（外科学专业论文）periostin在胆管患者血浆中的表达.pdf

目录 一、摘要 中文论著摘要1 英文论著摘要2 二、英文缩略语3 三、论文 一1 ，1 一 月u 吾4 材料和方法一4 结果7 讨论8 结论9 四、本研究创新性的自我评价1 0 五、参考文献1 1 六、附录 综述13 在学期间科研成绩18 致谢19 个人简介2 0 中文论著摘要 p erio s tin 在胆管癌患者血浆中的表达 目的 近年许多研究表明，多种恶性肿瘤中可见p e r i o s t i n ( p n ) 的高表达。既往 对于胆管癌p n 的检测均通过免疫组化方法，本实验检测胆管癌患者m 浆中p n 的表 达水平，以及其与胆管炎组和j 下常组之问的差异。 方法 提取2 4 例血浆标本，胆管癌组、胆管炎组、对照组各8 例，用e l i s a 方法检测 各组的p n 表达情况。 结果 癌症组的p n 值为( 4 4 5 4 + 1 5 7 5 ) n g l ，炎症组值为( 2 3 0 4 + 2 8 9 ) n g l ， 对照组值为( 2 1 2 1 2 2 5 ) n g l ，癌症组与炎症组、对照组之间p n 值均存在明 显差异( p o 0 5 ) 。测定 血浆p n 诊断e c c 的敏感度为8 7 5 ，特异度为2 5 。 结论 p e r i o s t i n 在胆管癌患者血浆中呈现高表达，临床上有望成为一种新的胆管癌标 记物。 关键词 胆管癌，p e r i o s t i n ，e l i s a 英文论著摘要 r l n l l1 1 ee x p r e s s l o n0 i p e r i o s t i ni nt h es e r u m0 t l c h o l a n 2 i o c a r c i n o m ad a t l e n t s o b j e c t i v e t h eh i g he x p r e s s i o no fp e r i o s t i ni sw i d e s p r e a di nav a r i e t yo ft u m o rt i s s u eo f h u m a n i tu s e dt od e t e c ti tb yi m m u n o h i s t o c h e m i s t r yb e f o r e ，b u tt h i ss t u d yi n s t e a do f e l i s a ，a n dc o m p a r e dt h ed if f e r e n c e sa m o n gc h a o l a n g i o c a r c i n o m a ，c h o l a n g i t i sa n d n o r m a l m e t h o d s e l e c t e d2 4c a s e s ，e v e r yg r o u pi s8c a s e s ，a n dd e t e c t e dt h ep nl e v e lo ft h es e r u m b ye l i s a r e s u l t s t h ep e r i o s t i nl e v e lo fc h o l a n g i o c a r c i n o m ag r o u pw a s ( 4 4 5 4p l u s m n15 7 5 ) n g l ， c h o l a n g i t i sg r o u pw a s ( 2 3 0 4p l u s m n2 8 9 ) n g l ，a n dc o n t r o lg r o u pw a s ( 2 1 2 1p l u s m n 2 2 5 ) n g l c o m p a r e dw i t ht h o s ei nt h ef o r m e rt h r e eg r o u p s ，t h ep e r i o s t i nl e v e lw a s h i g h e ri nt h ec h a l a n g i o c a r c i n o m ag r o u p 俨i to 0 5 ) ，b u tt h e r ew e r en o to b v i o u s l y d i f f e r e n c e sb e t w e e nt h ec h o l a n g i t i sg r o u pa n dc o n t r o lg r o u p ( pe t0 0 5 ) t h es e n s i t i v i t y o fp ni s8 7 5 a n dt h es p e c i f i c i t yi s2 5 j 、 乙0 n c l u s l o n t h e r ew e r eah i g he x p r e s s i o no fp e r i o s t i ni nt h es e r u mo fc h o l a n g i o c a r c i n o m a p a t i e n t s a n dp e r i o s t i nm a yb e c o m e sah i 曲d i a g n o s t i cv a l u eo fq u a l i t a t i v ea n d q u a n t i t a t i v ec h o l a n g i o c a r c i n o m am a r k e r k e yw o r d s c h o l a n g i o c a r c i n o m a ，p e r i o s t i n ，e l i s a 2 英文缩略语 3 论文 p erio s t in 在胆管癌患者血浆中的表达 上j l 刖舌 1 9 9 3 年f l 本学者t a k e s h i t a i 】等从小鼠成骨细胞系m c 3 t 3 一e 1 c d n a 文库中克 隆出的一种具有调节成骨细胞分化和粘附的功能骨粘附分子，并命名为成骨细胞 特异因子一2 ( o s f - 2 ) ，具有调节成骨细胞黏附和分化的功能，为一种非胶原性细 胞外基质蛋白。该蛋白分子量大约9 0 k d a ，含有8 1 1 个氨基酸残基，后在人骨膜 及牙周韧带中发现该蛋白并重新命名为p e r i o s t i n ( p n ) 。p n 已证明在结缔组织中 广泛表达，包括皮肤、牙周膜、肌腱、骨等等。在各种各样的疾病例如心血管疾 病以及创伤修复，可见其的表达是不同的。近年许多进一步研究表明，多种恶性 肿瘤中可见p n 的高表达，如头颈痛、鼻咽癌、甲状腺癌2 卅、乳腺癌5 棚、结肠 癌、胰腺导管上皮细胞癌、卵巢癌旧硼等，而且在乳腺癌及胰腺癌患者的血清中已 检测出p n 的高表达。 目前关于胆管癌中p n 的表达，m a r c o l i v e rr i e n e r l lo 】等采用免疫组化的方法对 良恶性组织均进行了系统研究，结果表明在胆管癌间质中，p n 的高表达率达到 6 7 2 ( 7 8 11 6 ) ，上皮中的高表达率达到3 3 6 ( 3 9 1 1 6 ) ，并发现p n 是否高表 达与患者的生存期密切相关。由此可见，p n 可作为胆管癌的辅助诊断标记物，且 能用于协助评价患者的预后。k u s u m a w a d e eu t i s p a n 】对胆管癌的研究也发现了p n 的高表达而且p n 与预后密切相关，与上述观点一致。迄今为止，国内外未对胆 管癌患者血浆中的p n 含量进行过研究，若存在表达异常就可大大提高p n 作为胆 管癌辅助诊断指标的实用性。 材料与方法 ( 一) 材料 1 实验所用2 4 例血浆标本来自本院及中国医科大学附属盛京医院住院患者，均 已签署知情同意书，梗黄肝外胆管癌组( e c c ) 、梗黄急性化脓性胆管炎组( a o s c ) 、 4 对照组( c g ) 各8 例。 e c c 组临床诊断标准参照2 0 1 0 n c c n 胆管癌临床实践指南，根据患者的症状、 体征以及影像学、生化学检查，临床诊断为肝外胆管癌。该组入选病例均为首次 入院且未进行过相关治疗如介入治疗、放化疗等，均存在黄疸( 直接胆红素总胆 红素 6 0 ) ，彩超、c t 、m r c p 示胆外胆管扩张、肝外胆管占位。 a o s c 组诊断标准遵循19 8 3 年在重庆举行的肝胆管结石专题研讨会制定了我 国的诊断标准： ( 1 ) r e y n o l d 五联征+ 休克。 ( 2 ) 无休克者，应满足以下6 项中之2 项即可诊断：精神症状：脉搏 1 2 0 次m i n ：白细胞讨数 2 0 1 0 9 l ；体温 3 9 。c 或 6 0 ) 、低血压，伴有神经精神症状，白细胞增高1 6 - - 一3 2 1 0 9 l ， 彩超、c t 示胆总管扩张，肝内胆管扩张或胆总管、肝总管结石，肝内胆管结石。 对照组为健康志愿者。 2 主要试剂人p e r i o s t i n 酶联免疫分析( e l i s a ) 试剂盒购自上海研吉生物科 技有限公司。 3 实验仪器 一8 0 冰箱7 0 23 6 8 l 一8 6 t h e r m o 离心机s c - 3 6 1 0中佳2 0 n k l a s h z 一8 8 台式水浴恒温振荡器江苏太仓市实验设备厂 酶标检测仪m o l l9 9 1 5芬兰l m ( 二)方法 1 样本采集抽取患者血液5 毫升置于抗凝管内，混合1 0 一2 0 分钟后，离 心2 0 分钟( 2 5 0 0 转分) 。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，再次离心。 2 操作步骤 ( 1 ) 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔1 0 孔，在第一、第二 5 孔中分别加标准品1 0 0 p l ，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液5 0 p l ，混匀；然 后从第一孔、第二孔中各取1 0 0 p 1 分别加到第三孔和第网孔，再在第三、第四孔 分别加标准品稀释液5 0 p l ，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取5 0 p l 弃掉，再 各取5 0 p 1 分别加到第血、第六孔中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液5 0 u l ， 混匀；混匀后从第五、第六孔中各取5 0 p 1 分别加到第七、第八孔中，再在第七、 第八孑l 中分别加标准品稀释液5 0ul ，混匀后从第七、第八孔中分别取5 0 p l 加到 第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液5 0 p l ，混匀后从第九第十 孔中各取5 0 p l 弃掉。( 稀释后各孔加样量都为5 0 p l ，浓度分别为9 0 n g l ，6 0 n g l ， 3 0 n g l ，1 5 n g l ，7 5 n l ) 。 ( 2 ) 加样：分别设空白孔( 空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相 同) 、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液4 0 p l ，然后再加 待测样品1 0 p l ( 样品最终稀释度为5 倍) 。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不 触及孔壁，轻轻晃动混匀。 ( 3 ) 温育：用封板膜封板后置3 7 温育3 0 分钟。 ( 4 ) 配液：将3 0 ( 4 8 t 的2 0 倍) 倍浓缩洗涤液用蒸馏水3 0 ( 4 8 t 的2 0 倍) 倍稀释后备用。 ( 5 ) 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置3 0 秒 后弃去，如此重复5 次，拍干。 ( 6 ) 加酶：每孔加入酶标试剂5 0 p l ，空白孔除外。 ( 7 ) 温育：操作同3 。 ( 8 ) 洗涤：操作同5 。 ( 9 ) 显色：每孔先加入显色剂a 5 0 p l ，再加入显色剂b 5 0 p l ，轻轻震荡混匀， 3 7 避光显色1 5 分钟 ( 1 0 ) 终止：每孔加终止液5 0 p l ，终止反应( 此时蓝色立转黄色) 。 ( 1 1 ) 测定：以空白空调零，4 5 0 r i m 波长依序测量各孔的吸光度( o d 值) 。 ( 三)统计学分析 以标准品的浓度为横坐标，o d 值为纵坐标，绘出标准曲线并计算出标准曲 线的直线回归方程式，将样晶的o d 值代入方程式，计算出样品浓度。应用s p s s 6 1 7 0 将三组数据行单项方差分析。以对照组的9 5 可信区间上限2 5 7 1 n g l 为分 界值，2 0 1 0 n c c n 胆管癌临床实践指南中的诊断标准为黄会标准，计算出测定血 浆p n 诊断e c c 的敏感度和特异度。 结果 ( 一)标准曲线及直线同归方程见图1 图1 ，标准曲线及直线回归方程 ( 二) 将样品的o d 值代入方程式，计算出样品浓度，癌症组的p n 值为( 4 4 5 4 1 5 7 5 ) n g l ，炎症组值为( 2 3 0 4 2 8 9 ) n g l ，正常组值为( 2 1 2 1 2 2 5 ) n g l ，见表1 。应用s p s s1 7 0 将三组数据行单项方差分析，结果显示癌症组与 炎症组、对照组之间p n 值均存在明显差异( p 0 0 5 ) 。 表l ，三组的均数及标准差 组别 均值( n g )标准差( n g l ) 术p 0 0 5 ( 三)以对照组的9 5 可信区间上限2 5 7 1 n g l 为分界值，大于此值作为阳 性标准，反之为阴性标准，以2 0 1 0 n c c n 胆管癌临床实践指南中的诊断标准为黄 7 金标准，见表2 ，计算出测定血浆p n 诊断e c c 的敏感度为8 7 5 ，特异度为2 5 9 6 。 表2 ，p n 的敏感度及特异度 讨论 胆管癌为当今世界各地常见的恶性肿瘤之一，为肝脏胆道系统第二大恶性肿 瘤，近年来发病率在全球呈增加趋势。早期胆管癌患者根治性手术切除率约 3 0 4 0 9 6 ，手术死亡率为1 2 ，且预后较差，统计1 0 7 例肝外胆管癌患者n 2 3 的手 术治疗效果，根治性切除的1 ，3 ，5 年生存率分别为7 2 4 ，4 4 7 和2 2 7 ，姑 息性切除1 ，2 ，3 年生存率分别为5 4 5 ，2 7 3 ，9 1 ，无5 年存活者。大多数 胆管癌患者起病隐匿，发病时大多数已属晚期，即使目前外科手术技术有所改善， 但失去了根治性治疗的机会，患者的生存率依然较低。 恶性上皮细胞肿瘤能够侵袭邻近组织，由于这一特征正像某些正常间质细胞， 这一过程义被称为上皮细胞间质转化( e m t ) 引。e m t 是多细胞生物胚胎发生过 程中的基础过程，也存在于多种肿瘤的进展过程中并且与肿瘤细胞的原位侵袭和 远处转移有着密切的关系。其不仅包括细胞形态学的改变，还包括基因型的改变。 细胞外基质( e c m ) 由局部细胞分泌，能为细胞、组织、器官提供支持，对结缔 组织的正常结构和功能起到非常重要的作用，并能限制和调节上皮细胞的增生和 演化。目f j i 许多研究已经证明微环境对e m t 的发生起着至关重要的作用。e c m 及其相关酶类的改变，可以导致细胞增殖、外形的改变和转移能力的获得。发生 e m t 的细胞原位逸出n 卯，导致分泌大量的e c m 及其酶类，由于e c m 是间充 质细胞分泌的，因此上皮细胞对e c m 的分泌也可以看作其向问质细胞转化的一个 证据，p n 为细胞外基质蛋白，也随之大量分泌。整合素是跨膜异二聚体受体，参 与上皮细胞一e c m 的相互作用，研究表明许多类型的整合素如c 【v p 3 、a v p 5 、0 【6 p 4 等为p n 受体，通过促进f a k 磷酸化来增加癌细胞迁移、增强痛细胞生存能力及 促进肿瘤血管生成旧1 。由于p n 的大量分泌以及肿瘤血管的生成，所以进入血液循 8 环的p n 相应增加，胆管痛患者血浆中的p n 值也将远远大于胆管炎患者及健康者。 m a r c o l i v e rr i e n e r l l o 】等用免疫组化法检测胆管癌患者p n 值，发现年龄及性别 因素对p n 值的影响无统计学意义，所以本实验未行年龄及性别分组比较。t a i 等 剐发现抗p n 抗体促进癌细胞凋亡和增加5 一氟尿嘧啶对肠癌细胞的疗效，为了避 免治疗对p n 值的影响，本实验对象入选标准定于首次入院且未进行过相关治疗 如介入治疗、放化疗等，并未做相关随访跟踪调查。本实验结果表明p n 在胆管 癌组中高表达，在胆管炎组和正常组中低表达，与预期结果相符，也再次验证了 以上所述e m t 与肿瘤的关系以及p n 的作用机制。 研究表明，c a l 9 - 9 诊断胆管痛的敏感度为6 5 8 7 8 0 ，特异度为8 7 9 4 m 1 钔， 本实验p n 的敏感度为8 7 5 ，稍高于c a l 9 - 9 ，但特异度较低，仅为2 5 。p n 联 合c a l 9 9 是否能提高检测胆管癌的敏感度及特异度还有待进一步研究。本实验 胆管癌组p n 值标准差较其余两组明显增大，考虑p n 值与肿瘤分期有关，至于血 浆p n 值能否评价预后仍需后续研究。 在某些肿瘤中，通过提高p n 的表达水平可以促进肿瘤细胞的转移、浸润和生 存能力，所以p n 除了可以作为一种新的肿瘤标记物应用于临床渗断，而且其抗 体有望成为新的抗癌药物。p n 作为一种分泌蛋白，在某种肿瘤组织周围高表达， 随着靶向药物研究发展，将来可以作为肿瘤治疗的潜在靶点进行研究，从而实施 临床肿瘤个体化治疗。 结论 p e r i s t i n 在胆管癌患者血浆中呈现高表达，其对胆管癌诊断的敏感度稍高于 c a l 9 9 。 9 本实验创新性的自我评价 既往对于胆管痛p n 的检测均通过免疫组化方法，患者若行手术治疗病理诊断 即可，并且目前e r c p 未能普及使用，取病理困难。因此若能发现一种简单方便 的检验方法具有重大的临床意义，本实验的创新性在于可从血浆中检测p n 值， 取材方便，实用性大大增加。 l o 参考文献 1t a k e s h i t as , k i k u n or ，t e z u k ak , e ta 1 o s t e o b l a s t s p e c i f i cf a c t o r2 ：c l o n i n go fap u t a t i v eb o n e a d h e s i o n p r o t e i n w i t h h o m o l o g y w i t h t h ei n s e c t p r o t e i n f a s c i c l i ni b i o c h e m j ，1 9 9 3 ，2 9 4 ：2 7 1 - 2 7 8 2k u d oy , o g a w ai , k i t a j i m as , e ta 1 p e r i o s t i np r o m o t e si n v a s i o na n da n c h o r a g e i n d e p e n d e n t g r o w t hi nt h em e t a s t a t i cp r o c e s so f h e a da n dn e c kc a n c e r c a n c e rr e s ，2 0 0 6 ，6 6 ( 7 ) ：6 9 2 8 6 9 3 5 3 c h a n gy , l e et c ，l ijc ，e ta 1 d i f f e r e n t i a le x p r e s s i o no fo s t e o b l a s t s p e c i f i c f a c t o r2a n d p o l y m e r i c i m m u n o g l o b u l i nr e c e p t o rg e n e s i n n a s o p h a r y n g e a i c a r c i n o m a h e a d n e c k ，2 0 0 5 ，2 7 ( 10 ) ：8 7 3 - 8 8 2 4 f l u g eo ，b r u l a n d0 ，a k s l e nl a ，e ta 1 g e n ee x p r e s s i o ni np o o r l yd i f f e r e r t i a t e dp a p i l l a r yt h y r o i d c a r c i n o m a s t h y r o i d ，2 0 0 6 ，1 6 ( 2 ) ：1 6 1 1 7 5 5 s h a or , b a os , b a ix ，e ta 1 a c q u i r e de x p r e s s i o no fp e r i o s t i nb yh u m a nb r e a s tc a n c e r sp r o m o t e s t u m o ra n g i o g e n e s i st h r o u g hu p - r e g u l a t i o no fv a s c u l a re n d o t h e l i a lg r o w t hf a c t o rr e c e p t o r2 e x p r e s s i o n m o lc e l lb i o l ，2 0 0 4 ，2 4 ( 5 ) ：3 9 9 2 - 4 0 0 3 6 g r i g o r i a d i sa ，m a c k a ya ，r e i s f i l h o j s , e t a 1 e s t a b l i s h m e n to ft h ee p i t h e l i a l s p e c i f i c t r a n s c r i p t o m e o fn o r m a l a n dm a l i g n a n th u m a nb r e a s tc e l l sb a s e do nm p s sa n da r r a y e x p r e s s i o nd a t a b r e a s tc a n c e rr e s ，2 0 0 6 ，8 ( 5 ) ：r 5 6 7b a os , o u y a n g ( j b a ix ，e ta 1 p e r i o s t i np o t e n t l yp r o m o t e sm e t a s t a t i cg r o w t ho fc o l o nc a n c e rb y a u g m e n t i n gc e l ls u r v i v a lv i at h ea k t p k bp a t h w a y c a n c e rc e l l ，2 0 0 4 ，5 ( 4 ) ：3 2 9 - 3 3 9 8b a r i lp , g a n g e s w a r a nr ，m a h o np c ，e ta 1 p e r i o s t i np r o m o t e si n v a s i v e n e s sa n dr e s i s t a n c eo f p a n c r e a t i cc a n c e rc e l l st oh y p o x i ai n d u c e dc e l ld e a t h ：r o l eo ft h eb e t a ( 4 ) i n t e g r i na n d t h ep 1 3 k p a t h w a y o n c o g e n e ，2 0 0 7 ，2 6 ( 1 4 ) ：2 0 8 2 0 2 0 9 4 9g i l l a nl ，m a t e id ，f i s h m a nd a ，e ta 1 p e r i o s t i ns e c r e t e db ye p i t h e l i a lo v a r i a nc a r c i n o m ai sa l i g a n df o ra l p h a ( v ) b e t a ( 3 ) a n da l p h a ( v ) b e t a ( 5 ) i n t e g r i n sa n dp r o m o t e sc e l lm o t i l i t y c a n c e r r e s ，2 0 0 2 ，6 2 ( 9 ) ：5 3 5 8 5 3 6 4 10m a r c o l i v e rr i e n e r , f l o r i a nrf r i t z s c h e ，c h r i s t o p h e rs o l l ，e ta 1 e x p r e s s i o no ft h ee x t r a c e l l u l a r m a t r i x p r o t e i n p e r i o s t i n i nl i v e rt u m o u r sa n db i l ed u c tc a r c i n o m a s h i s t o p a t h o l o g y , 2 010 ，5 6 ：6 0 0 6 0 6 1 1 1 1k u s u m a w a d e eu t i s p a n ，p e t it h u w a j i t ，y o s h i m i t s ua b i k o ，e ta 1 g e n e e x p r e s s i o np r o f i l i n go f c h o a n g i o c a r c i n o m a d e r i v e df i b r o b l a s tr e v e a l sa l t e r a t i o n sr e l a t e dt ot u m o rp r o g r e s s i o na n d i n d i c a t e sp e r i o s t i na sap o o rp r o g n o s t i cm a r k e r m o l e c u l a rc a n c e r , 2 0 1 0 9 ：1 3 12 w a n gz u o r e n ，q i nx i n l e i ，s h il e i ，e ta 1 s u r g i c a l t r e a t m e n ta n dp r o g n o s i so fe x t r a h e p a t i c c h o l a n g i o c a r c i n o m a ：ar e p o r to f1 0 7c a s e s c h i njh e p a t o b i l i a r ys u r g ，2 0 0 5s e p ，11 ( 9 ) ：6 0 4 6 0 8 13 d o u g l a ss m i c a l i z z i ，s u s a nm f a r a b a u g h ，a n dh e i d el f o r d e p i t h e l i a l - m e s e n c h y m a lt r a n s i t i o n i nc a n c e r ：p a r a l l e l sb e t w e e nn o r m a ld e v e l o p m e n ta n dt u m o rp r o g r e s s i o n jm a m m a r yg l a n d b i o in e o p l a s i a 2 010j u n e ；15 ( 2 ) ：117 13 4 1 4p a r kb j p a r kj i m i t o g e n i cc o n v e r s i o no ft r a n s f o r m i n gg r o w t hf a c t o r - b e t a1e f f e c tb yo n c o g e n i c h a r a s - i n d u c e da c t i v a t i o no ft h em i t o g e n a c t i v a t e dp r o t e i nk i n a s es i g n a l i n gp a t h w a yi nh u m a n p r o s t a t ec a n c e r c a n c e rr e s 2 0 0 0 ，3 0 31 - 3 0 3 8 15m o i n f a rf , m a ny g , a r n o u l dl ，e ta 1 c o n c u r r e n ta n di n d e p e n d e n tg e n e t i ca l t e r a t i o n si nt h e s t r o m a la n de p i t h e l i a lc e l l sfm a m m a r yc a r c i n o m a ：i m p l i c a t i o n sf o rt u m o r i g e n e s i s c a n c e r r e s 2 0 0 0 ，2 5 6 2 2 5 6 6 16t a ii t , d a im ，c h e nl b p e r i o s t i ni n d u c t i o ni nt u m o rc e l ll i n ee x p l a n t sa n di n h i b i t i o no fi nv i t r o c e l lg r o w t hb ya n t i p e r i o s t i na n t i b o d i e s c a r c i n o g e n e s i s 2 0 0 5 ，2 6 ( 5 ) ：9 0 8 - 9 1 5 17p a t e lah ，h a m o s i sdm ，k l e eq e ta 1 t h e u t i l i t y o fc ai9 - 9i nt h e d i a g n o s e so f c h o l a n g i o c a r c i n o m a i n p a t i e n t s w i t h o u t p r i m a r ys c l e r o s i n gc h o l a n g i t i s a m j g a s t r o e n t e r 0 1 2 0 0 0 ，9 5 ( 1 ) ：2 0 4 2 0 7 18k e rcg l c h e njs ，l e ek t ，e ta 1 a s s e s s m e n to fs e r u ma n db i l el e v e l so fc a19 9a n dc a12 5i n c h o l a n g i t i sa n db i l ed u c tc a r c i n o m a jg a s t r o e n t e r o lh e p a t o l ，19 91 ，6 ( 5 ) ：5 0 5 综述 p e rio s tin 在消化系统恶性肿瘤中的表达 细胞外基质( e c m ) 由局部细胞分泌，能为细胞、组织、器官提供支持，对 结缔组织的正常结构和功能起到非常重要的作用。p e r i o s t i n 是1 9 9 3 年发现的一种 多功能高分子糖蛋白，最初在鼠成骨细胞中发现而命名为成骨细胞特异因子一2 ( o s f - 2 ) ，具有调节成骨细胞黏附和分化的功能，为一种非胶原性细胞外基质蛋 白，后在人骨膜及牙周韧带中发现该蛋白并重新命名为p e r i o s t i n 。h o r i u c h i 等研究 发现m c 3 t 3 e 1 成骨细胞系可在固定的p e r i o s t i n 基质蛋白上有效地附着和伸展， 可见该蛋白参与e c m 的组成。p e r i o s t i n 已证明在结缔组织中广泛表达，包括皮肤、 牙周膜、肌腱、骨等等。在各种各样的疾病例如肿瘤、心血管疾病以及创伤修复， 可见其的表达是不同的。恶性上皮细胞肿瘤能够侵袭邻近组织，由于这一特征正 像某些正常问质细胞，这一过程又被称为上皮细胞i r j 质转化( e m t ) i i 。e m t 是 多细胞生物胚胎发生过程中的基础过程，也存在于多种肿瘤的进展过程中并且与 肿瘤细胞的原位侵袭和远处转移有着密切的关系。其不仅包括细胞形态学的改变， 还包括基因型的改变。具体包括：1 细胞粘附相关基因( e 一钙粘素) 表达下调导 致立方上皮细胞失去细胞问相互作用。2 立方上皮细胞的细胞角蛋白结构改变， 外形演变为纺锤形纤维细胞态。3 获得了纤维原细胞或i 、日j 质细胞的特性，如骨桥 蛋白、i 型胶原酶及其它间质蛋白的表达上调，细胞获得较强的侵袭和移动能力记1 t 3 1 。所以，近年的许多研究表明，多种恶性肿瘤中可见p n 的高表达，如头颈癌1 4 1 , 鼻咽癌5 1 、甲状腺癌1 6 1 , 乳腺癌7 1t 8 1 、结肠癌1 9 1 胰腺导管上皮细胞癌 1 0 l 卵 巢癌川1 等。 t g f b 在肿瘤发展中起着双重作用，一方面，它作为一种肿瘤生长抑制因子， 能够抑制原位肿瘤细胞的生长，另一方面，在肿瘤的侵袭和转移过程中，它却扮 演着肿瘤生长促进因子的角色，不但促使细胞周期阻滞、正常上皮细胞凋亡，还 能诱导并维持细胞e m t 状态1 1 2 1 。它能以自分泌形态作用于肿瘤细胞本身，还能 通过旁分泌形态调节细胞外基质。研究表明t g f b 能够促进p n 的分泌且p n 能 1 3 诱导肿瘤上皮细胞发生e m t ，造成恶性肿瘤中p n 的高表达。 下面就来介绍p n 在消化器官恶性肿瘤中的表达： 一胃结肠癌 j u n s h e n gl i 3 1 等研究发现p n 在胃癌组织及淋巴结转移灶中高表达，提 示p n 在胃痛的进展及转移中发挥着重要的作用。y o s h i n a ok i k u c h i 4 1 等对鼠 及人的结肠癌组织进行了实验发现了p n 的高表达，并提出p n 与结肠癌上皮 的分化程度及侵袭转移有关。很多研究已经表明覆盖在肿瘤细胞表面的整联 蛋白与e c m 微环境中的粘附分子之问存在相互作用，并促进肿瘤细胞的迁 移、存活和生长，而且可能同时触发细胞内的信号传导，激活相应的基因从 而加速肿瘤细胞繁殖以及肿瘤内血管的形成。 二胰腺癌 pb a r i l ，rg a n g e s w a r a n 们等对胰腺癌患者进行了实验研究，发现患者癌组 织及血清中p n 均见升高，并且在体外实验中发现，加入p n 的胰腺癌细胞组 其抗缺氧能力明显加强。通过分子水平上研究发现，胰腺癌细胞中p n 的表面 受体0 【6 p 4 能提高f a k 的活性、激活p 1 3 激酶通路从而促进胰腺癌细胞的侵袭 力。m e r t 5 1 等用实时定量p c r 测定p nm r n a 在胰腺癌组织和正常胰腺组织 中的表达，结果分别为2 6 1 4 拷贝u l 和6 2 拷贝u l ( p = 1 0 0 0 1 ) ；在胰腺癌组 织中，p nm r n a 表达高者生存期少于表达低者，分别为1 2 个月和1 9 个月， 提示p n 可作为预后指标来评价胰腺癌患者的预后。 三肝癌及胆管癌 关于肝癌及胆管癌中p n 的表达，m a r c o l i v e rr i e n e r 6 1 等采用免疫组化 的方法对良恶性组织均进行了系统研究，结果表明在肝癌上皮中2 0 9 呈现 高表达( 1 9 9 1 ) ，在问质中高表达率为1 1 ( 1 0 9 1 ) ，且高表达率随着肿瘤分 期的升高而提高，并与是否感染乙型肝炎病毒密切相关。在胆管癌间质中， p n 的高表达率达到6 7 2 ( 7 8 11 6 ) ，上皮中的高表达率达到3 3 6 ( 3 9 1 1 6 ) ， 并发现p n 是否高表达与患者的生存期密切相关。由此可见，p n 可作为肝癌 及胆管癌的辅助诊断标记物，且能用于协助评价患者的预后。k u s u m a w a d e e u t i s p a n 7 对胆管癌的研究也发现了p n 的高表达而且p n 与预后密切相关， 1 4 与上述观点一致。 四问题与展望 正常情况下，p n 作为一种粘附蛋白，除高表达于胚胎组织外，主要表达 于少数的币常成年组织。目前大量的研究发现该蛋白可以通过作用于e c m 来 调节肿瘤的生长发育，在某些肿瘤中，通过提高该蛋白的表达水平，可以促 进肿瘤细胞的转移和浸润。并且在多种肿瘤患者的血清检测出该蛋白水平的 异常升高，与预后存在相关性，如胰腺癌、非小细胞癌、乳腺癌等。因此， p n 可以作为一种新的肿瘤标记物应用于临床诊断，为临床治疗以及预后提供 可靠的依据。而且p n 作为一种分泌蛋白，在某种肿瘤组织周围高表达，随着 靶向药物研究发展，将来可以作为肿瘤治疗的潜在靶点进行研究，从而实施 临床肿瘤个体化治疗。目前虽然对已知能诱导p n 表达或分泌的细胞因子：如 t w i s t 、i l 4 、i l 1 3 已有相应研究且有不少了解，但在各种不同肿瘤中能诱导 p n 细胞因子的分子机制仍未阐明；此外p n 与整合素及纤连素、t e n a c i n c 、 胶原v 相互结合，其是否能相互作用后进一步参与或促进肿瘤生长尚不明了； 因此，有关p n 在肿瘤中作用基础和临床研究还任重道远。 1 5 参考文献 1 d o u g l a ss m i c a l i z z i ，s u s a nm f a r a b a u g h ，a n dh e i d el f o r d e p i t h e l i a l m e s e n c h y m a lt r a n s i t i o n i nc a n c e r ：p a r a l l e l sb e t w e e nn o r m a ld e v e l o p m e n ta n dt u m o rp r o g r e s s i o n jm a m m a r yg l a n d b i o ln e o p l a s i a 2 010j u n e ；15 ( 2 ) ：117 - 13 4 2 g o t z m a n n ，j o s e f h e p a t o c y t e sc o n v e r tt oaf i b r o b l a s to i dp h e n o t y p et h r o u g ht h ec o o p e r a t i o no f t g f 一1 3 , a n dh a r a s ：s t e p s t o w a r di n v a s i v e n e s s m u t a t i o nr e s e a r c h r e v i e wi nm u t a t i o n r e s e a r c h ，2 0 0 4 ，5 6 6 ( 1 ) ：9 - 2 0 3 b o y e rb r i g i t t e ，v a i l s a n am a r i a ，e d m en a t a c h a i n d u c t i o na n dr e g u l a t i o no fe p i t h e l i a l m e s e n c h y m a lt r a n s i t i o n s b i o c h e m i c a lp h a r m a c o l o g y 2 0 0 0 ，6 0 ( 8 ) ：1 0 9 1 1 0 9 9 4 k u d oy , o g a w ai , k i t a j i m as e ta 1 p e r i o s t i np r o m o t e si n v a s i o na n da n c h o r a g e - i n d e p e n d e n t g r o w t hi nt h em e t a s t a t i cp r o c e s so f h e a da n dn e c kc a n c e r c a n c e rr e s ，2 0 0 6 ，6 6 ( 7 ) ：6 9 2 8 6 9 3 5 5 c h a n gy , l e et c , l ijc ，e t a 1 d i f f