（临床医学专业论文）基质细胞衍生因子1与急性心肌梗死近期预后的关系.pdf

t h es h o i m t e r mp r o g n os t i cv a l u eo f s d f 一1 烈p a t i e n t sw i t h a c u t em y o c a r d i a l 玳f a r c t i o n at h e s i ss u b m i t t e dt o s o u t h e a s tu n i v e r s 时 f o rt h ea c a d e m i cd e g r e eo fm a s t e ro f m e d i c i n e b y c a i x i n g x i n g s u p e r v i s e db y p r o fm ag e n s h a n c l i n i c a lm e d i c i n e s o u t h e a s tu n i v e r s i t y m a y 2 0 l o 东南大学学位论文独创性声明 本人声明所早交的学位论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。 尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过 的研究成果，也不包含为获得东南人学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我 一同一r ：作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。 研究生签名：蒸星全日期：研究生签名：堡垦量日期： 扫f d 坯。2 3 东南大学学位论文使用授权声明 东南人学、中国科学技术信息研究所、国家图j 体馆有权保留本人所送交学位论文的复印 作和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容汞i 纸质 论文的内容相一致。除在保密期内的保密论文外，允许论文被查阅和借阅，可以公布( 包括 以电子信息形式刊登) 论文的全部内容或中、英文摘要等部分内容。论文的公布( 包括以电 子信息形式刊登) 授权东南人学研究生院办理。 研究生签名：缒导师签名： 内容 中文摘要 英文摘要 主要中英文缩略词表 刚舀 文献综述 第一章 1 1 研究对象 1 2 实验仪器与材料 1 3 实验方法及步骤 1 4 结果 1 5 讨论 第二章 2 1 研究对象 2 2 实验方法及步骤 2 3 结果 2 4 讨论 结论 参考文献 致澍 作者简介 目录 页码 i i i i 一 v 一 1 2 3 7 1 7 1 7 一1 8 1 8 2 0 2 0 2 3 ：1 4 2 5 3 0 3 1 3 2 0 3 6 9 1 l 1 8 纠 旷 旷 卜 梗死 山 中文摘要 目的：探讨急性s t 段抬高型心肌梗死( s t e m l ) 患者基质细胞衍生因子一1 a ( s d f 1 仅) 的动态表达及其对介入治疗术后近期预后的预测价值。 方法：测定2 8 例急诊行经皮冠状动脉介入治疗( p c i ) 的s t e m i 患者、2 0 例择期行p c i 的慢性稳定性心绞痛患者以及2 0 例冠脉造影正常人群入院时、p c i 或冠脉造影术后2 4 h 、4 8 h 的s d f 1 q 、h s c r p 水平，进行对比分析，血浆s d f 一1 q 的测定采用酶联免疫吸附测定法，l l s c r p 检测采用免疫散射比浊法；对s t e m i 患者平均随访( 2 7 土1 5 ) 月，以顽固性心绞痛、再发心肌梗死、恶性心律失常、 症状性心力衰竭以及心源性猝死等主要心脏不良事件( m a c e ) 作为随访终点， 对比m a c e 组与无m a c e 组s d f 1 a 、h s c r p 水平，分析其与近期预后的关系。 结果：( 1 ) s t e m i 组入院即刻、术后2 4 小时、4 8 小时的h s c r p 水平分别为 ( 6 5 0 士9 2 5 ) m l 、( 2 4 2 4 士3 5 6 9 ) m l 、( 3 8 5 6 士5 0 3 1 ) m l ，均显著高于s a p 组以 及对照组( p o 0 5 ) ， s a p 组与对照组三个时间点s d f 1 a 、h s c i 冲均无显著差异( p o 0 5 ) ；术后2 4 小时( f 0 2 7 5 ，p o 0 5 ) 、4 8 小时( r = 一o 2 9 0 ，p o 0 5 ) ； s d f 一1aa t2 4a n d4 8h o u r sa r e rp c ia r ei n v e r s e l yc o r r e l a t e dw i t h h s c r p ( p o 0 5 ) ( 2 ) m a c et o o kp l a c ei n1oo ft h es t e m ip a t i e n t sd u r i n g i 东南人学硕l j 学位论文 f o l l o w - u p ，h s - c r pi nm a c eg r o u pa tb a s e l i n ei s8 8 8 士7 7 3 m l ，w h i c hi sh i g h e r t h 柚c o n 仃o lg r o u pb u tw i t h o u ts t a t i s t i c a ls i 鲥：f i c a n c e ( p = 0 0 51 ) ，w h i l eh s - c r pa r e s i 印i f i c a n t l yh i g h e r ( p o 0 5 ) ；m u l t i v 撕a t el o 舀s t i cr e 孕e s s i o n 锄a l y s i s s h o wt h a t p l a s m al e v e l so fh s - c r p a n ds d f lqc a l l t i n d 印e n d e n t l yp r e d i c t s h o r t t e n t lm a c e 锄o n gs t e m lp a t i e n t s c o n c l u s i 仙：s d f 一1i sp r o b a b l yac a r d i o p r o t e c t i v ef a c t o rw i t h 锄t i i n f l a m m a t o 巧 e 虢c t ，b u tw h e t h e ri tc a ni n d 印e 1 1 d e n t l yp r e d i c ts h o r t t 唧lm a c e a n e rs t e m in e e d s 如r t h e rr e s e a r c hi nm o r ep a t i e i l t s k e y w o r d s ：s 仃o m a lc e l l d 甜v e df a c t o r 1 ；h i 曲s e n s i t i v i t yc r e a 嘶v ep r o t e i n ； a c u t em v o c a r d i a li n f a r c t i o n v 主要中英文缩略诃表 a m i a c u t em y o c 莉i a l i n f a r c t i o n 急性心肌梗死 a p o aa p o l i p o p r o t e i n a载脂蛋白a b m d c c t n e d t a e l l s a e p c f g f h d l c h r p h s c h s c r p i l 一8 l d l c m a c e m a p k b o n em a 盯o w _ d 甜v e dc e l l骨髓源性细胞 c a r d i a ct r o p o n i n心肌肌钙蛋白 e t l l y l e i l ed i 锄i n e t e t r a a c e t i ca c i d e 1 1 z y m e l i n k e d i m m u n o s o r b e n ta s s a y e n d o t h e l i a lp r o g e n i t o rc e l l 乙二胺四乙酸 酶联免疫吸附测定法 内皮祖细胞 f i b r o b l a s tg r o w t hf a c t o r 成纤维细胞生长因子 h i 曲d e n s i t y l i p o p r o t e i n c h o l e s t e r o l h o r s e r a d i s hp e i - o x i d a s e 高密度脂蛋白胆固醇 辣根过氧化物酶 h e i n a t o p o i e t i cs t 锄c e n造血干细胞 h i 曲s e i l s i t i v i t yc r e a c t i v e超敏c 反应蛋白 p r o t e i n i n t e r l e u k i n 8白介素8 l o wd e n s i t y l i p o p r o t e i n - c h o l e s t e r o l m a j o ra d v e r s ec a r d i a c e v e n t s 低密度脂蛋白胆固醇 主要心血管事件 m i t o g e n a c t i v a t e d 丝裂原活化蛋白激酶 p r o t e i n k i n a s e v 东南人学硕。 ：学位论文 前言 】厶l 一 刖f 舌 随着社会经济的发展，人民生活水平的日益提高，动脉粥样硬化的发病率逐 年增长，其中急性心肌梗死作为冠状动脉粥样硬化性心脏病的危重类型造成了严 重的社会负担。 动脉粥样硬化表现为动脉内膜脂质沉积、粥样斑块形成导致管壁增厚变硬、 失去弹性和管腔缩小，其特点是受累动脉的病变从内膜丌始，先后有多种病变合 并存在，包括局部有脂质和复合糖类积聚、纤维组织增生和钙质沉着形成斑块， 并有动脉中层的逐渐退变，继发性病变尚有斑块内出血、斑块破裂及局部血栓形 成。 本病病因尚未完全确定，迄今研究提示其是多种因素作用于不同环节所致， 主要危险因素包括高脂血症、高血压、吸烟、糖尿病和糖耐量异常、肥胖、年龄、 西方的饮食方式、遗传等，近年来由于人民卫生事业的发展，许多传染病得到控 制，人民平均期望寿命延长，生活水平提高，滋长的不健康的生活方式使本病相 对和绝对发生率增高，现已跃居于导致人口死亡的主要原因之列。 对本病发病机制，曾有多种学说从不同角度来阐述，包括脂质浸润学说、血 栓形成学说、平滑肌细胞克隆学说等，近年来多数学者支持“内皮损伤反应学说”， 认为本病各种主要危险因素最终都损伤动脉内膜，而粥样硬化病变的形成是动脉 对内膜损伤作出的炎症一纤维增生性反应的结果。 动脉内膜受损可为功能紊乱或解剖损伤。在长期高脂血症的情况下，增高的 脂蛋白中主要是氧化修饰的低密度脂蛋白( o x l d l ) 和胆固醇对动脉内膜造成功 能性损伤，使内皮细胞和白细胞( 单核细胞和淋巴细胞) 表面特性发生变化，粘附 因子表达增加。单核细胞粘附在内皮细胞上的数量增多，并从内皮细胞之间移入 内膜下成为巨噬细胞，通过清道夫受体吞噬0 x l d l ，转变为泡沫细胞形成最早 的粥样硬化病变脂质条纹。巨噬细胞能氧化l d l 、形成过氧化物和超氧化离子， 还能合成和分泌多种细胞因子，在这些细胞因子的作用下，平滑肌细胞和成纤维 细胞增生并游移到内膜，促使脂肪条纹演变为纤维脂肪病变，再发展为纤维斑块。 由纤维斑块发生出血、坏死、溃疡、钙化和附壁血栓形成复合病变，是急性血栓 事件的发病基础。 从临床的角度来看，动脉粥样硬化的斑块基本上可分为两类：一类是稳定型 即纤维帽较厚而脂质池较小的斑块；而另一类是不稳定型( 又称为易损型) 斑块， 其纤维帽较薄，脂质池较大易于破裂。而就是这种斑块的破裂导致了心血管急性 事件的发生。导致动脉粥样硬化斑块不稳定的因素包括血流动力学变化、应激、 炎症反应等。其中炎症反应在动脉粥样硬化斑块不稳定和斑块破裂中起着重要作 用。 斑块形成以白细胞迁徙和炎症介质的释放为特征，固有免疫以及适应性免疫 东南人学硕：l ：学位论文 参与其中，提示致炎一抗炎因子失衡与斑块进展之间存在因果关系。趋化因子是 一组小分子质量( 8 1 1 k d a ) 蛋白的集合，是细胞因子家族中唯作用于g 蛋 白偶联受体超家族的成员，它们直接参与白细胞特别是巨噬细胞和淋巴细胞的游 走和活化，参与炎症反应并在其中起核心作用。大量研究已证实趋化因子如单核 细胞趋化蛋白1 ( m c p 1 ) 、r a n t e s 、厅a c t a l k i n e 在斑块形成和进展过程中起促进 作用，基质细胞衍生因子一1 ( s d f 1 ) 作为趋化因子c x c 家族中的成员，被发现具 有抗炎以及稳定斑块作用而成为关注热点。 早期研究发现s d f 一1 在人的粥样斑块中高表达，并可诱导血小板的聚集， 提示s d f l 可能诱导粥样斑块的形成、破裂以及急性血栓形成，而后期的更多 研究则得到了相反的结论，他们发现s d f 1 可逆转抗原诱导的t - 淋巴细胞向炎 症部位聚集，高浓度s d f 1 可明显抑制致炎因子如白介素8 ( i l 8 ) 、m c p 1 合 成，另外其同时可降低基质金属蛋白酶一9 ( m m p 9 ) 以及组织因子( t f ) 水平并增强 金属蛋白酶组织抑制剂( t l m p ) 1 的释放，而m m p 9 与t f 被认为与斑块破裂以 及血栓事件有关，从而提示s d f 1 在高浓度时有潜在的抗炎和斑块稳定作用， 可降低急性冠脉事件的发生率。 在心肌梗死的研究中，多国学者发现s d f 1 在心肌梗死后心肌中高表达， 诱导骨髓源性干细胞( b m d c s ) 向坏死心肌迁移，可使局部新生血管形成以及 心肌再生，缩小梗死范围，同时可抑制细胞凋亡，抵抗缺血再灌注损伤，改善心 功能，然而也有发现s d f 1 并不能减少梗死心肌范围，同时具有负性肌力作用， 介导心肌梗死后心肌肥厚，不利于心功能的恢复。 综上可见s d f 一1 在冠心病中的作用尚有争议，本研究测定急性s t 段抬高型 心肌梗死患者血浆s d f 1 q 水平，评价其作为心肌梗死近期预后预测指标的价值， 同时观察其与炎症反应指标超敏c 反应蛋白( h s c r p ) 的关系，可以从侧面佐 证s d f 1 是否具有心血管保护作用，以期为临床应用外源性s d f 1 治疗心肌梗 死的可行性提供依据。 2 文献综述 文献综述 基质细胞衍生因子1 在急性心肌梗死中的研究进展 急性心肌梗死( a m i ) 是冠心病的严重类型，为在冠状动脉粥样硬化的基础 上，发生冠状动脉血供急剧减少或中断，使相应的心肌严重而持久地急性缺血导 致心肌坏死，其病理基础是不稳定粥样斑块破溃，继而出血和管腔内血栓形成， 而使管腔闭塞。普遍认为粥样斑块的形成、进展和破溃是一个炎症反应过程，固 有免疫与适应性免疫参与其中，趋化因子如单核细胞趋化蛋白一1 ( m c p 1 ) 、 r a n t e s 、触c t a l k i n e 在单核细胞趋化以及斑块进展过程中起着促进作用【。基 质细胞衍生因子一1 ( s d f 1 ) 是最近发现的具有抗炎以及稳定斑块作用的趋化因 子，而在心肌梗死后是否有心脏保护作用尚有争议。 一、s d f 1 ，c x c r 4 的结构和生物学功能 1 、s d f 1 c x c r 4 的结构 趋化因子是一组小分子质量( 8 1 1 k d a ) 蛋白的集合，是细胞因子家族中 唯一作用于g 蛋白偶联受体超家族的成员，根据其n 端前两个半胱氨酸在氨基 酸序列中的位置，分为c 型、c c 型、c x c 型、c x 3 c 型四种类型，它们直接参 与白细胞特别是吞噬细胞和淋巴细胞的游走和活化，参与炎症反应并在其中起核 心作用，另外还具有其它多效性功能，如对肿瘤生长的调节，参与免疫系统、循 环系统和神经系统的发育等。 s d f 1 是c x c 家族中的成员，与大多数c x c 家族成员的编码基因位于染色体 4 q 1 2 2 l 不同，人类s d f 一1 基因是一种位于染色体l o q l l 1 位点、编码8 9 和9 3 个氨 基酸多肽的封闭型基因。s d f 1 组成性地表达于骨髓、心、脑、肝、肾等组织中， 它有三个亚型：s d f 1 q 、s d f l p 、s d f 1 丫，k o d a n d a r 锄等【2 j 在大鼠的研究中发 现s d f 1 伐m r n a 在肝、脾、肾、心、脑、肺中高表达，而在骨骼肌和睾丸中低 表达，s d f 一1 pm r n a 在肝肾中表达丰富，s d f 一1 丫m r n a 在心脏中显著高表达， 然而在大鼠的心肌梗死模型中却发现s d f 1 qm r n a 被选择性地诱导表达， s d f l ym r n a 水平没有变化，由于人和鼠的s d f 1 a 具有高度同源性，提示 s d f 一1 qm r n a 的表达可能对心血管疾病中的炎症反应有一定的指导意义。 s d f 1 是一种g 蛋白偶联受体的配体，因为s d f 1 为c x c 家族成员，该受体 按c x c 受体编号命名为c x c r 4 ，c x c r 4 含3 5 2 个氨基酸残基，编码基因位于人染 色体2 q 2 1 ，主要表达于单核细胞、中性粒细胞、淋巴细胞和激活的t 细胞，与其 他可结合多种趋化因子的受体不同，c x c r 4 专一性地与s d f 1 结合，表现出多种 重要而独特的生物学功能。 2 、s d f l c x c r 4 的生物学功能 3 东南人学硕j j 学位论文 2 1 胚胎发育 在成人，趋化因子s d f 1 及其受体c x c r 4 广泛地表达予多种细胞和组织中， 在免疫系统、循环系统及中枢神经系统的发育中起至关重要的作用。c x c r 4 或 s d f 1 基因变异突变的胚胎鼠存在胃肠道血管畸形、小脑神经元的异常迁移、室 问隔膜性缺损、b 细胞缺乏及骨髓造血系统的衰竭，并最终导致死亡【3 】，说明 s d f 1 c x c r 4 在胚胎发育过程中是必须的。 2 2 造血系统 s d f 一1 c x c r 4 可对包括单核细胞、c d 3 4 + 造血干细胞、前体b 淋巴细胞等在 内的多种骨髓原始细胞产生趋化诱导作用。s d f 一1 可以引发中性粒细胞和破骨细 胞增殖、活化并释放蛋白水解酶，后者裂解膜结合干细胞因子，使静止期造血干 细胞在动员前增殖【4 】，s d f 1 也能促进c d 3 4 + 细胞分泌基质金属蛋白酶2 ( m m p 2 ) 和基质金属蛋白酶9 ( m m p 9 ) ，这些蛋白水解酶通过裂解s d f 1 使之失去趋化活 性。另外，骨髓造血干祖细胞上c x c r 4 的n 末端也被切割，这使造血干祖细胞 不能对s d f 一1 发生趋化反应。双重作用使造血干祖细胞挣脱基质细胞束缚而进入 循环。 2 3 介导免疫和炎症反应 s d f 1 是一种高效的淋巴细胞、单核细胞及树突状细胞的趋化因子，能诱导 t 淋巴细胞和紧密粘附活化的内皮细胞，具有介导通过内皮细胞的作用【5 】。利用 双室模型研究发现s d f 1 的趋化活性较其他趋化因子，如巨噬细胞炎性蛋白 1 ( m l p 1 ) 、单核细胞趋化蛋白1 ( m c p 1 ) 等高1 0 倍。n a n l ( i 等【6 】研究表明相当的 s d f 1 是c d 4 + t 淋巴细胞活化的协同刺激因子，在类风湿关节炎的病变滑膜中有 c d 4 + t 淋巴细胞的聚集现象，提示s d f 1 在免疫及局部炎症过程中是一个重要的 调节因子。 2 4 恶性肿瘤的血管形成及转移 研究发现s d f 1 及其配体c x c r 4 能促进肿瘤组织内血管的形成和肿瘤细胞 的迁徙，从而导致肿瘤的快速生长【7 1 。例如，c x c r 4 在人类乳腺癌细胞及远处转 移灶均高度表达，而s d f 1 在某器官的高浓度表达代表乳腺癌细胞是首先转移的 目的地【8 1 。研究表明s d f 1 c x c r 4 相互作用是骨髓细胞分化所必须的，实验证实 s d f 1 c x c r 4 轴可以预测治疗效果以及提示白血病等的不良预后【9 】。以上均提示 s d f 1 c x c r 4 轴在预测恶性肿瘤进展程度及预后方面可能有重要作用，同时也 能为肿瘤患者的治疗提供参考信息。 2 5 人类免疫缺陷病毒( h i v ) 感染 c x c r 4 为h i v l 感染c d 4 + t 淋巴细胞的辅助受体，现已明确h i v 1 膜蛋白必 须与第一受体c d 4 及辅受体c x c r 4 或c c r s 结合，才能导致与靶细胞的融合及进 入过程。因此h i v 辅受体c x c r 4 ( 或c c r s ) 的拮抗剂将会作为一种新型的重要的 4 文献综述 抗病毒药物以对抗义滋病【m 】。 二、s d f l 与急性心肌梗死 动脉粥样硬化是一种进行性的炎症性疾病，炎症细胞、激活的平滑肌细胞、 脂质以及细胞外基质在动脉壁的沉积最终导致粥样斑块的形成，而趋化因子在这 个过程中发挥着重要的调节作用。 l 、s d f 1 与粥样斑块 粥样斑块中存在着多种趋化因子，目前研究较多的如c c 家族的m c p 1 ( c c l 2 ) ，r a n t e s ( c c l 5 ) ，c x 3 c 家族的触c t a l k i n e ( c x 3 c l l ) 以及c x c 家族的 s d f 1 。a b i y o u n e s 等【发现s d f 1 在人的粥样斑块中高表达，并可诱导血小板 的聚集，由于单核细胞、淋巴细胞和血小板参与粥样斑块的形成、破裂以及急性 血栓形成，从而推测s d f 1 在此过程中起着一定的作用，提出阻断s d f l c x c r 4 轴可能对动脉粥样硬化的治疗有益。 p o z i l a n s k y 等1 1 2 j 研究发现，s d f 10 【可逆转抗原诱导的t 一淋巴细胞向炎症部位 聚集，并且发现s d f 1c 【在高浓度时，t 一淋巴细胞远离s d f 一1c c ，而在低水平时其 作用明显不同，提示高浓度s d f 1 。【具有抗炎作用。d a m a s 等【1 3 】研究显示，与对照 组比较，心绞痛尤其是不稳定型心绞痛患者血浆s d f 10 【水平显著降低，外周血单 核细胞表面表达的c x c r 4 降低但其转录水平增加，当s d f 10 【在低水平时可作为 植物血凝素( p h a ) 的协同刺激物，增强白介素8 ( i l 8 ) 和m c p 1 的作用( i l 一8 和m c p 1 被认为是介导白细胞至动脉粥样硬化斑块中的一个重要因子，可能在斑 块的不稳定性方面起致病作用) ，而在s d f 10 【高浓度时有明显的抑制作用，另 外，s d f 10 【可抑制基质会属蛋白酶一9 ( m m p 9 ) 释放以及组织因子( t f ) 水平升高并 增强会属蛋白酶组织抑制剂( t i m p ) 1 的释放，而m m p 9 与t f 被认为与斑块破裂 以及血栓事件有关。研究结果表明，s d f 1 q 在高浓度时有潜在的抗炎和斑块稳 定作用，可降低急性冠脉事件的发生率。 粥样斑块内的新生微血管只有很薄弱的管壁结构，一旦发生斑块内出血，可 迅速引起斑块体积增大，最终导致斑块破裂以及血栓形成，发生急性冠脉事件， 有研究显示【1 4 】s d f 1 仅可能通过激活c a 2 + 依赖性k + 通道诱导n o 合成，促进血管内 皮细胞的迁移和增殖，在斑块形成和稳定中发挥作用。 2 、s d f 1 与骨髓源性细胞( b m d c s ) 内皮功能障碍足冠状动脉粥样硬化的始动因素，内皮祖细胞( e p c s ) 在维 持内皮健康、再内皮化以及新生血管形成过程中发挥着重要作用。e p c s 主要定 居于骨髓，在内源性刺激( 如组织缺血) 以及外源因素( 如供给细胞因子) 的诱导 下，e p c s 可迁徙到外周。循环中e p c s 的前体c d 3 4 + 单核细胞在急性心肌梗死后 升高，与血浆中血管内皮生长因子( v e g f ) 的升高呈j 下相判1 5 】。除了v e g f ， 其它的血管生长因子如血管生成素1 ( a n g i o p o i e t i n 1 ) 、成纤维细胞生长因子2 s 东南人学硕上学位论文 ( f g f 2 ) 、s d f 一1 等都参与到e p c s 的招募及迁移过程中。 e p c s 表面表达功能性c x c r 4 ，可以顺s d f 一1 浓度梯度迁移，y 啪a g u c h i 等【1 6 】 在裸鼠的缺血后肢注射s d f 1 后给予外源性的人e p c s ，发现s d f 1 治疗组缺血区 域e p c s 明显积聚，在治疗后2 8 天局部毛细血管密度以及血流灌注有改善。s t e l l o s 等【l7 】研究发现，与稳定型心绞痛患者相比，急性冠脉综合征患者血小板表面 s d f 一1 表达增加，并与循环中e p c s 数目显著正相关，从而推测血小板表面s d f 1 可能参与心肌梗死患者的血管和心肌重塑。t a n g 等【l 引在心肌梗死的大鼠模型心 肌中注射转染了s d f l0 【基因的质粒后发现治疗组心肌中s d f 10 c 显著高表达，心 肌中高浓度梯度的s d f 1 仅诱导b m d c s 在局部聚集，修复坏死心肌，提示s d f 一1 仅 的基因治疗为修复缺血心肌提供了一条富有前景的策略。s d f 1 对于心肌梗死后 b m d c s 的定向迁移是必需的，然而不是唯一的诱导因子i l 川，可能需联合v e g f 、 m m p 9 等才能达到目的。 3 、s d f 1 与心肌梗死后心脏保护 心肌梗死后坏死心肌被疤痕组织代替最终导致心功能减低，由于干细胞具有 多向分化和增殖能力，干细胞移植促进心肌再生是目前关注的热点。理论上心肌 梗死后s d f 1 高表达，诱导b m d c s 向坏死心肌迁移，可使局部新生血管形成以及 心肌再生，改善心功能，然而目前研究却显示s d f 1 是否具有心脏保护作用尚待 进一步明确。 m a 等1 2 0 j 在心肌梗死大鼠的研究中发现，缺血心肌s d f 1 在心肌梗死后表达 增加并在第一天达到高峰，其后表达下调，只有在心肌梗死后4 天内接受静脉骨 髓间质干细胞( m s c s ) 移植的大鼠可以观察到心功能的改善，从而得出结论： 心肌s d f 1 在心肌梗死后早期表达增加，也只有早期移植的m s c s 可以归巢至缺 血区域，增加血管密度并改善左室功能。庄瑜等1 2 l j 在大鼠的心肌梗死模型中也 有类似发现：s d f 1 在心肌梗死后第1 天即升高并达到峰值，以后逐渐下降，第1 4 天 恢复至f 常水平，s d f 1 处理组大鼠心肌梗死区干细胞归巢量、心功能水平及血 管密度大于抗s d f 1 抗体处理组及对照组( p 1 5 n m l 的患者表现出更差的左心功能以 及更高的k i l l i p 分级，并增加了3 0 天死亡率。 综上所述，可见s d f 1 c x c r 4 在动脉粥样硬化的作用越来越受到关注， s d f 1 在粥样斑块中高表达，并具有抗炎和稳定斑块的作用，在梗死心肌中早期 表达增加，并可趋化b m d c s 向缺血部位迁移，然而s d f 1 是否具有心肌保护作 用以及其作用机制、心肌s d f 一1 与血浆s d f 1 的关系仍不清楚，但仍为心肌梗 死的治疗提供了新的研究思路。 7 东南大学硕j ：学位论文 弟一早 基质细胞衍生因子一1 、超敏c 反应蛋白 在急性心肌梗死患者中的表达 大量研究己证明反映炎症反应的指标超敏c 反应蛋白可以用于判断急性心 肌梗死患者的病情严重性及预后，本研究定量测定入院后行急诊经皮冠状动脉介 入治疗( p c i ) 的急性s t 段抬高型心肌梗死血清中s d f 10 【、h s c r p 水平，观察 其动态变化，研究s d f 1 伐、h s - c r p 两者之间的关系。 1 1 研究对象 2 8 例行急诊p c i 的急性s t 段抬高型心肌梗死( s t e m l ) 患者选自2 0 0 9 年10 月 至2 0 1 0 年3 月在东南大学附属中大医院c c u 病区住院病人，心肌梗死诊断依据全 球心肌梗死工作组于2 0 0 7 年颁布的全球心肌梗死的统一定义：心脏生化标志物 ( 心肌肌钙蛋白最佳) 水平升高超过参考值上限9 9 百分位值，同时至少伴有下述心 肌缺血证据之一：缺血症状；心电图提示新发缺血性改变新发s t t 改变或 新发左束支传导阻滞】；心电图提示病理性q 波形成；影像学证据提示新发局 部室壁运动异常或存活心肌丢失。本研究入选标准：心肌梗死诊断符合全球心 肌梗死定义，既往无p c i 史；至少两个相邻的胸导联s t 段上抬0 2 m v 或肢导联 s t 段上抬三o 1 m v ；距胸痛发作s 1 2 小时；急诊冠脉造影证实急性冠脉事件并 行支架介入治疗。排除标准：入院前一月及入院后4 8 小时内的感染、肿瘤、免疫 性疾病、外伤、外科手术创伤、肝肾疾患。 2 0 例慢性稳定性心绞痛( s a p ) 患者选自2 0 0 9 年1 0 月至2 0 1 0 年3 月在东南大 学附属中大医院心血管内科住院病人，入选标准：慢性稳定性心绞痛诊断符合 2 0 0 7 年中华医学会心血管病学分会制定的标准，既往无p c i 史；冠脉造影证实 至少一支主要血管狭窄7 0 并行支架介入治疗，排除标准同s t e m i 组。 2 0 例健康对照组为同期入住东南大学附属中大医院心血管内科行冠脉造影 检查排除冠心病的人群，排除标准同上。 1 2 实验仪器与材料 1 2 1s d f 10 【实验试剂 试剂盒( s d f 10 【e l i s ak i t ) 由南京麦威克生物科技有限公司提供 1 2 1 1 包被s d f 1 a 抗体的9 6 孔酶联板 1 2 1 2s d f 一1 a 标准品：2 0 0 n m l ，一管 1 2 1 3 检测溶液a ：生物素化的抗人s d f 1 a 抗体 8 第一章 1 2 1 4 检测溶液b ：辣根过氧化酶( h r p ) 标记的亲和素 1 2 1 5 底物：四甲基联苯胺( t m b ) 显色液 1 2 1 6 样品稀释液：用于稀释标准品和样本的稀释液 1 2 1 7 检测稀释液a ：用于稀释生物素化的抗人s d f 10 c 抗体的稀释液 1 2 1 8 检测稀释液b ：用于稀释h r p 标记的亲和素的稀释液 1 2 1 9 浓洗涤液 1 2 1 1 0 终止液：2 m 硫酸 1 2 2 主要实验材料及仪器 1 2 2 14 m l 乙二胺四乙酸( e d t a ) 抗凝管 1 2 2 2 微量移液器：1 0 u l 、1 0 0 i l l 、l 0 0 0 u l ，g i i s o n 产品。 1 2 2 3 台式高速普通离心机：t g l 1 6 c ，上海手术器械厂。 1 2 2 4 酶联免疫检测仪：l m 2 1 0 0 型，r a y t o ，u s a 产品。 1 2 2 5 8 0 冰箱：r 本三洋公司。 1 3 实验方法及步骤 1 3 1 临床资料收集 入选病例后入院后均全面询问病史、体格检查，完善入院即刻血常规、心肌 肌钙蛋白l ( c t n i ) 、心电图以及入院2 4 小时内肝。肾功能、血脂等检查，获取年龄、 体重指数、吸烟史、血压、血脂、空腹血糖、白细胞计数、肌酐等基础资料。 1 3 2 冠脉造影或p c i 常规穿刺桡动脉，如穿刺失败，可选择肱动脉或股动脉，以j u d k i n s 法行左右 冠状动脉造影，对于冠心病患者由经验丰富的主任医师判断冠脉病变情况并行支 架介入治疗，所有病例冠脉造影前服用负荷剂量的阿司匹林、氯吡格雷，p c i 术 后若无禁忌常规给予口服阿司匹林、氯吡格雷、血管紧张素转化酶抑制剂或血管 紧张素i i 受体阻断剂、b 受体阻滞剂、他汀类调脂药以及皮下注射低分子肝素等， s t e m i 组中伴有缓慢性心律失常者，于股静脉置入临时起搏电极，若有药物难以 纠正的血流动力学不稳定者，于股动脉置入主动脉内球囊反搏装置。 1 3 3 标本采集 所有研究对象均于入院即刻、冠脉造影或p c i 术后2 4 小时、4 8 小时采血2 m 1 送至东南大学附属中大医院检验科，采用免疫散射比浊法测定h s c r p ，另采血 3 4 m l 置于e d t a 抗凝管内，于8 1 0 0 0 转离心1 5 分钟后放入8 0 冰箱低温保存待 测。 1 3 4s d f 1 q 测定 采用亲和素生物素系统酶联免疫吸附法( a b s e l i s a ) ，试剂盒( s d f l 0 【 e l i s a k i t ) 由南京麦威克生物科技有限公司提供，s d f 1 q 的浓度单位为n m l ， 按 兑明书操作： 9 东南大学硕士学位论文 1 3 4 1 将3 0 m l 酶联板浓洗涤液用蒸馏水稀释成7 5 0 1 1 1 l 清洗缓冲液，充分混匀备 用。 1 3 4 2 设标准孔8 孔，每孔中各加入样品稀释液1 0 0 u l ，第一孔加标准品1 0 c h j l ， 混匀后用加样器吸出1 0 叫，移至第二孔，如此反复作倍比稀释至第七孔，最后， 从第七孔中吸出1 0 0 u l 弃去，使之体积均为1 0 0 u l ，第八孔为空白对照，使其浓度 依次为1 0 0 、5 0 、2 5 、1 2 5 、6 2 5 、3 1 2 、1 5 6 、0n 咖l 。 1 3 4 3 待测样品孔加入待测样品1 0 0 l l l ，轻轻晃动混匀，酶标板加上覆膜，3 7 反应1 2 0 分钟。 1 3 4 4 在反应9 0 分钟后将生物素化的抗人s d f l 伐抗体( 检测溶液a ) 以检测稀释 液a 按1 ：l o o 稀释成检测溶液a 工作液，轻轻混匀。 1 3 4 5 反应结束后弃去液体，甩干，每孔加检测溶液a 工作液10 0 u l ，3 7 ，6 0 分 钟。 1 3 4 6 温育3 0 分钟后，将辣根过氧化酶( h r p ) 标记的亲和素( 检测溶液b ) 以检 测稀释液b 按l ：1 0 0 稀释成检测溶液b 工作液，轻轻混匀。 1 3 4 7 温育6 0 分钟后，弃去孔内液体，甩干，应用稀释后的洗涤液沈板3 次，每 次浸泡1 2 分钟，3 5 0 u l 每孔，甩干。 1 3 4 8 每孔加检测溶液b 工作液1 0 0 l l l ，3 7 ，6 0 分钟。 1 3 4 9 温育6 0 分钟后，弃去孔内液体，甩干，洗板5 次，每次浸泡1 2 分钟，3 5 0 u l 每孔，甩干。 1 3 4 1 0 依序每孔加底物溶液9 0 u l