药物分析湖南大学第09章维生素类药物的分析.ppt

第九章维生素类药物的分析,维生素：是维持人体正常代谢机能所必需的微量营养物资。主要用于机体的能量转移和代谢调节人体不能合成维生素，需从食物中摄取。维生素并非同属一类化合物，有些是醇、酯，有些是酸、胺，还有些是酚和醛类。,第一节维生素A,基本结构与主要性质基本结构：具有共轭多烯侧链的环己烯,主要化学性质：易发生脱氢、脱水、聚合反应：,CHCl3,紫外吸收特性：维生素A分子中具有共轭多烯醇的侧链结构，在325328nm有最大吸收。与三氯化锑呈色维生素在三氯甲烷中能与三氯化锑试剂作用，产生不稳定的蓝色。,注意事项：反应需在无水、无醇的条件下进行。水可使三氯化锑水解成氯化氧锑（SbOCl）。乙醇可以与正碳离子作用使其正电荷消失。,薄层色谱法方法吸附剂：硅胶G；展开剂：环己烷-乙醚（80:20）显色剂：三氯化锑溶液判断：比较供试品和对照溶液所显蓝色斑点位置,含量测定紫外分光光度法（三点校正法）维生素A的最大吸收波长：325328nm杂质干扰（310340nm）：去氢维生素A（VitA2）去水维生素A（VitA3）光照产物（无活性聚合物：鲸醇）立体异构体（新维生素Aa、新维生素Ab等）氧化产物（环氧化物、维生素A醛、维生素A酸）,三点法测定原理：在三个波长处测得吸光度，然后计算含量。条件：杂质的吸收在310340nm波长范围内呈一条直线，且随波长的增大吸收度减小。物质对光的吸收具有加和性。波长的选择1：VitA的max（328nm）；2、3：分别在1的两侧各选一点,第一法（等波长差法）：,（式1）,杂质的吸收在310340nm波长范围内呈一条直线,（式2）,将X2、X3代入式1：,（式4）,（式3）,式3式4：,A1(校正)为消除杂质干扰后的吸光度值：,1、2、3为预先选定波长K1、K2是维生素A纯品测得的吸光度比值,用直接法测定维生素A醋酸酯：1=328nm、2=316nm、3=340nm,第二法（等吸收比法）：,FEM与FDL为相似三角形：,供试品在1、2、3处的吸光度分别为：A1、A2、A3：,即：,又：,即：,将X、Y代入式1：,（式1）,用皂化法测定维生素A醇：1=325nm、2=310nm、3=334nm,所求的值较实际应得之值要高2.6%2.7%，根据实验证明，乘以97.35%后较准确:,吸光度校正小结校正都是通过最大吸收波长及其两侧二个波长的三点法进行；选择三点的共同要求是：在此波长范围内杂质的额吸收再一条直线上。校正公式有两种类型：等波长差法和等吸收比法。使用公式时要注意溶液种类以及供试品是维生素A酯或维生素A醇。,测定方法第一法：直接测定法方法：如供试品中干扰测定的杂质较少，可用溶剂（环己烷）溶解供试品，制成每1ml含915IU的溶液后直接测定。在300、316、328、340、360nm处的吸光度，确定最大吸收波长（328nm）。适合于纯度高的维生素A醋酸酯。,计算：求E1cm1%A：实测吸光度A238或校正吸光度A238（校正）C：为混合样品的浓度,求效价（IU/g）：每g供试品中所含维生素A的国际单位数。1900：维生素A醋酸酯在环己烷溶液中的换算因子,求维生素A醋酸酯占标识量的百分含量：,第二法:皂化法方法：如供试品中干扰测定的杂质较多，且用第一法无法消除杂质干扰时，可加KOH乙醇溶液煮沸回流皂化。皂化液经乙醚提取、洗涤、滤过、浓缩和干燥处理，用异丙醇溶解残渣并稀释。测定300、310、325、334nm处的吸光度，并确定最大吸收波长（325nm）。适合于维生素A醇。,计算：求E1cm1%A：实测吸光度A235或校正吸光度A235（校正）C：为混合样品的浓度,VitAD胶丸中VitA的含量测定精密称取本品(规格10000VitAIU/丸)装量差异项下（平均装量0.08262g/丸）的内容物0.2399g至250ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀；精密量取2.0ml，置另一20ml量瓶中，用环己烷稀释至刻度，摇匀。以环己烷为空白，测定最大吸收波长为328nm，并测得下列波长处吸收度。,A300：0.354A316：0.561A328：0.628A340：0.523A360：0.216,A300/A328：0.555A316/A328：0.907A328/A328：1.000A340/A328：0.811A360/A328：0.299,求本品中维生素A的含量？,第二节维生素B1,维生素B1广泛存在于米糠、麦麸和酵母中，具有维持糖代谢及神经传导与消化的正常功能。用于治疗维生素B1缺乏病、多发性神经炎和胃肠道疾病。基本结构与主要性质基本结构由氨基嘧啶环和噻唑环通过亚甲基连接而成的季胺类化合物。,氨基嘧啶环CH2噻唑环(季铵碱),主要性质溶解性易溶于水（显酸性）、微溶于乙醇、不溶于乙醚硫色素反应噻唑环在碱性介质中可开环，与嘧啶环上的氨基环合，再经铁氰化钾氧化成硫色素（溶于正丁醇显蓝色荧光）。紫外吸收特性具紫外吸收，最大吸收波长为246nm。,与生物碱沉淀试剂反应分子中含有两个杂环（嘧啶环和噻唑环），可与某些生物碱沉淀试剂（碘化汞钾、三硝基苯酚、碘溶液和硅钨酸）反应生成组成恒定的沉淀。氯化物的特性维生素B1为盐酸盐，其水溶液显氯化物的鉴别反应。,鉴别试验硫色素反应原理:在碱性介质中可被铁氰化钾氧化成硫色素（溶于正丁醇显蓝色荧光）。,（硫色素）,（O）,硫色素反应为维生素B1所特有的专属反应,方法：,沉淀反应与碘化汞钾生成淡黄色沉淀与碘生成红色沉淀与硅钨酸生成白色沉淀与苦酮酸形成扇形白色结晶氯化物反应：本品水溶液显氯化物的鉴别反应。硝酸铅反应与NaOH共热，分解产生NaS，可与硝酸铅生成黑色沉淀。,含量测定非水滴定法原理：维生素B1分子中含有两个碱性的已成盐的伯胺和季铵基团，在非水溶液中（在醋酸汞存在下），均可与高氯酸（0.1mol/L）作用。,喹那啶红亚甲蓝（紫红天蓝）,注意事项：醋酸汞可与氢卤酸作用生成非解离的卤化汞溶液，已消除氢卤酸盐对非水滴定法的干扰。维生素B1具有两个碱性基团，与高氯酸反应的摩尔比为1:2。,硫色素荧光法,NaOH,原理：,方法与计算：,注意事项：铁氰化钾与维生素B1的反应虽非定量完成，但在一定的条件下形成的硫色素与维生素B1的浓度成正比。硫色素反应为维生素B1的专属性反应，不受氧化产物的干扰，测定结果较为准确，但操作繁琐。使用的氧化剂，除铁氰化钾外，可用氯化汞或溴化氰。溴化氰能将维生素B1完全定量氧化为硫色素，适用于临床体液分析。,第三节维生素C,维生素C（L-抗坏血酸）具有4中光学异构，以L-构型右旋体的生物活性最强。基本结构与主要性质基本结构具有烯二醇结构和内酯环，且有2个手性碳原子（C4、C5），使维生素C性质极为活泼，且具旋光性。,主要性质溶解性：易溶于水（呈酸性）、微溶乙醇、不溶于三氯甲烷和乙醚。酸性：烯二醇基中C3-OH收共轭效应影响，酸性较强（pK1=4.17）；C2-OH酸性较弱（pK2=11.57）旋光性：有2个手性碳原子,具旋光性。,还原性：分子中的烯二醇基具有极强的还原性，已被氧化为二酮基成为去氢抗坏血酸，在碱性或强酸性溶液中能进一步水解为二酮洛糖酸而失去活性。,水解性：维生素C和碳酸钠作用可生成钠盐，内酯环并得稳定，不致发生水解；在强碱中，内酯环可水解，生成酮酸盐。,糖类的性质：化学结构与糖类相似，具有糖类的性质和显色反应。,紫外吸收特性：具共轭双键，其稀盐酸溶液max=243，碱性溶液max=265。,鉴别试验与硝酸银反应烯二醇基具有强还原性，可被硝酸银氧化为去氢抗坏血酸，同时产生黑色银沉淀。,与2,6-二氯靛酚反应2,6-二氯靛酚的氧化型在酸性介质中位玫瑰红色，在碱性介质中位蓝色，与维生素C作用后生成还原型无色的酚亚胺。,（玫瑰色）,（无色）,与其他氧化剂反应可被亚甲蓝、高锰酸钾、碱性酒石酸铜试液、磷钼酸等氧化剂氧化为去氢抗坏血酸。,糖类的反应在三氯醋酸或盐酸存在下水解、脱羧、生成戊糖，再失水，转化为糠醛，加入吡咯，加热、溶液呈蓝色。,（蓝色）,(糠醛),（戊糖）,含量测定维生素C具有很强的还原性，可被不同氧化剂定量氧化。碘量法原理：,指示剂：淀粉指示液,注意事项：供试液用新沸冷H2O溶解配制，减少水中溶解的氧对测定的影响。滴定在酸性环境下进行，在酸性介质中维生素C受空气中氧的氧化速度减慢。供试品溶液配制好后应立即滴定，减少O2的干扰。附加剂干扰的排除,片剂滑石粉过滤,Na2SO3NaHSO3Na2S2O3Na2S2O5,2,6-二氯靛酚滴定法原理：,第四节维生素E,维生素E为-生育酚及其各种酯类，有天然品和合成品之分。天然品为右旋体，合成品为消旋体。右旋体与消旋体生物效价比为1.4：10。基本结构与主要性质,基本结构为苯并二氢吡喃衍生物，苯环上有一个乙酰化的酚羟基。,（苯并二氢吡喃醇）,主要性质溶解性：易溶于无水乙醇、丙酮、乙醚，不溶于水。水解性：苯环上的乙酰化的酚羟基，在酸性或碱性溶液中加热可水解成游离生育酚。氧化性：在无氧条件下对热稳定，对氧十分敏感，遇光、空气可被氧化为-生育醌和-生育酚二聚体。,鉴别试验硝酸反应,三氯化铁-联吡啶反应,血红色,紫外分光光度法,薄层色谱法,薄层板：硅胶G,展开剂：环己烷-乙醚(41),显色剂：硫酸（105，5min）,维生素E：Rf=0.7,杂质检查酸度检查维生素E的制备过程中引入的游离醋酸。,生育酚检查维生素E制备过程中未酯化的生育酚。原理：利用游离生育酚的还原性，将硫酸铈定量还原成硫酸亚铈。在一定条件下以0.1g本品消耗硫酸铈滴定液（0.01mol/L）的体积赖控制游离生育酚的限度。,指示剂：二苯胺（亮黄灰紫）,（M生育酚=430.8）,计算（滴定液消耗体积）：,药典规定,消耗硫酸铈液（0.01mol/L）1.0ml,设：应消耗硫酸铈液Vml,0.011.0实际浓度V,若硫酸铈液浓度不是0.01000mol/L，应重新计算硫酸铈的消耗量,含量测定气相色谱法中国药典（2019）采用气相色谱法测定维生素E的含量。,选择性好灵敏度高速度快分离效能好,GC特点,载气：N2固定相：硅酮（OV-17）；涂布浓度：2%担体：硅藻土或高分子多孔小球柱温：265检测器：氢火焰离子化检测器(FID)内标：正三十二烷计算：内标法系统适应性试验：n500，R2,VitE测定的色谱条件,供试液（样品+内标）,对照液（对照+内标）,测定方法,计算方法,例,内标液：取正三十二烷加正己烷溶解并稀释成1.0mg/ml溶液,对照液：精密称取VitE对照品0.2019g置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标液10ml，密塞，振摇使溶解，取13ul注入GC仪，测定，计算。,供试液：精密称取供试品0.2019g置棕色具塞锥形瓶中，精密加入内标液10ml，密塞，振摇使溶解，取13ul注入GC仪，测定，计算,讨论,含量计算,（MVitE=472）,在三氯醋酸或盐酸存在下，经水解、脱羧、失水后，加入吡咯即产生蓝色产物的药物应是（）氯氮卓维生素A普鲁卡因盐酸吗啡维生素C,自测题,中国药典（2019年版）采用以下何法测定维生素E含量（）酸碱滴定法氧化还原法紫外分光光度法气相色谱法非水滴定法,中国药典（2019年版）采用气相色谱法测定维生素E含量，内标物质为（）正二十二烷正二十六烷正三十烷正三十二烷正三十六烷,下列药物的碱性溶液，加入铁氰化钾后，再加正丁醇，显蓝色荧光的是（）维生素A维生素B1维生素C维生素D维生素E,既具有酸性又具有还原性的药物是（）维生素A咖啡因苯巴比妥氯丙嗪维生素C,维生素C的鉴别反应，常采用的试剂（）碱性酒石酸铜硝酸银碘化铋钾乙酰丙酮三氯醋酸和吡咯,测定维生素C注射液的含量时，在操作过程中要加入丙酮，这是为了（）保持维生素C的稳定增加维生素C的溶解度使反应完全加快反应速度消除注射液中抗氧剂的干扰,能发生硫色素特征反应的药物是（）维生素A维生素B1维生素C维生素E烟酸,使用碘量法测定维生素C的含量,已知维生素C的分子量为176.13，每1ml碘滴定液(0.1mol/L)相当于维生素C的量为（）17.61mg8.806mg176.1mg88.06mg1.761mg,维生素E的鉴别试验有（）硫色素反应硝酸氧化呈色反应硫酸-乙醇呈色反应碱性水解后加三氯化铁乙醇液与2,2-联吡啶乙醇液呈色反应,维生素A与反应即显蓝色，渐变成紫红色；反应需在条件下进行。,三氯化锑,无水,维生素E在酸性或碱性溶液中加热可水解生成游离，当有氧或其他氧化剂存在时，则进一步被氧化成醌型化合物，尤其在碱性下更易发生。,生育酚,维生素B1的噻唑环在介质中可开环，再与嘧啶环上氨基缩合环合，然后经等氧化剂氧化生成具有荧光的，加荧光消失，加碱荧光又显出；,碱性,铁氰化钾,硫色素,酸,维生素C是元弱酸，具有强性，易被氧化剂氧化，常用作剂。,一,还原,抗氧,维生素E中游离生育酚的检查时规定消耗硫酸铈滴定液（0.01mol/L）不得过1.0ml，现硫酸铈滴定液的实际浓度为0.01053mol/L，应不得超过多少ml？0.950.970.990.921.05,中国药典维生素C的含量测定取本品约0.2g，精密称定，加新沸过的冷水100ml与稀醋酸10ml使溶解，加淀粉指示液1ml，立即用碘滴定液(0.1mol/L)滴定，至溶液显蓝色，在30秒内不褪。每1ml碘滴定液(0.1mol/L)相当于8.806mg的C6H8O6。已知：取样量为0.2084g，消耗碘滴定液（0.09981mol/L）22.75ml。,要求：（1）解释划线部分（2）计算本品的含量是否符合规定（规定本品含C6H8O6应不低于99.0%）,结论：