（基础兽医学专业论文）兽用尼美舒利注射的制备与初步评价.pdf

西南大学硕士学位论文 目录 目录 摘要i a b s t r a c t 。i i i 第l 章文献综述1 1 1 环氧合酶l 1 1 1 环氧合酶的结构l 1 1 2 环氧合酶的功能2 1 2 环氧合酶抑制剂研究概况3 1 2 1c o x 1 选择性抑制剂4 1 2 2 非选择性抑制剂4 1 2 3c o x - 2 倾向性抑制剂4 1 2 4c o x 2 高选择性抑制剂5 1 3 结语6 第2 章引言7 第3 章尼美舒利注射液处方工艺研究9 3 1 材料9 3 1 1 药品9 3 2 方法与结果9 3 2 1 处方研究9 3 2 2 处方正交试验1 l 3 2 3 尼美舒利的最优处方工艺1 2 3 3 讨论一1 3 第4 章兽用尼美舒利注射液的质量标准研究1 4 4 1 材料1 4 4 1 1 药品l4 4 1 2 仪器14 4 1 3 实验动物。1 4 4 2 方法与结果1 4 4 2 11 生状15 4 2 2 鉴别1 5 4 2 3 检查。1 5 4 2 4 含量测定及有关物质。1 5 4 3 讨论19 第5 章兽用尼美舒利注射液的稳定性试验2 l 5 1 材料21 5 1 1 药品与试剂2 l 5 1 2 仪器恒温水浴锅2l i 西南大学硕七学位论文 目录 5 2 方法2 l 5 2 1 初均速法预测药物有效期2 1 5 2 2 温度加速试验2 2 5 2 3 长期试验2 2 5 3 结果2 2 5 4 讨论2 4 第6 章尼美舒利注射液的部分药效学试验2 6 6 1 材料2 6 6 1 1 药品。2 6 6 1 2 仪器2 6 6 1 3 试验动物2 6 6 2 方法2 6 6 2 1 解热对比试验2 6 6 2 2 镇痛实验。2 7 6 2 3 抗炎试验2 7 6 3 结果2 8 6 4 讨论2 9 第7 章兽用尼美舒利注射液的部分毒理学试验一3 l 7 1 材料3l 7 1 1 药 i i 31 7 1 2 仪器。3l 7 1 3 实验动物3 1 7 2 方法3l 7 2 1 尼美舒利注射液半数致死量( l d 5 0 ) 测定3 l 7 2 2 长期毒性试验3 2 7 2 3 蓄积性试验3 2 7 2 4 耐受性试验3 3 7 2 5 溶血性试验3 3 7 2 5 溶血性试验3 4 7 2 6 肌肉刺激性试验3 4 7 3 结果。3 4 7 4 讨论3 7 全文总结4 0 参考文献4l 致谢。4 6 在学期间发表的论文和申请的专利4 7 西南大学硕士学位论文 摘要 兽用尼美舒利注射的制备与初步评价 基础兽医学，兽医药理学与毒理学方向陈君 指导老师罗永煌 摘要 尼美舒利是一种非甾体抗炎药，1 9 8 5 年由b o e h r i n g e rb i o e h e m i a 公司在意大利上市，是 全球上市的第一个强选择性的环氧合酶2 抑制剂，目前已在很多国家广泛使用。在人医临床 上，尼美舒利具有解热、镇痛、抗炎、抗风湿等作用，临床可用于缓解病人的疼痛、炎症、 风湿症等，如牙痛、术后疼痛、急性创伤疼痛、咽炎、耳炎、类风湿性关节炎等。在兽医临 床上，尚未见该药用于动物的报道，但有望用于普通感冒、流行性感冒、其他原因引起的发 热性疾患、风湿症等。 由于尼美舒利很难溶于水，已经上市的人用尼美舒利制剂主要为片剂、分散片、缓释片、 颗粒剂、口服混悬液、口服干糖浆、栓剂、透皮剂等，未见其注射液上市。 本文研制的尼美舒利注射液属三类新兽药，作者按农业部新兽药注册管理要求，进行了 临床前的部分研究，主要内容如下： 1 兽用尼美舒利注射液的处方研究。以尼美舒利为原料药，以水为溶剂，加入抗氧化剂 l 半胱氨酸、金属络合剂e d t a n a 2 ，用乙醇胺和乳酸调节p h 值至8 1 0 。其性状为橙黄色澄 明液体。 2 兽用尼美舒利注射液的质量标准研究。对所制得的尼美舒利注射液进行了鉴别、检查、 含量测定等研究。结果，鉴别反应灵敏；装量差异、热原、澄明度、p h 值等均符合注射液相 关要求；尼美舒利注射液含量测定方法采取h p l c 方法，其色谱条件为：色谱柱：p l a t i s i lo d s 色谱柱( 4 6 m m x 2 5 0 m m ，5 1 j m ) = 流动相：甲醇磷酸二氢钾( 0 5 9 l - 1 ，用磷酸调节至p h 4 2 ) ( 6 0 ：4 0 ) ；检测波长：2 5 4 n m ；理论板数按尼美舒利计算应不低于3 0 0 0 ；流速：l m l m i n ， 进样量：2 0 血；柱温：室温。 3 兽用尼美舒利注射液的热稳定性研究。用初均速法预测尼美舒利注射液的有效期；加速 试验条件为：温度4 0 士2 、相对湿度7 5 士5 ；长期试验条件为：温度2 5 士2 、相对湿 度6 5 士5 。结果，初均速法预测尼美舒利注射液的有效期为2 1 1 年；加速试验6 个月，尼 西雨大学硕士学位论文 摘要 i i 美舒利注射液的含量、p h 值、性状、澄明度等变化甚微；长期试验1 2 个月，尼美舒利注射液 的含量略有下降，但与对照0 个月比较差异不显著( p 0 0 5 ) 。 4 兽用尼美舒利注射液的药效学研究。用蛋白胨致热家兔作解热试验，醋酸扭体法作镇痛 试验，蛋清致炎法作抗炎试验。结果，尼美舒利注射液显示出较好的解热、镇痛、抗炎效果。 5 兽用尼美舒利注射液的部分安全性试验。采用改良寇式法测定尼美舒利注 射的l d s o ；喂养大鼠3 个月以器官变化和指数测定其长期毒性；以剂量递增法测定其对小鼠 的蓄积性和耐受性；常规法测定其溶血性和肌肉刺激性。结果显示，尼美舒利注射液 l d s o = 1 8 3 5 m g k g ：连续给药3 个月，试验各组大鼠脏器指数与对照组比较无显著性差异；该 注射液对小鼠无蓄积性和耐受性，未见对家兔有明显的溶血性和肌肉刺激性。 关键词尼美舒利；注射液；制备；评价 |； 。 雪 ， ， ， 十 。z 一 一 摹 。 f 。t 学 o4 i ，： 砩_ 一 。t _ 。? ：? 0 ， ，0 。：? ： 西南大学硕+ 学位论文a b s t r a c t 皇曼曼鼍曼舅, i i ii i i _ i m _ i 一- - o 量皇曼曼皇皇曼量量皇皇曼曼曼曼曼曼曼 p r i m a r ys t u d y o nt h e p r e p a r a t i o na n ds a f e t y a s s e s so fn i m e s u l i d e i n j e c t i o nf o ra n i m a l s a b s t r a c t n i m e s u l i d ei sak i n do fn o n - s t e r o i d a la n t i - i n f l a m m a t o r yd r u g ，e n t e r e dt h em a r k e t b y b o e h r i n g e rb i o c h e m i ai ni t a l yi n19 8 5 i ti st h ef i r s ts t r o n gs e l e c t i v ec y c l o o x y g e n a s e2i n h i b i t o ro f l i s t i n g ，h a sb e e nu s e dw i d e l yi nm a n yc o u n t r i e s 。i nh u m a nh e a l t hc l i n i c ，n i m e s u l i d eh a sm a n y e f f e c t s ，s u c ha sa n t i p y r e t i c 、a n a l g e s i c 、a n t i - i n f l a m m a t o r y 、a n t i - r h e u m a t i c ，c a l lb eu s e dt or e l i e v e t h ep a t i e n t sp a i n , i n f l a m m a t i o n , r h e u m a t i s m ，e t c ，s u c h 觞t o o t h a c h e 、p o s t o p e r a t i v ep a i n 、a c u t e t r a u m a t i cp a i n 、p h a r y n g i t i s o t i t i s 、r h e u m a t o i da r t h r i t i s 。i nt h ev e t e r i n a r yc l i n i c ，t h ed r u gh a sn o tb e e n r e p o r t e df o ra n i m a l s ，b u ti sp r o m i s i n gt ob ea p p l i e dt oc o m m o nc o l d ，i n f l u e n z a , o t h e rc a u s e so f f e b r i l ed i s e a s e s ，r h e u m a t i s ma n ds oo n s i n c en i m e s u l i d ei sd i f f i c u l tt od i s s o l v ei nw a t e r , n i m e s u l i d ep r e p a r a t i o n st h a th a sb e e nl i s t e d i n c l u d em a i l y ，d i s p e r s i b l et a b l e t s ，s u s t a i n e d - r e l e a s et a b l e t s ，g r a n u l e s ，o r a ls u s p e n s i o n s ，o r a ld r y s y r u p s ，s u p p o s i t o r i e s ，t r a n s d e r m a la g e n te t c b 此t h e r ei sn or e p o r ta b o u ti t si n j e c t i o n t h en i m e s u l i d ei n j e c t i o n b e l o n gt h i r dt y p en e wv e t e r i n a r yd r u g ，a c c o r d i n gt o t h e m a n a g e m e n tr e q u i r e m e n t so ft h en e wv e t e r i n a r yd r u gr e g i s t r a t i o nt h a tt h em i n i s t r yo fa g r i c u l t u r e c a r r i e do u t , w eh a v ea c c o m p l i s h e ds o m ep r e - c l i n i c a ls t u d i e s t h ep r i n c i p a lr e s e a r c hw e r ea sf o l l o w e l e m e n t s ： p a r tl ：w eh a v ea c c o m p l i s h e dt h ef o r m u l ar e s e a r c ho fn i m e s u l i d ei n j e c t i o n a n dt h ei n j e c t i o n i n c l u d er a wm a t e r i a l sn i m e s u l i d e ，s o l v e n tw a t e r , a d d i n gl c y s t e i n e ，m e t a l c o m p l e x i n ga g e n t e d t a a n dt h e nu s el a c t i ca c i da n de t h a n o l a m i n ea d j u s tt h ep hv a l u et o8 1 0 t h ec h a r a c t e ro f n i m e s u l i d ei n j e c t i o ni so r a n g ey e l l o wc l e a rl i q u i d p a r t2 ：t h eq u a l i t ys t a n d a r ds t u d yo fv e t e r i n a r yn i m e s u l i d ei n j e c t i o n i d e n t i f y i n ga n d e x a m i n i n g t h en i m e s u l i d ei n j e c t i o n ，d e t e r m i n i n gt h ec o n t e n to fn i m e s u l i d e r e s u l t , t h e i d e n t i f i c a t i o n si su pt ot h es t a n d a r d , l o a dd i f f e r e n c e ，p y r o g e n , c l a r i t y , p h ，a l lm e e tt h er e l e v a n t r e q u i r e m e n t so fi n j e c t i o n ；u s i n gh p l cm e t h o dt od e t e r m i n et h ec o n t e n to f n i m e s u l i d e t h e i 西南大学硕十学位论文 a b s t r a c t c h r o m a t o g r a p h i cc o n d i t i o n s 懿f o l l o w ：c o l u m n ：p l a t i s i lo d sc o l u m n ( 4 6 r a m 2 5 0 m m ，5 岬) ； m o b i l ep h a s e ：m e t h a n o l - p o t a s s i u md i h y d r o g e np h o s p h a t e ( o 5 9 l - 1 ，w i t hp h o s p h o r i ca c i d a d j u s t e dt op h 4 2 ，t h er a t i oo f4 0 ：6 0 ) ；c o l u m n ( 4 6 m m 2 5 0 m m ，5 1 a m ) ；m o b i l ep h a s e ：m e t h a n o l - p o t a s s i u md i h y d r o g e np h o s p h a t e ( o 5 9 l - 1 ，w i t hp h o s p h o r i ca c i da d j u s t e dt op h 4 2 ，t h er a t i oo f 4 0 ：6 0 ) ；d e t e c t i o nw a v e l e n g t h ：2 5 4 n m ；n u m b e ro f t h e o r e t i c a lp l a t e sc a l c u l a t e db yn i m e s u l i d es h o u l d n o tb el e s st h a n3 0 0 0 ；f l o wr a t e ：l m l m i n , i n j e c t i o nv o l u m e ：2 0 p l ；c o l u m nt e m p e r a t u r e ：r o o m t e m p e r a t u r e p r a t3 ：t h et h e r m a ls t a b i l i t yr e s e a r c ho fn i m e s u l i d ei n j e c t i o n p r e d i c tt h ep e r i o do fv a l i d i t y o fn i m e s u l i d ei n j e e t i o nw i t ht h ei n i t i a le q u a l - s p e e dm e t h o d ；a c c e l e r a t e dt e s tc o n d i t i o n st e m p e r a t u r e 4 0 4 - 2 ，r e l a t i v eh u m i d i t y7 5 4 - 5 ；l o n g - t e r mt e s tc o n d i t i o n s ：t e m p e r a t u r e2 5 4 - 2 ， r e l a t i v eh u m i d i t y6 5 4 - 5 t h er e s u l ts h o w e dt h a ：lt h en i m e s u l i d ei n j e c t i o nc a r lb es t o r e d2 11 y e a r sa tr o o mt e m p e r a t u r e ；a c c e l e r a t e dt e s ta n dl o n g - t e r mt r i a lf o r6m o n t h sa n d12m o n t h s ，p h , c h a r a c t e r , c l a r i t y , e t c h a sc h a n g e dl i t t l e ，t h ec o n t e n to fn i m e s u l i d ed e c l i n eal i t t l e ，b u tc o m p a r e d w i t ht h ei n i t i a lh a v en os i g n i f i c a n td i f f e r e n c e 舻0 0 5 ) p a r t4 ：a n i m a l sp h a r m a c o d y n a m i cs t u d yo fn i m e s u l i d ei n j e c t i o n a n t i p y r e t i ct e s tu s i n g p e p t o n ei n d u c e ds p i k i n gf e v e r ；a n a l g e s i at r i a lu s i n ga c e t i ca c i dw r i t h i n gm e t h o d ；a n t i i n f l a m m a t o r y t e s tu s i n gi n f l a m m a t o rm o d e li n d u c e db y10 e g gw h i t e r e s u l t s ，n i m e s u l i d ei n j e c t i o ns h o w e d g o o da n t i p y r e t i c ，a n a l g e s i c ，a n t i - i n f l a m m a t o r ye f f e c t p a r t5 ：s o m es e c u r i t yt e s to fn i m e s u l i d ei n j e c t i o n d e t e r m i n el d s ob yi m p r o v e dk a r b e r m e t h o d ；f e dr a t s3m o n t h st od e t e r m i n ei t si n d e xo fo r g a nc h a n g e sa n dl o n g t e r mt o x i c i t y ；i n c r e a s e d d o s eg r a d u a l l yt od e t e r m i n et h ea c c u m u l a t i o na n dt o l e r a n c e ；u s i n gc o n v e n t i o n a lm e t h o dt o d e t e r m i n et h e i rh e m o l y t i ca n dm u s c l ei r r i t a t i o ni nr a b b i t s t h er e s u l t ss h o w e dt h a tn i m e s u l i d e i n j e c t i o nl d 5 0 = 18 3 5 m g k g ；c o n t i n u o u sa d m i n i s t r a t i o no f3m o n t h s ，t e s t i n ge a c hr a to r g a ni n d e x c o m p a r e dw i t ht h ec o n t r o lg r o u ps h o w e dn os i g n i f i c a n td i f f e r e n c e ( p 0 0 5 ) ；t h ei n j e c t i o na n dn o a c c u m u l a t i o ni nm i c et o l e r a n c e ；n os i g n i f i c a n th e m o l y s i sa n dm u s c l ei r r i t a t i o ni nr a b i t t s k e yw o r d s ：n i m e s u l i d e ；i n j e c t i o n ：p r e p a r e ：e v a l u a t e ，：一 ， ， - j ! 矿童? j b ? w 两南大学硕七学位论文文献综述 第1 章文献综述 环氧合酶( c y c l o o x y g e n a s e ，c o x ) ，又称环氧化酶或前列腺素内过氧化物合 成酶( p g h s ) ，其同工酶有c o x 1 和c o x 2 两种，是前列腺素合成的关键限速 酶，它可催化花生四烯酸生成各种前列腺素和血栓素a 2 ( m ) ，从而产生种种 生理病理作用。自从1 9 7 6 年c o x 被发现，人们对它的认识不断更新，对 c o x 的研究和c o x 抑制剂的开发都取得了辉煌的成果，为人类在解热、镇痛、 抗炎等领域做出了重要贡献。本文对环氧合酶及其抑制剂的研究概况作一简要阐 述。 1 1 环氧合酶 自1 8 9 9 年阿司匹林诞生以来，非甾体解热镇痛抗炎药( n o n s t e r o i d a l a n t i i n f l a m m a t o r yd r u g s ，n s a i d s ) 已有超过百年的历史，同时也是世界范围内使 用最广泛的一类药。1 9 7 1 年，英国的j o h nv a n e 等【l 】首次阐明了n s a i d s 的作用机 制：各种n s a i d s 起治疗作用的共同基础是通过抑制花生四烯酸代谢过程中的 c o x 活性，使前列腺素( p g s ) 合成减少，从而产生治疗作用。1 9 7 6 年，h e m l e r 等 闭分离得到具有催化活性的c o x ，分子量为7 1 k d a ，在细胞内质网内大量存在， 后来的研究证实，这实际上就是c o x 1 。8 0 年代末，v a n e 等【3 】发现另一条基因长 度为4 k b 的m r n a ，这是一种新的活性蛋白合成m r n a 。1 9 9 0 年，n e e d l e m a n 等 1 4 发现，c o x 的活性在人体单核细胞和大鼠巨噬细胞中的细菌样内毒素的刺激下 大大增强，于是推测可能存在一种新的c o x 蛋白质。1 9 9 1 年，x i e 等【5 】分离得到 这种新的蛋白质，标记为c o x 2 。随后的研究证实，人体内的c o x 确实存在两种 同工酶，即c o x 1 和c o x 2 t 4 - 7 1 。2 0 0 2 年，美国s i m m o n s 等【8 1 发现c o x - 1 存在一 种变异型，标记为c o x 一3 ，其分子量为6 5 k d a ，主要存在于大脑皮质、心脏、主 动脉，但它在人体内的作用机制与前两种同工酶不同，并不参与炎症过程，可能 与血液中的n o 浓度有关【9 1 。 1 1 1 环氧合酶的结构 1 9 9 4 年，p i c o t 等【l o 】用x 射线晶体衍射学方法揭示了c o x 的三维结构，证实 c o x 在细胞内分布呈单向性。c o x 的结构是由三个彼此独立的折叠单位构成：n 端的类似于生长因子的表面区域、膜结合区和c 端酶活性区。c o x 1 和c o x 2 均是分子量为7 1 k d 的膜整合蛋白，分别含有5 9 9 和6 0 4 个氨基酸残基，两者的氨 基酸残基有6 3 的同源性。h a w k e y t l l 】描述了c o x 的空间结构，c o x 1 和c o x 2 的活性部位都是由末端带有发夹弯曲的疏水通道组成( 如图1 1 所示) ，c o x 1 西南大学硕十学位论文文献综述 与c o x 2 在通道的一侧的1 2 0 位有一个不一样的精氨酸( a r g ) 残基。在通道另 一侧的5 2 3 位上，c o x 1 和c o x 2 分别是异亮氨酸( i l e ) 残基和缬氨酸( v a l ) ， 但是v a l 的分子小于i l e ，因此在旁边留下一个小空隙，可与很多药物建立共价结 合。在通道的开口处的5 1 3 位，c o x - 1 是组氨酸( h i s ) ，而c o x 2 是柔韧性更好 的a r g ，并且c o x 2 的开口比c o x 1 大，使底物与c o x 2 结合更容易。 c o x 1c o x - 2 图1 1c o x 1 和c o x - 2 活性位点结构 摘自a n n a 等环氧化酶抑制剂的结构和功能基础 1 2 1 1 9 9 6 年，k u r u m b a i l 等【1 3 】在对小鼠的c o x 2 与不同的n s a l i d s 所形成复合 物的三维结构分析的基础上指出，多数c o x - 2 抑制剂的s c 5 5 8 结构中的苯磺酸 酰胺部分是分子呈现高选择性抑制作用的主要因素。其根本原因在于c o x 2 的活 性部位空间较大，存在较大的n s a i d s 结合点，从而通过相对大分子底物占据， 加大结合力，实现对c o x 2 的专属性抑制，这也成为目前开发c o x - 2 抑制剂的重 要依据。 1 1 2 环氧合酶的功能 2 0 世纪9 0 年代末，研究者们确认了c o x 存在两种同工酶，虽p c o x 1 和c o x 2 。 进一步研究发现：c o x 1 是参与正常生理作用的结构酶，表达于血管、胃、肾和 血小板等绝大多数组织和器官，正常情况下，其浓度保持着稳定的水平，在各组 织中催化产生的前列腺素也保持着相对恒定的浓度，从而发挥保护胃肠道黏膜、 调节肾血流和促进血小板聚集、传递胞间信号等作用；c o x - 2 是诱导酶，在生理 状态下，体内大多数组织中检测不到c o x 2 ，在炎症因子的诱导下可以大量表达， 如i l 1 、t n f 、l p s 、有丝分裂原( 佛波酯) 、活性氧中间体、c a m p 和血清等都可诱 导c o x 2 表达，表达水平可升高1 0 倍 - - 8 0 倍【1 4 1 ，继而促进各种前列腺素合成， 2 西南大学硕士学位论文 文献综述 介导疼痛、炎症和发热等反应【l l 1 5 】。这些研究成果让人们以为找到了避免胃肠道 副反应的金钥匙，研制出大量的新型c o x 2 抑制剂( 如塞来昔布) ，并于1 9 9 9 年 开始应用于临床。然而，事情并未完全向着理论预测的方向发展，与传统的n s a i d s 相比，c o x - 2 抑制剂虽然显著降低了n s a i d s 最典型的胃肠道反应，但肾脏、心血 管的不良反应依然存在，甚至有用药导致死亡的个体报道 1 6 - 1 9 ，这表明人们对c o x 的认识还不够完善。 随后的深入研究发现，c o x - i 也参与了炎症过程。在类风湿关节炎患者的滑 膜组织中可检测到c o x - 1 和c o x 2 。当敲除c o x 2 的大鼠在炎症刺激下( 如n 盯) 依然出现炎症反应。早在1 9 9 8 年，w a u a e e 等 2 0 】在研究了很多n s a i d s 后，发现这些 药物达到抑制c o x - 1 的量时，炎症才显著好转，但是这个剂量的药物也显著抑制 了保护胃粘膜的前列腺素的分泌，而发生胃粘膜损伤。2 0 0 8 年，t a n a k a 等【2 1 】用传 统的非选择性非甾体抗炎药和c o x - 1 、c o x 2 选择性抑制剂治疗右旋硫酸葡聚糖 ( d s s ) 诱导的结肠炎，它们都加剧了结肠炎，分析发现这主要是因为它们抑制了 保护肠粘膜的前列腺素p e g 2 的产生。以上资料表明，c o x 1 不仅是重要的参与体 内某些生理作用的结构酶，而且某些部位的c o x 1 也参与了炎症过程。 也有研究显示 2 2 之4 】，c o x 0 2 不仅是诱导酶，也是结构酶。尽管c o x 2 一般是诱 导的，但发现在胃肠道还是有c o x 2 表达，在鼠的盲肠和远端小肠有高浓度的 c o x 2 ，在人的肠粘膜和内皮细胞中也有c o x 2 表达 2 5 - 2 6 1 。敲除c o x 1 的小鼠没有 任何胃肠生理学异常和损伤，由吲哚美辛诱导的胃病比对照组轻或发生率低，这 提示c o x 1 不是唯一产生保护性p g 的因素。1 9 9 6 年，n a k a t s a g i 2 7 】提供的实验证明， c o x 2 在重度溃疡鼠模型中有助于黏膜防御。g u r e t z e r 等【2 8 】在1 9 9 8 年指出：在胃的 “适应性环化防御”中，c o x 2 也起了关键作用。在人胎儿肾的动脉、静脉的内皮细 胞和成熟肾小球都发现有c o x 一2 存在，同时在新生鼠的肾单位和膀胱也发现有 c o x 2 ，若敲除c o x 1 ，对新生鼠发育无影响，但是敲除c o x 2 的新生小鼠发育则 显示功能性肾单位减少和严重肾病变，包括小球硬化和肾间质损伤【2 9 】。进一步研 究表明，c o x 2 选择性抑制剂会造成尿钠和尿量减少、急性尿潴留【3 们。人们在体 外培养的肺上皮细胞、表皮细胞、角质细胞，正常大鼠的脑、肾、脊髓以及人的 前列腺、肺发现了c o x 0 2 的结构性表达，提示由c o x - 2 催化生成的p g s 不仅参与炎 症、肿瘤等疾病过程，也与正常的角质细胞分化、神经传导、体温调节等生理功 能有关 3 1 - 3 3 】。上述事例表明，适量的c o x 2 在某些组织某些特定时期的表达是身 体所必需的，它也是一种重要的结构酶。 1 2 环氧合酶抑制剂研究概况 目前，根据n s a i d s 对c o x 一1 和c o x 2 的抑制作用可将其分为四类【蚓：第 西南大学硕七学位论文文献综述 暑詈曼! ! 暑! ! ! ! ! ! 詈詈! 曼詈! ! ! 詈鼍詈詈詈詈鼍曼鼍! 置! ! ! ! ! ! ! ! 曼! 詈鼍鼍曼詈鼍曼鼍ni 鼍! 詈! ! 曼! ! 曼詈詈詈詈曼詈鼍詈! 詈詈詈曼詈曼曼鼍 一类为c o x 1 选择性抑制剂，对c o x 2 无选择作用，如小剂量阿司匹林；第二类 为非选择性c o x 抑制剂，对c o x 1 和c o x 2 的抑制作用差别不大，如吲哚美辛； 第三类为c o x 2 倾向性抑制剂，在有效剂量时，c o x 2 的抑制作用明显强于 c o x 1 ，如美洛昔康、尼美舒利：第四类为c o x 2 高选择性抑制剂，这类抑制剂 对c o x 2 的抑制作用是c o x 1 的1 0 0 倍以上，如伐地昔布。 1 2 1c o x - 1 选择性抑制剂 这类药物对c o x - 1 的抑制作用很强，常见的药物有小剂量阿司匹林、吡罗昔 康等。这类药物开发早，解热镇痛效果较好，在临床上使用多年。在解热镇痛领 域，阿司匹林是开发最早的药，在1 8 9 7 年被德国拜耳公司的h o f f m a n 合成，随后由 同公司的d r e s s e r 通过自身实验和动物试验证明了它具有良好的抗炎作用和镇痛效 果，并在1 8 9 9 年用于临床【3 5 1 。多年临床应用提示，阿司匹林有较强的胃肠道副反 应，也发现有引起心肌梗塞和消化道穿孔的危耐3 6 1 。现在，阿司匹林较少用于解 热镇痛，已被发现有其他用途。白建刚等【3 7 】介绍了阿司匹林的新作用和新用途： 用于冠脉搭桥手术、抗大鼠脑缺血再灌注损伤细胞凋亡、对卡托普利降低血压及 改善胰岛素抵抗有影响、抗动脉粥样化、抑制癌细胞增值、改善原发性高血压患 者血管内皮功能等。 1 2 2 非选择性抑制剂 这类药物的代表有保泰松、吲哚美辛和布洛芬等。保泰松于1 9 4 9 年获得美国f d a 批准上市，吲哚美辛则于6 0 年代上市，二者都有强大的抗炎、镇痛作用。2 0 1 0 版 中国药典收录了吲哚美辛及其制剂。文献报道，吲哚美辛有严重的骨髓抑制等不 良反应而被要求慎用，正逐渐被其他新的药物替代【3 引。 1 2 3c o x 2 倾向性抑制剂 这类药物对c o x 2 的抑制作用明显大于c o x 1 ，如美洛昔康、奈丁美酮、依托 度酸、尼美舒利。其中，前三个药品对胃肠、肝和肾有较好的安全性。美洛昔康 治疗炎症引起的疼痛有效力强而持久的作用，对治疗风湿性炎症和关节炎效果很 好【3 9 】。美洛昔康发生消化道穿孔、溃疡和出血等胃肠反应的发生率明显低于尼美 舒利等，安全性显著高于其他几种c o x 2 倾向性抑制剂【3 9 1 。尼美舒利是2 0 世纪8 0 年代上市的一个药品，有很强的解热、抗炎作用，在治疗各类关节炎、呼吸道疾 病、软组织损伤和手术后疾病都有很好的疗效，但是该药在国内外都有严重的肝 毒性报道。一项多中心临床试验，研究了尼美舒利对6 4 6 例风湿性关节炎患者的疗 效和不良反应，尼美舒利口服1 0 0 m g 天，连用4 周，但是3 0 2 例患者继续连用4 周， 4 西南大学硕七学位论文文献综述 结果显示4 周时6 4 6 例中总有效率为8 4 1 2 ，8 周时3 0 2 例中总有效率为9 4 1 ；4 周 时6 4 6 例中不良反应发生率为1 7 4 1 ，8 周时3 0 2 例中不良反应发生率为1 8 4 5 4 0 1 。 2 0 0 2 年由于尼美舒利的肝毒和对肾的严重副反应，芬兰、西班牙先后停止了尼美 舒利的销售。随后很多国家和地区不断重新审视尼美舒利。2 0 0 7 年，欧洲药品管 理局人用药品委员会的评估肯定了尼美舒利的疗效，使用尼美舒利利大于弊，推 荐可以用于临床，但限制疗程 9 的溶液中易溶。故考虑以碱性溶液增加尼美舒利的溶解度，尽量减少有机溶剂的 用量。经过反复试验，以注射用水作溶剂，以有机碱一乙醇胺调节p h ，完全可以 制备出4 尼美舒利注射液。 3 2 1 2 抗氧剂的筛选 注射剂中常用的抗氧剂有亚硫酸钠、焦亚硫酸钠、二丁基苯酚、亚硫酸氢钠、 l 半胱氨酸、硫代硫酸钠和叔丁基对羟基茴香醚等。其中焦亚硫酸钠和亚硫酸氢 钠适合酸性注射剂；亚硫酸钠和l 半胱氨酸适合碱性注射剂；二丁基苯酚和叔丁 基对羟基茴香醚在光照条件和微量金属影响下易变色或失活，且制剂成本也相对 较高。 在单因素筛选中，本试验分别选用了适用于碱性的亚硫酸钠和l 半胱氨酸作为 抗氧剂( 如表3 1 所示) 。结果，当加入亚硫酸钠时，会立即产生沉淀，因此不宜 选为抗氧剂；加入l 半胱氨酸作抗氧剂，溶液稳定性较好，但需进一步做加速试 验和长期试验进行稳定性考察。 乙