（动物学专业论文）用血液生化标记法和微卫星标记法建立个猕猴种群的遗传概貌.pdf

用血液生化标记法和微卫星标记法 建蝌猕猴种群的遗传概貌 中文摘要 本文分别运用血液生化标记和微卫星法，对中国实验动物云南灵长类中心的 2 个猕猴品种( 食蟹猴和恒河猴) 进行群体遗传概貌分析，为指导猕猴的繁殖， 建立遗传背景清楚的灵长类实验动物种群工作探索方法和途径。 本论文第一部分采用血液生化标记，分析1 2 0 只恒河猴和1 2 0 只食蟹猴，这 8 个血液生化标记是：维生素d 结合蛋白( 5 号染色体) ，葡萄糖6 一磷酸脱氢酶 ( x 染色体) ，腺苷脱氨酶( 1 0 号染色体) ，转铁蛋白 ，o 5 时，该基因座为高度多态位点，当p i c 0 2 5 时，为低 度多态位点，在两者之间为中度多态位点。用聚类分析软件计算得出：恒河猴中 d 1 3 s 7 6 5 的p i c 值最小为o 5 8 8 5 ，食蟹猴中d 1 2 s 3 6 4 的p i c 值最小为0 5 4 9 2 。由 此可见，我们选择的所有微卫星基因座在研究样品中具有中高度多态性( 表2 ， 表4 ) 。 金宇娟：用血液生化指标和d n a 微卫星标记法建立面个猕猴种群的遗传概貌 2 3 表3 恒河猴9 个微卫星位点等位基因和基因型频率 编号位点等位基因等位基因频率基因型基因型频率 d 1 $ 2 0 7 2 d 8 s 5 0 5 2 4 3d 1 0 s 1 6 8 6 l 2 4 d 1 l $ 9 2 5 4 o 1 3 7 9 0 2 9 3 l 0 3 9 6 6 o 1 7 2 4 0 0 7 4 1 0 1 2 9 6 0 4 0 7 4 0 3 8 8 9 o 1 0 4 2 0 3 3 3 3 0 0 6 2 5 0 5 0 2 3 2 1 0 3 7 5 0 1 4 2 9 0 1 2 5 0 1 2 5 0 0 3 4 5 0 2 0 6 9 0 1 7 2 4 o 3 1 0 3 0 2 4 1 4 0 0 3 4 5 o 1 4 8 1 o 1 4 8 1 0 1 4 8 1 o 1 1 1 l 0 2 2 2 2 0 2 2 2 2 0 0 8 3 3 o 1 2 5 0 0 6 6 6 7 0 0 4 1 7 0 0 8 3 3 0 4 6 4 3 0 0 7 1 4 0 1 4 2 9 0 0 3 5 7 0 0 3 5 7 0 0 3 5 7 o 2 1 4 3 挖 b m b ” 驺 m 弘 “ n h m 弘 甜 挖 舱 驺 站 盯 扬州大学硕士学位论文 2 4 金宇娟：用血液生化指标和d n a 微卫星标记法建立西个猕猴种群的遗传概貌 2 5 编号位点 等位基因等位基因频率基因型基因型频率 但是，基于p c r 产物的长度来判断等位基因的重复数目，可能会导致一些偏 差，一个更为精确的测定微卫星的方法是运用诸如d n a 芯片( d n a c h i p ) 这样 的新技术，直接测出重复片断的数目。 另外，我们将进一步对繁殖猴群及各个不同世代的猴群进行分析，比较各个 世代之间的遗传差异，为提供遗传背景一致的实验猴提供更好的依据。 表4 食蟹猴的有效等位基因数( e ) ，杂合度( h ) 和多态信息含量( p l c ) 扬州大学硕士学位论文2 6 d 2 s 1 0 2 2 d 2 s 1 3 2 8 d 3 s 1 6 1 4 4 d i i s 9 2 5 l 2 3 4 5 0 1 9 4 4 o 3 1 9 4 0 2 7 7 8 0 0 9 7 2 o 1 1 l l 0 0 6 0 6 0 4 2 4 2 0 3 9 3 9 0 0 4 5 5 0 0 7 5 8 0 2 5 o 4 1 6 7 0 2 5 0 0 8 3 3 o 3 1 2 2 3 3 3 3 4 1 5 3 5 4 5 1 2 2 2 1 3 2 3 3 3 2 4 4 4 2 5 5 5 1 2 2 3 3 4 20 3 8 7 5 1 2 o 3 6 1 1 0 2 7 7 8 0 0 2 7 8 0 1 1 1 l 0 0 2 7 8 0 1 1 1 1 0 0 8 3 3 0 0 3 0 3 0 3 6 3 6 0 0 9 0 9 0 0 3 0 3 0 3 3 3 3 0 0 3 0 3 0 0 3 0 3 0 0 3 0 3 0 0 6 0 6 0 5 0 0 0 0 3 3 3 3 o 1 6 6 7 0 0 2 5 0 0 4 2 5 0 30 1 6 2 52 3 0 2 5 0 0 40 1 5 1 40 1 2 5 0 2 4 1 3 3 3 3 3 4 0 0 7 5 0 5 d 1 2 s 3 6 41o 1 8 7 51 2 o 0 4 1 7 金字娟：用血液生化指标和d n a 微卫星标记法建立面个猕猴种群的遗传概貌 2 7 编号 位点等位基因等位基因频率 基因型基因型频率 5 d 1 2 s 8 6 6 d 2 1 s 1 2 5 6 7 d 2 2 8 2 8 0 20 2 0 8 3 2 20 0 8 3 3 30 5 6 2 5 1 30 2 9 1 7 40 0 4 1 7 2 30 2 0 8 3 3 30 2 9 1 7 1 40 0 4 1 7 3 40 0 4 1 7 lo 1 4 1 20 0 4 0 0 20 2 62 3 0 4 8 0 0 30 3 6 1 4 0 2 4 0 0 40 2 23 40 2 0 0 0 5 0 0 23 50 0 4 0 0 l0 2 9 1 7 1 20 1 2 5 0 2o 1 6 6 7 1 30 4 5 8 3 30 3 9 5 82 3 0 1 2 5 0 40 0 8 3 33 3 0 0 4 1 7 50 0 6 2 5 2 40 0 8 3 3 4 40 0 4 1 7 3 50 1 2 5 0 l0 3 4 3 81 20 5 6 2 5 20 4 0 6 21 30 1 2 5 0 30 0 9 3 8 2 40 2 5 0 0 40 1 2 53 50 0 6 2 5 50 0 3 1 2 扬州大学硕士学位论文2 8 小结 本文通过血液生化标记和d n a 微卫星法分别建立猕猴属动个品种的群体遗 传概貌。为提供遗传背景更为清楚的灵长类实验动物提供依据。 这次实验采用的实验动物是由中国实验动物云南灵长类中心养殖场提供的普 通级实验猴，而且选用的品种都是同一个年龄阶段的猴群，没有做对不同世代的 猴群进行比较。为了进一步监测各个世代实验猴之问的遗传概貌，有必要进一步 对每一代繁殖猴群进行检测，保证各世代的基因及基因型频率的稳定性。为种猴 的繁殖奠定基础。 金宇娟：用血液生化指标和d n a 微卫星标记法建立雷个猕猴种群的遗传概貌 2 9 1 2 3 参考文献 h u n t e r , i l l ，a n dc ，lm a r k e r t h i s t o c h e m i c a ld e m o n s t r a t i o no f e n z y m e ss e p a r a t e db yz o n e e l e c t r o p h o r e s i si ns t a r c hg e l s s c i e n c e 1 9 5 7 1 2 5 ( 3 2 6 1 ) ：p 1 2 9 4 5 w i l l i a m s ，j c t ，e ta l ，d n ap o l y m o r p h i s m sa m p l i f i e db ya r b i t r a r yp r i m e r sa r eu s e f u la sg e n e t i c m a r k e r s n u c l e i ca c i d sr e s ，1 9 9 0 1 8 ( 2 2 ) ：p 6 5 3 1 - 5 w e l s h ，j ，c ，p e t e r s e n ，a n dm m c c l e l l e n d ，p o l y m o r p h i s m sg e n e r a t e db ya r b i t r a r i l yp r i m e d p c ri nt h em o r s e ：a p p l i c a t i o nt os t r a i ni d e n t i f i c a t i o na n dg e n e t i cm a p p i n g n u c l e i ca c i d sr e s ， 1 9 9 1 1 9 ( 2 ) ：p 3 0 3 6 z a b e a u ，m a n dvp ，s e l e c t i v er e s t r i c t i o nf r a g m e n ta m p l i f i c a t i o n ：ag e n e r a lm e t h o df o rd n a f i n g e r p r i n t i n g e u r o p e a np a t e n ta p p l i c a t i o nn o 0 5 3 48 5 8a 1 ，1 9 9 3 w a n g , d g ，e ta 1 ，l a r g e - s c a l ei d e n t i f i c a t i o n ，m a p p i n g ，a n dg e n o t y p i n go f s i n g l e - n u c l e o t i d e p o l y r n o r p h i s m si nt h eh u m a ng e n o m e s c i e n c e ，1 9 9 8 2 8 0 ( 5 3 6 6 ) ：p 1 0 7 7 8 2 黄腻，分子系统学原理、方法及应用1 9 9 8 ，北京：中国农业出版社 张英培，l d h - c 基因和鱼类分类生态学杂志，1 9 8 9 2 4 ( 5 ) ：p 3 9 4 1 熊全沫，鱼类同工酶谱分析遗传，1 9 9 2 1 4 ( 2 ) ：p 4 1 4 4 三f 可玲，张培牟，a n d 刘兰英，中国近海带鱼分种的研究海洋学报，1 9 9 3 1 5 ( 2 ) ：p 7 7 - - 8 3 聂龙，施立明，a n d 和向东，独龙牛遗传多样性及其种群结构的等位酶分析遗传学报， 1 9 9 5 2 2 ( 3 ) ：p 1 8 5 1 9 1 k e n ，n ，e ta 1 ，p o p u l a t i o ng e n e t i c so f j a p a n e s em o n k e y s ：i i i a n c e s t r ya n dd i f f e r e n t i a t i o no f l o c a lp o p u l a t i o n s p n m a t e s ，1 9 9 1 3 2 ( 4 ) ：p 4 i l - 4 3 5 k a w a m o t o ，v ，e ta 1 ap o p u l a t i o n - g e n e t i cs t u d yo f c r a b - e a t i n gm a c a q u e s ( m a e a e af a s i c u l a r i s ) o nt h ei s l a n do f a n g a u r , p a l a u ，m i c r o n e s i a f o l i ap r i m a t o l o g i c a 1 9 8 8 5 1 ：p 1 6 9 - 1 8 1 k a m a m o t o , ya n d m 1 s c h a k g e n e t i cd i f f e r e n t i a t i o no f t h ei n d o n e s i a nc r a b e a t i n gm a c a q u e s i p r e l i m i n a r yr e p o r t o n b l o o d p r o t e i np o l y m o r p h i s m p r i m a t e s ，1 9 8 1 2 2 ( 2 ) ：p 2 3 7 - 2 5 2 阳建春a n d 黄韧，人工繁殖恒河猴血清酯酶、乳酸脱氢酶，淀粉酶、碱性磷酸酶生化位 点遗传多态性研究北京实验动物科学与管理，1 9 9 4 1l ( 1 ) ：p 3 7 4 1 王文，宿兵，a n d 兰宏。，猕猴属6 个种的r d n a 变异及其系统进化关系，遗传学报，1 9 9 6 2 3 ( 5 ) ：p 3 4 3 - - 3 5 0 ， n o z a w a ，k ，ts h o m k e ，a n dy ，o h k u r a , g e n e t i cv a i l a t i o n sw i t h i na n db e t w e e ns p e c i e so f a s i a nm a c a q u e s j p n j g e n e t 1 9 7 7 5 2 ：p 1 3 - 3 0 ， 用伟，周用武，a n d 潘晓赋，分子生物学在脊椎动物分类和进化研究中的应用概述，i n 生物多样性保护与区域可持续发展p 7 6 - - 8 7 刘若余，张启林，a n d 刘世会。贵州剑河白、黑香猪的血液蛋白多态性研究中国畜牧杂 志，1 9 9 9 3 5 ( 6 ) 王杰，e t a l ，安哥拉山羊血液蛋白多态性的研究西南民族学院学报自然科学版，1 9 9 3 1 9 ( 0 ：p 1 9 2 4 r l ，n ，o d a a 。a n dc e g a 。p o l y m o r p h i s mo f s e r u mp r o t e i n si nc a m p o l i n ah o r s e s a n i m r e p r o d ，2 0 0 5 2 ( 1 ) ：p 6 0 - 6 2 t i 丘z 爱o = m 他 埒 垮 惦 ” 瞎 坶 加 扬州大学硕七学位论文 3 0 2 1 2 2 2 3 2 4 2 5 2 6 2 7 2 8 3 8 方心葵，e ta 1 ，自香猪血液蛋白多态性与若干性状表现的相关性上海交通大学学报( 农 业科学版) ，2 0 0 2 2 0 ( 3 ) ：p 2 3 2 - - 2 3 5 d o m i n g o - r o u r a ，x ，e ta 1 ，h y p e r v a r i a b l em i c r o s a t e l l i r el o c ii nt h ej a p a n e s em a c a q u e ( m a c a c a f u s c a t a ) c o n s e r v e di nr e l a t e ds p e c i e s a mjp r i m a t o l ，1 9 9 7 4 3 ( 4 ) ：p 3 5 7 - 6 0 r i v e r a , m a ，g c g r a h a m ，a n dg k r o d e f i c k ，i s o l a t i o na n dc h a r a c t e r i z a t i o no f n i n e m i c r o s a t e l l i t el o c if r o mt h eh a w a i i a ng r o u p e re p i n e p h e l u sq u e m u s ( s e r t a n i d a e ) f o rp o p u l a t i o n g e n e t i ca n a l y s e s m a rb i o t e c h n o l ( n y ) ，2 0 0 3 5 ( 2 ) ：p 1 2 6 - 9 r e e d , k m ，e ta 1 ，m i c r o s a t e l l i t el o c if o rg e n e t i cm a p p i n gi nt h et u r k e y ( m e l e a g r i sg a l l o p a v o ) a n i t a b i o t e c h n o l ，2 0 0 3 1 4 ( 2 ) ：p 1 1 9 3 1 l i u ，c ，e ta 1 ，【d e v e l o p m e n to f d a s y p y r u mg e n o m es p e c i f i cm a r k e rb yu s i n gw h e a t m i c r o s a t e l l i t e s y i c h u a n ，2 0 0 6 2 8 ( 1 2 ) ：p 1 5 7 3 9 ， m o f f n ，e a sk a n t h a s w a m y , a n dd gs m i t h ，s i m p l es e q u e n c er e p e a t ( s s r ) p o l y m o r p h i s m s f o rc o l o n ym a n a g e m e n ta n dp o p u l a t i o ng e n e t i c si nr h e s u sm a c a q u e s ( m a c a c am u l a t t a ) a mj p r i m a t o l ，1 9 9 7 4 2 ( 3 ) ：p 1 9 9 - 2 1 3 s m i t h , d g ，e ta t 。a d d i t i o n a lh i g h l yp o l y m o r p h i cm i c r o s a t e l l i t e ( s t r ) l o c if o re s t i m a t i n g k i n s h i pi nr h e s u sm a c a q u e s ( m a c a c am u l a t t a ) a mjp r i m a t o l ，2 0 0 0 ，5 0 ( 1 ) ：p 1 - 7 h a d f i e l d , r m ，e ta 1 ，t o w a r dd e v e l o p i n gag e n o m e w i d em i c r o s a t e l l i t em a r k e ts e tf o rl i n k a g e a n a l y s i si nt h er h e s u sm a c a q u e ( m a c a c am u l a t t a ) ：i d e n t i f i c a t i o no f 7 6p o l y m o r p h i cm a r k e r s a mjp r i m a t o l ，2 0 0 1 ，5 4 ( 4 ) ：p ，2 2 3 3 1 n u r n b e r g ，p ，e ta 1 ，p a t e r n i t ya s s e s s m e n ti nr h e s u sm a c a q u e s ( m a c a c am u l a t t a ) ：m u l f i l o c u s d n af i n g e r p r i n t i n ga n dp c rm a r k e rt y p i n g a mjp r i m a t o l ，1 9 9 8 4 4 ( 1 ) ：p 1 - 1 8 陈元霖，曾中兴，白寿昌，猕猴1 9 8 5 ，北京：科学技术出版社i 2 ， s t o n e ，w ，h ，j e l y ，a n dgm a n i s ，c l s s i c a lg e n e t i cm a r k e r sa n dd n am a r k e r s ：ac o m m e n s a l m a r r i a g e p r i m a t e s ，1 9 9 3 ( 3 4 ) ：p 3 6 5 - 3 7 6 胡能书，万贤国，同工酶技术及其应用1 9 8 5 ，长沙：湖南科学技术出版社 h e ，c z ，e ta l ，【s t u d yo ng e n e t i cp o l y m o r p h i s mo f i s o z y m ei nn a t u r a lp o p u l a t i o n so f d r o s o p h i l a v i d l i s y ic h u a nx u eb a o ，1 9 8 9 1 6 ( 1 ) ：p 3 4 - 4 1 l i ，b l ，e ta 1 ，【d i s t r i b u t i o n sa n dg e n ef r e q u e n c i e so f p g m ls u b t y p e ，e s d ，g l o i ，a k ， a d a a n d6 - p g di n2 0r a c e so f c h i n a y ic h u a nx u eb a n ，1 9 8 9 1 6 ( 2 ) ：p 1 5 i 一8 v a n k a n , d ，m a n dk b e l l ，g e n e t i cp o l y m o r p h i s mo f p l a s m av i t a m i nd - b i n d i n gp r o t e i n ( g c ) i n a u s t r a l i a ng o a t s a n i t ag a n e l1 9 9 2 2 3 ( 5 ) ：p 4 5 7 - 6 2 s u ，b ，c ta 1 ，【g e n e t i cd i v e r s i t ya n dp h y l o g e n e t i cr e l a t i o n s h i p sa m o n gc h i n e s em a c a c a sb a s e d o np r o t e i ne l e c t r o p h o r e s i s y ic h u a nx r eb a o ，1 9 9 7 2 4 ( 2 ) ：p 1 0 9 1 5 m e l n i c k ，d ，j ，t h eg e n e t i c so f aw i l dp o p u l a t i o no f d l e s u sm o n k e y s ( m a c a c am u l a r a ) i g e n e t i cv a r i a b i l i t yw i t h i na n db e t w e e ns o c i a lg r o u p s a m j p h y s a n t h r o p o l ，1 9 8 4 6 3 ：p 4 3 1 3 6 0 霍金龙，e t a l ，微卫星聚丙烯酰胺凝胶银染法影响因素的分析研究云南农业大学学报 2 0 0 5 2 0 ( 1 ) ：p 1 1 1 5 r o g e r s ，j ie ta 1 ，ap a n e lo f 2 0h i g h l yv a r i a b l em i c r o s a t e l l i t ep o l y m o r p h i s m s i nr h e s u s m a c a q u e s l ( m a c a c a m u l a t t a ) s e l e c t e d f o r p e d i g r e e o r p o p u l a t i o n g e n e t i c a n a l y s i s a mjp r i m a t o l ， 凹 如孔 轮 弘 弱 ” 金字娟：用血液生化指标和d n a 微卫星标记法建立丙个猕猴种群的遗传概貌 3 l 4 l 4 5 4 7 4 8 2 0 0 5 6 7 ( 3 ) ：p 3 7 7 - 8 3 t o s h i h i k o ，k ，h m a s a y u k i ，a n dtk e i f i ，d e v e l o p m e n to f am i c r o s a t e l l i t em a r k e rs e t a p p l i c a b l et og e n o m e - w i d es c r e e n i n go f c y n o m o l g u sm o n k e y s ( m a c a c af a s i c u l a r i s ) p r i m a t e s ， 2 0 0 6 a n d r a d e ，m c ，e ta l ，d e t e r m i n a t i o no f g e n e t i cs t a t u si nac l o s e dc o l o n yo f r h e s u sm o n k e y s ( m a c a c am u l a t t a ) p r i m a t e s ，2 0 0 4 4 5 ( 3 ) ：p 1 8 3 - 6 k i k u c h i ，t ，m h a r a , a n dk t e r a o ，d e v e l o p m e n to f am i c r o s a t e l l i t em a r k e rs e ta p p l i c a b l et o g e n o m e - w i d es c r e e n i n go f c y n o m o l g u sm o n k e y s ( m a c a c af a s c i c u l a r i s ) p r i m a t e s ，2 0 0 7 4 8 ( 2 ) ： p 1 4 0 - 6 z h u ，q ，e ta 1 ， t h ep o p u l a t i o ng e n e t i cs t r u a t u r ea n a l y s i sv i am i e r o s a t e l l i t el o c ii nn e ws i l k i e s l a y i n gb r e e d s y ic h u a n ，2 0 0 6 2 8 ( 2 ) ：p 1 3 9 - 4 7 l u o ，w y ，j h u , a n dx el i ，【t h ee v o l u t i o na n da p p l i c a t i o no f m i c r o s a t e l l i t e s y ic h u a n ， 2 0 0 3 2 5 ( 5 ) ：p 6 1 5 - 9 g a o ，a b a n dd j w u ， m i c r o s a t e l l i t em a r k e r sf o rp a t e r n i t yt e s t i n go f l i a n g s h a ns e m i - f i n e w o o ls h e e p y ic h u a n ，2 0 0 5 2 7 ( 1 ) ：p 8 5 - 9