（农药学专业论文）偏基苍耳杀虫活性研究.pdf

摘要 本文比较了福建农林大学福州校区校园常见的1 5 种菊科植物乙醇提 取物对菜粉蝶( 彤8 巧5 a p a el ) 5 龄幼虫的室内生物活性。系统的分析 了偏基苍耳( ；( a n t h i u mi n a e q u i l a t u m ) 两种提取方法、不同部位、不同提 取溶剂提取物对菜粉蝶5 龄幼虫的生物活性；测定了偏基苍耳叶的乙醇提 取物对黄曲条跳甲( 户缈 o t r e t as t r i o j a t ef a b r i c i u s ) 成虫、斜纹夜蛾 ( s p o d o p t e r a i t u r a f a b r i e i u s ) 3 龄幼虫、小菜蛾( p u t e j a x y l o s t e a l i ) 3 龄幼虫的生物活性；测定偏基苍耳叶的乙醇提取物的不同浓度对菜 粉蝶幼虫的生长发育和菜粉蝶产卵的影响。评价了偏基苍耳叶的乙醇提取 物对菜粉蝶幼虫的室外应用效果。采用柱层析法初步分离了偏基苍耳叶的 乙醇提取物组分，并测定了各组分对菜粉蝶5 龄幼虫的生物活性。 室内生物测定结果表明，1 5 种菊科植物的乙醇提取物对菜粉蝶5 龄 幼虫具有一定的生物活性，其中以偏基苍耳为最高，试虫取食带药的叶碟 2 4 h 、4 8 h 后的拒食率分别为7 8 3 1 和5 3 1 3 ，7 天后的校正死亡率为 9 5 2 3 。 以乙醇作溶剂用索氏法和冷提法对偏基苍耳的根、茎、叶、果实进行 了提取，索氏法、冷体法提取结果都表明偏基苍耳根、茎、叶、提取物中 以偏基苍耳叶的提取物活性为最高；索氏法提取根、茎、叶、果实提取物 处理叶碟2 4 h 后，对莱粉蝶5 龄幼虫的拒食率分别为3 0 8 4 、4 7 7 2 、 6 1 6 3 、3 3 3 4 ：它们的提取物处理叶碟4 8 h 后，对菜粉蝶5 龄幼虫的拒 食率分别为1 9 9 4 、2 3 6 8 、4 8 1 5 、2 0 5 8 ：7 d 后的校正死亡率分别 1 5 0 1 、3 6 2 6 、9 0 7 1 9 6 、5 3 6 8 。冷提法提取根、茎、叶、果实提取物 处理叶碟2 4 h 后，对菜粉蝶5 龄幼虫的拒食率分别为4 9 1 9 、5 3 8 7 、6 9 1 7 、4 1 2 2 ；它们的提取物处理叶碟4 8 h 后，对菜粉蝶5 龄幼虫的拒食率 分别为1 3 0 6 、2 0 5 3 、5 0 0 2 、3 9 1 0 ；7 d 后的校正死亡率分别2 3 1 7 、 4 6 利、9 6 3 7 、2 3 4 5 。并且根、茎、叶、果实提取物生物活性测定结 果表饵冷提法优于索氏法。 用丙酮、石油醚、乙醇3 种溶剂提取偏基苍耳叶，得到三种液体的提 取杉。寸菜粉蝶幼虫都有生物活性，其中以偏基苍耳叶的乙醇提取物对菜粉 蝶5 羚幼虫的生物活性为最强；偏基苍耳叶的乙醇提取物对菜粉蝶5 龄幼 虫在2 4 h 和4 8 h 后的拒食率为6 5 2 7 和5 1 4 2 ，7 天后的校正死亡率为 9 5 3 ；其次为丙酮提取物，它对菜粉蝶5 龄幼虫在2 4 h 和4 8 h 后的拒食 率为5 3 0 9 和4 0 8 6 ，7 天后的校正死亡率为7 5 6 7 ：最后为石油醚提 取物，它对菜粉蝶5 龄幼虫在2 4 h 和4 8 h 后的拒食率为5 2 3 1 和3 0 3 7 ， 7 天后的校正死亡率为6 8 3 6 。 用偏基苍耳叶的乙醇提取物的不同浓度处理菜粉蝶5 龄幼虫，结果表 明，随着浓度的减小，对菜粉蝶幼虫的生物活性也随之降低，但是即使浓 度为0 1 2 5 时，对菜粉蝶5 龄幼虫在处理2 4 h 和4 8 h 拒食率分别为4 2 7 4 和3 0 5 7 ，7 d 后的校正死亡率为2 0 3 7 。浓度为2 ，在2 4 h 、4 8 h 后 对菜“分蝶幼虫的拒食率分别为6 1 1 1 和5 0 3 8 ，7 d 后的校正死亡率为 9 3 骶。浓度为1 ，在2 4 h 、4 8 h 后对菜粉蝶幼虫的拒食率分别为5 1 2 8 和4 4 3 5 ，7 d 后的校正死亡率为8 5 4 9 。浓度为0 2 5 时，在2 4 h 、 4 8 h 后对菜粉蝶幼虫的拒食率分别为4 5 7 3 和3 4 1 2 ，7 d 后的校正死亡 率为4 3 2 5 。 蓉虫谱研究表明偏基苍耳叶的乙醇提取物不仅对菜粉蝶有较高的生物 活性，而且对黄曲条跳甲成虫、小菜蛾幼虫、斜纹夜蛾幼虫也具有较强的 生物活性。当试验浓度为2 时，对黄曲条跳甲成虫、小菜蛾3 龄幼虫、斜 纹夜_ i 戎3 龄幼虫2 4 h 拒食率分别为8 5 2 4 、7 5 7 5 和9 3 2 0 ；4 8 h 后的拒食 率分i ) 0 为和7 9 7 8 、7 0 6 9 和8 4 9 0 ；4 天后的校正死亡率为4 3 2 1 ，7 d 后酐燮正死亡率分别为5 2 5 4 和3 0 7 2 。总体而言，这3 种试虫中对黄曲 条跳甲成虫效果最强，次之是斜纹夜蛾3 龄幼虫，对小菜蛾3 龄幼虫较弱。 5 龄菜粉蝶幼虫取食偏基苍耳叶的乙醇提取物处理过的叶碟后，与对 照耗比体重其增加明显减缓甚至出现负增长，这种影响随着浓度的增加而 增大。当浓度为0 5 时，菜粉蝶幼虫的体重在l d 和2 d 体重减小，分别 为对照体重1 2 左右。3 d 后的体重增加，但仅为对照的i 3 ，4 d 、5 d 后 体重又随之减小。浓度为1 和2 时，菜粉蝶幼虫的体重随着时间的增加 而减小的，出现负的增长。而且取食偏基苍耳叶的乙醇提取物处理过的叶 碟后，对幼虫存活率的影响是：化蛹高峰期比对照组延迟，而且随着浓度 的增加化蛹数随之减小。当浓度为0 1 2 5 ，0 5 ，1 时，在5 d 总化蛹 虫数分别为1 1 头，1 头，0 头；幼虫7 d 后的校正死亡率为6 2 0 7 、8 2 7 5 和1 ( ，o 。 产卵忌避试验的结果表明，提取物对菜粉蝶的产卵也有一定的影响， 随蓑：农度的增加，产卵忌避率也相应增大。浓度为2 偏基苍耳叶的乙醇 提取物，第1 、2 、3 、5 d 对菜粉蝶产卵忌避率分别为4 7 4 4 、4 0 2 1 、3 6 4 0 和2 1 2 9 。 ：晦偏基苍耳叶的乙醇提取物通过柱层析，得到不同流分对菜粉蝶幼虫 的生物活性，结果表明：流分一5 和流分- 6 对菜粉蝶5 龄幼虫2 4 h 和4 8 h 的非选择性拒食作用最强，分别为7 1 9 2 和5 5 7 2 ，6 7 1 5 和6 0 3 7 。 、舟偏基苍耳叶的乙醇提取物应用于菜粉蝶室外防治，盆栽试验中，施 药7 ( 后，2 偏基苍耳叶的乙醇提取物和1 偏基苍耳叶的乙醇提取物处 理后的防效效果分别是6 4 8 7 和5 2 3 9 。田间小区试验表明，偏基苍耳 叶乙谆提取物喷雾处理后3 d 出现了死虫，虫口密度有一定的下降，0 5 偏基苍耳叶乙醇提取物处理组防效为2 0 7 9 ，1 偏基苍耳叶乙醇提取物 处理组防效为3 4 2 6 ，2 偏基苍耳叶乙醇提取物处理组防效达到4 3 5 0 。由于受到天气的影响，田间小区的试验结果并不是很理想。 关键词偏基苍耳菜粉蝶生物活性 a b s t r a e t ! nt h i sp a p e r , f i f t e e ns p e c i e so fc o m p o s i t a ew e r et r e a t e df o re x t r a c t i o na n d b i o l o g i c a la c t i v i t i e so ft h e i re x t r a c t sa g a i n s tp i e r i sr a p a ew e r ec o m p a r e da n d a n a l y z e d t h e nx a n t h i u mi n a e q u i l a t u mw a ss i n g l e do u ta n de x t r a c t e dw i t l lt w o t r a d k i o n a lm e t h o d sa n dt h r e es o l v e n t s ，a n db i o l o g i c a la c t i v i t i e so ft h ee t h a n o l e x t r r c tf r o mt h el e a v e so fi t a g a i n s tp h y l l o t r e t av i t t a t a ，s p o d o p t e r al i t u r aa n d p l u f 口x y l o s t e l l aw e r ed e t e r m i n e db yb i o a s s a y t h ee f f e c t so ft h ee x t r a c to f d i f f e r e n tc o n c e n t r a t i o n so nt h eg r o w t ha n do v i p o s i t i o no fp i e r i sr a p a ew e r e m e a z j l r e d ，a n d f i e l dt r i a l sw e r ec a r r i e do u tf o r m e a s u r i n gi t s e f f e c to n c o n t r o l l i n gp i e r i sr a p a e a c t i v ef r a c t i o n sw e r es e p a r a t e df r o mt h ee x t r a c to f x a n t ；? i u mi n a e q u i l a t u mb ys i l i c ag e lc o l u m nc h r o m a t o g r a p h y , a n db i o l o g i e a l a c t i v i t i e so f t h ef r a c t i o n sa g a i n s tp i e r i sr a p a ew e r ea l s od e t e r m i n e d n l er e s u l t so fb i o a s s a ys h o w e dt h a ta l lt h ee t h a n o le x t r a c t sf r o mt h o s e1 5 p l a n 扭h a db i o l o g i c a la c t i v i t ya g a i n s tp i e r i sr a p a e x a n t h i u mi n a e q u i l a t u m s h o w e dt h eh i g h e s tb i o l o g i c a la c t i v i t ya g a i n s tt h ep e s t w i t i li t sa n t i f e e d a n tr a t e s b e i n ? 7 8 3 la n d5 3 1 3 ，a f t e r2 4a n d4 8h o u r so f t r e a t m e n t s ，r e s p e c t i v e l y , a n d t h ec 2 , r r e c t e dm o r t a l i t yb e i n g9 5 2 3 ，a f t e r7d a y so f t r e a t m e n t ) i f f e r e n tp a r t so f x a n t h i u mi n a e q u i l a t u m ，s u c ha si t sr o o t s ，s t e m s ，l e a v e s a n d ：珂t s w e r et r e a t e df o re x t r a c t i o nw i t he t h a n o la n dt w oe x t r a c t i o nm e t h o d s t h er e s u l t ss h o w e dt h a tt h ee x t r a c tf r o mt h el e a v e sh a dt h eh i g h e s tb i o l o g i c a l a c t i v i t ya g a i n s tt h ep e s t 1 1 1 ea n t i f e e d a n tr a t e so ft h ee x t r a c t sf r o mt h er o o t s s t e m ：；1 e a v e sa n df r u i t sb ys o x h l e tm e t h o dw e r e3 0 8 4 ，4 7 7 2 ，6 1 6 3 a n d 3 3 3 - 。，r e s p e c t i v e l y , a f t e r2 4h o u r so ft r e a t m e n t s ，a n dw e r e1 9 9 4 ，2 3 6 8 ， 4 8 1 5 a n d2 0 5 8 ，r e s p e c t i v e l y , a f t e r4 8h o u r so ft r e a t m e n t s ，a n dc o r r e c t e d m o r t ? l i t i e sw e r e1 5 0 1 ，3 6 2 6 ，9 0 7 1 ，a n d5 3 6 8 ，r e s p e c t i v e l y , w h i l et h e a n t i f c e d a n tr a t e so f t h ee x t r a c t sb yc o l dd i p p i n gw e r e4 9 1 9 ，5 3 8 7 ，6 9 1 7 a n d ，1 2 2 ，r e s p e c t i v e l y , a f t e r2 4h o u r s ，a n dw e r e1 3 0 6 ，2 0 5 3 ，5 0 0 2 a n d3 9 1 0 ，r e s p e c t i v e l y , a f t e r4 8h o u r s ，a n dc o r r e c t e dm o r t a l i t i e sw e r e2 3 1 7 ， 4 6 7 4 ，9 6 3 7 a n d2 3 4 5 ，r e s p e c t i v e ! y t h i ss h o w e dt h a tc o l dd i p p i n g m e t k dw a sm o r ee f f e c t i v et h a ns o x h l e tm e t h o d ee x t r a c t sf r o mt h e1 e a v e so fx a n t h i u mi n a e q u i l a t u m w i t he t h a n 0 1 a c e t o n ea n dp e t r o l e u me t h e rp o s s e s s e db i o l o g i c a la c t i v i t ya g a i n s tp i e r i sr a p a e ， w h e nt h ee t h a n o le x t r a c th a dt h eh i 【g h e s t ，w i t hi t sa n t i f e e d a n tr a t e sb e i n g 6 5 2 7 a n d51 2 4 ，a f t e r2 4a n d4 8h o u r so ft r e a t m e n t s ，r e s p e c t i v e l y , a n dt h e c o r r e c t e dm o r t a l i t yb e i n g9 5 3 4 a f t e r7d a y so ft r e a t m e n t w m l ef o rt h e a c e t o n ee x t r a c t ，t h ea n t i f e e d a n tr a t e sa n dc o r r e c t e dm o r t a l i t yw e r e5 3 0 9 ， 4 0 8 6 a n d9 5 3 4 ，r e s p e c t i v e l y , a n df o rt h ep e t r o l e u me t h e re x t r a c t ，t h er a t e s w e r e5 2 3 1 ，3 0 3 7 a n d6 8 3 6 ，r e s p e c t i v e l y t h el a r v a eo fp i e r i sr a p a ew e r et r e a t e dw i t ht h ee t h a n o le x t r a c to f d i 疗e r e n tc o n c e n t r a t i o n sa n dt h er e s u l t si n d i c a t e dt h a ta si t sc o n c e n t r a t i o n d e c r e a s e d ，i t sb i o l o g ya c t i v i t y w a sa l s or e d u c e d w i t ht h ee x t r a c ta t c o n c e n t r a t i o n o f 2 ，1 a n do 2 5 ，t h ea n t i f e e d a n tr a t e s w e r e6 1 ，1 1 ，5 1 2 8 a n d4 5 7 3 ，r e s p e c t i v e l y , a f t e r2 4h o u r so ft r e a t m e n t s ，a n dt h er a t e sw e r e 5 0 3 8 ，4 4 3 5 a n d3 4 1 2 ，r e s p e c t i v e l y , a f t e r4 8h o u r so ft r e a t m e n t s , t h e c o r r e c t e dm o r t a l i t i e sw e r e9 3 5 6 ，8 5 4 9 a n d4 3 2 5 ，r e s p e c t i v e l y e v e n 、】l r i t ht h ee x t r a c ta tc o n c e n t r a t i o na s1 0 wa s0 1 2 5 a f t e r2 4a n d4 8h o u r so f t r e a t m e n t s ，t h ea n t i f e e d a n tr a t e sw e r e4 2 7 4 a n d3 0 5 7 ，r e s p e c t i v e l y , a n dt h e c o r r e c tm o r t a l i t yw a s2 0 3 7 t h ee x t r a c th a das t r o n ga n t i f e e d a n te f f e c tn o to n l yo np i e r i sr a p a e b u ta l s o o np i ? y l l o t r e t av i t t a t a ，s p o d o p t e r al i t u r aa n dp l u t e l l ax y l o s t e l l a w i t hae x t r a c t a tc o n c e n t r a t i o no f2 ，i th a das t r o n ga n t i f e e d a n te f f e c to np h y l l o t r e t av i t t a t a ， w i t h t h e a n t i f e e d a n tr a t e s b e i n g8 5 0 6 a n d 7 9 7 8 ，r e s p e c t i v e l y ，a f t e r 2 4 a n d 4 8h o u r s ，a n dt h em o r t a l i t yr a t eb e i n g4 3 2 1 a f t e r4d a y so ft r e a t m e n t u n d e r t h es a m ec o n d i t i o n ，t h ea n t i f e e d a n tr a t e sw e r e7 5 7 5 a n d7 0 6 9 ，r e s p e c t i v e l y , a f t e r2 4a n d4 8h o u r s ，a n dt h em o r t a l i t yr a t ew a s6 2 5 4 a f t e r7d a y so f t r e a t m e n to f3 r d i n s t a rl a r v a eo fp l u t l l ax y l o s t e l l a w h i l ef o r 勋o d o p t e r af i t u r a t h ea n t i f e e d a n tr a t e sw e r e9 3 _ 2 0 a n d8 4 9 0 r e s p e c t i v e l y , a n dt h em o r t a l i t y r a t ew a s3 0 7 2 a f t e r7d a y so f t r e a t m e n t w i t ht h ee x t r a c ta tac o n c e n t r a t i o no f2 ，t h ew e i g h to fl a r v a ei n c r e a s e d s l o ：y t h er e s u l t so f b i o a s s a ys h o w e dt h a tw h e n t h ec o n c e n t r a t i o nw a s2 t h e w e i g h to fal a r v aw a so n l yh a l fo ft h a ti nc ki nt h ef i r s tt w od a y s a n dt h e w e i g h to fal a r v aw a so n l y1 3t i m e so fi nc ki nn l ef i r s tt h r e ed a y s a tt h e s a m pt i m e t h ew e i g h tw a ss t i i lr e d u c e da f t e rt r e a t e di nt h ef o u r t ha n df i f t hd a y w h e it h e 。c o n c e n t r a t i o nw a s2 a n d1 t h ew e i g h to fal a l v ad e c r e a s e d c o m p a r e dw i t ht h a ti nf i r s td a y n l ei n s e c tf e do nt r e a t e dl e a v e sa n di t sp u p a t i o n r a t ed e c r e a s e d t h ee x t r a c th a sa ne f f e c to np i e r i sr a p a ea n dt h er e s u l t ss h o w e dt h a t o v i p o s i t i o nr e p e l l e n t r a t ew a s4 7 4 4 ，4 0 2 1 ，3 6 4 0 a n d2 1 2 9 ， r e s p e c t i v e l y , a f t e rt h ef i r s tf i v ed a y s s i xf r a c t i o n sw e r es e p a r a t e df r o mt h ee x t r a c tt h r o u g hs i l i c ag e lc o l u m n c h r o j n a t o g r a p h y n l er e s u l t so fb i o a s s a ys h o w e dt h a tf r a c t i o n5a n d6h a da s t r o n ga n t i f e e d a n te f f e c to n5 t h i n s t a rl a r v a eo fp i e r i sr a p a ei nt h ef i r s tt w o d a y s ，a f t e r2 4a n d4 8h o u r so ft r e a t m e n t s ，t h ea n t i f e e d a n tr a t e sw e r e7 1 9 2 a n d5 5 7 2 ，6 7 1 5 a n d6 0 3 7 ，r e s p e c t i v e l y t h er e s u l t so f t h ef i e l dt r a i l ss h o w e dt h a ti t se r i e c to nl a r v a eo f p i e r i sr a p a e w a sr o ti d e a ld u et ov a r i o u sw e a t h e r s k e y w o r d s ：x a n t h i u mi n a e q u i l a t u m1 p i e r i sr a p a e ；b i o l o g ya c t i v i t y 独创性声明 本人声明，所呈交的学位( 毕业) 论文，是在指导教师的指导下，通过 我的努力取得的成果，并且是自己撰写的。尽我所知，除了文中作了标注和 致谢中已作了答谢的地方外，论文中不包含其他人发表或撰写过的研究成 果。与我一同对本研究做出贡献的同志，都在论文中作了明确的说明并表示 了谢意，如被查有侵犯他人知识产权的行为，由本人承担应有的责任。 学位( 毕业) 论文作者亲笔签名：候翠j 丽同期：砌文玉3 论文使用授权的说明 本人完全了解福建农林大学有关保留、使用学位( 毕业) 论文的规定， 即学校有权送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论 文的全部或部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。 保密，在年后解密可适用本授权书。 口 不保密，本论文属于不保密。 学位( 毕业) 论文作者亲笔签名：侯翠丽 指导教师亲笔签名： | = i 期：p 辑孓引 日期： ，福建农林大学硕士论文 前言 农药的使用是防治农作物病、虫、草和鼠害的主要手段，对保护农作物正 常生长发育，丰产丰收和人类健康起到了重要的作用。就杀虫剂而言，使用于 棉花、玉米、水稻的总量几乎可以占到杀虫荆市场的1 2 ；在各种水果和蔬菜上 的用量又占去约1 ，3 的市场( 高德霖，1 9 9 4 ) 。整个农药的投入侬作物的收益比 为1 ：1 0 ( 叶纪明等，1 9 9 9 ) 。由于近年来很多地区单一使用化学杀虫剂，因此它 的负面影响也逐渐暴露出来，诸如，使用杀虫剂所引起的3 r 问题：环境和农作 物上的农药残留、昆虫抗药性、害虫再猖獗( 屠豫钦，1 9 9 8 ) 。同时由于“绿色 壁垒”的原因，我国农产品的出口受到限制。据大连海关提供信息：到2 0 0 2 年 2 月底出口农产品遭退的价值达到1 5 9 万美元，比2 0 0 1 年同期增长1 7 4 。 据了解，近凡年，我国农产品由于质量安全方面的原因( 即农产品农药残留的 问题) 而在国际市场屡屡受挫的状况已经不在少数( 周慧燕，2 0 0 3 ) 。 为了克服这些不利影响，适应人类、环境长远利益需要和持续发展，人们 一方面，探索新的防治策略，如6 0 年代提出的有害生物综合治理，进而发展为 农田生态系统综合管理( 戈峰，1 9 9 2 ) ，并强调综合使用各种生态调控措施( 丁 岩钦，1 9 9 3 ) ，实现害虫种群系统的持续控制( 庞雄飞，1 9 9 5 ) 及农业可持续发 展。另一方面积极探讨杀虫剂的自我改造和完善的途径。一是用高效、低毒、 低残留农药品种取代高毒、广谱性农药品种；二是直接利用天然杀虫物质：三 是分析天然杀虫物质中的有效成分的化学结构。研究结构与活性关系，寻找人 工合成的天然模板，进行仿生会成。第三孝中途径既能较好的嬲决当前化学防治 负面影响的问题，又适应现代化规模生产的需要，更具有发展前途。因此，从 天然产品中寻找、开发优良的新型杀虫剂品种被人们广泛的研究。 在长期进化过程中植物为了抵抗害虫的为害形成了复杂的化学防御体系，其 中起主导作用的是一些植物次生代谢物。这些化合物能影响昆虫( 或其它有机 体) 的生长、发育。人们长期对植物性杀虫剂的研究中发现，大多数植物性杀 - 福建农林大学硕士论文 虫剂，无论单用或混用，不仅使害虫化蛹率降低，这说明植物性杀虫剂不仅能 干扰害虫取食，起到保护叶片的作用，而且还能对幼虫的生长发育及变态起到 明显的影响( 赵善欢等，1 9 8 9 ) 。 与化学农药相比，植物性杀虫剂具有以下几个优点：植物性杀虫剂成分 是自然存在的物质，在植物与自然界的长期演化过程中，自然界对植物中的各 种化学早已形成了完善的降解机制，其活性成分在自然界中不积累，对环境较 安全，其安全间隔期短，特别适用于蔬菜、水果和茶叶等被人直接食用的作物， 对作物也很难产生药害；对害虫的作用机理与常规化学农药差别很大。植物 性杀虫剂成分复杂，能够作用于昆虫的多个器官系统，有利于克服害虫抗药性， 主要具有抑制生长发育、拒食、忌避、呼吸和不育。对非靶标生物比较安全； 而且有些植物杀虫剂还可刺激作物生长，制造方法简便、成本低廉，可以因 地制宣、就地取材( 徐汉虹，2 0 0 2 ) 。 菊科植物是被子植物中最大的一个科，约有i ，0 0 0 属，2 5 ，0 0 0 3 0 ，0 0 0 种，广 布全球，分布于我国的有2 4 0 属，2 ，3 0 0 种之多。其植物成分的复杂性和多样性 均居于植物界的首位，总计有3 0 余种，几乎包括了所有天然化合物类型。菊科 植物不仅都含有黄酮，并且大多数含有挥发油和三萜烯。菊科植物最突出的特 点是含有两类独有的天然产物的结构类型，即倍半萜内酯和许多独有的不同类 型的炔类化合物。前者对许多昆虫有拒食作用，后者则具有对多种生物有机体 有光活化毒杀作用的特点( 乐海洋，1 9 9 7 ) 。人们在探索菊科植物杀虫的过程中， 最重要的发现之一就是从白花除虫菊的花中分离到除虫菊素化合物，并且以它 为先导化合物，合成了一系列的拟除虫菊酯类杀虫剂，该类农药独特的机制及 对乳动物毒性低的优点，使该类杀虫剂已成为当前农业生产中的重要品种。至 目前为止，菊科植物杀虫剂的研究比较多的集中在万寿菊、胜红蓟和茼蒿，并 且已经大概知道它们的杀虫的有效成分。如万寿菊的根提取物对昆虫具有良好 的毒杀活性，而且活性成分中的伽噻吩具有光活化性质，它的根提物对谷蠹 ( r h y z o p e r t h ad o m i n i c af a b r i c i u s ) 和黄粉虫( t e n e b r i om o l i t o rl ) 有毒杀效果 2 - 福建农林大学硕士论文 ( 赵善欢等，1 9 9 73 ，万寿菊的粗提物对蔬菜上的重要害虫小菜蛾( p l u t l t a x y l o s t e l l al ) 具产卵忌避作用( 崔德君等，1 9 8 8 ) ，同时杨秀娟报道( 2 0 0 4 ) 万 寿菊提取液能在2 4 小时内杀死5 0 以上的线虫：人们在知道猪毛蓠的主要杀虫 活性物质是茵陈二炔对斜纹夜蛾( s p o d o p t e r a l i t u r af a b r i c i u s ) 有强烈的拒食 活性( 乐海洋，1 9 9 2 ) ：也发现从千日菊分离出的千日菊酰胺对美洲大蠊 ( p e r p l a n e t aa m e r i c a n al ，) 有迅速的击倒作用，是一种强烈的神经毒剂。同时菊 科植物，由于它具有光活化的作用，即在无光的条件下对昆虫没有活性或活性 很低，但在光照的条件下，有很强的活性，因此菊科植物f 1 2 0 世纪8 0 年代以来 也用于卫生杀虫剂的开发( 如蚊子) 而且对卫生害虫也有一定的毒杀作用。 偏基苍耳为菊科植物，具有菊科植物所拥有的两类独特的天然成分，仅仅 分布于我国的广东、福建、台湾，容易生长，对环境的要求不高。同时对脊椎 动物无明显的毒性或对植物无药害，在环境中迅速的降解。因此本文选取福建 省常见的偏基苍耳为研究对象， 近1 0 年来，有很多学者报道了苍耳的提取物对菜粉蝶、斜纹夜蛾、粘虫 ( m y t h i m n as e p a r a t aw a l k e r ) 、桃蚜( m y z u s p e r s i c a es u l z e r ) 和萝卜蚜i p a p h i s e r y s i m ik a l t e n b a c h ) 有拒食活性( 章玉苹，2 0 0 0 ；周琼，2 0 0 2 ；张宏利等，2 0 0 4 ； 彭跃峰，2 0 0 4 ) 。但是都仅仅报道苍耳对某种试虫有拒食活性，而关于偏基苍 耳的生物活性都没有提到，更不用说偏基苍耳的那一个部位有拒食活性并没有 报道，活性较好部位的不同浓度对菜粉蝶幼虫的拒食活性以及对黄曲条跳甲成 虫、小菜蛾幼虫、斜纹夜蛾幼虫的拒食活性也未见报道。因此，有必要对偏基 苍耳进一步的研究，以确定偏基苍耳的活性部位以及该部位的不同浓度对试虫 的生物活性，甚至是其相应部位的有效成分。以便于充分利用其资源优势，变 害为利，为植物源农药开发及农业生产作出更大的贡献。 本论文以重要的蔬菜害虫菜青虫为主要对象，在室内对偏基苍耳的根、茎、 叶乙醇提取物进行了活性测定。并探讨了不同溶剂提取物对菜青虫的生物活性， 以及不同浓度对菜粉蝶5 铃幼虫、黄曲条跳甲成虫、斜纹夜蛾3 龄幼虫、小菜蛾3 福建农林大学硕士论文 龄幼虫的生物活性。而且采用活性跟踪法，对偏基苍耳的粗提物进行室外生物 测定，同时对粗提物进行有效成分的分离，并对其活性进行评价，为偏基苍耳 的次生物质研究和作为新型植物源农药的开发提供理论基础。 研究的程序如下： 1 l 粉碎 上 j r 上 上 上 活性跟踪 4 析 - 福建农林大学硕士论文 1 材料与方法 1 1 供试材料 1 1 i 供试植物的来源及提取 供试的1 5 种植物，均于2 0 0 3 2 0 0 4 年7 8 月采自福建农林大学福州校区 的校园及周边地区。具体种类及采集部位见表1 。 表1 供试植物 将样品放到室内阴干，切成l 2 c m 长段，用旧报纸包好放人恒温烘箱内 ( 4 0 5 0 。c ) 鼓风吹干至材料发脆。然后用j z 7 1 1 4 型粉碎机粉碎，粉碎的样品 过4 0 目筛子，将千粉装入塑料袋中密封后置于干燥箱内保存待用。 5 福建农林大学硕士论文 用乙酊为溶剂，用2 种提取法对1 5 种菊科植物进行提取。提取的2 种方法： ( 1 ) 索臣提取法：准确称取植物材料干粉1 0 0 9 ，分4 份用滤纸包好后放入索 氏提取器，加入干粉重的5 倍量的9 5 乙醇，回流7 2 h 后，待其冷却后，将提 取液在旋转蒸发器内减压浓缩至膏状，同时记录下提取得到膏状物的重量，便 于计算提耳 ：率。 ( 2 ) 冷浸法：将4 0 0 9 的植物干粉放入广口瓶( 1 l ) 中，一次装2 个广口瓶， 每个瓶内托5 倍量的9 5 乙醇，浸提3 5 天，重复3 次，在此过程中放入摇 床内( 增加振荡，以利于植物的提取) 。过滤后将提取液合并，将提取液在旋转 蒸发器内孤：j 压浓缩至膏状，同时也称取膏状物的重量，计算提取率( 提取物膏 状物的重量干物质的重量) 。 称取l g 浓缩的膏状物用少量的乙醇溶解，加入少量的吐温8 0 乳化剂，用 丙酮配置成2 的药液。放在冰箱中密闭、低温、避光保存。 1 1 2 供试昆虫及饲养 菜粉蛾，鳞翅目，粉蝶科。 斜纹班蛾，鳞翅目，夜蛾科。 黄曲祭跳甲，鞘翅目，叶甲科。 小菜蛾，鳞翅目，菜蛾科。 菜粉蝶、小菜蛾、斜纹夜蛾均从福州建新蔬菜科研基地的菜田( 未施用任 何化学药荆) 采集菜粉蝶、小菜蛾、斜纹夜蛾的幼虫和蛹，幼虫放在田问实验 室内继续厣甘蓝饲养直至化蛹；蛹放在养虫笼内的培养皿中，成虫羽化后用3 0 的蜜糖水饲养，用灯芯浸入装有糖水的棕色瓶( 3 0 m 1 ) 中制成菜粉蝶、小菜蛾、 斜纹夜蛾持续补充蜜源的装置；从田间移入甘蓝( 已经长有6 片叶子) 放入室内 养虫笼内，让成虫产卵，将不同天数的卵做好标记，以获得虫龄一致的试虫。 养虫室内的的温度2 5 士1 ，相对湿度为8 5 a ：1 0 ，光照( l ：d 为1 6 ：8 h ) 。黄曲 条跳甲是跌福州建新蔬菜科研基地的菜田中( 未施用任何化学药剂) 用吸管吸 回成虫放在田间试验田中饲养数代。 6 r 福建农林丈等顾士论文 1 1 3 供试：寿剂 试验中听用的有机溶剂氯仿、乙醇、丙酮、石油醚、乙酸乙酯等均为分析纯。 o 3 的删柬素乳油：成都绿金生物科技有限公司 2 0 0 3 。0 目硅胶h ：青岛海洋化工厂生产 1 1 4 供试加寝 甘蓝：z 、福建农林大学植物保护学院的化保组试验菜田和生态实验室试验笼 中( 未旌仁诃化学药裁) 选择较健壮无虫害甘蓝萤秘甘蓝叶片。 1 1 5 供试义器 电动梏物粉碎机( d w f - l o o ) ：河北黄骅科学仪器厂 循环水式多用真空泵：英峪仪器厂 电子天平：梅特勒一托利多仪器( 上海) 有限公司 真空干燥箱( z k - 8 2 a ) ：上海实验设备厂 恒温循环器( h x 5 0 0 ) ：北京博医康技术公司 恒温水浴锅( b c 2 0 1 ) ：上海贝凯生物化工设备有限公司 旋转蒸发仪( b c - r 2 0 1 b ) ：上海贝凯生物化工设备有限公司 电热恒温鼓风干燥箱( d h q - - 9 0 7 0 ) ；上海益恒实验仪器有限公司 1 1 6 统计灾件 统计软件为d p s 和m i c r o s o f te x c d 2 0 0 0 1 2 偏基苍耳活性成分的提取 将采匪的偏基苍耳植株洗净、晾干将其根、茎、叶、果实( 用手术刀剖开 果皮，便于提取) 分别放入烘箱中烘干( 4 0 n 4 5 c ) 至材料发脆，再分别用粉 碎机粉碎，过4 0 目筛，装入塑料袋密封存于干燥箱中备用。提取方法见1 5 种 菊科植物懿提取方法。但是在素氏提取法中称取偏基苍耳千粉为2 0 魄，冷提法 中称量的倔基苍耳干粉为2 0 0 9 ，此过程共进行了6 次。 7 - 祸建农林大学硕士论文 1 2 1 活性成分的初步分离 苷类物质的提取。将偏基苍耳叶的乙醇提取物的膏状物称取2 0 9 ，加蒸馏 水使得膏状物溶于水中，滤除水不溶性杂质，继续用石油醚萃取。除去残留的 树脂类等脂溶性杂质，水液再用正丁醇萃取，减压回收正丁醇后，浓缩成的膏 状物即为粗总苷，通过大孔树脂柱层析分离。 非苷类物质的提取。以乙醇为溶剂提取偏基苍耳叶，得到的溶液减压回收 醇液至无醇味，再用乙酸乙酯萃取，得到总的萜类物质。 1 2 2 柱层析分离 大孔树脂经过前期处理后，装入柱子中。将苷的水提物通过大孔树脂 ( p d h 1 0 0 ) 柱，分别用水与乙醇的不同比例依次洗脱，便可得到不同的苷类 物质。 萜类物质的分离多用吸附柱层析。将硅胶( 2 0 0 3 0 0 目) 放入烘箱中在 1 2 0 活化1 2 h ，等其冷却下来后，放入石油醚中浸泡2 4 h ，再用石油醚冲洗2 次。 将其装入吸附柱中，边装边敲打柱子，使得柱中的气泡排出。样品与吸附剂之 比为1 ：5 0 。用非极性的有机溶剂冲洗填充柱，选择石油醚和乙酸乙酯的不同 ( 总的溶液量为5 0 0 m 1 ) 比例为洗脱剂。将得到的不同流分进行室内生物测定。 1 3 室内生物活性测定 1 3 1 拒食作用测定 参照吴文君( 1 9 8 8 ) 的方法将新鲜的甘蓝叶片用打孔器( 直径为2 e m ) 打 成叶碟，放入到供试样品的丙酮稀释液中( 粗提物先用少量的水热溶，然后用 乙醇溶解，在该液体中再用丙酮稀释到所需的浓度) 浸5 s ，待叶碟晾干后，放 入直径为9e m 的培养皿中( 内垫滤纸，加少量的蒸馏水保湿) 。非选择性拒食 作用试验中，每皿放入4 片叶碟，放入饥饿了4 h 的菜粉蝶5 龄幼虫1 头( 每 1 0 头为一组，每一组重复3 次) ，分