（植物学专业论文）拟南芥cdpk基因wdss1参与干旱胁迫反应的实验证据.pdf

c h i n aa g r i c u l t u r a lu n i v e r s i t yp h d d i s s e r t a t i o na b b r e v i a t i o n s 中文摘要 干旱是影响植物生长和作物产量的主要因素之一。植物在响应干旱胁迫过程中的一种机制是 通过气孔关闭降低水分流失，以保持植物体内的生物活性在这个过程中，保卫细胞中自由的 c a + 浓度增加，从而使气孔关闭。作为c a 2 + 的感受器之一，钙依赖的蛋白激酶( c d p k ) 在这个 过程中起着重要的作用。对拟南芥c d p k s 参与植物响应水分胁迫的研究还很少 拟南芥c p k 基因突变体w d s s l ( w a t e rd e f i c i ts t r e s ss e n s i t i v e1 ) 在水分不足的条件下显示了较 野生型更敏感的表型和较高的蒸腾速率。g f p 融合蛋白表达亚细胞定位结果表明w d s s l 是质膜 定位。r t - p c r 的结果显示w d s s l 是干旱胁迫诱导表达的。c a 2 + ，h 2 0 z 和a b a 处理后，w d s s l 的气孔不能关闭，这与干旱条件下w d s s l 体内水分大量流失是一致的，说明w d s s i 功能的缺失 减弱了保卫细胞响应干旱的信号转导过程。酵母双杂交筛选结果证实朋嘟7 与过氧化氢酶 ( c a t x ) 在体外互作，但与其它的c a t 成员并不互作。b i f c 的实验结果也证明了二者在体内是 互作的。表型观察结果显示c a t x 与w d s s l 在干旱条件下都表现出敏感的表型。w d s s l 体外h 2 0 2 的清除率部分降低。过表达株系的h 2 0 2 的清除率却较野生型高，表明w d s s l 通过激活c a t x 来 增加对r o s 胁迫的耐受性。d a b 染色结果表明w d s s l 和c a t x 突变体在干旱条件下积累较高的 h 2 0 2 ，说明二者参与了调控h 2 0 2 平衡的过程。对两种突变体在种子萌发和幼苗生长期间对h 2 0 2 和a b a 的敏感性实验结果显示差异不明显。过氧化氢酶活性的测定结果显示w d s s l 与野生型的 差异不明显。 以上证据表明w d s s l 和c a t x 在干旱条件下调节气孔运动方面起着重要的作用。体内和体 外的实验证据也表明w d s s l 与c a t x 是互作的，推测w d s s i 可能通过磷酸化c a t x ，并控制h 2 0 2 的平衡。 关键词：拟南芥，c d p k ，干旱胁迫，w d s s i ，c a t x c h i n aa g r i c u l t u r a lu n i v e r s i t yp h d d i s s e r t a t i o na b s t r a c t a b s t r a c t d r o u g h ti s am a j o rt h r e a tf o rp l a n tg r o w t ha n dc r o pp r o d u c t i v i t y o n eo ft h e m e c h a n i s m so fp l a n tr e s p o n s et od r o u g h ts t r e s si ss t o m a t a lc l o s u r et op r e v e n tw a t e rl o s s a n dm a i n t a i ni t sb i o l o g i c a la c t i v i t y d u r i n gt h i sp r o c e s s ，t h ec y t o s o l i cf r e ec ai ss h o w nt o b ee l e v a t e di ng u a r dc e l l si nr e s p o n s et os t r e s ss t i m u l iw h i c ht r i g g e rs t o m a t a lc l o s u r e a s o n eo ft h ec a s e n s o r s ，c a l c i u m - d e p e n d e n tp r o t e i nk i n a s ( c d p k s ) m a yp l a yi m p o r t a n t r o l e si nt h i sp r o c e s s h o w e v e r , t h ei n v o l v e m e n to fr e g u l a t i o nm e c h a n i s m so fc d p k si n p l a n tr e s p o n s e st ow a t e rs t r e s sr e m a i n sl a r g e l yu n k n o w n o n ea r a b i d o p s i sc p k sg e n ek n o c k o u tm u t a n tw d s s l ( w a t e rd e f i c i ts t r e s ss e n s i t i v e1 ) s h o w e dm o r es e n s i t i v ep h e n o t y p ea n dh i g h e rt r a n s p i r a t i o nr a t eu n d e rw a t e rd e f i c i t c o n d i t i o nt h a nd i dw i l dt y p ep l a n t s t h ep r e v i o u ss t u d i e si no u rl a bc o n f i r m e dt h a tw d s s l w a se x p r e s s e di ng u a r dc e l l su s i n gg u s s t a i n i n ga s s a y w d s s lw a sb r o a d l ye x p r e s s e di n s e e d l i n g s ，f l o w e r sa n dl e a v e sa n dp a r t i c u l a r l yh i g ha c t i v i t yw a so b s e r v e di ng u a r dc e l l sa n d w d s s l w a sm e m b r a n e a s s o c i a t e dd e t e r m i n e db yg u ss t a i n i n ga n dg f pf u s i o nm e t h o d s ， r e s p e c t i v e l y f u r t h e rm o r e ，r t p c ra n a l y s i ss h o w e dt h a tw d s s ie x p r e s s i o nl e v e lw a s i n d u c e di nr e s p o n s et od r o u g h ts t r e s s p r e o p e n e dw d s s ls t o m a t af a i l e dt oc l o s ei nr e s p o n s e t oa b a ，h 2 0 2a n dc a 十，w h i c hi sc o n s i s t e n tw i t ht h ei n a b i l i t yo fw d s s lp l a n t st or e d u c e w a t e rl o s su p o nd r o u g h ts u g g e s t i n gt h a tl o s s - o f - f u n c t i o nm u t a t i o ni nw d s s li m p a i r ss i g n a l t r a n s d u c t i o ni ng u a r dc e l l si nr e s p o n s et od r o u g h t y e a s tt w o - h y b r i dr e s u l t sd e m o n s t r a t e d t h a tw d s s1 s p e c i f i c a l l yi n t e r a c t e dw i t ho n eg r o u po fc a t a l a s e ( c a t x ) b u tn o tw i t ho t h e r c a tm e m b e r s ，c o n s i s t e n t 谢t ht h eo b s e r v a t i o nt h a tt h ew d s s la n dc a t xm u t a n t sd i s p l a y e d t h es a m ep h e n o t y p ei nr e s p o n s et od r o u g h ts t r e s s t h eb i f cr e s u l t sf u r t h e rc o n f i r m e dt h a t w d s s1 s t r o n g l y i n t e r a c t s 、析t hc a t x nv i v o t h ew d s s lp l a n t sp a r t i a l l yi m p a i r e d e l i m i n a t i o no fe x t r ac e l l u l a rh 2 0 2 o v e r e x p r e s s i o np l a n t se l i m i n a t e dh 2 0 2a tah i g h e rr a t e t h a nd i dw i l dt y p ep l a n t s ，s u g g e s t i n gt h a tt h ei n t r a c e l l u l a ra b u n d a n c eo fw d s s1a f f e c t e d t h et o l e r a n c et or o ss t r e s s h i g hp r o d u c t i o no fh 2 0 2i nw d s s la n dc at xr e c e s s i v e m u t a n t si nr e s p o n s et od r o u g h ts u g g e s t st h e i ri n v o l v e m e n ti nc o n t r o l l i n gh 2 0 2h o m e o s t a s i s w ea l s o t e s t e dt h ee f f e c to fh 2 0 2a n da b ad u r i n gs e e dg e r m i n a t i o na n ds e e d l i n g d e v e l o p m e n t n o n eo ft h el i n e ss h o w e ds i g n i f i c a n td i f f e r e n c e t h er e s u l t so fc a t a l a s e a c t i v i t ys h o w e dt h a tt h ed i f f e r e n c ei nc a t a l a s ea c t i v i t yo ft h ec r u d ee x t r a c t sf r o mt h ew d s s l a n dw i l dt y p ep l a n t sw a sn o td i s t i n g u i s h a b l e t h ep r e s e n t e de v i d e n c e ss u g g e s tt h a tw d s s ia n dc at xm a yp l a ya ni m p o r t a n tr o l ei n c h i n aa g r i c u l t u r a iu n i v e r s i t yp h d d i s s e r t a t i o na b s t r a c t t h er e g u l a t i o no fs t o m a t a lm o v e m e n tu n d e rw a t e rs t r e s s a l s o ，i nv i v oa n di nv i t r o ， e v i d e n c e ss h o w e dt h a tw d s s1i n t e r a c t ss t r o n g l yw i t hc a t x t h e r e f o r e ，w es p e c u l a t e x i t h a tw d s s i ，ak i n a s c ，m a y d i r e c t l yp h o s p h o r y l a t et h ec a t xa n dc o n t r o lh 2 0 2 h o m e o s t a s i s k e yw o r d s ：a r a b i d o p s i st h a l i a n a ，c a l c i u m - d e p e n d e n tp r o t e i nk i n a s e s ( c d p k s ) ，d r o u g h t s t r e s s ，w d s s l ，c at x 2 c h i n aa g d c u l t u r a lu n i v e r s i t yp h d d i s s e r t a t i o na b b r e v i a t i o n s a b a 心 b a c c d p k c a 涨 c c a l 订k c r k c a 2 + c y t l c d n a d n t p 晰 e b e f e d t a g u s h y g k a n l b m e s m s n c b i o d p c r r 活 r n a r t p c r s d s s i g n a l t a i r t e m e d t i g r t r i s a b b r e v i a t i o n s a b s c i s i ca c i d a d e n o s i n 5 - t r i p h o s p h a t e b a c t e r i a la r t i f i c i a lc h r o m o s o n l e c a l c i u md e p e n d e n tp r o t e i nk i n a s e c a l m o d u l i n - d e p e n d e n tp r o t e i nk i l l a $ c a l c i u ma n dc a l m o d u l i n d e p e n d e n tp r o t e i nk i n a s e s c d p kr e l a t e dk i n a s c y t o s o l i cc a l c i u m c o m p l e m e n t a r yd n a d e o x y n u c l e o t o d et r i p h o s p h a t e d i t h i o t h r e i t o l e t h i d i u mb r o m i d e e l o n g a t i o nf a c t o r e t h y l e n e d i a m i n et e t r a a c e t i ca c i d p g l u c u r o m d 2 u s e h y 鲈o m y c m k a n a m y c i n l u r i a - b e r t a n im a d i a 2 一( n m o r p h o l i n o ) e t h a n s e s u l f o n i ca c i d m u r a s h i g e s k o o gm e d i a n a t i o n a lc e n t r ef o rb i o t e c h n o l o g yi n f o r m a t i o n o p t i c a ld e n s i t y p o l y m e r a s ec h a i nr e a c t i o n r i f a m p i n r i b o n u c l e i ca c i d r e v e r s e t r a n s c r i p t i o np c r s o d i u md o d e c y ls u l f a t e s a l ki n s t i t u t eg e n o m i ca n a l y s i sl a b o r a t o r y t h ea r a b i d o p s i si n f o r m a t i o nr e s o u r c e n ，n ，n ，n t e t r a - m a t h y l - e t h y l e n ed i a m i n e t h ei n s t i t u t ef o rg e n o m i cr e s e a r c h 啊s ( h y d r o x y m e t h y l ) a m i n o m e t h e n e 4 独创性声明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发 表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国农业大学或其它教育机构的学位或证书 而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明 确的说明并表示了谢意。 研究生签名：9 譬心r r a 百n s e l c e j 已时间：加0 1 年o 月l f 日 关于论文使用授权的说明 本人完全了解中国农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留 送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复 制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、 传播学位论文的全部或部分内容。 ( 保密的学位论文在解密后应遵守此协议) 研究生签名：少i s f 、 位 1 h as k 乏j 之j 。i 时间：2 0 g 1 年d 月i s 日 导师签名： 时间：矿7 年( 月踊 c h a p t e rl ：r e s e a r c hb a c k g r o u n d w a t e ri sal i m i t i n gr e s o u r c 跫i nm o s tt e r r e s t r i a lp l a n t s d e s i c c a t i o no fc r o p sd u r i n g p e r i o d so fd r o u g h tc a u s e ss e v e r ea n d o f t e ni r r e v e r s i b l ed a m a g ea n dl o s ty i e l d s f r e s hw a t e r s c a r c i t yh a sb e e ni d e n t i f i e da so n eo ft h ep r i n c i p a lg l o b a lp r o b l e m si nt h en e wc e n t u r ya n d p l a n t sa c c o u n tf o ra r o u n d6 5 o fg l o b a l 毹s hw a t e ru s e a g r i c u l t u r a la n dh o r t i c u l t u r a l 墩 o fp l a n t si nc l i m a t e st ow h i c ht h e s ep l a n t sa r en o ta d a p t e d , a sw e l la ss h o r t - t e r mc l i m a t e c h a n g e s ，l e a dt od r a m a t i cc r o pl o s s e so rf r e s h w a t e rc o n s u m p t i o nu n d e rs t r e s sc o n d i t i o n s s u c ha sd r o u g h t i tw o u l db eb e n e f i c i a lt oa g r i c u l t u r ef o rc r o pp l a n t st os h o ww i d es t o m a t a l o p e n i n gf o rc 0 2i n t a k ew h e nw a t e ri sa v a i l a b l e ，b u tt oc l o s es t o m a t ad u r i n gd r o u g h t p e r i o d s ，t h e r e b ys l o w i n gd e s i c c a t i o na n dd a m a g e p l a n t sn e e dt or e g u l a t ew a t e rl o s st o c o p e 、析mt h e s es t r e s sc o n d i t i o n sa n d t os u r v i v ei na d v e r s ec o n d i t i o n s p l a n t sl o s eo v e r9 0 o fw a t e rb yt r a n s p i r a t i o nt h r o u g hs t o m a t a lp o r e s b u tw a t e rl o s s t h r o u g hs t o m a t ai sr e q u i r e df o rt h ea s c e n to fn u t r i e n t sa n de v a p o r a t i o no fw a t e rf r o mt h e l e a fh a sa ni m p o r t a n tc o o l i n ge f f e c t h o w e v e r , t h e r es h o u l db eab a l a n c eb e t w e e nw a t e r l o s sa n dc 0 2 u p t a k ef o ro p t i m u mp l a n tg r o w t h an u m b e ro fu n d e s i r a b l ee n v i r o n m e n t a l c o n d i t i o n si n c l u d i n gd r o u g h t ，s a l i n i t y , l o wh u m i d i t ye t c s u b j e c tp l a n t st oo s m o t i cs t r e s s l e a d i n gt or e d u c ep l a n tg r o w t ha n dd e v e l o p m e n ta n du l t i m a t e l yp l a n tp r o d u c t i v i t y p l a n t sr e s p o n dt od e h y d r a t i o nw i t han u m b e ro fp h y s i o l o g i c a la n dd e v e l o p m e n t a l c h a n g e s k n o w l e d g e a b o u ts t r e s ss i g n a lt r a n s d u c t i o ni sa l s ov i t a lf o rc o n t i n u e d d e v e l o p m e n to fb r e e d i n ga n dt r a n s g e n i cs t r a t e g i e st oi m p r o v ed r o u g h tt o l e r a n c ei nc r o p s m o l e c u l a ra n dc e l l u l a rr e s p o n s e st os t r e s s e si n c l u d i n gd r o u g h th a v eb e e na n a l y z e d e x t e n s i v e l ya tt h eb i o c h e m i c a ll e v e l v a r i o u sk i n d so fp r o t e i n sa n do t h e r m o l e c u l e s i n c l u d i n gs u g a r s ，p r o l i n ea n da b a a r ea c c u m u l a t e di nr e s p o n dt od r o u g h t i na d d i t i o n ， m a n yg e n e sa r ei n d u c e db yd e h y d r a t i o n i ng e n e r a l ，s t r e s sr e s p o n s es i g n a lt r a n s d u c t i o n p a t h w a ys t a r t sw i t hs i g n a lp e r c e p t i o nf o l l o w e db yt h eg e n e r a t i o no fs e c o n dm e s s e n g e r s s e c o n dm e s s e n g e r sc a nm o d u l a t ei n t r a c e l l u l a rc a 十l e v e l s ，o f t e ni n i t i a t i n g ap r o t e i n p h o s p h o r y l a t i o nc a s c a d et h a tf i n a l l yt a r g e t sp r o t e i n sd i r e c t l yi n v o l v e di nc e l l u l a rp r o t e c t i o n o rt r a n s c r i p t i o nf a c t o r sc o n t r o l l i n gs p e c i f i cs e t so fs t r e s s - r e g u l a t e dg e n e s r e c e n ts t u d i e si n a r a b i d o p s i sh a v ed e m o n s t r a t e dt h a ts t o m a t a lr e s p o n s e sc a nb em a n i p u l a t e db ym o d i f y i n g g u a r dc e l ls i g n a lt r a n s d u c t i o ne l e m e n t st or e d u c et r a n s p i r a t i o n a lw a t e rl o s sa n dd e s i c c a t i o n d u r i n gd r o u g h tp e r i o d s ( p e ie ta 1 ，19 9 8 ) 1 15 胁m a a lr e g u l a t i o n s t o m a t aa r es p e c i a t i z e dl e a fs t r u c t u r e ss u r r o u n d e db yt w os p e c i f i ce p i d e r m a lc e l l st h a t f a c i l i t a t ec o zu p t a k ef o rp h o t o s y n t h e s i sa n dr e g u l a t et r a n s p i r a t i o n a lw a t e rv a p o rl o s st h e a p e r t u r eo ft h es t o m a t a lp o r em u s tb ef i n e l yt u n e di no r d e rt oa l l o wu p t a k eo fs u f f i c i e n t c 0 2 a n dn o tt ol o s ee x c e s s i v ew a t e ru n d e rd i v e r s ec o n d i t i o n si nr e s p o n s et oan u m b e ro f e x t e r n a la n di n t e m as i g n a l ss u c ha s l i g h t c 0 2 ，d r o u g h t ，h u m i d i t y , c a 2 + a n dp h y t o h o r m o n e a b a ，( b l a t t 2 0 0 0 ；a s s m a n na n d w a n g 2 0 0 i ：d i e t r i c he ta l ，2 0 0 1 ；s e h r o e d e re t a 1 2 0 0 1 ：r o e l f s e m aa n dh e d r i c h 。2 0 0 2 ) t h ea p e r t u r e s o f t h es t o m a t a lp o r e s a r er e g u l a t e d b yt h et u r g o td r i v e nv o l u m ec h a n g e so ft w os m x o u n d i n gg u a r dc e l l s ( m a c r o b b i e 1 9 9 8 ) t h ep o r ea p e r t u r ee n l a r g e sw h e ng u a r dc e l l ss w e l ld u et oi n c r e a s e dt u r g o rp r e s s u r et h e t u r g o tp r e s s u r eo fg u a r dc e l l si sr e g u l a t e db ys o l u t ec o n c e n t r a t i o na n dw a t e rf l o wa c r o s s c e l l m e m h r a n e sk + i s t h e m a j o r o s m o t i c a t h a | d r i v eg u a r dc e l lv o l u m e ( f i gij 1 t h e r e f o 佗g u a r dc e l l sa r eaw e l l - d e v e l o p e dm o d e ls y s t e mf o rc h a r a c t e r i z a t i o n so f m e c h a n i s m so f e a d yp l a n ts i g n a l i n gc a s c s d e s k a t t k a t 2 篮瞿小 a t k c4 f i g u r e l i ：i o n c h a n n e l sa n d t r a m p o w e r s i ng u a r dc e l l s i f a n z h a o a n d a s s m a n n2 0 叫1 c h i n a a g r i c u l t u r a lu n i v e r s i t yp h d d i s s e r t a t i o n c h a p t e r1 ：r e s e a r c hb a c k g r o u n d 1 1 1s t o m a t a lo p e n i n g s t o m a t a lo p e n i n gi sd r i v e nb yp l a s m am e m b r a n eh y p e rp o l a r i z a t i o np r o p o s e dt od r i v e k - u p t a k ei n t og u a r dc e l l sp a s s i v e l yv i ai n w a r d - r e c t i f y i n gk - ( k + 曲c h a n n e l s ( s c h r o e d e r e t a t ，19 8 7 ) t h a tr e s u l t sf r o mt h ea c t i v a t i o no fp l a s m am e m b r a n eh + - a t p a s e sb ye x c r e t i n g 矿，w h i c hm e d i a t e sm e m b r a n ep o t e n t i a lt ob e c o m en e g a t i v e ，c a u s i n go p e n i n go ft h ek 、 c h a n n e l sa n dd r i v i n gf o r c et op a s s i v ep e r m e a t i o no fk 十t h r o u g hl ( 十i l ic h a n n e l s ( r e v i e w e d b yo u t l a w , 2 0 0 3 ) c h a n g e si ng u a r dc e l lt u r g o ra l ed r i v e nb yf l u x e so fc t h r o u g hi o n c h a n n e l si nt h ep l a s m aa n dv a c u o l a rm e m b r a n e s ( b l a t t , 2 0 0 0 ；a s s m a n na n dw a n g ，2 0 01 ； d i e t r i c he ta t ，2 0 01 ；s c h r o e d e re ta 1 ，2 0 01 ) k 十u p t a k ei sb a l a n c e db yac o u n t e ri o n s ，c i o b t a i n e df r o mt h ea p o p l a s to rm a l a t e 呓d e r i v e df r o ms t a r c hm e t a b o l i s mi ng u a r dc e l l st h a t a r ea c t i v a t e db ya u x i n s ( l o h s ea n dh e d r i c h ，19 9 2 ) ，r e dl i g h t ( s e r r a n o ，19 8 8 ) ，a n db l u el i g h t ( s m m a z a k ie ta 1 ，19 8 6 ) r e c e n t l ya n o t h e ra n i o n , n 0 3 h a sb e e nf o u n dt oc o n t r i b u t e s t o m a t a lo p e n i n gu n d e rs o m ec o n d i t i o n s d i s r u p t i o no ft h en 0 3 。t r a n s p o r t e rg e n ea t h a l i a n a ，n i t r a t et r a n s p o r t e r l ( a t n r t t ) c h l o r a t et r a n s p o r t e rl ( c h l l ) r e d u c e sl i g h t s t i m u l a t e dn i t r a t ea c c u m u l a t i o ni ng u a r dc e l lp r o t o p l a s t sa n di m p a i r ss t o m a t a lo p e n i n g w h e nn 0 3 i st h eo n l ya n i o np r o v i d e di nt h ei n c u b a t i o nb u f f e r s u c hm u t a t i o n sr e s u l t e di n s m a l l e rs t o m a t a la p e r t u r e st h a nt h o s eo fw i l dt y p ea n da l s oc o n f e r e dr e d u c ew a t e rl o s sa n d i m p r o v e dd r o u g h tt o l e r a n c ei ni n t a c tp l a n t sw h e np l a n t sa l ec o n t i n u o u s l ys u p p l i e d 、析t 1 1 n i t r a t e ( g u oe ta 1 ，2 0 0 3 ) e x t r ac e l l u l a ra c i d i f i c a t i o ni n c r e a s e st h ea c t i v i t yo fg u a r dc e l lk + mc h a n n e l s t h e w e l l s t u d i e dg u a r dc e l lk + i nc h a n n e li sa c t i v a t e db ye x t e r n a lh + ( b l a t t ，19 9 2 ；i l a ne ta 1 ， 19 9 6 ) a n db yl o wa t p c o n c e n t r a t i o n s ( w ua n da s s m a n n ，19 9 5 ) c y t o s o l i cc a 十( c a 2 + 】c y t ) e l e v a t i o ni n h i b i t sk + i nc h a n n e l s ，t h u sl i m i t i n gk + u p t a k e ( l e m t i r i c h l i e ha n dm a c r o b b i e ， 19 9 4 ；s c h r o e d e ra n dh a g i w a r a ，19 8 9 ) i na d d i t i o n ，p r o t e i np h o s p h o r y l a t i o nh a sb e e n s u g g e s t e dt op l a ya ni m p o r t a n tr o l ei nm o d u l a t i o no fk + i nc h a n n e la c t i v i t y i n h i b i t o r so f c a l c i n e u r i n ( p p 2 b ) ，ac a l c i u m d e p e n d e n tp r o t e i np h o s p h a t a s e ，m a i n t a i n e dk + i nc h a n n e l a c t i v i t yi ns p i t eo fe l e v a t e d 【c 一 c y ti nh c i ag u a r dc e l l s ( l u a ne ta t ，19 9 3 ) c y c l o s p o r i n a ，a ni n h i b i t o ro fa n i m a lp p 2 b t y p ep h o s p h a t a s e s ，i n h i b i t ss t o m a t a lc l o s u r ea n dr e d u c e s a b ai n