（植物病理学专业论文）真菌源激活蛋白对水稻秧苗生长与抗性影响研究.pdf

摘要 激活蛋白 是从交链抱真菌 ( a l t e m a r ia s p )中 提取的一种内 源性蛋白 质，是 一种高效， 广谱性的， 对人畜无毒性，无污染的新型诱导剂， 该蛋白通过与植物 细胞膜上受体结合激活细胞内一系列生化反应， 刺激植物种子萌发、 生长， 诱导 植物对病害产生免疫抗性。 本实验研究了蛋白的获得和提纯， 用不同浓度激活蛋 白处理水稻秧苗和种子， 观察其生长变化规律， 和与生长相关的酶: 唬伯酸脱氢 酶 ( 5 d h ) , 淀粉酶 ( a m y l a s e ) 、 丙酮酸激酶 ( p k ) 的活性变化规律观察其对水 稻稻瘟病的抑菌和诱抗作用以及用基因芯片测试该蛋白 处理后水稻秧苗基因表 达差异，结果如下: 1 ,真菌源激活蛋白的提取纯化和电泳谱带鉴定，为4 2 k d蛋白 2 、真菌源激活蛋白对水稻秧苗根长、株高的影响: 2 g g -m l -， 浓 渡 激活蛋白 为 最 佳， 促 进 水 稻 秧苗 根 苗 生 长， 而6 g g -m l - ， 对水 稻 秧苗 有 抑 制 作 用， 水 稻 秧苗生 长 性 状 较 差， 1 g g -m l ， 差 异 不 明 显。 3 、真菌源激活蛋白 对水稻生长相关酶活性影响 1 ) 1 g g -m l , 2 g g -m l - 1 , 6 g g -m u 1一均 激 活 水 稻 秧苗 唬拍 酸 脱氢 酶 活 性， 5 d 时 均 高 于 对 照， 2 g g -m l - 浓度 处理 活 性比 对 照 高6 7 . 1 % ， 持 续 时 间 最 久。 ( 2 ) 1 g g -m l 1 , 2 g g -m l - 1 , 6 g g -m l 1 均 激 活 水 稻 秧 苗 淀 粉 酶 活 性 ， 6 g g -m l - 1 浓 度 处 理的 酶 活 性3 d 时 升高 幅 度 最 大， 但 很 快 下降 ， 2 g g -m l 浓 度处 理， 活 性 持续时间最长，5 d 时与对照相比高6 3 .2 %a ( 3 ) l g g -m l 1 , 2 g g -m l - 1 , 6 g g -m l ， 均 对 水 稻 秧 苗 丙 酮 酸 激 酶 有 影 响 ， 2 g g -m l - 1 浓 度 处 理的 秧 苗 丙 酮酸 激酶 活性 最高， 且 持 续 时间 较 长， 5 d 时 达3 7 8 % , 6 g g -m l - 1 则有抑制作用。 4 、真菌源激活蛋白 对稻瘟病的抑菌实验和抗性诱导作用 ( 1 )真菌源激活蛋白对稻瘟病菌无直接抑制作物 ( 2 )真菌源激活蛋白对水稻稻瘟病的诱抗效果不明显 5 、 基因 芯片 对2 g g -m l - ， 激活蛋白 处理后水 稻秧苗 第7 天 测试， 结果表明 有 大量基因表达变化。 以 上结果说明， 适宜浓度真菌源激活蛋白 能刺激水稻秧苗生长， 激活与水稻 生长相关酶活性， 但对水稻稻瘟病诱抗不明显， 激活蛋白处理后基因变化较复杂， 本实验从分子水平和代谢水平对激活蛋白作用于水稻的方式和机理，进行了研 究， 为激活蛋白在水稻生产上的应用和进一步的分子机理研究提供了初步的理论 依据。 关键词:真菌源激活蛋白:水稻秧苗;墟拍酸脱氢酶 ( s d h) ;淀粉酶 ( a m y l a s e ) :丙酮酸 激酶 ( p k ) ;诱导抗性: 水稻基因芯片 ab s t r a c t a e n d o g e n i c a c t i v a t o r p r o t e in i s o l a t e d f r o m a l t e ma r ia w a s a h i g h p e r f o r m a n c e , w i d e - s p e c t r u m , n o n - t o x i c i ty t o h u m a n b e i n g s a n d l i v e s t o c k s , n o n - p o l l u t i o n a l a n d n o v e l i n d u c e r .t h e a c t iv a t o r p r o t e i n c o u l d a c t i v a t e a s e r i e s o f re s p o n s e s , a n d a c t i v a t e s e e d b o u r g e o n a n d g r o w t h a n d i n d u c e i m m u n o re a c t i o n t o a l a r g e n u m b e r o f p a r a s i t e s o f p l a n t b y b i n d i n g t o t h e a c c e p t o r o f c e l l m e m b r a n e . i n t h i s s t u d y , g r o w t h s t a t u s o f r i c e s e e d l i n g , t h e d y n a m i c c h a n g e o f s o m e e n z y m e s p e r t i n e n t t o g r o w t h o f s e e d l in g , s u c h a s a m y l a s e , s d h a n d p k , t h e i n d u c e r e s i s t a n c e t o ma g n a p o r th e g r i s e a a n d t h e d i r e c t i n h i b i t i o n a g a i n s t a l a r g e n u m b e r o f p l a n t p a r a s i t e s w e r e i n v e s t i g a t e d a ft e r b e i n g t r e a t e d w i t h t h i s p r o t e i n o f d i ff e r e n t c o n c e n t r a t i o n , w h i c h c o n c e n t r a t i o n w a s s e p a r a t e ly i u g - m l , 2 u g m: a n d 6 u g m l - . a n d u n d e r t h e s a m e c o n d it io n , t h e d i ff e r e n c e o f g e n e e x p r e s s i o n o f r i c e s e e d l i n g s w a s a l s o c o n d u c t e d u s in g g e n e c h i p . t h e r e s u l t s w e re a s f o l l o w s : i .t h e m o l e c u l a r w e i g h t o f t h e a c t i v a t o r p r o t e i n o r i g i n a t i n g fr o m f u n g i w a s 4 2 k d b y e l e c t r o p h o re s i s a f t e r b e i n g e x t r a c t e d a n d p u r i fi e d . 2 .e ff e c t o f a c t i v a t o r p r o t e i n o n ro o t l e n g t h a n d p l a n t h e i g h t o f r i c e s e e d l i n g s : w h e n th e c o n c e n t r a t io n o f a c t iv a to r p r o t e in w a s 2 u g m l - , g r o w th o f r ic e s e e d l i n g s w a s e n h a n c e d . w h i le t h e c o n c e n t r a t io n w a s 6 u g m l , g r o w th o f r ic e s e e d l i n g s w a s i n h i b i te d . h o w e v e r , t h e c o n c e n t r a t io n w a s i t 3 8 3 0 m g / k g( 中 南大学 湘雅医院 毒 理学试验室提供) ，该蛋白 对人畜均无毒性，是一种安全的生物激发剂， 有着广 泛的应用前景。 该种蛋白质主要通过与细胞表面受体结合激活植物体内生长和免 疫系统，促进植物生长，诱导植物抗性，从而达到促生增产的目 的。 本试验是研究真菌源激活蛋白对水稻的作用， 及作用的方式、 作用的分子机 理。 研究真菌源激活蛋白有无对稻瘟病的直接抑制作用和能否诱导水稻秧苗对稻 瘟病的系统抗性。 通过不同浓度梯度的激活蛋白对水稻生长相关的玻拍酸脱氢酶 ( s d h ) . 淀粉酶 ( a m g l a s e ) 、 丙 酮酸 激酶 ( p k ) 动态 变化规 律的 影响， 找出 较 适宜的能促进水秧苗生长， 进而促进增产的真菌源激活蛋白的施用的时机， 施用 的浓度， 同时用基因芯片测试最佳浓度真菌源激活蛋白的处理后三叶一星期水稻 秧苗基因的变化规律为进一步的真菌源激活蛋白对水稻秧苗可能的作用方式提 供研究方向，为真菌源激活蛋白 在水稻生产上的应用提供理论基础 6 研究的内容和实验设计思路 本实验从代谢水平和分子水平两方面对真菌源激活蛋白 对水稻秧苗作用的 机理和方式浓度进行探讨，进行了以下几个方面的研究。 6 . 1真菌源激活蛋白的提取、纯化、浓度测定 6 . 1 . 1激活蛋白的 提取、 浓缩 6 . 1 .2浓 缩后粗蛋白 的 浓 度测定 6 . 1 .3粗蛋白 的进一步纯化 6 . 1 .4电泳谱的鉴定 6 .2真菌源激活蛋白 对水稻根长株高的影响 6 .3真菌源激活蛋白 对水稻生长相关的酶作用规律 6 .3 . 1不同浓度激活蛋白对玻拍酸脱氢酶 ( s d h )的动态影响 6 .3 . 2不同 浓度 激活蛋白 对淀粉酶 ( a m g l a s e ) 的 动 态影响 6 .3 . 3不同浓度激活蛋白对丙酮酸 ( p k)的动态影响 6 .4真菌源激活蛋白 对水稻稻瘟病病菌的抑制实验和对水稻的诱抗作用测试 6 . 5基因芯片对施用激活蛋白后三叶一星期的水稻秧苗基因变化进行测试， 找出 其对水稻基因作用变化规律，在分子机理上，作一个探讨。 本研究技术路线如图所示 病源真菌的培养 蛋白的提取 蛋白的制剂 对水稻根长、 株高的影响 对玻拍酸脱氢酶、 淀粉酶、丙酮酸激 酶的动态影响 蛋白对稻瘟病菌 抑菌实验和对水 稻的诱抗作用 蛋白 对稻瘟病菌 抑菌实验和对水 稻的诱抗作用 图 1 技术路线 f i g . 1 e x p e ri me n t c o u r s e 第二章真菌源激活蛋白的 提取、纯化和浓度测定 1 病源真菌的培养 1 . 1 材料与方法 菌种:交链饱菌 ( a l t e r n a r i a ) 培养基配方:p d a ( 土豆培养基) 土豆 蔗糖 水 1 .2真菌的培养 2 8 0c 置摇床中液体p d a发酵摇瓶培养4 8 h 2 0 0 . 0 g 2 0 . 0 g 1 0 0 0 . o ml 2 . 1 真菌蛋白的提取 提取方法和保存 用真空抽滤装置滤取菌丝体、机械粉碎*超声波粉碎*离心出上清液、蒸 发 浓 缩 一 测 定 粗 蛋 白 含 量 低温保存浓缩液 制成可湿性粉剂 提取液配方:t r s - e d t a提取液 ( 见附录) 2 .2粗提液浓度和蛋白生物制剂有效成分含盘测定 参照 b r a d f o r d ( 1 9 7 6 )的蛋白浓度测定方法，以牛血清蛋白 ( b s a)为标 准蛋白，去离子水调零， u v - 2 5 5 0 型分光光度计 ( s h i m a d z u ) ， 采用z v p r o b e 软 件分 析， 电 脑绘制标准曲 线。 生 物 制剂用一定 量去离 子 水稀释后装入e p p e n d o r f 管5 4 1 5 d微型 离心机离心片刻， 取上清液于人 . 二 5 9 5 处比 色测定蛋白 浓度。粗 提液直接测定。 a c tiv a to r ( % ) 二 ( 一 xvx 1 0 0 % m c -所测蛋白 浓度 ( m g / m l ) v 稀释的去离子水体积 ( m l ) m 一称取的生物制剂质量 ( m g ) 3 激活蛋白粗蛋白的纯化 31材料与方法 a l t e r n a r i a a p .菌株系中国 农业科学院 环境与发展研究所蛋白 质药物工程实 验室保存并提供。 植物激活蛋白来源: 中国农业科学院环境与发展研究所蛋白 质 药物工程实验室提供 溶液的配制 ( 1 ) 磷酸缓冲液( f b s ) 的 pe制: d d h 2 0 8 0 0 m l ; k h 2 p o 4 0 . 2 4 g ; n a 2 h p o 4 1 . 4 4 g ; k c 1 0 .2 g ; n a c l 8 g 用h c l 调 节 溶 液的p h 值 至7 .5 ， 定 容 至1 l 。 分 装 后1 5 p s i ( 1 .0 5 k g / c m 2 ) 高 压 蒸 汽 灭 菌2 0 分钟，室温备用. ( 2 ) 3 0 % 的丙烯酞胺: 丙烯酞胺2 9 g ; n , n 一 双亚甲 基丙 烯酞胺: 馆加去离子水定容至i o o m l ( 3 ) 5 倍s d s 电 泳缓冲液: t ri s : 碱1 5 ; s d s 5 g : 甘氨酸7 2 g 调p h为8 .3 ， 加去离子水定 容至1 0 0 m l ( 4 ) 3 倍的s d s -p a g e 样品 缓冲液: 蔗糖1 5 g ; s d s 3 .4 5 g ; t ri s 碱1 .0 3 4 g ; 卜 琉基乙 醇7 . 5 m l ; 澳 酚蓝少 量; 加去离子水定容至5 0 m l ( 5 ) s d s -p a g e 分离 胶( 1 2 % ) : 3 0 %的丙烯酞胺4 . 0 m l ; 1 . 5 m o u 1 t ri s ( p h 8 . 8 ) 2 . 5 m l ; 1 0 % s d s 0 . 1 m l ; 1 0 % 过硫酸钱 ( 6 ) 0 . 1 m l : t e me d o . 0 0 4 m l ;去离子水 3 . 3 m l :总体积 l o m l s d s -p a g e 浓缩胶( 5 % ) : 3 0 % 的 丙 烯酞胺6 7 0 1 1 ; 1 . o m o l / 1 t ri s ( p h 6 . 8 ) 5 0 0 1 1 ; 1 0 % s d s 4 0 1 1 1 ; 1 0 % 过硫酸按4 0 u 1 ; t e m e d 4 m1 ; 去离子水2 7 2 0 k 1 ; 总体积4 0 0 0 u 1 ( 7 ) 染色液: 0 . 2 5 g 考马斯亮兰r - 2 5 0 : 1 0 m l 冰乙酸; 4 5 m l 甲 醇: 4 5 m l 去离广水; 总 体积 io o m l ( 8 ) 脱色液: l o m l 冰乙酸;4 5 m l甲醇;4 5 m l去离子水;总体积 1 0 0 m l 3 .2粗蛋白的进一步纯化 3 . 2 ， i分级沉淀 先用 1 0 % ( w n) 浓度的 硫酸钱在 0 条件下沉淀粗蛋白 半个小时， 在4 下 1 0 0 0 0 r p m离心3 0 m i n ， 取上清， 再加入硫酸钱至5 0 % ( w n) ; 在。 条件下沉淀 半个小时， 在4 下l 0 0 0 o r p m离心3 0 m i n ， 取沉淀， 溶 解后 用于丙 酮分级 沉淀。 先用 2 0 % (y n) 浓度的预冷丙酮在 。 条件下沉淀半个小时，在 4 下 1 0 0 0 0 r p m离心3 0 m in ， 取上 清， 再加入预冷丙 酮至5 0 % ( v n) 在。 条 件下 沉淀 半个小时， 在4 下1 0 0 0 0 r p m离心3 0 m i n , 取沉淀， 真空干燥5 m i n , 溶解， 用 于过离子柱。 3 . 2 . 2过离子柱 选用丙 酮 沉淀 后获得的 蛋白 过离子柱， 选用柱子是h i t m p q f f lm m ， 流动 相: ( a ) 5 0 m m o l/ l t r is - h c i . ( b ) a + z m o l几k c i : 流 速: in f / m i n , 梯 度 洗 脱 。 过 疏 水柱 从离 子 柱 上 洗 脱 下 来的目 的 峰中， 加入 硫酸 钱至2 m o l/ l ， 选 用 疏 水 柱h i t r a p p h e n y l p f ( h i g h s u b ) i m l , h i t r a p b u t y l f f i m l , h i t r a p o c ty l f f i m l ,流动相: ( a ) 5 0 m m o l / l t r i s -h c i 和2 m o l/ l 硫酸按( p h 7 . 2 ) . ( b ) 去离子水; 流速: 1 m l / m i n , 梯度洗脱。 4 s d s -聚丙烯酞胺凝胶电泳 将粗蛋白 纯化后得到的 较纯的a l t e r n a r i a . s p . 菌株激活蛋白 跑s d s 一聚丙 酞胺凝胶电泳，检测是否有目的蛋白的存在。 4 . 1样品的制备及电泳 4 . 1 . 1样品的制备 将较纯蛋白 液3 0 b t 1 ， 加入6 闪6 倍凝胶上样缓冲液， 沸水浴3 -5 分钟， 取 2 5 闪点 样。 浓缩胶浓度为5 % ，分离胶浓度为1 2 % ( 7 ) 染色液： 0 2 5 9 考马斯亮兰r - - 2 5 0 ；1 0 m l 冰乙酸；4 5 m l 甲醇：4 5 m l 去离广水：总 体积l o o m l ( 8 ) 脱色液： 1 0 m l 冰乙酸；4 5 m l 甲醇；4 5 m l 去离子水；总体积1 0 0 m l 3 2 粗蛋白的进一步纯化 32 ，1 分级沉淀 先用l 蝴( w ) 浓度的硫酸铵在o c 条件下沉淀粗蛋白半个小时，在4 下 1 0 0 0 0 r p m 离心3 0 m i n ，取上清，再加入硫酸铵至5 0 ( w v ) ；在0 c 条件下沉淀 半个小时，在4 c 下1 0 0 0 0 r p m 离心3 0 m i n ，取沉淀，溶解后用于丙酮分级沉淀。 先用2 0 ( v v ) 浓度的预冷丙酮在o 条件下沉淀半个小时，在4 下 1 0 0 0 0 r p m 离心3 0 m i n ，取上清，再加入预冷丙酮至5 0 ( v v ) 在o c 条件下沉淀 半个小时，在4 c 下1 0 0 0 0 r p m 离心3 0 m i n ，取沉淀，真空干燥5 m i n ，溶解，用 于过离子柱。 3 2 ，2 过离子柱 选用丙酮沉淀后获得的蛋白过离子柱，选用柱子是h i t r a p q f f l m m ，流动相： ( a ) 5 0 m m o l l t r i s - - h c l 、( b ) a + 2 m o l lk c i ：流速：i n f i m i n ，梯度洗脱。过疏水柱 从离子柱上洗脱下来的目的峰中，加入硫酸铵至2 m o l l ，选用疏水柱h i t r a p p h e n y l p f ( h i g h s u b ) l m l ，h i t r a pb u t y l f f l m l ，h i t r a po c t y l f f t m l ，流动相：( a ) 5 0 m m o l l t r i s - - h c l 和2 m o l l 硫酸铵( p h 7 2 ) 、( b ) 去离子水；流速：l m l m i n ， 梯度洗脱。 4 s d s 一聚丙烯酰胺凝胶电泳 将粗蛋白纯化后得到的较纯的a l t e r n a r i a s p 菌株激活蛋白跑s d s 一聚丙 酰胺凝胶电泳，检测是否有目的蛋白的存在。 4 1 样品的制备及电泳 4 1 1 样品的制备 将较纯蛋白液3 0 b t l ，加入6 p l6 倍凝胶上样缓冲液，沸水浴3 5 分钟，取 2 5 i _ t l 点样。浓缩胶浓度为5 ，分离胶浓度为1 2 。 4 1 2 电泳 1 3 m a 电泳至溴酚蓝进入分离胶后1 7 m a 电泳至溴酚蓝到胶板底部。 4 1 3 染色及脱色 小心取出凝胶，用考马斯亮兰r 2 5 0 染色液染色1 5 - 2 0 分钟，用脱色液脱 色2 3 次，至蛋白条带清晰，背景透明为止。 5 结果与分析 s d s p a g e 电泳 结果显示：a l t e r n a r i as p 菌株中存在一种4 2 k d 左右的蛋白质( 见图2 ) 9 7 。t 轴 6 6 2 脑 4 锄 3 1 e e 9 7 幸k d 配2 畿d 4 2 1 d 4 3 1 c 图2 ；a l t e r n a r i a s p 菌株s d s - p a g e 分析 f i g2 ：s d s - p a g ea n a l y s i so f a l t e r n a r i as p 3 1 k 1 ) 第三章 植物激活蛋白对水稻秧苗生长及 相关酶活性的影响 经过一段时间用植物激活蛋白 处理水稻种子、 喷施水稻秧苗发现该蛋白有刺 激水稻种子萌发，促进水稻秧苗生长的作用，水稻生长到 巧天左右时，处理与 对照差异明显， 酶活性明显升高， 酶活性在生长一段时间后回复， 各处理对酶活 性影响有不同。 1 . 1 植物激活蛋白对水稻秧苗生长株高、根长的影响 材料与方法 1 . 1 . 1试验材料 ( 1 ) 水稻品种 ( 2 )蛋白制剂 中花1 0 号 ( 中国农科院 作物所提供) 。 由中国农科院环发所邱德文博士试验室提取，浓度为 2 . 4 m g l m l . 1 . 1 . 2研究方法 ( 1 )水稻秧苗生长测定: 试验于2 0 0 4 年夏在中国农科院环发所温室内 进行。采用营养液泡沫板悬浮 培 养， 温 度3 0 左 右 把 激活 蛋白 分 别 稀 释为 a g -m , 2 1i g -m l - l , 6 u g -m l - 三个稀释度， 每稀释度三个重复，以三个重复的清水作对照浸水稻种 2 d ，崔芽 i d 后同时播种。 1 5 d 取3 0 株以上样本测量秧苗株高根长统计分析。 数据见表1 - 4 . 2 结果与分析 2 . 1激活蛋白浸种对秧苗生长发育的影响 试验结果表明 ( 表 3 - 5 )各浓度激活蛋白处理与空白 对照比均对水稻的生长 有 影 响 ， 2 p g -m l - ， 浓 度处理 种 子 秧苗 生 长 旺 盛， 与 空白 对 照 相比 根长、 株高 都有 明 显 差 异， 苗 高 、 根长 都比 对照 长， 生 长 旺 盛。 6 u g ,m l - 1 浓 度处 理 种子 与空白 对 照相比秧苗生长较差。见表5 .显著性差异p = 0 .0 1 0 表 1 不同浓度激活蛋白 对水稻秧苗株高影响数据 t a b l e 1 t h e d a t a o f t h e i n fl u e n c e o f d i ff e r e n t c o n c e n t r a t i o n o f _ _ _ _丝_ _ _ _ _ _ _ _ _ _1 p g -m l _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ 1 2 3 1 2 3 5 . 7 0 4 . 4 0 9 . 4 0 7 . 7 0 9 . 6 0 8 . 5 0 1 1 . 3 0 5 . 5 0 9 . 5 0 1 2 . 7 0 9 . 0 0 1 1 . 0 0 1 2 . 4 0 1 0 . 2 0 6 . 5 0 1 1 . 5 0 9 . 3 0 1 2 . 7 0 1 1 . 5 0 8 . 0 0 4 . 0 0 1 2 . 3 0 1 4 . 2 0 1 5 . 0 0 1 1 . 0 0 2 . 3 0 1 1 . 0 0 1 5 . 2 0 1 1 . 5 0 9 . 7 0 1 2 . 8 0 1 1 . 3 0 1 2 . 6 0 1 1 . 3 0 1 1 . 3 0 1 4 . 2 0 1 2 . 0 0 1 5 . 0 0 1 2 . 8 0 1 2 . 9 0 1 2 . 7 0 1 1 . 4 0 1 3 . 5 0 6 . 5 0 1 3 . 7 0 1 3 . 0 0 1 1 . 7 0 1 2 . 4 0 1 1 . 0 0 1 4 . 5 0 1 2 . 0 0 1 1 . 8 0 1 4 . 5 0 1 3 . 1 0 1 4 . 2 0 1 0 . 6 0 1 0 . 0 0 4 . 4 0 7 . 0 0 1 3 . 0 0 7 . 0 0 9 . 0 0 3 . 0 0 1 3 . 3 0 1 2 . 0 0 8 . 5 0 8 . 5 0 4 . 5 0 5 . 0 0 5 . 3 0 1 2 . 7 0 1 2 . 4 0 1 1 . 3 0 1 0 . 8 0 1 2 . 8 0 1 3 . 7 0 1 1 . 3 0 1 1 . 0 0 7 . 5 0 1 2 . 7 0 8 . 0 0 6 . 5 0 1 0 . 3 0 1 2 . 2 0 1 2 . 7 0 5 . 5 0 3 .2 0 1 0 . 8 0 1 2 . 0 0 7 . 9 0 1 2 . 4 0 1 1 . 0 0 4 . 0 0 7 . 2 0 6 . 5 0 1 0 . 4 0 6 . 3 0 1 3 . 7 0 9 . 7 0 1 3 . 3 0 5 . 5 0 6 . 8 0 8 . 2 0 1 2 . 5 0 7 . 3 0 8 . 0 0 8 . 7 0 1 1 . 7 0 1 0 . 0 0 5 . 2 0 6 . 3 0 1 1 . 0 0 1 3 . 3 0 6 . 5 0 1 2 . 4 0 9 . 0 0 5 . 2 0 7 . 8 0 1 3 . 0 0 9 . 3 0 9 . 0 0 nunun叶 ，口066 . j斗，.八u内j 月，五.且飞1一.1 1 4 . 8 0 1 1 . 6 0 1 1 . 0 0 7 . 6 0 8 . 0 0 1 2 . 7 0 1 1 . 0 0 9 . 5 0 1 5 . 5 0 1 1 . 0 0 9 . 0 0 1 1 . 8 0 1 2 . 3 0 1 3 . 0 0 9 . 5 0 6 . 5 0 6 . 2 0 7 . 8 0 8 . 6 0 1 4 . 6 0 1 2 . 5 0 7 . 8 0 8 . 0 0 7 . 1 0 1 2 . 0 0 1 2 . 0 0 7 . 2 0 1 4 . 6 0 1 2 . 0 0 1 2 . 0 0 8 . 6 0 1 3 . 4 0 1 1 . 5 0 6 . 2 0 1 2 . 5 0 9 . 0 0 1 4 . 8 0 7 . 2 0 1 1 . 6 0 8 . 0 0 1 0 . 3 0 5 . 5 0 9 . 4 0 1 4 . 5 0 9 . 3 0 1 1 . 5 0 1 3 . 3 0 1 4 . 2 0 1 2 . 0 0 1 3 . 0 0 1 1 . 5 0 1 2 . 7 0 6 . 5 0 1 3 . 5 0 1 0 . 3 0 1 1 . 8 0 1 3 . 4 0 1 0 . 7 0 8 . 5 0 1 1 . 3 0 9 . 6 0 1 0 . 0 0 8 . 6 0 9 . 7 0 1 4 . 0 0 1 2 . 8 0 8 . 7 0 1 1 . 5 0 1 3 . 2 0 1 4 . 2 0 1 3 . 1 0 9 . 3 0 1 1 . 8 0 表2 不同浓度激活蛋白对水稻秧苗株高影响数据 t a b l e 2 t h e d a t a o f t h e i n fl u e n c e o f d i ff e ren t c o n c e n t r a t i o n o f 一 一 一 一 一 一 一a c tiv a t o r p ro t e in o n th e h ig h th o f r i c e s e e d in g 2 g g - m l 一升一 一 一一_ 一一_ _ 如 - _ _ _ . : 艺 一_ _ 一_ 一_ 一 一 _ _ 一石匕一一2一一一3一一 一 1 2 3 一一-一一旧一.一一恤曰. 一 1 7 . 6 0 1 7 . 0 0 1 1 . 9 0 1 4 . 9 0 7 . 9 0 1 7 . 5 0 1 5 . 9 0 1 7 . 4 0 1 6 . 1 0 1 3 . 9 0 1 4 . 5 0 8 . 5 0 1 3 . 7 0 7 . 6 0 1 5 . 0 0 8 . 5 0 1 3 . 0 0 8 . 5 0 1 3 . 7 0 1 8 . 0 0 1 7 . 0 0 9 . 0 0 8 . 5 0 1 3 . 8 0 9 . 7 0 1 5 . 5 0 1 0 . 5 0 1 8 . 3 0 7 . 4 0 9 . 0 0 1 1 . 5 0 1 5 . 5 0 1 2 . 2 0 1 7 . 4 0 1 4 . 5 0 1 3 . 0 0 1 8 . 5 0 1 8 . 2 0 1 2 . 0 0 1 3 . 0 0 1 4 . 9 0 1 5 . 5 0 1 1 . 8 0 1 8 . 2 0 1 3 . 2 0 1 3 . 4 0 1 4 . 1 0 1 6 . 2 0 8 . 9 0 9 . 9 0 1 7 . 0 0 1 3 . 3 0 1 1 . 5 0 1 5 . 0 0 1 6 . 1 0 1 1 . 4 0 7 . 9 0 1 7 . 2 0 1 1 . 8 0 1 4 . 2 0 1 4 . 8 0 6 . 6 0 1 0 . 7 0 1 7 . 5 0 1 7 . 0 0 8 . 0 0 1 4 . 3 0 9 . 4 0 1 0 . 5 0 1 1 . 1 0 7 . 6 0 1 5 . 0 0 1 6 . 5 0 8 . 0 0 1 2 . 0 0 8 . 6 0 9 . 4 0 1 2 . 0 0 1 4 . 6 0 1 1 . 1 0 9 . 7 0 9 . 3 0 1 1 . 4 0 6 . 4 0 1 1 . 2 0 1 0 . 1 0 9 . 9 0 3 . 2 0 5 . 6 0 1 4 . 5 0 1 1 . 0 0 1 2 . 0 0 1 1 . 7 0 1 2 . 0 0 4 . 6 0 4 . 7 0 4 . 8 0 1 3 . 0 0 9 . 5 0 1 2 . 5 0 9 . 0 0 1 2 . 1 0 8 . 2 0 1 2 . 2 0 8 . 4 0 1 3 . 4 0 8 . 7 0 1 3 . 0 0 1 2 . 3 0 1 3 . 6 0 8 . 1 0 1 1 . 4 0 1 1 . 0 0 1 0 . 4 0 6 . 3 0 8 . 5 0 1 1 . 4 0 1 1 . 7 0 1 3 . 4 0 7 . 7 0 1 2 . 0 0 5 . 8 0 1 3 . 3 0 1 1 . 7 0 9 . 5 0 7 . 6 0 1 2 . 2 0 5 . 8 0 4 . 0 0 1 1 . 4 0 1 3 . 7 0 1 6 . 2 0 1 2 . 5 0 1 2 . 0 0 9 . 0 0 1 0 . 9 0 1 2 . 0 0 5 . 4 0 1 1 . 5 0 .70105070.0070 119.6.1014认 1 1 . 3 0 1 4 . 8 0 1 1 . 3 0 1 5 . 6 0 1 7 . 5 0 1 5 . 3 0 9 . 4 0 1 1 . 8 0 1 5 . 0 0 8 . 2 0 1 2 . 0 0 1 3 . 1 0 1 1 . 7 0 1 4 . 2 0 1 4 . 3 0 1 4 . 0 0 1 3 . 0 0 1 5 . 3 0 1 5 . 5 0 1 5 . 2 0 1 2 . 0 0 1 1 . 8 0 1 1 . 2 0 9 . 3 0 9 . 3 0 1 1 . 4 0 1 1 . 1 0 1 0 . 9 0 1 1 . 0 0 9 . 5 0 1 1 . 3 0 3 . 5 0 1 3 . 7 0 1 0 . 2 0 1 2 . 7 0 1 0 . 4 0 1 0 . 5 0 5 . 6 0 1 0 . 6 0 9 . 6 0 1 1 . 2 0 2 . 2 0 1 2 . 9 0 1 5 . 7 0 1 1 . 5 0 1 4 . 3 0 4 . 2 0 1 2 . 0 0 1 3 . 7 0 1 1 . 5 0 1 1 . 4 0 1 3 . 2 0 1 2 . 2 0 表3 不同浓度激活蛋白对水稻秧苗根系影响数据 t a b l e 3 t h e d a t a o f t h e i n fl u e n c e o f d i ff e r e n t c o n c e n t r a t i o n o f a c t i v a t o r p ro t e i n o n t h e r o o t l e n 郭h o f r i c e , s e e d i n e c k 1 g g -m l 1 2 3 1 2 3 2 3 . 2 0 1 3 . 2 6 1 3 . 9 2 1 0 . 2 0 1 0 . 7 0 1 9 . 2 5 1 2 . 1 6 2 3 . 6 3 1 7 . 0 5 2 5 . 4 1 3 2 . 0 5 2 0 . 4 1 1 8 . 0 6 1 6 . 5 6 2 1 . 9 6 2 1 . 9 6 1 9 . 4 9 1 9 . 4 9 2 5 . 5 7 1 2 . 9 8 2 9 . 5 2 1 3 . 3 7 2 9 . 6 9 2 4 . 0 6 1 2 . 2 8 1 3 . 5 1 2 0 . 3 3 1 0 . 5 8 2 0 . 3 4 1 9 . 41 1 6 . 8 1 1 5 . 8 2 1 4 . 2 2 1 4 . 8 2 1 8 . 8 3 2 9 . 7 0 2 3 . 7 6 1 4 . 8 1 1 6 . 8 9 3 9 . 8 4 1 8 . 4 3 1 8 . 9 9 2 0 . 3 6 2 5 . 8 7 1 3 . 3 8 2 3 . 3 5 2 2 . 2 3 1 9 . 7 8 2 2 . 0 8 2 2 . 1 5 1 6 . 5 4 1 7 . 2 9 2 1 . 2 9 1 9 . 5 3 1 5 . 5 7 1 1 . 9 7 1 0 . 5 0 2 1 . 9 5 1 0 . 5 5 1 3 . 9 2 2 1 . 0 5 1 9 . 6 9 2 0 . 9 9 1 7 . 2 5 2 3 . 2 4 1 7 . 9 4 2 0 . 2 5 2 3 . 2 3 1 8 . 6 3 1 5 . 9 1 1 8 . 1 6 1 2 . 3 0 2 1 . 4 9 1 7 . 3 8 1 8 . 4 3 1 7 . 3 4 1 5 . 9 3 1 4 . 9 9 1 2 . 8 6 2 0 . 2 3 3 2 . 9 6 1 4 . 0 5 2 0 . 5 3 1 0 . 7 5 1 7 . 1 4 1 0 . 3 4 1 0 . 3 5 1 0 . 5 7 1 6 . 7 7 1 0 . 3 5 1 0 . 7 9 1 4 . 1 3 1 6 . 7 6 1 3 . 3 7 1 1 . 5 1 1 5 . 1 1 2 3 . 5 9 2 0 . 3 5 1 0 . 5 5 1 0 . 3 4 1 5 . 6 9 1 5 . 1 8 1 6 . 3 6 2 1 . 3 3 1 0 . 2 5 1 0 . 0 6 2 9 . 7 6 1 5 . 3 6 1 3 . 3 4 8 . 0 7 1 6 . 2 7 1 3 . 4 9 1 3 . 4 6 1 2 . 2 3 1 3 . 9 7 1 4 . 5 5 2 4 . 6 7 2 0 . 5 5 2 0 . 9 0 1 2 . 3 1 2 0 . 3 2 2 0 . 3 5 2 1 . 1 2 1 8 . 8 3 2 1 . 4 9 1 4 . 7 8 1 6 . 6 7 2 8 . 1 1 2 3 . 0 2 2 6 . 2 9 1 4 . 2 2 1 0 . 5 0 1 7 . 4 8 1 1 . 9 6 1 3 .4 4 1 6 . 3 0 1 9 . 3 8 1 0 . 5 0 2 6 . 4 9 2 9 . 6 2 1 7 . 5 8 2 1 . 7 3 1 0 . 7 5 1 4 . 7 6 2 1 . 7 5 1 8 . 6 5 2 2 . 4 6 1 3 . 8 2 1 5 . 6 2 2 4 . 0 6 1 4 . 7 6 2 6 . 6 6 1 7 . 7 8 2 4 . 4 8 1 7 . 0 3 1 5 . 0 3 1 3 . 3 5 1 6 . 5 1 1 8 . 5 5 1 8 . 1 8 3 4 . 3 3 2 1 . 1 1 3 2 . 8 8 2 1 . 2 2 1 7 . 6 1 1 6 . 0 4 1 3 . 4 0 1 9 . 8 5 1 7 . 8 6 1 6 . 5 9 1 8 . 0 5 1 6 . 6 2 1 2 . 0 0 1 3 . 5 0 1 0 . 5 5 1 7 . 5 5 2 0 . 7 5 1 7 . 8 5 1 5 . 0 1 1 9 . 5 6 2 1 . 5 0 2 0 . 9 2 1 5 . 0 1 1 5 . 4 8 2 1 . 8 8 1 1 . 8 8 1 0 . 5 0 2 2 . 5 2 1 9 . 8 0 1 4 . 1 6 1 0 . 1 6 1 7 . 2 9 2 4 . 4 0 2 2 . 2 8 1 6 . 1 4 1 6 . 6 2 1 3 . 1 4 1 6 . 4 7 2 1 . 7 6 1 8 . 5 6 1 7 . 5 9 2 0 . 6 8 2 3 . 7 2 1 7 . 5 4 1 9 . 1 1 1 8 . 7 9 2 4 . 7 1 2 8 . 4 0 3 7 . 8 3 2 3 . 5 0 2 4 . 2 3 1 9 . 0 8 2 7 . 5 7 1 7 . 6 3 2 2 . 1 1 2 0 . 3 5 2 4 . 5 2 1 2 . 2 3 1 9 . 1 7 1 1 . 5 1 1 9 . 0 1 1 5 . 5 8 1 0 . 3 0 1 8 . 7 5 1 0 . 3 7 3 1 . 5 0 1 0 . 2 5 2 8 . 6 3 1 9 . 7 2 1 4 . 9 2 2 1 . 0 0 1 3 . 7 8 2 2 . 0 8 1 5 . 6 5 表4 不同浓度激活蛋白 对水稻秧苗根系影响数据 t a b l e 4 t h e d a t a o f t h e i n fl u e n c e o f d i ff e r e n t c o n c e n t r a t i o n o f a c t i v a t o r n rot e i n o n t h e r o o t l e n e h t h o f r i c e s e e d i n g 2 p g -m l 6 p g -m u 1 2 3 1 2 3 3 0 . 8 4 2 1 . 7 4 2 7 . 6 8 1 9 . 0 2 3 2 .0 7 3 2 . 3 8 3 0 . 7 8 2 2 . 2 5 2 0 . 7 5 1 5 . 9 5 2 1 . 8 1 2 2 . 1 8 3 2 . 2 3 3 5 . 4 6 2 2 . 8 9 2 0 . 8 8 3 0 . 8 8 2 7 . 4 8 1 9 . 5 9 3 0 . 8 1 3 0 . 0 3 3 6 . 0 3 2 9 . 5 2 2 1 . 9 9 2 9 . 0 0 2 8 . 2 4 3 5 .2 5 3 6 .2 1 2 3 . 3 6 2 8 . 2 9 2 8 .4 5 2 6 . 1 8 2 2 . 2 3 2 9 . 0 3 1 9 . 8 7 2 4 .4 6 2 4 . 1 7 3 0 . 2 5 1 8 . 5 2 2 1 . 3 5 3 2 . 0 7 3 0 . 4 8 2 4 . 4 4 2 5 . 1 6 2 2 . 4 6 3 5 . 0 1 2 4 . 7