脂联素基因多态性与动脉粥样硬化关系的研究开题报告.ppt

脂联素基因多态性与动脉粥样硬化关系的研究,绍兴文理学院：XXX指导老师：XXXXXXX,一、研究背景二、研究目的三、研究方法四、可行性分析五、技术路线六、准备工作七、时间进度安排,一、研究背景（1）,1995年SchererPE和HuE分别独立地在小鼠脂肪组织中发现了一种新的蛋白质，分别命名Acrp30和AdipoQ；1996年在人血浆内分离获得人脂联素（adiponectin），即明胶结合蛋白28（GBP28）；1999年命名为脂联素。,目前已有许多有关脂联素基因的单核苷酸多态性(singlenucleotidepolymorphism,SNP)与动脉粥样硬化的报道，但结果不尽一致。,研究背景（2）,Filippi等研究发现：脂联素基因与早发冠心病显著相关，在年轻的冠心病患者（50岁），脂联素基因的单核苷酸多态性（+276GT）与冠心病有显著的相关性,且携带有SNP+276GT的患者脂联素水平明显降低。KimSH等研究发现：携带SNP+276GT与动脉粥样硬化没有明显相关性，而携带SNP+45TG基因型的患者有更高的动脉粥样硬化风险。,脂联素与胰岛素抵抗的相关性Menzaghi等发现脂联素基因45位和276位SNP都与胰岛素抵抗的一些特性有明显的相关性，而由两个SNP组成的单倍体与胰岛素抵抗的许多特性有显著的相关性：纯合子个体表现为体重增加，收缩压和舒张压升高，胰岛素和空腹血糖水平上调而血浆脂联素水平则降低；,而在意大利高加索人中也发现脂联素基因SNP+276位GT与高BMI和高胰岛素抵抗指数相关，也与血浆脂联素水平有关，未发现SNP+45TG与胰岛素抵抗的相关性；在法国高加索人中,则未发现这两个SNPs与2型糖尿病和胰岛素抵抗的相关性。,研究背景（3）,这些研究表明脂联素是动脉粥样硬化的保护因素，但其抑制动脉粥样硬化的具体机理仍有待进一步研究。,研究背景（4）,二、研究目的,1）了解台州地区脂联素基因的多态性情况；2）研究脂联素基因的不同多态性位点与动脉粥样硬化的关系；3）寻找与动脉粥样硬化密切相关的脂联素基因多态性位点。,三、研究方法,（1）研究对象病患组：100例确诊动脉粥样硬化的患者，整理详细病史资料（包括患者年龄，性别，身高，体重，是否吸烟，血压以及临床表现等）对照组：100例健康对照组人群，排除肝、肾、甲状腺病变和糖尿病等（年龄、性别等与动脉粥样硬化患者匹配）,（2）冠状动脉狭窄程度以及颈动脉狭窄程度评估应用数字血管造影机（DSA）对动脉粥样硬化患者进行冠状动脉造影，观测血管病变的数量、部位，病变的程度、性质等，判断患者冠状动脉粥样硬化狭窄程度；应用彩色多普勒超声对颈动脉粥样硬化狭窄程度进行评估。,（3）血清血脂水平、血糖水平、心肌酶水平测定1）对所有研究对象采集其促凝血4ml；2）高速离心促凝血标本，分离血清；3）用雅培全自动生化分析仪及其配套试剂测定血脂水平、血糖以及心肌酶水平；,（4）脂联素基因多态性的判读1）采集所有研究对象的EDTA-K2抗凝血5ml；2）对EDTA-K2抗凝血，利用DNA提取试剂盒，提取全血DNA；3）利用设计的引物进行PCR扩增，再针对特异位点如SNP45位点、SNP276位点、SNP11377位点和SNP11391位点进行酶切，分析脂联素基因的多态性。,（5）统计学分析采用SPSS15.0统计软件，结合患者临床资料，影像学资料、超声资料以及脂联素基因不同多态性位点情况综合分析脂联素基因多态性与动脉粥样硬化的关系，并寻找与动脉粥样硬化密切相关的脂联素基因多态性位点。,四、可行性分析,我们与临床科室有密切联系，可收集确诊动脉粥样硬化病人的详细病史资料我院有优秀的心血管内科医生以及影像科医生、超声科医生，可通过DSA、彩色多普勒超声对动脉粥样硬化患者的冠状动脉狭窄程度以及颈动脉的狭窄程度进行评估检验科有充足的实验设备与优秀的人才资源,五、技术路线,确诊AS患者,对照组,临床资料收集,外周血采集,冠状动脉造影,彩色多普勒超声,统计学分析,促凝血4ml,高速离心留取血清,生化指标测定,EDTA-K2抗凝血5ml,提取外周血DNA,PCR扩增,PCR产物纯化,酶切,脂联素基因多态性分析,六、准备工作,收集了80例动脉粥样硬化病人EDTA-K2抗凝血和促凝血（-80冷藏），且已经整理其一部分病史资料，包括患者的年龄、性别、肝肾功能检查、心肌酶检查、血脂检查等各项生化检测资料；给患者做了DSA造影，彩色多普勒超声检测，根据这些检测结果可判断患者冠状动脉粥样硬化和颈动脉粥样硬化狭窄程度。,七、时间进度安排,2009.9-2009.11完成标本收集工作，并收集整理动脉粥样硬化患者的详细病史资料完成血清血糖、血脂、心肌酶等的测定提取全血DNA，完成引物设计,