（茶学专业论文）乌龙茶中茶多酚和芳香物质的提取及其生物活性研究.pdf

c l a s s i f i c a t i o n ：$ 5 7 1 1 c l a s so fc o n f i d e n t i a l i t y ： c o d eo fu n i v e r s i t y ：10 3 8 9 s t u d e n t sn u m b e r ：l0 7l l0 7 m a s t e r st h e s i so ff u ji a na g r i c u l t u r e & f o r e s t r yu n i v e r s i t y s t u d i e so ne x t r a c t i o na n db i o l o g i c a la c t i v i t i e so ft e a p o l y p h e n o l sa n d a r o m as u b s t a n c e sf r o mo o l o n gt e a c a t e g o r y ：a g r o n o m y f i r s tr a n kd i s c i p l i n e ：h o r t i c u l t u r e s e c o n d a r yr a n kd i s c i p l i n e ：t e as c i e n c e r e s e a r c hf i e l d ：t e aq u a l i t y n a m eo fp o s t g r a d u a t es t u d e n t ：w a n gd o n g a d v i s o r s ：p r o f z h e n gj i n g u i p r o f l i nj i n k e c o m p l e t a t i o nd a t eo ft h e s i s ：a p r i l ，2 0 10 独创性声明 本人声明，所呈交的学位( 毕业) 论文，是本人在指导教师的指导下独立完 成的研究成果，并且是自己撰写的。尽我所知，除了文中作了标注和致谢中已作 了答谢的地方外，论文中不包含其他人发表或撰写过的研究成果。与我一同对本 研究做出贡献的同志，都在论文中作了明确的说明并表示了谢意，如被查有侵犯 他人知识产权的行为，由本人承担应有的责任。 学位( 毕业) 论文作者亲笔签名： 多柏 论文使用授权的说明 日期：砂p 彳o 本人完全了解福建农林大学有关保留、使用学位( 毕业) 论文的规定，即学 校有权送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅：学校可以公布论文的全部或 部分内容，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。 保密，在年后解密可适用本授权书。 口 不保密，本论文属于不保密。矿 学位( 毕业) 论文作者亲笔签名：曼彳暂、 日期：钞矽石厂。 指导教师亲笔签名： 日期沙，j 彳。 摘要。 a b s t r a c t 第一章文献综述 目录 i l 茶多酚研究进展1 1 1 茶多酚的理化性质l 1 2 茶多酚的提取纯化1 1 3 茶多酚的生物活性研究4 1 4 茶多酚的应用研究6 2 芳香物质研究进展7 2 1 乌龙茶的香气特征7 2 2 芳香物质的提取制备8 2 3 芳香物质的生物活性研究9 2 4 芳香物质的应用研究1 0 3 本研究的目的及意义10 第二章茶多酚、芳香物质提取制各技术研究 第一节茶多酚提取技术研究。 1 2 1 2 1 材料与方法1 2 1 1 实验材料1 2 1 2 实验方法12 2 结果与分析1 3 2 1 料液比( g r o b 对茶多酚浸出量的影响1 3 2 2 浸提温度对茶多酚浸出量的影响。1 4 2 3 浸提时间对茶多酚浸出量的影响1 5 2 4 乙醇浓度对茶多酚浸出量的影响1 5 2 5 茶多酚提取最佳工艺的确定】6 3 讨论18 第二节茶多酚分离纯化技术研究 2 0 l 材料与方法2 0 1 1 实验材料2 0 1 2 实验方法2 0 福建农林大学硕士学位论文 2 结果与分析2 2 2 1 大孔吸附树脂的筛选2 2 2 2 静态吸附曲线2 3 2 3 静态解吸曲线2 4 2 4 上样流速对树脂吸附能力的影响2 5 2 5 供试液p h 值对树脂吸附能力的影响2 5 2 6 洗脱剂的选择2 6 2 7 洗脱流速对树脂解吸能力的影响2 7 2 8 动态解吸曲线2 7 3 讨论2 8 第三节芳香物质提取制备技术研究 1 材料与方法3 0 1 1 实验材料。3 0 1 2 实验方法3 0 2 结果与分析3 2 3 讨论3 5 第三章茶多酚、芳香物质的生物活性研究 第一节茶多酚、芳香物质的抗肿瘤作用研究 3 7 3 7 l 材料与方法。3 7 1 1 实验材料。3 7 1 2 实验方法3 8 2 结果与分析3 9 2 1 茶多酚、香精油的抗肿瘤活性3 9 2 2 茶多酚、香精油对s 1 8 0 肿瘤小鼠免疫器官的影响4 0 3 讨论4l 第二节茶多酚、芳香物质的抗衰老作用研究 l 材料与方法4 3 1 1 实验材料4 3 1 2 实验方法4 3 2 结果分析4 5 2 1 茶多酚和香精油对果蝇寿命的影响4 5 福建农林人学硕士学位论文 2 2 茶多酚和香精油对果蝇s o d 活性值的影响4 8 2 3 茶多酚和香精油对果蝇m d a 含量的影响4 9 2 4 茶多酚和香精油对果蝇总抗氧化能力的影响4 9 3 讨论5 0 第四章结论与展望5 3 l 主要研究结果5 3 1 1 茶多酚最佳浸提工艺研究：5 3 1 2 茶多酚最佳纯化工艺研究5 3 1 3 芳香物质的主要成分及含量研究5 3 1 4 茶多酚和芳香物质的抗肿瘤作用研究5 3 1 5 茶多酚和芳香物质的抗衰老作用研究5 4 2 展望5 4 参考文献。 致谢 5 5 6 2 福建农林大学硕士学位论文 摘要 本论文以清香型铁观音为研究材料，建立了茶多酚的最佳浸提和纯化工艺， 分析了芳香物质的成分及其含量，并对茶多酚和芳香物质的生物活性进行了研 究。主要研究结果如下： 1 采用单因素实验和正交实验对茶多酚的提取工艺进行了优化，茶多酚乙 醇浸提法的最佳工艺为：料液比为l ：2 5 ，浸提温度为7 5 ，浸提时间为5 0 m i n ， 乙醇浓度为7 5 ，在此条件下茶多酚浸出量为2 6 7 7 m g g 。 2 采用树脂吸附法对茶多酚进行纯化。通过比较h 1 0 2 0 、a b 8 、d 1 0 1 、 d m 3 0 1 、n k a 五种大孔吸附树脂对茶多酚的吸附解吸特性，筛选出茶多酚分离 纯化的最佳树脂是d m 3 0 1 ，确立了茶多酚纯化的最佳工艺。结果显示，当上样 速度为1 5 m l m i n 、供试液p h 值为3 0 、乙醇浓度8 0 ，洗脱速度为1 5 m l m i n 时，茶多酚提取率为1 5 6 9 ，纯度为9 4 7 8 。 3 采用同时蒸馏萃取法制备香精油，利用g c m s 对其进行了定性和定量分 析。共检测出5 6 种芳香物质，其中醇类占5 8 1 ，碳氢化合物占1 5 4 8 ，酯类 占9 4 6 ，含氮化合物占7 2 9 ，未知物及其他占5 0 9 ，杂氧化合物占2 4 7 ， 醛类占0 9 8 ，酮类占0 7 9 ，酸类占0 3 4 。香精油总量为0 0 0 7 3 。 4 通过构建小鼠s 1 8 0 荷瘤模型对茶多酚和香精油进行抗肿瘤作用研究。茶 多酚高、中、低三剂量组对小鼠肿瘤有极显著的抑制活性，与剂量呈负相关，抑 瘤率分别为2 3 8 1 、2 9 1 7 、3 3 3 3 。香精油高、中、低三剂量组对小鼠肿瘤 无显著的抑制活性。茶多酚实验组都能极显著提高小鼠的胸腺指数和脾指数，与 剂量呈负相关。与对照组相比，香精油高剂量组的胸腺指数和脾指数分别提高了 2 1 1 1 ( p 0 0 1 ) 、2 6 0 3 ( p 0 0 5 ) 。 5 通过果蝇生存试验，计算其半数死亡期、平均寿命和平均最高寿命。测 定6 0 日龄果蝇体内的s o d 活性、m d a 含量和总抗氧化能力。 茶多酚、香精油实验组都能延长雌雄果蝇的寿命。茶多酚高剂量组对雌雄果 蝇半数死亡期的延长率分别为1 7 1 8 ( p 0 0 5 ) 、2 5 0 7 ( p 0 0 1 ) ，对雌雄果蝇平 均寿命的延长率分别为1 4 5 8 ( p 0 0 5 ) 、2 0 18 ( p 0 0 1 ) ，对雌雄果蝇平均最高 寿命的延长率分别为1 5 1 1 ( p o 0 1 ) ，1 3 2 0 ( p 0 0 1 ) 。香精油中剂量组能显著 福建农林大学硕士学位论文 延长雌雄果蝇的半数死亡期，延长率分别为1 3 2 8 、1 2 9 7 ，且能显著延长雌 雄果蝇的平均寿命，延长率分别为1 2 3 9 、1 9 3 2 ，但是对果蝇的平均最高寿 命无显著影响。 茶多酚高剂量组能显著提高雌雄果蝇的s o d 值，分别提高了 1 2 8 2 0 心 0 0 1 ) 、3 8 4 1 ( 1 3 0 0 5 ) ，极显著降低雌果蝇的m d a 值，而对雄果蝇无 显著影响，极显著提高雌果蝇的总抗氧化能力。茶多酚中剂量组显著提高雌果蝇 的s o d 值和总抗氧化能力，分别提高了9 9 4 ( p 0 0 5 ) ，2 1 8 8 ( p 0 0 5 ) ，极显 著降低雌果蝇的m d a 含量，降低了9 8 0 0 如 0 0 1 ) 。香精油中剂量组显著提高 果蝇的s o d 值，极显著降低雌果蝇的m d a 值，极显著提高雌果蝇的总抗氧化 能力。香精油高、低剂量组对雌雄果蝇的s o d 值、m d a 值和总抗氧化能力均无 显著影响。 关键词：乌龙茶；茶多酚；芳香物质；提取纯化；生物活性 i i 福建农林大学硕：i ：学位论文 a b s t r a c t u s i n gt h ef a i n t - s c e n tt y p et i ek u a n y i nt e aa se x p e r i m e n tm a t e r i a l ，e s t a b l i s h e d t h eo p t i m u me x t r a c t i o nt e c h n o l o g ya n dp u r i f i c a t i o nt e c h n o l o g yo ft e ap o l y p h e n o l s ， a n a l y z e dc o m p o n e n t sa n dc o n t e n to fa r o m a t i cs u b s t a n c e s ，a n ds t u d i e db i o l o g i c a l a c t i v i t yo ft e ap o l y p h e n o l sa n d a r o m a t i cs u b s t a n c e s t h em a i nr e s e a r c hr e s u l t sa lea s f o l l o w s 1 t h ee x t r a c t i o nt e c h n o l o g yw a so p t i m i z e db ys i n g l ef a c t o ra n do r t h o g o n a l e x p e r i m e n t s t h eo p t i m u mt e c h n o l o g yo fe t h a n o le x t r a c t i o no ft e ap o l y p h e n o l si sa s f o l l o w s ：s o l i d l i q u i dr a t i oi s1 ：2 5 ，e x t r a c t i o nt e m p e r a t u r ei s7 5 。c ，e x t r a c t i o nt i m ei s 5 0 m i n , a l c o h o lc h r o m ai s7 5 ，t h ea m o u n to ft e ap o l y p h e n o l si s2 6 7 7 m g go nt h i s c o n d i t i o n s 2 t e ap o l y p h e n o l sw a sp u r i f i e db yr e s i na b s o r p t i o n b a s e do nc o m p a r i n g a d s o r p t i o na n dd e s o r p t i o nc h a r a c t e r i s t i c so f5m a c r o p o r o u sa d s o r p t i o nr e s i n sh 10 2 0 ， a b 一8 ，d 101 ，d m 3 01 ，n k af o rt e ap o l y p h e n o l s ，f i n d e do u tt h a td m 3 0 1 t y p e m a c r o p o r o u sr e s i n i sc o n s i d e r e da s o p t i m u mr e s i g n f o rp u r i f i c a t i o no ft e a p o l y p h e n o l s ，e s t a b l i s h e dt h eo p t i m u mt e c h n o l o g yo fp u r i f i c a t i o no ft e ap o l y p h e n o l s r e s u l t sd i s p l a y , w h e nf l o wr a t e1 5 m l m i n ，p hv a l u e3 0 ，t h ec o n c e n t r a t i o no fe t h a n o l 8 0 ，d e s o r p t i o nv e l o c i t y1 5 m l m i n ，t h er a t eo ft e ap o l y p h e n o l sw a s15 6 9 ，p u r i t y w a s9 4 7 8 3 t h ev o l a t i l eo i lw a se x t r a c t e dw i t hs d em e t h o d ，a n dt h e ni d e n t i f i e da n d q u a n t i f i e db yg c m s 5 6a r o m a t i cs u b s t a n c e sw e r ed e t e c t e d a m o n gt h e ma l c o h o l s a l e5 8 1 ，h y d r o c a r b o n sa l e1 5 4 8 ，e s t e r sa r e9 4 6 ，n i t r o g e nc o m p o u n d sa l e 7 2 9 ，u n k n o w nc o m p o u n d sa n do t h e rc o m p o u n d sa r e5 0 9 ，h e t e r o c y c l i c o x y g e n c o m p o u n d sa l e2 4 7 ，a l d e h y d e sa r e0 9 8 ，k e t o n e sa l e0 7 9 ，a c i d s a r e0 3 4 ， t o t a lv o l m i l eo i li s0 0 0 7 3 4 t h r o u g hs e t t i n gu pm o u s es i8 0t u m o r - b e a l i n gm o d e l s ，s t u d i e dt h e a n t i - t u m o r f u n c t i o n so ft e ap o l y p h e n o l sa n da r o m a t i cs u b s t a n c e s a l lt h ed o s a g eg r o u p so ft e a p o l y p h e n o l sh a dh i g h l ys i g n i f i c a n tf u n c t i o no nt h es u p p r e s s i o no ft h es 18 0t u m o r a c t i v i t y , n e g a t i v e l yr e l a t e dw i t hd o s a g e ，a n dt h er a t e so fa n t i - t u m o rw e r e2 3 81 ， i i i 福建农林大学硕士学位论文 2 9 17 ，3 3 3 3 a l lt h ed o s a g eg r o u p so fv o l a t i l eo i lh a dn os i g n i f i c a n te f f e c to nt h e s u p p r e s s i o no ft h es 18 0t u m o ra c t i v i t y a l lt h ee x p e r i m e n tg r o u p so ft e ap o l y p h e n o l s h i g h l ys i g n i f i c a ni n c r e a s e dt h y m u si n d e xa n ds p l e e ni n d e xo fm o u s e ，n e g a t i v e l y r e l a t e dw i t hd o s a g e c o m p a r e dw i t hc o n t r o lg r o u p ，t h et h y m u si n d e xa n ds p l e e ni n d e x o f h i g hd o s a g eo fv o l a t i l eo i lw e r ei n c r e a s e db y2 1 11 ( p 0 o1 ) ，2 6 0 3 ( p 0 0 5 ) 5 t oc a l c u l a t eh a l f - d e a t hp e r o i d ，m e a nl i f e - s p a na n dm e a nm a x i m u ml i f e - s p a n b yd r o s o p h i l as u r v i v a lt e s t ，a n dd e t e r m i n es o dv a l u e ，m d ac o n t e n ta n dt o t a l a n t i - o x i d a t i o nv a l u ei n6 0a g e i n d a y sd r o s o p h i l a a l lt h ee x p e r i m e n tg r o u p so ft e ap o l y p h e n o l sa n dv o l a t i l eo i lc o u l dp r o l o n gt h e l i f e s p a n o fd r o s o p h i l a t h eh i g hd o s a g eo ft e ap o l y p h e n o l sc o u l dp r o l o n gt h e h a l f - d e a t hp e r o i do f m a l ea n df e m a l eb y1 7 1 8 ( p 0 0 5 ) ，2 5 0 7 ( p 0 0 1 ) ，i n c r e a s e d m e a nl i f e - s p a no fm a l ea n df e m a l e b y 14 5 8 ( p 0 0 5 ) ，2 0 18 ( p 0 01 ) ，a n d l e n g t h e n e dm e a nm a x i m u ml i f e - s p a n o fm a l ea n df e m a l eb y15 1 1 ( p 0 oi ) ， 13 2 0 ( p 0 01 ) t h em e d i u mo fv o l a t i l eo i lc o u l ds i g n i f i c a n tp r o l o n gh a l f - d e a t h p e r o i do fm a l ea n df e m a l e ，t h ee l o n g a t i o nr a t e sw e r e13 2 8 ，12 9 7 ，s i g n i f i c a n t p r o l o n gm e a nl i f e s p a no fm a l ea n df e m a l e ，t h ee l o n g a t i o nr a t e sw e r e12 3 9 ， 19 3 2 ，b u th a dn os i g n i f i c a n te f f e c to nm e a nm a x i m u ml i f e s p a no f d r o s o p h i l a t h eh i g hd o s a g eo ft e ap o l y p h e n o l ss i g n i f i c a n ti n c r e a s e ds o dv a l u eo fm a l ea n d f e m a l eb y1 2 8 2 ( p 0 0 1 ) ，3 8 4 1 ( p 0 0 5 ) ，h i g h l ys i g n i f i c a nd e c r e a s e dm d av a l u e o ff e m a l e ，b u th a dn os i g n i f i c a n te f f e c to nm a l e ，h i g h l ys i g n i f i c a ni n c r e a s e dt o t a l a n t i - o x i d a t i o nv a l u eo ff e m a l e t h em e d i u mo ft e ap o l y p h e n o l ss i g n i f i c a ne n h a n c e d s o dv a l u ea n dt o t a la n t i o x i d a t i o nv a l u eo ff e m a l e b y9 9 4 ( p 0 0 5 ) ， 21 8 8 ( p 0 0 5 ) ，h i g h l ys i g n i f i c a nd e c r e a s e dm d av a l u eo f f e m a l eb y9 8 0 ( p 0 0 1 ) t h em e d i u mo fv o l a t i l eo i ls i g n i f i c a n te n h a n c e ds o dv a l u eo fd r o s o p h i l a , h i g h l y s i g n i f i c a nd e c r e a s e dm d a v a l u eo ff e m a l e ，a n di n c r e a s e dt o t a la n t i o x i d a t i o nv a l u eo f f e m a l e b o t ht h eh i g ha n dl o wd o s a g eg r o u p so fv o l a t i l eo i lh a dn os i g n i f i c a n te f f e c t o ns o dv a l u e m d av a l u ea n dt o t a la n t i o x i d a t i o nv a l u eo f m a l ea n df e m a l e k e yw o r d s ：o o l o n gt e a ；t e ap o l y p h e n o l s ；a r o m a t i cs u b s t a n c e s ；e x t r a c t i o na n d p u r i f i c a t i o n ；b i o l o g i c a la c t i v i t y ； i v 福建农林大学硕士学位论文 第一章文献综述 l 茶多酚研究进展 茶多酚是存在于茶树中的多元酚类化合物的总称，研究表明，具有抗氧化、 抗突变、抗衰老、抗辐射、降血糖、降血脂及清除机体自由基等多种药理功能【14 1 。 人类对茶多酚的认识已经进入科学消费阶段、更重视其产品的营养与保健品质。 因此，对茶多酚的提取纯化和生物活性研究具有重要意义。 1 1 茶多酚的理化性质 茶多酚( t e ap o l y p n e h e n o l s ，t p ) 又名茶鞣质、茶单宁，是决定茶叶品质的主 要物质之一，一般占茶叶干重的1 5 - 3 0 t 5 1 ，大约有3 0 种以上的酚类物质组成。 按化学结构可分为儿茶素类、黄酮及类黄酮醇类、花色素类、酚酸及缩酚酸类等， 其中儿茶素类最重要，属于黄烷醇类化合物，约占茶多酚总量的6 0 一8 0 。j 除 了酚酸及缩酚酸类外，均具有以邻苯酚基苯并吡喃衍生物为主体的结构，统称为 类黄酮物质。 茶多酚一般为灰白色粉状或淡黄色至褐色略带茶香的晶体，有涩味，略有吸 潮性。可溶于水、甲醇、乙醇、冰醋酸、乙酸乙醋等极性较大的有机溶剂，微溶 于油脂，难溶于苯、氯仿、石油醚极性较小的溶剂，有较好的耐热性和耐酸性， 在p h 2 7 范围内均相对稳定，在碱性条件下易发生氧化聚合反应而褐变 6 1 。 1 2 茶多酚的提取纯化 目前茶多酚的提取纯化工艺主要有以下7 种方法，如溶剂萃取法、超声萃取 法、微波萃取法、金属离子淀法、膜技术纯化法、树脂吸附法、超临界萃取法。 1 2 1 溶剂萃取法 溶剂萃取法是茶多酚传统的提取方法，过程简单方便，易于工业化生产【7 8 】。 常用溶剂是水、甲醇、乙醇、丙酮、乙酸乙酯等有机溶剂，其原理主要是利用茶 叶的内含物在有机溶剂中的溶解度不同进行萃取分离茶多酚。萃取工艺一般是先 用溶剂将茶多酚提取出来，然后用石油醚等去除茶色素，再用氯仿脱除咖啡因得 到茶多酚粗品。胡秋辉，姜梅等【9 1 研究证明：用9 5 7 , 醇提取茶多酚，茶多酚的 得率和纯度最高。袁华，容如滨等【1 川利用特定的混合溶剂提取分离得到含量9 5 福建农林大学硕士学位论文 的茶多酚，提出了茶多酚提取分离的新工艺。这种方法主要缺点是有机溶剂耗量 大、提取工艺周期长、提取率较低、易造成环境污染，且高温下茶多酚易发生氧 化反应。 1 2 2 超声萃取法 超声提取法【1 1 1 原理是利用超声波振动产生的巨大能量和对液体的空化作用， 使植物的细胞壁粉碎，从而使提取物从细胞内释放出来。何晓梅，曹伟【1 2 】利用超 声波辅助提取法，采用正交实验设计，确定了提取茶多酚的最佳工艺，使浸提中 的茶多酚含量达2 6 4 4 ，比对照组提高了8 。张素霞【1 3 1 研究了不同提取方法对 茶多酚含量的影响，确定了超声波最佳提取条件，比有机溶剂提取法提取的茶多 酚含量高4 4 9 。超声提取法是在提取过程中对目标物进行超声波强化处理，具 有简单方便，能耗低、效率高、不破坏有效成分等特点，应用前景广阔1 4 1 。 1 2 3 微波萃取法 微波辅助提取法主要利用微波的电磁辐射作用，加快植物细胞壁破裂，使细 胞内的有效成分溢出来，扩散到溶液中，达到萃取的目的。该方法的特点是效率 高、省时、耗能低，可有效地保护原料中的有效成分，但是有一定的辐射副作用。 林硕，高学玲等【1 5 】利用正交实验设计，对微波提取工艺进行改进，比传统水提取 法茶多酚的含量要高9 3 6 。宋建红，汪建华【1 6 】利用乙酸乙酯作为溶剂对茶叶进 行微波萃取，得出萃取率较高，而且省时。 1 2 4 金属离子沉淀法 金属离子沉淀法主要是利用茶多酚可与某些金属离子如b i 2 + 、a 1 3 + 、z n 2 + 、 c a 2 + 、a g + 、h 9 2 + 等产生络合沉淀的原理，再通过离心分离、酸转溶、溶剂萃取 等过程，得到较高纯度的茶多酚，某些混合离子也可以作为沉淀剂1 7 , 1 8 】。蒋建平， 陈洪等【1 9 l j 炯( a l + 3 + z n + 2 ) 为复合沉淀剂，n a h c 0 3 溶液调节p h 值= 5 5 6 5 ，进而以 盐酸溶液转溶沉淀，使茶多酚的产率提高到1 1 8 ，纯度达到9 9 5 。离子沉淀 法主要有耗能低、操作简单方便，选择性好、产品的纯度较高的优点，但是某些 有一定毒性的金属离子可能会在茶多酚中有残留、且转溶条件必须在酸性条件 下，否则易造成茶多酚的氧化。 1 2 5 膜技术纯化法 膜技术纯化法是以选择透性膜为分离介质，根据不同物质对膜有不同的选择 2 福建农林大学硕士学位论文 性，在分离时由于膜两侧的浓度不同，使膜两侧产生压力差，进而使不同物质选 择性的分离【2 0 1 。茶多酚的膜技术纯化主要是利用微滤膜、超滤膜对茶叶中蛋白质、 多糖、胶质等大分子物质截取，以及利用反渗透、纳滤技术进行浓缩。孙艳娟、 毛志方等【2 1 1 研究了不同膜对茶多酚的分离效果，结果显示：微滤膜消除杂质不明 显；超滤膜澄清效果显著，反渗透浓缩对茶多酚的分离率比纳滤浓缩约高1 0 。 1 2 6 树脂吸附法 树脂吸附法是利用某些特定的树脂对茶多酚有选择吸附特性而达到分离纯 化茶多酚的方法，主要有离子交换柱、凝胶柱、吸附柱分离法等三种方法，分离 不同的物质，需要选择不同的方法，因为不同的树脂对不同物质的吸附解吸效果 不同。陈海霞掣2 2 】通过对1 5 种树脂对茶多酚的吸附解吸性能的比较，研究了连续 提取茶多酚、茶多糖、咖啡碱的新工艺。吕远平，姚开等【2 3 】比较了1 1 种树脂对茶 多酚的吸附解吸特性，结果显示，n k a 树脂可以有效提高茶多酚的纯度，纯度 可达9 5 8 。高彦华，刘晓娜等【2 4 1 研究了1 1 种树脂对茶多酚纯化效果，结果表明， 莲 h 1 0 2 0 树脂吸附率达8 0 3 3 ，解吸率达8 3 5 ，茶多酚的纯度大于9 8 。周芸， 周菊峰【2 5 】研究了大孔p m v b s 树脂对茶多酚的吸附效应，结果显示，p m v b s 树脂 对茶多酚有良好的吸附解吸特性，且稳定性好。黄秋森，胡娟等【2 6 j 以a b 8 树脂 为吸附剂，探讨静态吸附法纯化茶多酚的吸附解吸效果，得出儿茶素组分占总量 的8 8 6 。树脂吸附法因操作方便、工艺简单、节省能源、成本低、不吸潮且树 i 脂机械强度好，容易再生、产品纯度较高等诸多优点在物质纯化方面得到了广泛 应用。 1 2 7 超临界c 0 2 流体萃取法 超临界流体萃取( s u p e r c r i t i c a lf l u i de x t r a c t i o n ，s f e ) 是近3 0 年来发展的一种 新型分离技术，原理是以介于气体和液体之间的流体( 如c 0 2 ) 作为萃取剂，利用 其压力和温度对超临界流体溶解能力的影响而进行的。在超临界状态下，流体具 有的高溶解能力和高渗透力，可以把高沸点物质从固体或液体中萃取出来，以达 到纯化的目的。于基成，金莉【2 7 】探究了超临界c 0 2 萃取茶多酚的最佳条件，结果 显示，茶多酚的萃取率提高t 5 6 3 7 。王朝瑾，马红青等【2 8 1 采用正交实验法， 优化了超临界c 0 2 萃取茶多酚的最佳工艺，茶多酚制品中儿茶素的含量为 7 7 3 5 。由于其萃取剂常为二氧化碳，对产品没有毒性，广泛应用于医药、食品 福建农林大学硕： ：学位论文 添加剂等方面，但是设备昂贵，工序繁琐，不利于规模化生产。 1 3 茶多酚的生物活性研究 1 3 1 抗氧化作用 茶多酚的抗氧化作用主要体现在清除自由基的能力。自由基是机体在氧化反 应过程中会产生的一种有害化合物，具有强氧化性，可损害机体的组织、细胞、 免疫应答体系，进而引起各种并发症。作为一种从茶叶中提取的天然多酚类物质， 茶多酚具有很强的抗氧化作用和清除自由基的能力，o 0 1 0 0 3 即可起作用，而 且不存在毒副作用。茶多酚类物质的结构中富含多酚羟基，能提供活泼h + ，h + 与机体内产生的活泼自由基反应，降低自由基含量。研究已证实，茶多酚的抗氧 化作用主要体现在以下几个方面：( 1 ) 直接清除活性氧自由基；( 2 ) 抑制脂质过氧 化反应。阻止脂自由基的传播扩增；( 3 ) 结构中的2 苯基苯并吡喃鳌合金属离子形 成络合物，影响氧化反应【2 9 】；( 4 ) 激活细胞内抗氧化防御系统，维持自由基的动 态平衡；( 5 ) 茶多酚与其他抗氧化物质的协同作用【3 0 1 。 1 3 2 抗衰老作用 衰老是生物随着时间的推移，而发生的一系列生理、病理综合影响的动态过 程。生物体在衰老的同时，脂质过氧化反应加重，产生活性自由基，致使生物体 的细胞膜和免疫应答系统受损伤，加速了丙二醛( m d a ) 和脂褐质在机体内大量积 累，影响细胞的功能，导致生物体的逐渐衰老。而茶多酚能竞争性地与自由基结 合，终止自由基的链式反应，并且提高超氧化物歧化酶( s o d ) 的活性，从而预防 或减轻自由基对生物体的损伤，延缓生物体的衰老。宁鸿珍、闫红等【3 1 】用茶多酚 矿工饮料饲喂1 2 月龄的小鼠7 周后，结果发现，小鼠体内的脂褐素降低了6 0 9 9 。 周大勇【3 2 1 用复方茶多酚胶囊灌胃9 月龄小鼠1 0 日后，血浆中的s o d 活性显著高于 对照组，且m d a 值水平显著低于对照组( p o 0 5 ，p 0 0 1 ) ，潘喜华，杨隽【3 3 1 得到 了同样结果。 1 3 3 抗肿瘤、抗癌作用 研究发现，过量的自由基会导致癌细胞的扩散，而茶多酚具有清除自由基的 作用，可以防止致癌物质的形成，降低促进癌细胞增殖的酶的活性3 4 1 ，因此茶多 酚会阻止癌细胞的扩散或杀死癌细胞。曹明富，杨贤强等网研究了茶多酚对s 1 8 0 小鼠的影响，结果显示茶多酚可以有效的抑制癌细胞的增殖，徐力，侯丽1 3 6 1 得到 了同样的结果。j d l a m b e r ta n dc s y a n g 3 7 1 报道茶多酚可以抑制癌细胞d n a 的 4 福建农林大学硕士学位论文 复制，诱导癌细胞凋亡。杜春华，张萌云1 3 8 1 研究报道茶多酚对可以肺癌s p c a 1 细胞的增殖，且可以阻滞s p c a 1 的周期。 1 3 4 抗辐射作用 随着社会的发展，人们长时间地受到紫外线、电脑、手机等电磁辐射的危害。 茶多酚可以直接竞争辐射能量并清除辐射产生的自由基，从而降低辐射的危害。 夏济平，宋秀祖等【3 9 】研究了茶多酚对紫外照射后角质形成细胞和成纤细胞增殖的 影响，结果发现，茶多酚对这两种细胞的损伤起到了明显的保护作用。王清吉、 王友绍等【加】用6 0 c 叫射线照射小鼠，然后用茶多酚灌胃治疗，结果显示，茶多酚 存活天数比对照组提高2 9 天( p o 0 1 ) 。 1 3 5 抗病毒、抗菌作用 茶多酚对甲、乙型流感病【4 1 1 、胃肠炎病毒及乳酸杆菌、肠道致病菌等多种致 病菌具有较强的抑制作用。彭慧琴，蔡卫引4 2 1 研究报道，茶多酚在6 2 5 5 0 u g m l 浓度之间，对流感a 3 病毒有很好的治疗效果。y a m a g u c h ik ，h o n d amd 等【4 3 】将 ? e g c g 植入t 淋巴细胞和单核细胞样系统中，分析e g c g 对h i v 病毒颗粒的附着、 注入反转录及m r n a 表达的破坏作用，结果发现，当e g c g 浓度大于1 1 t m 时，能 破坏h i v 病毒颗粒，且能抑制病毒的注入和反转录。李鸣宇，刘正掣删利用茶多 酚测定抗粘性放线菌等产酸能力，结果显示，当茶多酚对粘性放线菌的m i c 为 5 0 0 m g l 时，其抑制粘性放线菌的产生能力最强。侯冰、钱元恕等【4 5 】利用基因芯 童 片技术考察了金葡菌被茶多酚处理前后基因图谱的变化，结果显示，有2 0 4 个基 因表现差异，这些差异基因可能会影响金葡菌的细胞生物合成、代谢等过程。 1 3 6 对心血管的保护作用 血脂、血压升高、动脉粥样硬化、心机损伤是心血管疾病发生的主要原因。 茶多酚通过降低血脂、调节胆固醇代谢、降血压、防止心机损伤、抑制平滑肌细 胞的增殖和肥大，来阻止心血管病的发生【4 6 ，4 7 ，4 引。茶多酚降低血脂的作用在于它 能与脂类结合，将胆固醇较多地逆向肝脏转移，然后形成胆固酸排出体外，进而 起到调节血脂、预防心脑血管疾病的作用4 9 1 。 1 3 7 减肥轻身作用 肥胖症主要是由于脂肪细胞增大和增多的结果，它能引发许多非传染性疾病 等多种并发症，而茶多酚可以通过加快脂肪酸和脂肪的分解，还可以通过抑制蔗 糖酶、葡萄糖苷酶的活性，减少碳水化合物的消化吸收，从而起到减肥轻身的作 福建农林人学硕士学位论文 用【5 0 1 。连丽娜，孟宪军等5 u 研究发现以高剂量的( 6 0 0 m g l ( g d ) 茶多酚饲喂小鼠， 对小鼠的营养肥胖有明显的预防和减肥效果。王丽云、凌宝银等【5 2 1 用低、中、高 ( 3 0 、1 5 0 、7 5 0