甾体激素类药物的分析药物分析.ppt

药物分析第六章,典型药物的分析第四节甾体激素类药物的分析,甾体激素：具有“环戊烷并多氢菲母核”为结构特征的一类物质。一种内分泌激素，由肾上腺或生殖器官产生，在生长发育、生殖、体内物质平衡上起重要作用。,甾体药物：提取或合成的，结构、功能与甾体激素类似的化学物质。,甾体类药物分析概述,性激素,雄激素雌激素雌甾烷类孕激素,肾上腺皮质激素,糖皮质激素盐皮质激素,雄激素蛋白同化激素,按作用,孕甾烷类,雄甾烷类,按结构,甾类药物分类：,甾体类药物分析概述,甾体激素药物具有很强的抗感染、抗过敏、抗病毒和抗休克的四大药理作用,及其在生殖系统疾病中的重要性，因此在国内外临床上广泛应用(目前甾体激素药物生产品种近300种）。,甾体类药物分析概述,甾体药物的来源,天然：不稳定，少数半合成：大部分甾类药物全合成：已烯雌酚,甾体类药物分析概述,源于植物甾体物质,通光藤中通光素；多种植物中的强心苷、多种植物中的甾体皂苷、海葱中的海葱苷等一般以苷的形式存在。,可以作为合成激素的原料。,甾体类药物分析概述,甾体激素类药物分析，无特殊方法。鉴定：常用化学法、IR法；含量：以HPLC法为最（3/4以上）、其它有UV法、比色法等仪器分析法，极少应用化学法。,甾体激素类药物分析,甾体类药物分析概述,甾体类药物检验分析示例：醋酸泼尼松的鉴别：取本品约1mg,加乙醇2ml使溶解，加10%氢氧化钠2滴与氯化三苯四氮唑试液1ml，即显红色。炔雌醇鉴别：取本品10mg,加乙醇1ml溶解后，加硝酸银试液56滴，即生成白色沉淀。醋酸氢化可的松鉴别：取本品约2mg，加硫酸2ml使溶解，即显黄色至棕黄色，并带绿色荧光。,甾体类药物分析概述,中国药典醋酸可的松原料测定方法：1、色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈-水（3664）为流动相；检测波长为254nm。醋酸可的松峰和醋酸氢化可的松峰的分离度应大于4.0。2、测定法取本品适量，精密称定，加乙腈溶解并定量稀释制成每lml中约含0.5mg的溶液；精密量取该溶液10l注入液相色谱仪，记录色谱图；另取醋酸可的松对照品适量，精密称定，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。,甾体类药物分析概述,中国药典醋酸可的松片的含量测定：取本品20片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于醋酸可的松20mg），置100ml量瓶中，加无水乙醇75ml，时时振摇约1小时，使醋酸可的松溶解，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，用干燥滤纸滤过，精密量取续滤液5ml，置另一100ml量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，照紫外-可见分光光度法，在238nm的波长处测定吸收度，按醋酸可的松的吸收系数(E1%1cm)为390计算,即得。,甾体类药物分析概述,醋酸地塞米松软膏的含量测定：（1）对照品溶液的制备（乙醇溶解）（2）供试品溶液的制备（无水乙醇提取）（3）测定法精密量取对照品溶液及供试品溶液各10ml，分别置具塞容器中，置水浴中蒸去乙醇，残渣中加氯仿10ml，振摇，使残渣溶解，各精密加0.1异烟肼甲醇溶液（取异烟肼0.5g，加盐酸0.63ml，加甲醇使溶解成500ml，即得）10rnl，摇匀,置55暗处保温45分钟，取出、放冷至室温，用氯仿稀释至25ml，摇匀，在415nm波长处分别测定吸收度，计算，即得。,甾体类药物分析概述,倍他米松磷酸钠含量测定,（1）对照液配制（2）供试液配制（3）精密量取对照品溶液及供试品溶液各1ml，分别置25ml量瓶中，各精密加异烟肼溶液（异烟肼75mg，盐酸0.1ml，加甲醇使溶解成100ml）20ml，摇匀,置60水浴中保温1小时，冷却，加甲醇稀释至刻度，摇匀，照紫外-可见分光光度法，在420nm的波长处分别测定吸光度，计算，即得。,甾体类药物分析概述,甾体激素类药物分析，无特殊方法。鉴定：常用化学法、IR法；含量：以HPLC法为最（3/4以上）、其它有UV法、比色法等仪器分析法，极少应用化学法。,甾体激素类药物分析,甾体类药物分析概述,一、药物结构与性质,（一）结构特征,环戊烷并多氢菲母核，A、B、C、D四环，及角甲基、其它取代基构成。,取代基的种类、位置和数目；双键的位置和数目；及C10上有无角甲基等决定不同的甾体药物。,A,B,C,D,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,15,16,17,18,19,20,21,甾体类药物分析结构与特征,1.肾上腺皮质激素,来源：肾上腺皮质,作用：抗炎、抗病毒、抗风湿、抗过敏、抗休克等,药物：松，一般与乙酸成酯，称醋酸松,结构特征：,2）C环11位上有羰基或羟基,3）D环17位有羟基和醇酮基,4）C10及C13双角甲基,1）43一酮基,甾体类药物分析结构与特征,2.雌激素,药物：雌（雌醇、雌二醇、雌三醇）,结构特点：P？,1）A环为苯环，3位有酚羟基（或成酯）,2）C10无甲基，C13单角甲基,3）D环17位上有羟基或羰基（部分形成酯），部分还有-乙炔基（如炔雌醇）。,甾体类药物分析结构与特征雌激素类,3.雄性激素（睾丸素）及蛋白同化激素,蛋白同化：同化蛋白作用，促进蛋白质合成减小蛋白质分解。,蛋白质,药物,雄激素：睾丸素（丙酸、苯乙酸、甲基）,蛋白同化激素:龙（康力龙、苯丙酸诺龙）,结构特征：,2）C10及C13双角甲基,3）C17羟基,注：同化激素结构例外,1）A环4，5位间为双键，并与3位酮基共轭，称为“，-不饱和酮”，标记为“43一酮”,甾体类药物分析结构与特征,4.孕激素（黄体激素）,药物：黄体（孕）酮（黄体酮、甲羟孕酮、甲地孕酮等）,结构特征：,1）43一酮基,2）C10及C13双角甲基,3）C17甲酮基,4）C17可能有乙炔基,甾体类药物分析结构与特征,（二）主要性质,1.性状：,2.与强酸的呈色反应,甾体类药物分析特征基团与性质,知道甾类药物可与大部分强酸显色，尤以硫酸最为常用，但专属性不强。,表6-9部分甾体激素药物与硫酸的呈色反应,3.羰基反应：羰基（）可与肼成腙；与羟胺成肟；与氨基脲成缩氨脲。,除雌激素外，都有羰基结构。,甾体类药物分析特征基团与性质,4.醇酮基的还原性（）：与斐林试剂、氨制硝酸银、四氮唑盐等氧化剂反应。皮质激素,甾体类药物分析特征基团与性质,5.亚硝基铁氰化钠反应（）：甲酮基在碱性条件下与亚硝基铁氰化钠作用反应，生成蓝色复合物。孕激素,甾体类药物分析特征基团与性质,黄体酮鉴别：取本品约5mg,置小试管中，加甲醇0.2ml溶解后，加亚硝基铁氰化钠的细粉约3mg、碳酸钠及醋酸铵各约50mg,摇匀，放置1030分钟，应显蓝紫色。,7.雌激素A环酚羟基反应,6.乙炔基（）反应：与硝酸银醇溶液反应，生成炔化银白色沉淀。炔,甾体类药物分析特征基团与性质,CCH+Ag+CCAg(白色）,雌激素A环为苯酚结构，可与重氮苯磺酸盐作用生成红色偶氮染料；与FeCl3作用显色。,8.其它：紫外吸收；羟基成酯反应、异羟肟酸铁反应、酯交换反应、酯水解反应、氯化物或氟化物的一般鉴别等。,甾体类药物分析特征基团与性质,有机氟,F,有机破坏,有机氯,Cl,有机卤素,茜素氟蓝硝酸亚铈,硝酸银,AgCl,呈蓝紫色,（氧瓶燃烧）,地塞米松,甾体类药物分析鉴别试验,二、氢化可的松的分析,（一）性状白色或类白色的结晶性粉末；无臭；遇光渐变质。在乙醇或丙酮中略溶，在三氯甲烷中微溶，在乙醚中几乎不溶，在水中不溶。,吸收系数为422448。,甾体类药物分析鉴别试验,比旋度为+162至+169,（二）鉴别,1.与羰基试剂的反应P?,2.与硫酸呈色反应P？,3.高效液相色谱法P?,4.红外光谱法P?,甾体类药物分析鉴别试验,取本品约0.1mg，加乙醇lml溶解后，加临用新制的硫酸苯肼试液8ml，在70加热15分钟，即显黄色。,红外光谱法具有特征性强，专属性好的特点，绝大多数甾体激素类药物的原料药均采用此法进行鉴别。,（三）检查,1.有关物质,中国药典二部采用高效液相色谱法中的外标法检查氢化可的松原料药及注射剂中的泼尼松龙;采用主成份自身对照法检查氢化可的松中的其他有关物质。,2.溶出度,取本品，以水900ml为溶出介质，转速为每分钟50转，依法操作，经30分钟时，取溶液滤过，精密量取续滤液5ml置10ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀。在248nm的波长处测定吸光度，按吸收系数为449.3计算每片的溶出量。限度为标示量的70%，应符合规定。,甾体类药物分析鉴别试验,取本品约0.1mg，加乙醇lml溶解后，加临用新制的硫酸苯肼试液8ml，在70加热15分钟，即显黄色。,红外光谱法具有特征性强，专属性好的特点，绝大多数甾体激素类药物的原料药均采用此法进行鉴别。,（二）含量测定,1高效液相色谱法,（1）外标法：氢化可的松原料药及其注射液的含量测定。,（2）内标法中国药典（2000年版）二部。,用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-水（70:30）为流动相；内标溶液的制备取炔诺酮，加甲醇制成每1ml中含0.40mg的溶液，即得。,甾体类药物分析含量测定,2.紫外-可见分光光度法,（1）百分吸收系数法：,中国药典（2015年版）二部采用百分吸收系数法测定氢化可的松片的含量，根据其在242nm波长处的吸收系数为435计算其含量。,中国药典也曾采用此法测量氢化可的松原料药和注射液的含量。,甾体类药物分析含量测定,（2）四氮唑比色法（肾上腺素类药）,比色测定,结果受反应时间、温度、水份、pH值、O2、光等影响（P157），不宜用吸收系数法，宜用对照法同步消除这些因素对结果影响。,甾体类药物分析含量测定,氢化可的松软膏含量测定：,1、对照液制备（乙醇溶解）2、供试品液制备（乙醇提取，稀释）,3、测定法精密量取对照品溶液及供试品溶液各lml，分别置于干燥具塞试管中，各精密加无水乙醇9ml与氯化三苯四氮唑试液1ml，摇匀，各再精密加氢氧化四甲基胺试液1m1，摇匀，在25暗处放置4045分钟。照分光光度法，在485nm的波长处分别测定吸收度，计算，即得。,甾体类药物分析含量测定,三、甾体药物的其他分析方法,（一）鉴别1.紫外分光光度法,4-3-酮基在240nm附近有最大吸收，雌激素在280nm附近有最大吸收（无水乙醇溶液中）。,甾体类药物分析鉴别试验,（二）薄层色谱法,采用的方法多为对照法，即将供试品溶液和对照品溶液同点于同一薄层板上，按照药典规定的方法展开、显色、检视，供试品溶液所显主斑点的颜色和位置应与对照品溶液的主斑点相同。,甾体类药物分析含量测定,中国药典中采用该法鉴别的甾体激素类药物有丙酸睾酮注射液、炔诺孕酮炔雌醚片、倍他米松磷酸钠、醋酸甲羟孕酮片、醋酸泼尼松片、醋酸泼尼松眼膏、苯丙酸诺龙注射液、戊酸雌二醇注射液、苯甲酸雌二醇注射液等。,（二）含量测定1.Kober反应比色法,原理：雌激素与硫酸-乙醇共热呈色，用水和稀硫酸稀释后重新加热发生颜色改变，并在515nm处有最大吸收。,结果受条件影响，宜用对照法。,炔雌醇片含量测定：（1）对照品溶液的制备（乙醇溶解）（2）供试品溶液的制备（提取，再用乙醇溶解）（3）测定法精密量取对照品溶液与供试品溶液各lml，分别置试管中，在冰浴内冷却，各精密滴加硫酸-乙醇（41）4m1，摇匀，显色后，在530nm波长处分别测定吸收度。计算，即得。,2.异烟肼比色法,原理：酮基在酸性条件下与异烟肼缩合成黄色异烟腙，在一定波长下具有最大吸收。,结果受条件影响，宜用对照法消除影响。,甾体类药物分析含量测定,醋酸地塞米松软膏的含量测定：（1）对照品溶液的制备（乙醇溶解）（2）供试品溶液的制备（无水乙醇提取）（3）测定法精密量取对照品溶液及供试品溶液各10ml，分别置具塞容器中，置水浴中蒸去乙醇，残渣中加氯仿10ml，振摇，使残渣溶解，各精密加0.1异烟肼甲醇溶液（取异烟肼05g，加盐酸0.63ml，加甲醇使溶解成500ml，即得）10rnl，摇匀,置55暗处保温45分钟，取出、放冷至室温，用氯仿稀释至25ml，摇匀，在415nm波长处分别测定吸收度，计算，即得。,甾体类药物分析含量测定,3.其它含量测定方法,司坦唑醇（康力龙）吡唑环，非水滴定法测定；含乙炔基甾体硝酸银-氢氧化钠容量法孕酮类甲基酮，与三硝基苯酚作用显色，比色测定；有机溶剂提取制剂中甾体激素药物，重量法测定等。,甾体类药物分析含量测定,甾体药,肾上腺皮质激素（松）,雄激素、蛋白同化激素（睾丸素）,雌激素（雌醇）,孕激素（孕酮）,特征基团：