o no fb e ev e n o m s o l u t i o ne s p e c i a l l ym i d d l ec o n c e n t r a t i o n ( 3 7 5 x10 。g l ) c o u l di n c r e a s e dm y o c a r d i a l c o n t r a c t i o nf o r c e ，a n dt h ee f f e c tw a sa n t a g o n i z e db yb e t a l o cn o tb yp h e n t o l a m i n e i n a d d i t i o n ，l d ha c t i v i t yw a si n c r e a s e da n dm d a l e v e lw a sd e c r e s e ds i g n i f i c a n t l y ( p 0 0 5 ) b yb e ev e n o mt r e a t m e n t ，b u tt h et r e a t m e n tc a u s e dl i t t l ec h a n g e sb o t hi n n a + k + a t p a s ea n dc a 2 十m 矛+ a t p a s ea c t i v i t i e s c o n c l u s i o n ：b e ev e n o mh a s c a r d i o t o n i ce f f e c t ，a n dt h em e c h a n i s mi n v o l v e dm i g h tc l o s e l yc o r r e l a t ew i t hi t sa c t i o n i na c t i v a t i n gpl r e c e p t o ro fe p i n e p h r i n et h a ni t s0 【- r e c e p t o r , i n c r e a s i n gl d h a c t i v i t y a n dd e c r e a s i n gm d al e v e li nc a r d i a cm u s c l e 2 t h ep r e v e n t i v ee f f e c to fb e ev e n o mo nh y p e r l i p i d e m i af o rm i c ea n dt h e m e c h a n i s mi n v o l v e d ：f i f t ym i c ew e r er a n d o m l yd i v i d e di n t o f i v eg r o u p s ：c o n t r o l g r o u p ，h y p e r l i p e m i am o d e lg r o u p ，l o w , m e d i a t ea n dh i g hd o s a g eo f b e ev e n o mg r o u p c o n t r o lg r o u pw a sg i v e nn o r m a ld i e ta n dt h eo t h e rf o u rg r o u p sw e r eg i v e nh i g hl i p i d d i e t t h em o u s ei nl o w , m e d i a t ea n dh i g hd o s a g eo fb e ev e n o mg r o u p sr e c e i v e da n i n t r a p e r i t o n e a li n j e c t i o n o f2 0 0 p ls a l i n e r e s p e c t i v e l yc o n t a i n i n g 1 10 一m g m l ， i i a b s t r a c t 2 x10 - m g m la n d4 x10 - 3 m e d m lb e ev e n o m a n dt h em o u s ei nc o n t r o la n d h y p e r l i p e m i am o d e lg r o u po n l yr e c e i v e da l li n j e c t i o no fs a m ea m o u n to fs a l i n e w i t h o u ta n yb e ev e n o m t h ee x p e r i m e n t a lt e r mi s3 0 d b l o o dw a sg a i n e da f t e r e x t r a c t i n ge y e b a l l sa n db r a i nw a sg a i n e da f t e ro p e n i n gc r a n i u mo ni c e c o n t e n to f l i p i da n dl i p o p r o t e i ni nb l o o dw a sr e s p e c t i v e l yd e t e r m i n e dw i t hc o l o r i m e t r ya n d e l e c t r o p h o r e s i s t h ec o n t e n to fs si ns e r b ma n dc e r e b r a lc o r t e xw a sr e s p e c t i v e l y d e t e c t e dw i t hw e s t e r nb l o ta n di m m u n o h i s t o c h e m i s t r y r e s u l t ：t h el e v e lo fb l o o d l i p i do fh y p e r l i p e m i am o d e lg r o u pw a ss i g n i f i c a n t l yh i g h e rt h a nt h a to fc o n t r o lg r o u p c o m p a r e dw i t hh y p e r l i p e m i am o d e lg r o u p ，t h el e v e lo ft r i g l y c e r i d e ( t g ) a n dl o w d e n s i t yl i p o p r o t e i nc h o l e s t e r o l ( l d l - c ) o fl o w , m e d i a t ea n dh i 曲d o s a g eo fb e e v e n o mg r o u pw a sd e c r e a s e d ，w h e r e a st h el e v e lo ft o t a lc h o l e s t e r o l ( t c ) a n dh i g h d e n s i t yl i p o p r o t e i nc h o l e s t e r o l ( h d l - c ) w a si n c r e a s e d t h ec o n t e n to fs o m a t o s t a t i n ( s s ) i nm o u s es e r u ma n dc e r e b r a lc o r t e xo fl o w , m e d i a t ea n dh i g hd o s a g eo fb e e v e n o mg r o u pw a sa l ls i g n i f i c a n t l yh i g h e rt h a nt h a to fh y p e r l i p e m i am o d e lg r o u p ( p 0 0 5 ) c o n c l u s i o n ：b e ev e n o mc o u l dr e s d ti nd e c r e a s ei nb l o o dt ga n dl d l a n di n c r e a s ei nb l o o dh d lf o rm i c ef e dh i g hl i p i dd i e t ，a n dm i g h tp r e v e n tt h e d e v e l o p m e n to fh y p e r l i p i d e mf o rm i c e t h ea b o v er o l eo fb e ev e n o mm i g h tc l o s e l y c o r r e l a t ew i t hi t sm o d u l a t i o no fs o m a t o s t a t i nm e t a b o l i s mi nb o d y k e yw o r d s ：b e ev e n o m ；c a r d i a lr h y t h m i cc o n t r a c t i o n ；b l o o dl i p i d ；s o m a t o s t a t i n i i i 目录 目录 摘要i a b s t r a c t i i 目录i v 前言1刖舌 第1 章文献综述2 1 1 蜂毒及其药理作用2 1 1 1 蜂毒的研究简史2 1 1 2 蜂毒的理化性质3 1 1 4 蜂毒的药理作用3 1 1 5 蜂毒的临床应用5 1 1 6 蜂毒的毒性和不良反应6 1 2 蜂毒对心血管系统的影响及其机制的研究进展7 1 2 1 蜂毒对心脏的影响及其机制7 1 2 2 蜂毒对血脂的影响l o 1 3 药物强心机制1 3 1 3 1 调节心肌细胞内的钙离子浓度1 3 1 3 2 抗过氧化清除自由基而保护心肌1 5 1 4 生长抑素与血脂调节1 6 第2 章蜂毒影响离体蟾蜍心脏节律性收缩的研究1 8 2 1 材料和方法1 8 2 1 1 实验动物1 8 2 1 2 药物1 8 i v 目录 2 1 3 实验仪器1 9 2 1 4 实验项目及方法1 9 2 2 结果2 0 2 2 1 小剂量蜂毒对离体心脏节律性收缩的影响2 0 2 2 2 蜂毒对倍他乐克或酚妥拉明处理的离体心脏节律性收缩的影响2 l 2 2 3 蜂毒处理对心肌m d a 含量和l d h 活性的影响2 2 2 2 4 蜂毒处理对心肌n a k - a t p a s e 和c a 2 + m 9 2 + - a t p a s e 活性的影响2 4 2 3 讨论2 4 2 4 结j 沧2 6 第3 章蜂毒对小鼠高血脂症的预防作用及其机制研究2 7 3 1 高血脂小鼠模型的建立2 7 3 1 1 实验动物2 7 3 1 2 高脂饲料配方2 7 3 1 3 实验动物的饲养及分组处理2 7 3 2 称重及取材2 8 3 2 1 体重的测定2 8 3 2 2 取材及组织样品处理2 8 3 3 实验试剂、原理及方法2 8 3 3 1 血脂含量测定2 8 3 3 2 血清脂蛋白琼脂糖凝胶电泳3 4 3 3 3 蛋白免疫印记( w e s t e r nb l o t ) 测定血清中s s 含量3 5 3 3 4 免疫组化测定小鼠大脑皮层s s 含量4 0 3 4 实验结果4 2 3 4 1 蜂毒对实验小鼠体重的影响4 2 3 4 2 蜂毒对实验小鼠血脂状况的影响4 3 3 4 3 蜂毒对小鼠血清脂蛋白的影响4 7 3 4 4 蜂毒对小鼠血清生长抑素含量的影响4 8 3 。4 5 蜂毒对小鼠大脑皮层m 1 区生长抑素表达的影响4 9 v 日录 一一 3 5 讨论5 3 3 5 1 实验高脂动物模型的建立及蜂毒对饲喂高脂日粮的小鼠体重的影响5 3 3 5 2 蜂毒对饲喂高脂饲料小鼠血脂的影响5 3 3 5 3 蜂毒降血脂的作用与小鼠体内生长抑素水平的关系5 4 3 6 结论5 5 参考文献5 6 致 谢6 1 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果6 2 v i 前言 上- j 一 刖吾 蜂毒是工蜂毒腺和副腺分泌出的具有芳香气味的淡黄色透明毒液，它是一 种成分复杂的混合物，除了含有大量水分外，还含有若干种蛋白质多肽类、酶 类、组织胺、酸类、胆碱、甘油、氨基酸及微量元素等。蜂毒有广泛的药理学 作用，包括：消炎、镇痛、抗肝纤维化和吸收肝纤维化、抗肿瘤、抗菌和抗辐 射【l j 。目前，在临床治疗中，蜂毒的各种制剂主要用于治疗神经痛等神经系统疾 病、风湿性和类风湿性关节炎、支气管哮喘以及艾滋病等疾病【2 】。 蜂毒对心血管功能的调节方面如降压、抗心律失常、改善脑血流及心肌功 能等也曾有过研究报i 苣【3 1 。也有应用蜂毒治疗高血压、心绞痛、血栓闭塞性脉管 炎、动脉粥样硬化等心血管系统疾病的案例【4 】。然而有关蜂毒对心血管功能的调 节的研究结果报道并不一致，如m a r s h 研究指出，2 0 - - 4 0 9 9 蜂毒肽( 约占蜂毒 干重的5 0 ) 对离体动物心脏有强毒性作用，引起心脏不可逆麻痹【5 】。蜂毒肽对 大鼠离体心房实验结果亦表明蜂毒肽具有负性肌力作用【6 】。另有研究表明，蜂毒 中存在一种多肽，由于该物质主要对心脏起作用，故被命名为心脏多肽。实验 发现，以心脏多肽灌流实验动物心脏的冠状动脉，可使心肌收缩力增加，且作 用时间较长【7 j 。可以看出，蜂毒的各组分对心脏的作用是不同的，既有起强心作 用的，又有导致心脏毒性的。另外，我国传统中医以前就认定了蜂毒具有降黏、 调脂和改变血流变的作用，并在实际应用中运用蜂针治疗高血脂症。王孟林和 方新连曾报道，用蜂毒法治疗高脂血症、高粘血症疗效显著，治愈率蒯引。然而 蜂毒降血脂效果的实验研究报道不多，更不知其降血脂的机制。 为此，本研究将采用离体蛙心、高脂模型小鼠就小剂量蜂毒分别对心肌收 缩力和血脂的影响及其机制进行研究。我国养蜂历史悠久，规模很大，是世界 养蜂大国之一，有很丰富的蜂毒资源。希望本研究为蜂毒在心血管功能调节和 降血脂方面的有效应用提供一些实验依据；同时为其进一步开发利用，产生其 应有的经济效益和社会效应，提供一些思路和启示。 第1 章文献综述 第1 章文献综述 1 1 蜂毒及其药理作用 1 1 1 蜂毒的研究简史 蜂毒在国内外的利用和研究有悠久的历史，远在古埃及人们就注意到蜂螫有 治疗功效，古罗马大学者兼医生盖伦( g a l e n ) 就记述了蜂毒治疗疾病的方法。自古 以来，我国的民间医学中就有应用蜂毒治病的记载。方以智( 1 6 1 1 1 6 7 1 年) 物 理小识卷五记载“药蜂针”的配方。民间应用活蜂治疗风湿性关节炎等疾病 的做法至今还在应用1 9 1 。 1 8 6 4 年，俄国人卢阔姆斯基著文认为蜂毒是治疗风湿病、痛风病的良好药 物以来，人们逐渐发现了蜂毒的各种药用价值。本世纪六十年代苏联的养蜂杂 志先后刊登了蜂毒治疗关节炎、外周神经炎、肌肉炎、神经痛等多种疾病的报 道，并且都有很好的治疗效果。另外，蜂毒的镇痛、抗肿瘤、抗菌、抗辐射、 调解免疫系统、降血压等方面的功效也日益被人们所认识。 同时在蜂毒的成分方面有着大量的研究。n a g a m i t h ( 1 7 3 5 年) 发现了蜂毒中的 一个组分组织胺，在此基础上，又有许多科学家发现蜂毒中的一系列组分。从 六十年代开始，许多国家对蜂毒的理化性质、药理、毒理以及蜂毒的成分进行 了系统而深入的研究。取得了系列的科研成果，进一步证实了蜂毒的治病机 理。为蜂毒在医学和生物学上的应用开辟了更为广阔的前景【1 0 1 。 自1 9 5 7 年以来，我国开始有应用蜂毒治病的临床报道，全国不少研究机构、 医院的试验结果表明：蜂毒对多种疾病均有良好的疗效。由于蜂毒疗效显著， 长期以来对蜂毒医疗应用积累了一些经验。4 0 年来，药理学家、生化学家及临 床学家对蜂毒进行了广泛深入的研究，尤其是近几年来，化学分离方法研究蜂 毒取得了可喜的成果，蜂毒组成结构与功能的研究也取得了相应进展，蜂毒功 效不断有新的发现。 2 第1 章文献综述 1 1 2 蜂毒的理化性质 蜂毒是工蜂毒腺和副腺分泌出的具有芳香气味的淡黄色透明毒液。刚排出 的蜂毒是一种透明淡黄色液体，味苦，呈酸性反应，p h 值为5 o 5 5 ，比重 为1 1 3 1 3 。在常温下很快就挥发干燥至原来液体重量的3 0 - 4 0 ，这种挥发 物的成分至少含有1 2 种以上的可用气相分析鉴定的成分，包括以乙酸异戊酯为 主的报警激素，由于它在采集和精制过程中极易散失，因而通常在述及蜂毒的 化学成分时被忽略。蜂毒极易溶于水、甘油和酸，不溶于酒精。在严格密封的 条件下，即使在常温下，也能保存蜂毒的活性数年不变。 1 1 3 蜂毒的化学成分 蜂毒是一种成分复杂的混合物，它除了含有大量水分外，还含有若干种蛋 白质多肽类、酶类、组织胺、酸类、胆碱、甘油、氨基酸及微量元素等。主要 包括多肽类：蜂毒肽( m e l i t t i n ) 、原蜂毒肽( p r o m e l i t t i n ) 、蜂毒明肽( a p a m i n ) 、m c d 一 多肽等；在多肽类物质中，蜂毒肽约占干蜂毒的5 0 ，蜂毒神经肽占干蜂毒的 3 。蜂毒中的酶类多达5 5 种以上，活性酶类主要包括：磷脂酶a 2 ( p h o s p h o l i p a s e ， p l a 2 ) 、透明质酸( h y a l u r o n i d a s e ) 、酸( 碱) 磷酸酶等。 1 1 4 蜂毒的药理作用 1 1 4 1神经系统的作用 蜂毒是向神经性的，在大脑网状组织上具有阻滞作用和溶胆碱活性，并能 改变皮层的生物电活性，尤其是蜂毒肽对n 胆碱受体有选择性阻滞作用，可使 中枢神经系统突触内兴奋传导阻滞，并表现出中枢性烟碱型胆碱受体阻滞作用 【l l 】 o 1 1 4 2 对血液的作用 蜂毒具有溶血和抗凝血作用，治疗剂量极少引起溶血反应；较大剂量使血 液凝固时间明显延长；蜂毒直至稀释为1 1 0 0 0 0 时，其溶血作用才消失。蜂毒 的溶血成分主要为p l a 和蜂毒肽，其中以蜂毒肽的作用最强【1 2 】。机理是胶体渗 出性溶血，即蜂毒肽使红细胞壁通透性增强，胞内胶体大量渗出，红细胞因内 第1 章文献综述 部渗透压降低而破裂。另外还具降低血栓素的功效，在改善微循环的基础上起 缓解关节症状的作用。 1 1 4 3 抗炎镇痛作用 蜂毒中的单体多肽是抗炎的主要成分，它具有类激素样的作用，但无激素 的不良反应。全蜂毒、溶血毒多肽、神经毒多肽、m c d 多肽均能刺激垂体肾 上腺系统使皮质激素释放增加而产生抗炎作用【l3 1 。溶血毒多肽还能抑制白细胞 的移行，从而抑制了局部炎症反应【1 4 】。蜂毒镇痛作用特别显著，尤其是对慢性 疼痛更为有效。蜂毒肽对前列腺素合成酶的抑制作用是吲哚美辛的7 0 倍，故有 较好的镇痛抗炎作用，镇痛强度为吗啡的4 0 ，是安替比林的6 8 倍，镇痛作 用的持续时间亦较长，但无水杨酸类对消化道的刺激和甾体类的免疫抑制作用。 另外，安度拉平( a d o l a p i n ) 是2 0 世纪8 0 年代从蜂毒中分离出的一种抗炎镇痛多 肽，对后足角叉菜胶水肿和前列腺素e 水肿有强力抗炎作用，其对脑前列腺类 合成酶的抑制作用约为消炎痛的7 0 倍，这种抑制作用是产生抗炎作用的基本机 制【1 5 】。 1 1 4 4 对消化系统的作用 目前研究较多的是蜂毒对大鼠实验性肝纤维化的影响，活蜂循经穴蜇刺治 疗乙型肝炎和丙型肝炎引起的早期肝硬化有较好效果。辛氏实验用c c h 造成大 鼠肝纤维化模型，预防组在肝纤维化之前给药，6 个月后发现i i 级纤维化占6 9 ；而治疗两组在肝纤维化完全形成后给药，3 个月后发现i 一- i i i 级纤维化分别占 5 4 5 和6 6 7 ，明显轻于模型组。提示蜂毒有抗肝纤维化和吸收肝纤维化作用， 但其作用机制还需进一步研究【1 6 】。 1 1 4 5 抗肿瘤、抗菌和抗辐射作用 蜂毒对淋巴瘤、肉瘤都具有抵抗作用，对r o u s 肉瘤和h e l a 细胞均有抑制作 用。蜂毒的抗肿瘤成分主要是m e l i t t i n 和p l a 2 ，通常认为两者使细胞线粒体膜 溶解，使细胞的正常呼吸受到抑制，因而肿瘤组织氧化磷酸化的过程受到抑制， 氧化供能被破坏，导致肿瘤组织生长抑制【1 7 1 。蜂毒能抑制2 0 3 0 种革兰氏阳性 和阴性病原微生物的生长繁殖，并能对抗对青霉素耐药的金黄色葡萄球菌，还 能增强磺胺类和青霉素类药物的抗菌能力。蜂毒的辐射防护效应主要作用是引 起神经内分泌反应，增强机体抗辐射作用【l8 1 。现已有很多关于蜂毒抗x 射线、 4 第l 章文献综述 抗y 射线作用的报道。 1 1 4 6 对内分泌系统的作用 蜂毒对垂体肾上腺皮质系统有明显的兴奋作用，能使肾上腺皮质激素和促 肾上腺皮质激素a c t h 释放增加，起到抗风湿、类风湿关节炎作用。 1 1 4 7 对免疫系统的影响 蜂毒对免疫系统具有直接抑制作用。m e l i t t i n 和a p a m i n f l 皂降低使小鼠产生溶血 素的腺细胞的数量。但是小鼠去肾上腺后，蜂毒对其免疫系统呈现刺激作用。 从而可推 出m e l i t t i n 和a p a m i n 作用是通过刺激肾上腺的相关皮质，增加了皮质 激素的分泌，达到抑制免疫的目的【1 9 1 。 此外，蜂毒还能兴奋离体肠管和子宫平滑肌，并具有一定的改善肠系膜微循 环障碍、抗病毒、溶栓等作用。 1 1 5 蜂毒的临床应用 蜂毒疗法由蜂蜇治疗与中医经络学理论相结合发展而成的一种针、药、灸三 结合的复合疗法。目前，已有蜂毒素、蜂散痛、蜂特灵和蜂毒注射液等多种蜂 毒制剂广泛应用于临床。 1 1 5 1 用于治疗神经痛等神经系统疾病 蜂毒肽能够提高疼痛阈，具有较好的镇痛作用，临床用于三叉神经痛、坐骨 神经痛、偏头痛等，具有消炎止痛、活血化瘀、见效快、疗效可靠的特点；蜂 毒注射液糖尿病患者并发糖尿病性神经病的发病率高达6 0 - - 9 0 ，主要表现 为对称性或非对称性的双下肢、上肢、全身肌肉呈针刺样、烧灼样痛，感觉异 常，有蚁走等症状【删。 临床应用蜂毒治疗后，效果良好，认为与蜂毒具有扩张血管，改善血小板 凝集性，减少糖蛋白沉积作用有关。蜂毒的抗凝和纤溶作用证明，蜂毒在体内 促进血液纤溶活性强化，清除血栓形成前状态，对脑中风后遗症、老年性痴呆 有较好治疗作用。老年性痴呆的发病率逐年增多，国内外尚无特效药物，研究 认为蜂产品及蜂毒能清除体内自由基，增加脑部血液循环，改善脑部功能，调 节神经系统紧张度，使脑皮质活动正常化，调整物质代谢，从而促进神经本身 5 第l 章文献综述 的修复功能。此外，蜂毒制剂对神经根炎、神经根神经炎、神经丛炎、面神经 麻痹、颈椎病、癌性神经痛等神经系统病变均有较好的治疗效果。 1 1 5 2 用于治疗风湿性和类风湿性关节型2 1 】 目前，非甾体类药物配合甾体类药物是治疗风湿性和类风湿性关节炎的主要 措施，这些药物可以短期抑制炎症发展和减轻症状，但不能收到长期效果。而 且，长期应用这些药物会引起胃肠溃疡、肾脏受损等一系列副作用。自1 8 世纪 以来，关于蜂毒治疗风湿病和类风湿病的报告已屡见不鲜，至今尚未见一例否 定蜂毒对其疗效的报道。蜂毒中的多肽具有抗炎作用，能降低毛细血管的通透 性，抑制白细胞移行，抑n - 商；i 列腺素e 的合成，并能兴奋肾上腺皮质功能，i 临 床常用于治疗风湿性和类风湿性关节炎。蜂毒治疗风湿性关节炎和类风湿性关 节炎，具有起效快，疗效可靠，耐受性好等特点。 1 1 5 。3 用于治疗支气管哮喘 支气管哮喘是一种常见的发作性变态反应性疾病。由于发作时支气管痉挛， 患者有明显的呼吸困难，并可耳闻喘鸣音而得名。国外杂志曾报道对2 8 0 例哮喘 者进行蜂蜇、蜂毒注射，结果表明疗效良好，哮喘发作停止，呼吸困难减轻， 全部患者自觉蜂毒有祛痰作用，远期有效率达8 0 。长期的临床实践证明，蜂 毒治疗支气管哮喘等变应性疾病用量宜轻，单纯性哮喘和，儿哮喘经蜂毒治疗的 效果优于有并发症成人。 1 1 5 4 用于治疗艾滋病 德国采用蜂毒破坏病人体内艾滋病病毒的促进剂对病毒的转录，从而根除 了病毒扩散体系。研究证明，蜂毒可减少7 0 的基因转录，使病毒的产生减少 9 9 ，蜂毒优势是直接从内部抑制了病毒的产生【2 2 】。 1 1 5 5 用于治疗其它疾病 蜂毒还可以治疗红斑性狼疮、带状疱疹、硬皮病、枯草热、血管神经性水 肿、血管舒缩性鼻炎、痉挛性结肠炎、牛皮癣、遗尿、痛风、甲状腺功能亢进、 白塞病、妇科炎症、溃疡病、更年期综合症等疾病【l 】。 1 1 6 蜂毒的毒性和不良反应 6 第1 章文献综述 虽然蜂毒治疗量与中毒量、致死量之间有很大距离，但毕竟是一种昆虫类毒 素，因而各种不同年龄、性别的人对其敏感性有所不同，尤其是儿童、老人和 妇女。蜂毒中磷酯酶a 2 、透明质酸酶有很强的致敏性，局部过敏较强烈，有全 身荨麻疹神经性水肿【2 3 1 ，少数患者在治疗初期伴有低热或淋巴结肿大等全身反 应，经治疗一段时间后症状消失，国内临床有过敏致死的报道。其次蜂毒有溶 血作用，能发生溶血性贫血，急性非淋巴细胞白血病，对血小板凝集作用有影 响，能发生紫癜，另外还有肾脏损伤，迟发性超敏感性反应，急性多发性神经 炎，视神经炎等报道，而且还可能致畸致突变。如果蜇刺过敏，尤其是过敏性 休克，必须及时抢救，以免造成严重后果。 1 2 蜂毒对心血管系统的影响及其机制的研究进展 蜂毒对心血管具有强烈作用，如降压【2 4 1 、抗心律失常、改善脑血流及心肌功 能等多方面作用【2 5 1 。蜂毒可治疗症状性高血压和高血压病，另外蜂毒对于更年 期症状性高血压有良好的治疗作用。此外，蜂毒对心绞痛、血栓闭塞性脉管炎、 动脉粥样硬化等心血管系统疾病也有一定疗效【2 6 】。 1 2 1蜂毒对心脏的影响及其机制 1 2 1 1 蜂毒及蜂毒肽对心脏的影响 1 9 8 0 年，m a r “5 】发现：离体动物心脏，一次性注射蜂毒肽1 0 4 0 g ，引起心 脏麻痹，呈量效关系。蜂毒肽1 0 4 0 肛g 溶于2 0 m l 灌流液作心脏灌流，引起心脏麻 痹及灌流压增加，呈量效关系。在离体动物心脏，蜂毒肽具强的心脏毒，注射 蜂毒肽后，毒性立即出现，伴e c g 的变化及g o t 释放至灌流液中。注射蜂毒肽 后出现心脏挛缩，甚至不可逆麻痹，在蛙的实验中，亦可观察到。 在整体动物，注射蜂毒肽后，未立即出现心脏毒，心率不变，仅在注射后1 5 m i n ，偶然出现e c g 变化。个别动物e c g 出现s t 低平。在体动物，蜂毒肽的心脏 毒性减弱，m a r s h 认为，可能蜂毒肽被未知器官或部位摄取，但未得到证实。 蜂毒肽对心血管的作用与全蜂毒相似，m a r s h 将全峰毒的作用归咎于蜂毒 肽。 卡甫林斯基( e k a p l i n - s k y ) 2 7 证明，当给家兔按l 1 5 m 眺g 静脉注射蜂毒肽时， 7 第1 章文献综述 引起窦性心动过速、心律不齐和房室传导阻滞，并能降低血压及改变心电活动等。 当给猫按l m g k g 静脉注射蜂毒肽时，可使血压立刻降低至不可逆休克水平，使 心电图呈现三种改变：s t t 段明显升高或下降；各种程度的房室传导阻滞；严 重的室性心律不齐。 然而，也有学者们在狗和猕猴上的实验表明：蜂毒明肽具有p 肾上腺素和 抗节律不齐的作用，它增o n , g , 率和收缩力，使节律不齐恢复正常的节律，但不 影响血压。 维克和许帕曼等从蜂毒中提出了一种具1 3 肾上腺素和抗节律不齐作用的心 脏肽，在3 0 只实验动物( 2 0 只狗、1 0 只猴的离体心脏) 和1 2 只动物( 6 只狗、6 只猴) 上作了研究：心脏肽冠状循环灌流离体心脏时，增加频率( 5 0 l o ) ，收缩力增 力n 0 5 0 + 5 0 ) ，冠状灌压没有变化。在节律不齐的心脏上，注射0 、2 m g 心脏肽 可以恢复正常的节律，增加频率和收缩力，维持心脏的能力和防止心肌衰竭【2 8 1 。 研究表明，心脏肽具有增强心收缩力，抗心律失常，改善减弱的心脏功能及预防 全身性血管衰竭的作用。蜂毒可用于治疗心血管衰竭、心原性休克或心功能降 低任何综合征。 1 2 1 2 蜂毒及蜂毒肽对心脏影响的机制探究 国内游育红等就蜂毒对心肌的影响作了系列研究，认为蜂毒肽可引起心肌 挛缩性抑制。他们分离成年豚鼠心肌细胞，以f u r a 一2 a m 为荧光试剂，测了蜂 毒肽引起的心肌细胞内钙离子浓度变化，观察蜂毒肽对心脏的作用与心肌细胞 内钙浓度的关系，结果显示，蜂毒肽3 5x l o 。3 m o l l 为终浓度，使细胞内钙离子 浓度增加，由静息状态11 0 n m o l l 升至2 1 5 n m o l l 增加达1 0 4 。用维拉帕米 ( 1 0 由l ) 处理并未明显拮抗蜂毒肽引起的细胞内钙浓度增加，提示蜂毒肽可促 进钙离子内流增加，可能与维拉帕米所阻断的钙通道无关【2 9 1 。对大鼠离体心房 实验结果则表明，蜂毒肽具有正性频率和负性肌力作用。原因可能是蜂毒肽能 促进心脏自律细胞钙离子内流，而抑制工作心肌细胞钙的内流【3 0 】。 有关蜂毒肽的心脏毒性作用，一般认为蜂毒肽可以使细胞膜的透性增加， 细胞内容物泄露，细胞裂解。蜂毒肽诱导的磷脂双分子层的裂解的发生机制是 “全或无”，也就是说蜂毒肽作用下，有的囊泡的内容物全部释放，而有的则 保持完整，没有渗漏。内容物释放的比例与蜂毒肽脂质的摩尔比率有关，只有 达到一定量的蜂毒肽才可能有内容物渗出【3 。 第1 章文献综述 另有资料认为，蜂毒明肽是一种钙离子依赖的钾通道( c a l c i u m a c t i v a t e dk c h 籼e 1 ) 阻断齐i j 【3 2 】，而k + 通道在调节膜电位和兴奋性方面起着重要作用。c 在细 胞内的浓度( 1 5 0 m m o l l ) 远大于细胞外浓度( 4 m m o l l ) ，当k + 通道阻滞时，k + 不能 外流，使膜电位负值变小，膜去极化，动作电位时程和有效不应期延长，细胞 兴奋性增高，不应期延长可抗心律失常。当k + 通道开放时，k + 外流增加，膜超 极化，缩短动作电位时程，使膜上c a 2 + 、n a + 等通道开放机率下降，膜兴奋性降 低。蜂毒明肽通过阻断心肌细胞的k + 通道，使心肌细胞兴奋性增高也是其强心 作用的一个机制。 蜂毒中的磷脂酶a 2 则能直接作用于血管平滑肌，而改变血管张力，具有抗 心律失常作用。 蜂毒对心血管的影响颇似组织胺，体内外实验证明蜂毒能促进细胞组胺的 释放。蜂毒中能促进组胺释放的成分有：m e l i t t i n 、p l a 、m c d 多肽。蜂毒肽破 坏肥大细胞释放出组胺；p l a 促进卵磷脂转变为溶血卵磷脂，后者使肥大细胞内 颗粒与细胞膜融合，释放出内容物；强碱性的m c d 多肽可直接与肥大细胞膜 上的钙通道蛋白酸性侧链基团发生反应，导致钙通道开放，钙向细胞内流动， 使肥大细胞脱颗粒。m c d 多肽释放组胺的能力为蜂毒肽的1 0 - 1 0 0 倍。1 0 8 1 0 。7 m o l l 的m c d 一多肽离体实验，可使大鼠腹腔肥大细胞中5 0 的组胺释放。此 外，蜂毒内尚有传播组织胺的物质透明质酸酶存在，因而使其组织胺样作用更 加显著6 1 。 组胺( h i s t a m i n e ) 由组氨酸经组氨酸脱羧酶( h d c ) 脱羧而产生，是人体内分布 广，作用强的生物活性物质之一。一般认为，它和其他神经递质一样，首先和 靶细胞上特异性受体结合，从而改变细胞的兴奋性而发挥广泛的生理作用。组 胺主要通过作用于三种受体而发挥