（微生物学专业论文）蝙蝠蛾拟青霉发酵条件的优化及有效成份提取方法的研究.pdf

沈阳农业大学硕士学位论文 摘要 冬虫夏草是我国名贵的药用真菌，与人参、鹿茸并称为中药三大补品。目前，天然 虫草已濒临灭绝。大量研究表明，蝙蝠蛾拟青霉菌丝粉在化学成份、药理作用及i 临床效 果上与天然虫草基本一致。而且蝙蝠蛾拟青霉是国家允许使用的可药食两用的真菌菌 种。 本报告以蝙蝠蛾拟青霉c s l 0 为试验菌株，对摇瓶发酵培养基配方和发酵条件进行 了优化，并进行扩大培养。研究结果如下： 最佳发酵培养基配方：蔗糖4 豆饼粉4 k h 2 p 0 4 0 1 5 m g s 0 4 0 1 最佳摇瓶发酵条件：初始p h 6 5 ，装液量1 0 0 m l 5 0 0 m l ，种龄为3 6 h ，接种量为5 ， 温度为2 5 ，摇床转速1 7 0 r 恤i n 。菌丝体收率为4 0 】2 9 几。与原配方比，菌丝体收率提 高了3 1 7 5 。 最佳发酵罐发酵条件：通风量l ：o 7 5 ( v m i n ) ，1 0 l 发酵罐装料量为8 l ，搅拌 速率2 0 0 r m in 。通过在发酵过程中流加4 m o l l 的n a o h 和2 m 0 1 l 的h c l 将p h 分别控 制在6 o 、6 5 、7 0 ，当p h = 6 ，5 时菌丝体牧率最高为3 4 7 8 班，同不控制发酵p h 相 比，菌丝体收率增长了1 3 。 蝙蝠蛾拟青霉菌丝粉主要是水煎煮处理，缺点是剂量大，有效成份损失，质量控制 也存在缺陷，本报告采用水浸提法、酶法、超声波法和超微粉技术对菌粉进行处理，目 的是找到一种提高虫草发酵产品质量的提取工艺。研究结果如下： 水浸提法最佳提取工艺：菌粉：水= 1 ：1 0 ，浸提2 h ，浸提2 次，浸提温度7 0 ，甘 露醇含量1 1 2 ，腺苷含量1 6 7 0 岭垃。 酶法提取的最佳工艺：浸提p h 5 ，5 ，浸提温度4 0 ，最佳酶组合：纤维素酶o 1 十 蜗牛酶0 1 ，甘露醇含量1 2 5 6 ，腺苷含量2 0 6 5 p g 幢。 超声波法最佳提取条件：超声波功率2 5 0 w ，作用1 0 m i n ，作用方式：处理6 0 s ，间 歇1 0 s ，浸提p h 5 o ，甘露醇含量1 0 5 6 ，腺苷含量1 6 7 0 腭位。 超微粉甘露醇含量1 1 。7 6 ，腺苷含量2 9 7 0 耀，g ，与未处理菌粉相比分别提高了1 6 和7 0 。 结论：酶法提取的甘露醇和腺苷含量最高，而且处理温度低，耗能少，节约能源， 并且可连续进行处理，单次处理数量大，处理时间短。超微粉提取效果也比较好，但处 理成本高，时间长。 另外，据文献报道，冬虫夏草发酵液中可能含有某种抑菌物质，具有抗菌、抗肿瘤 等作用。本研究对蝙蝠蛾拟青霉菌丝体及过滤废液中抑菌活性物质进行了初步研究，结 果表明： 蝙蝠蛾拟青霉菌丝体对金黄色葡萄球菌有抑制作用，抑菌圈直径为2 0 啪。浓缩2 0 倍的过滤废液对大多数细菌都有拮抗作用，对酵母菌、丝状真菌没有抗菌活性。 关键词：冬虫夏草，蝙蝠蛾拟青霉，菌丝体收率，深层发酵，酶法，超声波法 沈阳农业大学硕士学位论文 a b s t r a c t 删”唧哼矗础脚打i sap r e c i o u sr e s t o r a t j v e 印j p h y t e ，t 1 e 国喇 蛩fj 加p 珊扫，t l l e g i n s e n 岛a n dt h eh a i r ya r i t l e ra r cm e1 1 l r c ek i n g d o m st o i l i c so fc h 协e s e 打a d i t i o n a lm e d i c i n e ， b u tt h en a t l l r a l c o ，咖c 哆p sj f 咒e ，博扫w a si ni m m i n e n td a n g e ra tp r e s e n t t h er e s e a r c h e ss h o w t 1 1 a tt h ep 。8 c f 如以弦p s 月印f 棚p o 、v d e r sa r ec o n s i s t e n tt ot h e 咖a l c b ，咖c 哆p 占j f 菇e 瑚括o nm e c h e m i ci n g r e d i e n t s ，t l l ep h a n n a c o l o g i c a l 胁c t i o n 距d 也ec l i i l i c a le 行b c t s ，l ep o e c i l o m y c e s h e p i a l ii sa m g i d d a ls t r a i n 廿l 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c e l i m ，协e s u b m e 唱e df e r m e n t a t i o n ，t h ee 】 1 z y m a t i cm e m o d ，t l l es u p e r s o n i cw a v em e m o d 4 独创性声明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。 尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰 写过的研究成果，也不包含为获得沈阳农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过 的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并 表示了谢意。 研究生签名 了谗压 爱万户 导师签名： 夕0 弘 r 时间； 嘭 年z 刖7 日 鼙通：j 。g 每乒羚j 躔 关于论文知识产权和使用授权的说明 本论文的知识产权为沈阳农业大学所有。本人完全了解沈阳农业大学有关保留、使 用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阕和借 阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意沈阳农业大学可 以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的内容。 学位论文中的所有内容不经沈阳农业大学授权不得以任何方式擅自对外发表。 ( 保密的学位论文在解密后应遵守此协议) 、 研究生签名： 寸缝圣 时间： 巧年，月，目 导师虢多髻# 时间 j ，。g 年乒r j 糖 沈阳农业大学硕士学位论文 刖舌 冬虫夏草是我国名贵的食药用真菌，与人参、鹿茸并称为中药三大补品。近年来， 冬虫夏草的多种药理功能越来越受到人们的重视，需求量不断增加。但目前，天然虫草 已濒临灭绝。从仁个世纪8 0 年代起，我国研究人员就冬虫夏草的菌种分离、人工培养和 发酵制药等方面开展了大量的研究工作。冬虫夏草菌种资源十分丰富，到目前为止，对 天然冬虫夏草无性型进行过分离研究的报道涉及有1 6 个学名，1 2 个属。包括葡萄穗霉属 舭c 细6 0 ，删r 几冬虫夏草头孢心印而咖印o ，f “m f 船瑚彬、虫草头孢黝幽印。阿”辨 s f n p m 叫、中国拟青霉锄e p f f o 叼j e p s 曲m 删、蝙蝠蛾被孢霉蜘r f 出r p 砌 甲函“印、顶 孢头孢霉却 d ，。删“d w m o n f “圳、中国弯颈j 搴忉。幽成ms 加p m 叫、中国被 毛孢瞳西 “即加一月8 w 倒、蝙蝠蛾拟青霉r p i f o 叼w 5 甲埘功、中华束丝孢 跏m m 8 卅m m s 加e m j 捌、中国金孢霉似甜f 删j 加p 坩圳、蝙蝠蛾被毛孢俾抛“耙胁 印缸脚、虫花棒束孢m g m 如加d s g j 、金龟予绿僵菌( 日， 胁m 西叩肠p ) 和中 国轮枝孢f 他r 出矗“ms f n e m 掣。 目前应用于深层发酵的冬虫夏草菌主要有蝙蝠蛾被孢霉、虫草头孢霉、蝙蝠蛾拟青 霉及中国拟青霉。2 0 0 1 年，蝙蝠蛾被孢霉和蝙蝠蛾拟青霉被列为可药食两用的真菌菌种。 蝙蝠蛾拟青霉最早是从青海化隆县产冬虫夏草上分离得到，属半知菌，丛梗孢日，从梗 孢科，曲霉族，瓶梗青霉属。大量研究表明，蝙蝠蛾拟青霉发酵菌丝粉在化学成份、药 理作用及临床效果r 与天然虫草基本一致。在临床上用于治疗慢性支气管炎、高血脂症、 性功能减退、慢性肾炎和肾衰等病症。 辽宁省微生物科学研究院从青海冬虫夏草中分离得到一株虫草菌，经鉴定为蝙蝠蛾 拟青霉。本院研究人员对其进行了深层发酵研究，取得了较好的效果，但直存在收率 低的问题，因此，在此基础上，本人对培养基配方和发酵条件进行优化，提高菌丝体收 率，洚低生产成本。为了应用于工业化生产，述进行发酵罐的扩大培养，并通过对发酵 菌丝粉成份分析，发现其有效成份略高于天然虫草。所以用蝙蝠蛾拟青霉菌丝粉代替天 然虫草是完全可能的。近年来，国内外对于保健与药用需求的增加，虫草菌丝粉自质量 控制一时成为研究的焦点。传统的水煎煮处理，服用剂量大，有效成分损失严重，本文 尝试运用四种提取方法对蝙蝠蛾拟青霉菌丝粉进行处理，研究发现，复合酶法提取有效 成份浸出率最高，而且处理温度低，节约能源，单次处理数量犬，处理时间短，产品的 质量得到提高，服用剂量减少，解决人体对主要有效成份的高效吸收问题。 质量得到提高，服用剂量减少，解决人体对主要有效成份的高效吸收问题。 文献综述 文献综述 一、冬虫夏草简介 冬虫夏草简称虫草，是冬虫夏草菌寄生于昆虫蝙蝠蛾幼虫上所形成的菌核及子座。 冬虫夏草的形成过程是虫草菌有感染昆虫及菌丝体不断发育的过程。当虫草菌孢子成熟 后散发到适宜的昆虫体上，特别是幼虫的虫体上后，便开始萌发形成菌丝体，菌丝体一 面不断发育，一面开始向虫体体内蔓延，于是昆虫就被这种真菌感染，菌丝体进入昆虫 体内之后，逐渐侵入到虫体的血腔和肠道内，在那里通过分解昆虫体内的组织和各种器 官而继续萌发和不断地生长，这时菌丝体的生命力最为旺盛，通过菌丝体连续不断地分 枝，很快就可以布满整个昆虫的身体内部。菌丝体以虫体内的组织和器官作为其生长发 育的物质和能量来源，最后便将虫体内部完全分解，从而致该昆虫于死遗。春夏之交时， 虫草菌的菌丝体发育也进入了一个新的阶段，即菌丝体从营养生长转化为生殖生长，最 后扭结并从蛹体空壳的头部，胸部或尾部伸出桔黄色到深桔红色，顶端膨大为棒状的子 座。所以，冬虫夏草的得名是从该真菌的寄主在冬季为虫体，到了夏季被虫革真菌菌丝 感染致死后，菌丝扭结并从虫体头部伸出形成子座而得名。 t 二、冬虫夏草的人工培育 目前国内外都在大力开展培育冬虫夏革的工作，虽然已经掌握了人工栽培的基本技 术，但至今离产业化的实际要求有一些关键的科学和技术问题有待突破。沈南英等通过 子囊孢子、内菌核、予座及虫体外菌丝分离得的3 5 个菌株，于2 3 种培养基上进行了实 验。其中有一个从虫体组织分离得的h l 菌株，在营养成分丰富的s 3 l 培养基上，室内 见光培养，7 个月后形成了具有成熟予囊壳的虫草子实体。迄今为止，仅此一例，尚未 见到其它成功的报道。冬虫夏革的生长过程是先营寄生再作腐生，加之生活环境特殊， 人工培育成功得具备一些必要条件：( 1 ) 菌种用真正无性阶段菌株( 含无性孢子) 或用成 熟的天然生的子囊孢子作接种体：( 2 ) 具备能满足虫与菌生理、生化要求的特定条件，使 虫结合实现侵染寄主，以便长成虫草子实体。显然，菌种是一个关键性的条件，在自然 野生状态下，虫草菌丝的生长力和繁殖产孢力是有效侵染寄主的两个重要因素。要实现 人工侵染和冬虫夏草人工繁殖应下功夫探索促进产孢率的条件。因此，冬虫夏草培育成 功，必须首先要培养出具有感染力的无性型孢子，同时如何检测分生孢子的质量和怎样 才能生产出大量的孢子等问题，也是冬虫夏草的人工培育中存在和亟待解决的问题。 沈阳农业大学硕士学位论文 三、冬虫夏草的液体深层发酵 自从1 9 4 8 年美国h u m f e l d 首次应用深层液体培养技术( s u b m e r g e dc u l t u r e ) 成功地培 养食用菌苗丝体以来在短短的四十多年中食、药用真菌的液体培养已发展成为生物 工程的一种新兴产业，成为发酵工程技术中重要的部分。如今，虫草菌的深层液体培 养技术不是停留在摇瓶和实验小罐发酵的水平上，有许多虫草制剂产品己步入工业化大 罐发酵技术中。虫草菌丝体的液体培养大都是采用动植物蛋白和葡萄糖或淀粉类物质。 由于工业化生产虫草菌丝的营养需求所选出的培养基中都含天然成分，所以氨基酸、维 生索也不需要再增加。 近年来，国内外市场货源紧缺，为此对冬虫夏革的人工栽培、深层发酵、开发应用 等都进行了广泛的研究，并获得了一定成果，尤其在进行深层发酵代用品方面取得较大 进展。对人工培养虫草菌丝与天然冬虫夏草进行的化学成分和药理活性对比研究已有很 多报道。实验表明，人工培养虫草菌丝经毒理、药理、植化研究，证明与天然虫草化学 组成、药理作用基本一致，可代替天然虫革生产虫草制品，以弥补自然资源的短缺( z h u j s ，1 9 9 8 ) 。蝙蝠蛾拟青霉的深层发酵工艺虽然己被人们熟知，但其配方中大多采用蚕蛹 粉，蛋白胨等高价原料，成本高。本研究选用工业蔗糖和豆饼粉廉价原料进行发酵，所 得的蝙蝠蛾拟青霉菌丝粉有效成份略高于天然虫草，且菌丝体收率有了大幅度增加。 据报道，国内有3 0 多个单位的科学工作者在进行冬虫夏草的人工培养及无性阶段的 发酵物，代替野生冬虫夏草的研究方面己取得较为理想的结果。姜文侠等( 1 9 9 9 ) 对蝙蝠 蛾拟青霉菌丝体最适发酵条件进行研究，以2 0m 3 发酵罐培养，菌丝体收率为2 5 ，其甘 露醇含量8 3 ，腺苷含量为o 2 4 。肖建辉等( 2 0 0 4 ) 对江西虫草深层培养条件进行优化， 确定江西虫草深层培养的装液量2 0 0 2 5 0 m l 5 0 0 m l ，接种量为5 一7 5 ，2 6 2 8 旋转式摇 床1 5 0 一1 8 0 r m i n 培养8 d ，最大茵丝生物量可达1 6 6 9 几。肖建辉，刘祖林等( 2 0 0 4 ) 通过 摇瓶液体培养正交试验获得了粉被虫草的液体培养条件，装液量( 1 0 0 m l 2 5 0 m l 摇瓶) ， 加1 5 颗玻璃珠作分散剂，5 接种量，旋转式摇床1 5 0 r m i n ，2 8 培养7 d ，达到最大菌 丝干重3 】8 6 9 l ，于9 文获得最大胞内产物3 】3 9 l 。赵桂云，李风云等( 2 0 0 2 ) 对冬虫 夏草菌丝液体培养碳氮源最佳组合进行研究，通过正交设计试验得出：每l o o m l 培养 液中葡萄糖1 5 9 ，蔗糖1 0 9 ，蛋白胨l g ，蚕蛹粉2 9 的组合为本项试验中最佳组合。张伟 ( 2 0 0 4 ) 对冬虫夏草茵丝进行液体培养表明，葡萄糖、玉米粉、淀粉是适宜的碳源；酵 母膏、蛋白胨、黄豆粉是适宜的氮源。采用正交设计考察了培养基的营养成分及其较优 文献综述 浓度，再以中心组合实验对培养基进一步优化组合，并以回归方程从理论上拟合得出最 适液体发酵培养基配方( ) ：葡萄糖1 o ，玉米粉1 7 ，黄豆粉2 3 ，麦芽汁1 0 ，酵母 膏0 5 。 殴、冬虫夏草菌丝体与天然虫草化学成分研究 1 9 4 7 年汤腾汉初次报道冬虫夏草含粗蛋白、脂肪、粗纤维、碳水化合物、灰分：1 9 5 2 年郑藻杰报道从冬虫夏草分得一种淡黄色结晶粉末，似一种有机酸。孙志琳报道含维生 素b 1 2 ，1 9 5 7 年c h 施e 巧e e 等报道从中国虫草分得虫革酸( c o r d y c e p i ca c i d ) ，后证明系 d 一甘露醇，这期间c 硼t i l i n 曲a m 等从蛹虫草的培养物中，分离并鉴定出一种3 一脱氧腺 营，并命名为虫草素( c o r d y c e p i n ) ，但目前还未见到从冬虫夏草中分离得到虫草素的 报道，1 9 7 7 年日本宫琦( m i y a z a k i ) 等分得半乳甘露聚糖，由含有甘露糖原和含有分支 的半乳糖低聚物组成。随着冬虫夏草人工发酵物的开发和利用，我国对虫草的化学成分 研究取得一些进展。1 9 8 1 年吕瑞绵得报告分离出尿嘧啶、腺嘌呤、腺嘌岭核营、蕈糖、 甘露醇、麦角甾醇和硬脂酸等7 种成分，其中前4 种在虫草中还未见报道。1 9 8 3 年肖 永庆等又分离得到九个结晶，其中五个结晶为胆甾醇软脂酸脂、软脂酸，麦角甾酵，麦 角甾醇过氧化物及d 一甘露醇，前3 个成分首次从虫草中分出。 随着化学研究工作的深入，不仅得到了一些新成分，同时还对天然虫草与发酵物进 行了对比分析，以及对不同产区、不同部位的虫革、不同菌种的发酵物、不同制剂等成 分进行了研究。研究表明冬虫夏草菌丝体与天然虫草具有相似的功能成分和化学组成， 含有多糖类：核苷类化合物：甾酵及糖薛类化合：氨基酸类化合物及其它类化合物。 l 、虫草多糖 虫草属真菌的子实体、菌核、菌丝体及发酵液中均含有多糖。m i y a z a l ( i 等从冬虫夏 草子囊果中得到水溶性高分子多糖c ：一i 和c 。一l l ，其单糖组分为d - 半乳糖：d 一甘露糖 = 1 ：1 。季晖等( 1 9 9 3 ) 从人工虫草菌丝中分得一具降血糖活性的多糖，分子量为3 2 0 0 0 ， 纸层析和气相色谱分析显示其含d 一甘露糖，d 一半乳糖和d _ 葡萄糖，各多糖摩尔比为l 0 ： 2 7 ：1 8 。袁建国等( 2 0 0 2 ) 通过分离纯化及选育，筛选出一株可溶性虫草多糖产量最 高的菌株，使原来的虫草多糖含量占菌丝干重的6 一7 提高到1 0 一1 2 ，并通过多糖组 分分析证明该多糖由甘露糖、半乳糖、葡萄糖等组成。 2 、核苷类化合物 核苷类物质为冬虫夏草有效成分之一，尤以腺苷具有明显的药理作用，如改善心脑 沈阳农业大学硕士学位论文 血液循环、防止心律失常、抑制神经递质释放和调节腺苷酸环化酶活性等。腺苷含量已 被用作冬虫夏草的质控指标，夏文娟等( 2 0 0 1 ) 用高效液相法分析了1 3 个产地冬虫夏 草的腺苷含量为1 4 2 5 3 9 6 6 p g 。至今已从发酵菌丝体及天然虫草中分离鉴定有1 1 个化合物，其中从天然虫草及人工虫草菌发酵物中得到腺嘌呤、腺苷、尿嘧啶、尿苷、 鸟苷：从天然虫草中得到鸟嘌呤、次黄嘌呤、次黄嘌呤核苷、胸腺嘧啶，从人工虫草中 分得胸腺嘧啶脱氧核苛及尿嘧啶脱氧核苷。1 9 9 4 年解军等首次用高效液相色谱法直接 定量测定了正品冬虫夏草中虫草素的含量( 解军，徐卫东，郭欣等，1 9 9 4 ) 。虫草素可 以抑制艾氏腹水癌、s 1 8 0 等癌细胞；还可抑制杀灭念珠病菌等真菌：此外虫草素还具 有调节免疫能力，抵抗辐射等功效。l i 等( 2 0 0 1 ) 用高效毛细管电泳法测定天然和人 工冬虫夏草中核苷成分的含量，结果显示人工虫革的核苷含量明显高于天然虫草；新采 集的天然虫草中核苷类物质含量极低，而采集日久者核苷成分含量较高。 h 腺苷a d c i l o s i n o 3 、甾醇及糖醇类化合物 c h a l e rj e e 等( 1 9 5 7 ) 报道分离到虫草酸，后证明系甘露醇，含量为3 7 。冬虫夏草 虫草酸的含量大约为7 - 2 9 ，不同生长期的冬虫夏革子鹰中甘露醇的含量不一样。b o k 等( 1 9 9 9 ) 新近采用活性检测引导分离的方法，从虫草甲醇提取物中分得两个具抗肿瘤活 性的体化合物， 5 a l p h a ，6 a l p h a _ e p o x y 一2 4 ( r ) 一m e 1 y l c h o l e s 诅_ 7 ，2 2 一d i e n _ 3 d e t a o l ( 3 ) 和 5 a l p h a ，8 a l p h a - 印i d i o x y - 2 4 ( r 卜m 甜w l c h o l e s t a _ 6 ，2 2 一d i e n 一3 b e 协一d 粤u c 叩y r a n o s i d e ( 4 a ) 。两者 对k 5 6 2 、w m 一1 3 4 1 、 a r k a t 、h l 一6 0 和e m p i 一8 2 2 6 肿瘤细胞增殖均有明显的抑制作 用。h i a 则具有免疫调节作用( 1 9 9 9 ) 。 4 、氨基酸 冬虫夏草含丰富的氨基酸，其补益强壮作用及增强免疫功能等似与氨基酸的作用有 奎堕堡垄 关。对天然虫草的不同产区、不同部位、不同种的氨基酸以及天然虫草与人工虫草等进 行了对比分析，虽有所差异，但不论是天然虫草还是人工虫草菌丝，两者均含有丰富的 氨基酸这一点是共同的。 5 、其它类 ( 1 ) 肽类 从虫草发酵菌丝中分离鉴定了六个环二肽类化合物( 1 9 9 0 ) ：l 一苷一l 脯环二肽 c y c l o 一( l g l y c y l l p r o l y l ) ，6 ) 、l 一亮l 一脯环二肽 c y c l o 一( l k u c y l - l - p m l y l ) ，7 ) 、l 一缬一l 一 脯环二肽 c y c l o 一( l v a l y l l p r o l y l ) ，8 ) 、l 一丙一l 亮环二肽 c y c l o 。( l a l a c y l l k u l y l ) ，9 ) 、l 一 丙一l 一即环二肽 c y c l o 一( l a i a y l - l v a l y l ) ，1 0 、l 一苏一l 一亮环二肽 c y c l o 一( l 一l r e o n y l - l l e u c y l ) ，1 1 ( 此成分首次从天然物中分得) 。初步药理实验结果表明 l 一甘一l 脯环二肽等具有抗肿瘤和增强免疫作用的生理活性。刘珂等从人工培养的蛹虫 草干燥子实体中分得对正常小鼠细胞免疫调节作用的虫草环肽a ( c o r d y c e p c t i d e a ) 。 ( 2 ) 有机酸及维生素 冬虫夏草中已分得软脂酸、硬脂酸、油酸和亚没酸等多种有机酸和烷烃类化合物， 人工发酵虫草也有类似报道。冬虫夏草含维生素b 。：和c ，人工发酵虫草含有维生素 b t b z b e 和k 。f u j i 协( 1 9 9 4 ) 等从蝉花培养液中分得具有明显免疫抑制活性的 i s p i ( m y r i o c 虹m e 眦。珂o c i d i n ) 。 ( 3 ) 无机元素 冬虫夏草无机元素的研究报道较多，但报道的种类和含量有差异。目前报道的无机 元素有3 0 多种，以磷和镁的含量最高，其次是钾、铁、钙、锌、铝、钠等，较少有锰、 硅、镍、锶、钛、铬、硒等。沈晓云等通过对冬虫夏革及虫草菌丝微量元素分析表明， 大量元素钠、钾、钙、镁、磷的含量，虫草菌丝高于冬虫夏草，锰的含量两者接近，铜、 镍、铬的含量，天然虫草高于虫草菌丝：铁、锌、锂、铝等的含量，虫草菌丝高于天然 虫草。 五、冬虫夏草菌丝体与天然虫草药理作用研究 l 、对免疫系统的影响 冬虫夏草提取物具有免疫功能正向调节作用( 夏宝森，李小康，2 0 0 2 ) 。f t r 7 2 0 是来 源于冬虫夏草的免疫抑制剂，该剂直接作用于淋巴细胞，而表现免疫抑制效果，特别是 对器官移植等的排斥反应的抑制作用尤为引人注目，在各种器官移植的动物实验中，对 6 一 婆堕查些查堂堡主堂垡堡塞 排斥反映均表现了良好的抑制作用和治疗效果，同时没有副作用，而且与现有的免疫抑 制剂同时投用时免疫效果更好( 黄志江，季晖，2 0 0 2 ) 。宋金娣等试验发现，冬虫夏草多糖 能显著增加荷瘤小鼠脑组织和全血中s o d 含量，从而提高机体免疫力，明显减少荷瘤小 鼠s 1 8 0 癌细胞面积，降低癌细胞重量，促进癌细胞高度分化，致使癌细胞坏死，对肿 瘤生长表现出较强的抑制力。蝙蝠蛾拟青霉人工发酵培养物是一种免疫抑制荆，可能通 过减少i l 一2 而选择性抑制t 淋巴细胞系统( 郭伟平，黄明明，1 9 9 3 ) 。 2 、降血糖作用 人工虫草对正常小鼠血糖水平无明显的影响，但能够显著降低四氧嘧啶糖尿病小鼠 的血糖水平和糖基化血清蛋白含量，明显改善糖尿病小鼠血糖耐量，提高胰岛素抵抗脂 肪细胞的葡萄糖摄取可能是其降血糖作用机制之一( 董妙珠等，2 0 0 1 ) 。虫草制品调节体 液免疫、细胞免疫、巨噬细胞和n k 细胞免疫功能，并对正常动物和高血糖模型动物血 糖耐量有一定的增强作用，但对正常动物空腹血糖无影响( 贾保祥，张玉海，2 0 0 0 ) 。蝙蝠 蛾拟青霉人工发酵虫草茵丝预防给药对链佐霉素所致大鼠i d d m 有明显降低血糖作用， 推测其降糖机制主要与其防止炎症细胞浸润，保护胰岛细胞免受损伤有关。与其清除自 由基作用无明显相关性( 汤静等，2 0 0 5 ) 。 3 对肾脏的作用 冬虫夏及其制剂对肾脏疾病有多种治疗作用( 孙艳，官杰等，2 0 0 2 ) 。冬虫夏草对冷缺 血有保护作用，并提示其作用与其保护了内皮细胞功能有关( 卢岚，2 0 0 2 ) 。冬虫夏草可 以抑制狼疮肾炎的复发，保护肾功能( 卢继明，方建新，2 0 0 1 ) 。冬虫夏草对单纯性血尿转 阴有显著效果，且疗效持久( 郭瑞新，蔡承妹等，2 0 0 2 ) 。冬虫夏草可提高“肾阳虚”模型 小鼠的生殖功能，并可改善睾丸的形态等指标( 井芝春等，2 0 0 0 ) 。人工培养冬虫夏草能 使慢性肾功能衰竭患者血( c r f ) 必需氨基酸水平明显升高，促进蛋白质的合成，纠正 血浆氨基酸紊乱，改善患者营养状况，延缓c r f 进展( 曾宪可，唐玉，2 0 0 1 ) 。 4 、对肝脏的作用 冬虫夏草中国拟青霉粗柬梗新变种在体外能抑制乙型肝炎病毒d n a 多聚糖，使体外 h b v d n a 拷贝减少，并能抑制p l c p r f 5 细胞系分泌h b 。a g 。人工虫草菌丝体明显减少大 鼠肝内总胶原和i 型，i 型胶原在肝内的沉积，对己形成的胶原也有一定程度的溶解和 吸收功效( 朱家璇等，1 9 9 4 ) 。 文献综述 5 、对心脏的作用 人工虫草菌丝体醇提取物和醚提取物抗心律失常，延长心律失常的诱发时间，降低 心律失常持续时间及严重程度：对氯化钡所致心律失常也有一定的对抗作用，可降低心 律失常严重程度( 龚小建与季晖，2 0 0 1 ) 。冬虫夏草精抗心律失常作用有效率达6 63 ， 又无副作用，特别是心律失常伴有明显的症状者其有效率达8 67 ，是很有意义的。应 用虫草水提液o 4 m g k g 后，平均9 0 复极化时程明显缩短，e a d 发生率及振幅下降，室 性心律失常消失，说明虫草水提液具有良好的抗触发活动及触发性心律失常的作用( 俞 宇，何建新，1 9 9 9 ) 。 6 、抗衰老、抗应急作用 以冬虫夏草、构杞多糖、红景天多糖为主功效成分的抗衰老抗疲劳胶囊能增强体仙 脂蛋白酶活性，使t g 分解加快，引起血清t g 下降，说明该剂在降血脂及抗动脉粥样硬 化方面有明显的预防和治疗作用，同时该劫能降低体内蛋白质功能程度，提高机体的适 应能力，对抗疲劳有明显的效果( 陈显久，向前等，2 0 0 2 ) 。 7 、对呼吸系统的作用 冬虫夏草具有温肾补肺功效，现代研究表明该药台有l o 余种氨基酸和微量元素， 具有增强免疫促进损伤组织修复，起到改善机体功能，预防感染，延缓衰老，且无明显 的副作用。因而用于反复呼吸道感染疾病有良好的效果。胡征等( 2 0 0 4 ) 通过对人工培 养冬虫夏草菌丝的挥发油成分分析，找到了一种对呼吸道疾病有特效的药物成分 v e 而c i o l ，它是一种与贝母碱结构极其相似的物质，而后者是一种对呼吸道疾病有特效 的药物，v e r t i c i o l 类物质的存在极可能是冬虫夏草具有止咳化痰之功效的原因。 8 、抗菌作用 冬虫夏草菌丝体及其发酵液中的抗菌物质为广谱性的，提取液对葡萄球菌、链球菌、 炭疽杆菌、猪出血性败血症杆菌均有抑制作用。粉被虫草菌丝体和孢梗束的浸提液对金 色葡萄球菌、太肠杆菌、铜绿假单孢菌、枯草芽孢杆菌及嗜热芽孢杆菌有明显的抑制作 用。 9 、抗辐射作用 虫草的一种次生代谢产物n 6 一( 2 一羟乙基) 腺嘌呤核苷 n 6 ( 2 h y d r o x y e 吐