（药剂学专业论文）治疗哮喘的复方中药颗粒剂的研制.pdf

复旦大学硕士学位论文1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 11 1 1 1i iil l l l l ll lli i i i1 t i il l l g l y 18117 3 3 目录 中文摘要l a b s t r a c t 一”一3 前言”5 日看”“”“”a 第一部分治疗哮喘复方中药颗粒剂的提取工艺研究8 一、材料与仪器8 1 1 材料8 1 2 仪器“一“8 二、实验方法8 2 1 提取工艺路线的确定8 2 2 提取工艺的优化8 2 3 提取样品中麻黄碱的含量测定l o 2 4 提取样品中黄芩苷的含量测定1 2 2 5 提取样品的药效学实验考察1 3 2 6 水提醇沉工艺重演性研究1 4 三、结果与讨论1 4 3 1 提取样品中麻黄碱的含量测定1 4 3 2 提取样品中黄芩苷的含量测定1 7 3 3 药效学实验考察提取工艺结果 2 2 3 4 水提醇沉工艺重演性结果2 2 四第一部分小结2 3 第二部分治疗哮喘的复方中药颗粒剂处方和工艺研究2 4 一、材料与仪器2 4 1 1 材料“2 4 1 2 仪器2 4 二、实验方法2 4 2 1 颗粒剂考察方法2 4 2 2 不同辅料对中药浸膏粉吸湿性的影响2 5 2 3 流化床一步制粒2 5 2 4 湿法挤压制粒2 8 2 5 高速剪切( 搅拌) 制粒3 0 2 6 三种制粒工艺制得颗粒剂性状的初步探讨3 0 2 7 颗粒剂临界相对湿度的测定3 0 三、结果与讨论3 0 复旦大学硕士学位论文目录 3 1 不同辅料对中药半成品吸湿性的影响3 0 3 2 流化床制粒工艺的影响因素考察结果3 1 3 3 湿法挤压制颗粒剂处方和工艺的筛选3 4 3 4 工艺重演性结果3 8 3 5 高速剪切( 搅拌) 制颗粒剂性状的考察3 9 3 6 三种制粒工艺颗粒剂性状的比较3 9 3 7 颗粒剂临界相对湿度4 2 4 讨论“4 3 四、第二部分小结4 4 第三部分质量标准研究及初步稳定性试验4 5 一、材料与仪器4 5 1 1 材料4 5 1 2 仪器4 5 二、实验方法4 6 2 1 薄层色谱鉴定4 6 2 1 1 麻黄的t l c 鉴别4 6 2 1 2 黄芩的t l c 鉴别4 6 2 1 3 地龙的t l c 鉴别4 7 2 1 4 甘草的t l c 鉴别4 8 2 2h p l c 法测定复方中药颗粒中麻黄碱的含量4 8 2 3h p l c 法测定复方中药颗粒中黄芩苷的含量 5 l 2 4 流化床制复方中药颗粒稳定性试验5 2 三、结果与讨论5 4 3 1 液液萃取法和水蒸气蒸馏法处理麻黄碱结果比较5 4 3 2 薄层色谱鉴定5 6 3 2 1 麻黄的t l c 鉴别5 6 3 2 2 黄芩的t l c 鉴别5 7 3 2 3 地龙的t l c 鉴别5 7 3 2 4 甘草的t l c 鉴别5 8 3 3h p l c 法测定复方中药颗粒中麻黄碱的含量 5 9 3 4h p l c 法测定复方中药颗粒中黄芩苷的含量6 3 3 5 流化床制得复方中药颗粒稳定性试验6 7 4 讨论7 1 四、第三部分小结7 2 2 复旦大学硕士学位论文目录 第四部分复方中药颗粒剂药效学试验7 4 一平喘实验7 4 1 1 实验材料7 4 1 2 实验方法7 4 1 3 结果与讨论7 5 二止咳实验7 8 2 1 实验材料7 8 2 2 实验方法7 9 2 3 结果与讨论7 9 三第四部分小结8 0 全文总结8 1 参考文献8 2 发表论文8 5 致谢8 6 3 复旦大学硕士学位论文中文摘要 治疗哮喘的复方中药颗粒剂的研制 中文摘要 支气管哮喘( b r o n c h i a la s t h m a ，简称哮喘) 是由多种细胞( 如嗜酸性粒细胞、 肥大细胞、t 细胞、中性粒细胞、气道上皮细胞等) 和细胞组份参与的气道慢性 炎症性疾病【l 】，本处方是在著名中医专家王忆勤医生对哮喘十多年临床研究的基 础上，证实在治疗哮喘方面具有良好的平喘、解痉、抗过敏和调节免疫、神经、 内分泌功能，能够改善微循环，控制炎症病灶及炎症反应。为使患者能够方便和 及时的服药，本课题应用药剂学制剂技术将其研制成复方中药颗粒剂。本课题主 要包括以下四部分内容： 一、提取工艺路线的研究 通过正交试验比较不同的加水量、煎煮次数和煎煮时间优选药材的水提取工 艺，同时采用醇浓度和醇沉次数为因素考察醇沉淀工艺，采用处方中君药麻黄的 有效成分麻黄碱和臣药黄芩的有效成分黄芩苷为指标成分，综合药效学结果选择 最有效的提取方法。 二、复方中药颗粒剂处方和工艺研究 通过单因素试验，对影响湿法挤压制粒法和流化床一步制粒法制颗粒剂质量 的各种因素进行考察，确定了两种不同制粒方法的处方和工艺及流化床制粒的工 艺参数，用优化处方制备的颗粒剂工艺重演性良好。测定颗粒剂的临界相对湿度 值，供颗粒剂生产和包装时相对湿度控制的参考，以避免吸湿使产品的含水量过 高而影响质量。 三、质量标准研究及初步稳定性试验 建立中药制剂质量标准中的鉴别和含量测定方法。以薄层色谱法鉴别方中君 药麻黄，臣药黄芩、地龙，及佐药甘草。使用高效硅胶g 板，层析图显示分离 效果佳，斑点清晰。 建立高效液相色谱法测定复方中药颗粒中麻黄碱的含量。采用p b o n d a p a k t m c 1 8 柱，乙腈1 磷酸溶液( 5 ：9 5 ) 为流动相，检测波长为2 1 0 n m ，麻黄碱在 0 0 6 0 3 6 - 0 1 4 0 7 9 9 范围内呈良好的线性关系，处方中其他成分无干扰，平均加样 回收率为1 0 0 3 5 ，r s d 为1 7 5 。方法灵敏度高，准确，重现性好。 建立了高效液相色谱法测定复方中药颗粒中黄芩苷的含量。采用 g b o n d a p a k l mc 1 8 柱，甲醇水磷酸( 5 0 ：5 0 ：0 2 ) 为流动相，检测波长为2 8 0 n m ， 复旦大学硕士学位论文中文摘要 黄芩苷在o 1 1 2 - - 0 3 9 2 u g 范围内呈良好的线性关系，处方中其他成分无干扰，平 均加样回收率为1 0 0 5 9 ，r s d 为1 9 3 ，方法简便，快速，准确，灵敏度高， 重现性好。 对颗粒剂进行影响因素试验，加速试验和长期试验，考察其在各种不同条 件下的稳定性。高温和强光对颗粒剂的各项指标无明显影响，高湿的环境对中药 制剂的保存不利，易吸潮，本实验中采用了双层铝塑复合膜包封颗粒剂进行加速 和长期试验。加速试验3 个月( 正在继续考察中) 表明，在温度3 0 ( 2 ，相对湿 度6 0 的条件下放置，颗粒剂的外观和麻黄碱、黄芩苷含量均符合规定；长期 试验表明，在温度2 5 ，相对湿度6 0 的条件下放置3 个月( 正在继续考察中) ， 颗粒剂的外观和麻黄碱、黄芩苷含量无明显变化，说明基本稳定。 四、复方中药颗粒剂初步药效学试验 本文对复方中药颗粒剂的平喘、止咳作用进行初步考察。 试验比较了正常豚鼠、哮喘模型豚鼠和高、中、低剂量复方中药颗粒剂及 地塞米松治疗组治疗后体内情况。治疗组明显降低了粘膜上皮细胞的损伤脱落、 腔内炎性渗出物以及炎性细胞的浸润，且复方中药颗粒剂疗效与地塞米松相比没 有显著性差异。 止咳试验采用雾化浓氨水致小鼠咳嗽后，比较复方中药颗粒剂高、中、低 剂量和咳必清疗效，结果表明复方中药颗粒剂明显降低小鼠的咳嗽次数，高、中 剂量组疗效优于咳必清组，且有显著性差异。 综上所述，该颗粒剂对治疗豚鼠及小鼠的哮喘确实有效。 关键词：复方中药颗粒剂，正交试验，鉴别试验，含量测定，稳定性试验，平喘 试验，止咳试验 2 复旦大学硕士学位论文a b s t r a c t s t u d i e so ng r a n u l e so fc o m p o u n dc h i n e s e t r a d i t i o n a lm e d i c i n ef o ra s t h m a a b s t r a c t b r o n c h i a la s t h m ai sac h r o n i ci n f l a m m a t o r yd i s o r d e ro ft h ea i r w a y s c h r o n i c a l l y i n f l a m e da i r w a y sa r eh y p e r r e s p o n s i v e ；t h e yb e c o m eo b s t r u c t e da n da i r f l o wi sl i m i t e d ( b yb r o n c h o c o n s t r i c t i o n ，m u c u sp l u g s ，a n di n c r e a s e di n f l a m m a t i o n ) w h e na i r w a y sa r e e x p o s e dt ov a r i o u sr i s kf a c t o r s t h ep r e s c r i p t o no fc o m p o u n dc h i n e s et r a d i t i o n a l m e d i c i n et h a tw er e s e a r c h e di sg o o df o rt r e a t i n ga s t h m a i ti s n e c e s s a r ya n d m e a n i n g f u lt od e v e l o pan e wp r e p a r a t i o nt op r e v e n ta n dt r e a tt h ed i s e a s e t h es t u d y o ng r a n u l e sf o rt h i sc o m p o u n dc h i n e s et r a d i t i o n a lm e d i c i n ew a sc a r r i e do u t t h e s u b j e c tm a i n l yi n c l u d e df o u rs e c t i o n sa sf o l l o w s ： 1 s t u d yo nt h ee x t r a c t i n gp r o c e d u r e s t h ee x t r a c t i n gp r o c e d u r e sb yw a t e ra n da l c o h o lw e r eo p t i m i z e da c c o r d i n gt o i n d e xo ft h ec o n t e n to fe p h e d r i n e 、b a i c a l i na n dp h a r m a c o l o g i c a le f f e c t t h e o r t h o g o n a le x p e r i m e n tw a sd e s i g n e dt oc o m p a r ew a t e rv o l u m e 、d e c o c t i o nt i m ea n d d e c o c t i o nd e g r e ef o rw a t e re x t r a c t i n g ，a n da l c o h o lc o n c e n t r a t i o n 、a l c o h o ld e p o s i t i n g t i m ef o ra l c o h o le x t r a c t i n g i na d d i t i o n ，t h ee x t r a c t i n ge f f e c tw a sa p p r a i s e db yh p l c a n dp h a r m a c o l o g i c a le f f e c t t oc h o o s et h eb e s tp r o c e d u r e st oe x t r a c tt h ec o m p o u n d c h i n e s et r a d i t i o n a lm e d i c i n e 2 p r o c e d u r eo fc o m p o u n dc h i n e s et r a d i t i o n a lm e d i c i n eg r a n u l ef o r m a t i o n w ep r e p a r e dg r a n u l e s b yw e tf l u i d i z e db e dg r a n u l a t i o na n dw e te x t r u s i o n g r a n u l a t i o n t h em a j o rf a c t o r sf o rt h et o wp r o c e d u r e sw e r ed e t e r m i n e db yu s i n g s i n g l ef a c t o ri n f l u e n c ee x p e r i m e n ta c c o r d i n gt ot h ef o r m u l a t i o nq u a l i t i e s t h e o p t i m i z e df o r m u l a t i o n sw i t hg o o dr e p r o d u c i b i l i t yw e r ea c q u i r e d t h eg r a n u l e s c r i t i c a lr e l a t i v e h u m i d i t y w a sd e t e r m i n e di no r d e rt oc o n t r o l m a n u f a c t u r i n g e n v i r o n m e n t 3 q u a l i t yc o n t r o la n dp r e l i m i n a r ys t a b i l i t yt e s t t h eq u a l i t a t i v ea n dq u a n t i t a t i v ed e t e r m i n a t i o nm e t h o d sw e r ee s t a b l i s h e df o rt h e g r a n u l ef o r m u l a t i o nq u a l i t yc o n t r 0 1 f o u rm a i nd r u g s ，h e r b ae p h e d r a e ，r a d i x s c u t e l l a r i a e ，p h e r e t i m aa n dr a d i xg l y c y r r h i z a e ，w e r ei d e n t i f i e db yt l c t h e c h r o m a t o g r a p l l i cs p o t sw e r ec l e a ra n dc o n c e n t r a t e do nt h eh i g l le f f i c i e n c ys i l i c ag e lg p l a t e ，w h i c hs h o w e dp e r f e c ts e p a r a t i o ne f f e c t t h ec o n t e n to fe p h e d r i n ei nt h eg r a n u l ef o r m u l a t i o nw a sd e t e r m i n e db yh p l c t h ec h r o m a t o g r a p h yc o n d i t i o nw a sa sf o l l o w s ：g b o n d a p a k mc18c o l u m n ，o 1 p h o s p h o r i c a c e t o n i t r i l e ( 9 5 ：5 ) a sm o b i l ep h a s e ，d e t e c t i o nw a v e l e n g t h2 1 0n n l t h e 3 复旦大学硕士学位论文 a b s t r a c t c o n t e n to fe p h e d r i n ed i s p l a y e dg o o dc o r r e l a t i o nw i t ht h ep e a ka r e ai nt h er a n g eo f 0 0 6 0 3 - 0 1 4 0 7 l a g a v e r a g ea d d i t i o nr e c o v e r yw a s1 0 0 3 5 ，r s dw a s1 7 5 t h e r e s u l ts h o w e dt h eh p l cm e t h o dw a sh i g hs e n s i t i v ea n dr e p r o d u c i b l e b a i c a l i nw a sa l s od e t e r m i n e db yh p l c t h ec h r o m a t o g r a p h yc o n d i t i o nw a s 勰 f o l l o w s ：# 3 0 n d a p a k 刑c 1 8c o l u m n ，m e t h a n o l w a t e r - p h o s p h o r i ca c i d ( 5 0 ：5 0 ：o 2 ) 弱m o b i l ep h a s e d e t e c t i o nw a v e l e n g t h2 8 0n n l t h ec o n t e n to fb a i c a l i nd i s p l a y e d g o o dc o r r e l a t i o nw i t ht h ep e a ka r e ai nt h er a n g eo fo 1 1 2 一o 3 9 2 9 9 a v e r a g ea d d i t i o n r e c o v e r yw a s10 0 5 9 ，r s dw a s1 9 3 t h em e t h o dw a sc o n v e n i e n la c c u r a t ea n d w e l lr e p r o d u c i b l e s t r e s st e s t i n g ，a c c e l e r a t e dt e s t i n ga n dl o n g - t e r mt e s t i n go ft h eg r a n u l ew e r e c a r r i e do u t h i l g ht e m p e r a t u r ea n di n t e n s i v el i g h tt e s t i n gs h o w e dt h a tt h e yh a dn o i n f l u e n c eo nt h eg r a n u l eq u a l i t y h i g hh u m i d i t ye n v i r o n m e n tw a sag r e a td i s a d v a n t a g e t ot h es t o r a g eo ft h ef o r m u l a t i o n a c c e l e r a t e dt e s t i n ga n dl o n g t e r mt e s t i n go ft h e g r a n u l ee n v e l o p e d i n a l u m i n u m - p l a s t i cc o m p o s i t em e m b r a n e w e r ec o n d u c t e d a c c e l e r a t e dt e s t i n gw a sc a r r i e do u tu n d e rt h ec o n d i t i o no f3 0 ca n d6 0 r e l a t i v e h u m i d i t y , a n dt h eg r a n u l e ss h o w e ds o u n ds t a b i l i t ya f t e rs t o r a g ef o r 3m o n t h s ； l o n g t e r mt e s t i n gs h o w e dt h ea p p e a r a n c ea n dt h ec o n t e n to fe p h e d r i n ea n db a i c a l i n w e r ea l s oq u a l i f i e du n d e rt h ec o n d i t i o no f2 5 a n d6 0 r e l a 矗v eh u m i d i t y ( t ob e c o n t i n u e d ) 4 p r e l i m i n a r yp h a r m a c o l o g i c a lt e s t so fc o m p o u n dc h i n e s et r a d i t i o n a lm e d i c i n e g r a n u l e s t h ep h a r m a c o l o g i c a lt e s t so fg r a n u l ew e r e i n v e s t i g a t e db y i t se f f e c to n a n t i a s t h m a ，c o u g hr e l i e f ，a n t i - i n f l a m m a t o r y i tw a sp r e s e n t e dt h a tt h et h r e ed o s e so ft h eg r a n u l e sa n dd e x a m e t h a s o n eg r o u p s s i g n i f i c a n t l y r e d u c e dt h eb r o n c h u s e p i t h e l i u m sd e s q u a m a t i o n ，e x u d a t i o n a n d i n f l a m m a t o r yc e l ls o a k a g ec o m p a r i n gw i t ha s t h m am o d a li na n t i - a s t h m a t e s t i nc o u g hr e l i e ft e s t ，t h ec o u g ht i m ew a sr e l i e v e dc l e a r l yb yt h et h r e ed o s e so f g r a n u l e sa n dk e b i q i n gg r o u p s n el l i 曲a n dm i d d l ed o s e sg r o u p sh a ds i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e sc o m p a r e dw i t l lk e b i q i n gg r o u p s ( p 0 0 5 ) k e yw o r d s ：c o m p o u n dc h i n e s et r a d i t i o n a lm e d i c i n eg r a n u l e ，o r t h o g o n a le x p e r i m e n t ， i d e n t i f i c a t i o nt e s t , c o n t e n td e t e r m i n a t i o n ，s t a b i l i t yt e s t , a n t i a s t h m at e s t ，c o u p r e l i e v a t i o nt e s t 4 复旦大学硕士学位论文前言 前言 支气管哮喘( b r o n c h i a la s t h m a ，简称哮喘) 是由多种细胞( 如嗜酸性粒细胞、 肥大细胞、t 细胞、中性粒细胞、气道上皮细胞等) 和细胞组份参与的气道慢性 炎症性疾病。这种慢性炎症导致气道反应性的增加，通常出现广泛多变的可逆性 气流受限，并引起反复发作性喘息、气急、胸闷或咳嗽等症状，常在夜间和( 或) 清晨发作、加剧。哮喘的病因还不十分清楚，患者个体变应性体质及环境因素的 影响是发病的危险因素。哮喘与多基因遗传有关，同时受遗传因素和环境因素的 双重影响。哮喘的相关基因尚未完全明确，但有研究表明存在与气道高反应性、 i g e 调节和特应性相关的基因，这些基因在哮喘的发病中起着重要作用，环境因 素，如尘螨、花粉、真菌、动物毛屑、二氧化硫、氨气等各种特异和非特异性吸 入物；感染，如细菌、病毒、原虫、寄生虫等；食物，如鱼、虾、蟹、蛋类、牛 奶等；药物，如普洛奈尔( 心得安) 、阿司匹林等；以及气候变化、运动、妊娠 等都有可能是哮喘的激发因烈1 | 。 据世界卫生组织报道：“哮喘对人类健康造成的危害和经济负担超过了结核 病和艾滋病的总和”。因生态环境污染程度不断加重，哮喘的发病率和死亡率呈 逐年增高趋势。目前全世界有哮喘病人1 5 亿2 亿人，而且这个数字还在继续 增加，每年死于哮喘病的人数达1 8 万之多【2 】。我国哮喘发病率为1 - - 5 ，约 有3 0 0 0 万哮喘病人。陈育智1 3 j 等调查了2 7 个城市儿童哮喘患病率1 0 年前、后 的变化。2 0 0 0 年共调查2 8 7 3 2 9 名儿童中有4 3 0 1 例( 1 5 0 ) 诊断为哮喘，其中3 5 4 0 例( 8 2 3 1 ) 为儿童哮喘，7 6 1 例( 1 7 6 9 ) 为婴幼儿哮喘；1 9 9 0 年调查3 9 9 1 9 3 名 儿童中有3 6 2 5 例( o 9 l ) 诊断为哮喘，其中2 6 9 1 例( 7 4 2 3 ) 为儿童哮喘，9 3 4 例 ( 2 5 7 7 ) 为婴幼儿哮喘。1 0 年前、后比较，儿童哮喘患病率上升了6 4 8 4 。所 以，寻找更好的治疗方法成为迫在眉睫的事情。 目前治疗哮喘主要从西医和中医两方面入手。西医的治疗侧重于抗炎，药物 主要分为三大类，即消除非特异性炎症药物、抑制过敏介质释放药物和支气管舒 张剂【4 j 。( 1 ) 糖皮质激素是最有效的消除气道非特异性炎症药物，主要作用机制 是：阻止炎症细胞特别是嗜酸性粒细胞的趋化和激活；抑制细胞因子的生成；干 扰碳四烯酸的代谢；抑制白三烯和前列腺素类介质的合成与释放；减少微血管渗 漏；增加气道平滑肌对p 2 激动剂的反应性。糖皮质激素对急性重症发作期的哮 喘患者全身给药与缓解期的局部吸入治疗效果确切、可靠。( 2 ) 抑制过敏介质释 放常用的药物有：色甘酸钠、奈多罗米钠和抗组胺药物，色甘酸钠是一种非皮质 激素类抗炎制剂，可抑制i g e 诱导的肥大细胞释放介质对其它炎症细胞释放介 5 复旦大学硕士学位论文前言 质也有选择性抑制作用，采用干粉或m d i 方式吸入能预防哮喘发作，尤其适合 季节性哮喘发作的预防；奈多罗米钠是一种新型的吡喃喹啉抗炎剂，预防气道收 缩作用比色甘酸钠强4 - - - ，1 0 倍，长期应用能降低非特异性气道反应性，改善肺功 能，并无明显副作用；抗组胺药物随着气道炎症学说的建立又开始受到重视，尤 其是第二代抗组胺药如氨卓斯汀、酮替芬、仙特敏、特非那丁与息斯敏等因具有 抗炎和支气管舒张作用而被广泛应用于哮喘。( 3 ) 支气管舒张剂：受体激动剂： 陉受体激动剂虽具有快速减敏、肺功能降低、反常性支气管痉挛、气道反应性增 高等不良作用。但它可较强地舒张气道平滑肌，增加粘液纤毛清除功能、降低血 管通透性、调节肥大细胞及嗜碱粒细胞介质的释放，故仍不失为一种迅速缓解 症状的有效药物。茶碱类：茶碱具有舒张支气管平滑肌作用，还能兴奋呼吸中 枢和呼吸肌、促进支气管粘膜的纤毛活动、加速气管内分泌物排出。由于其支气 管舒张作用一般在血浆浓度1 0 m g l 以上较明显，而此浓度已接近中毒浓度，所 以茶碱的治疗价值在西方特别是在欧洲一直有争议，但在我国一直应用较广，并 取得较好疗效。近年来研究发现，茶碱有免疫调节和抗炎作用，长效型、缓释型 和控释型茶碱能够保持稳定的有效血浓度，越来越受到人们的重视。抗胆碱药 物：抗胆碱药物能降低迷走神经张力、舒张支气管，还可防止吸入刺激物引起的 反射性支气管收缩，对支气管的逆转作用不因年龄增加而减弱，作用时间较长， 不良反应也较少，但其扩张支气管作用较弱，起效比较缓慢。不过哮喘患者在使 用“抗炎、抗敏、解痉平喘”类药物控制症状的同时，会产生诸多副反应，如抗过 敏药物引起的嗜睡，而影响患者的精神、生活和工作，使用激素类药物引起高血 压、糖尿病、骨质疏松、向心性肥胖、满月脸等药源性疾病，还因其副反馈抑制 作用导致神经一内分泌免疫功能的紊乱，长期使用还造成内分泌腺逐渐萎缩甚至 丧失内分泌功能，对人体生理功能造成更大的危害；使用解痉平喘类药物因兴奋 交感神经而影响心脏功能，甚至造成猝死等口】。 经典中医理论认为，哮喘的发生，为宿痰内伏于肺，复加外感、饮食、体虚 病后等因素，以致痰阻气道、肺气上逆所致。病理因素以痰为主，痰的产生责之 于肺不能布散津液，脾不能运输精微，肾不能蒸化水液，以致津液凝聚而成，伏 藏于肺，成为发病的“夙根”。如遇气候突变、饮食不当、情志失调、劳累等多种 诱因，均可引起发作。发作期的基本病理变化为“伏痰”遇感引触、痰随气升、气 因痰阻、相互搏结、壅塞气道、肺管狭窄、通畅不利，肺气宣降失常，引动停积 之痰，而致痰鸣如吼、气息喘促。近年来，许多学者认识到风、痰、瘀等为哮喘 的重要病理因素，同时某些脏腑功能失调与哮喘的发生也有一定的关系【5 j 。中医 在治疗上以“急则治其标，缓则治其本”为大法，并根据发作期与缓解期的临床症 状加以辨证施治。发作期以寒哮和热哮论治，寒哮施以温肺散寒、化痰平喘，麻 6 复旦大学硕士学位论文前言 黄射干汤主之；热哮施以清热宣肺、化痰定喘，定喘汤主之。缓解期则从肺、脾、 肾论治，肺虚予以补肺益气固表，玉屏风散主之；脾虚予以健脾化痰，六君子汤 主之；肾虚则予补肾纳气，七昧都气丸或金匮肾气丸主之【4 】。在辨证施治、标本 兼治的基础上，众多学者在脏腑论治上有从肺论治、从肾论治、肺肾论治、肺脾 论治、肺肝论治、脾胃论治等不同侧重面，临床上都取得了良好的治疗效果。 本课题中药处方是著名中医专家王忆勤医生经过十多年对中药内服、敷贴和 吸入等多种疗法治疗哮喘的临床和动物实验研究，证实该方在治疗哮喘方面具有 良好的平喘、解痉、抗过敏和调节免疫、神经、内分泌功能，能够改善微循环， 控制炎症病灶及炎症反应。该方临床应用需要制成汤剂服用或者雾化给药，操作 步骤繁琐，患者使用不便，同时限制了该方的推广，所以拟研制成合适的口服剂 型。 本处方每日生药量，经提取精制后很难将出膏率降到1 0 以下，还需加入 一定量辅料稀释方能制成稳定的制剂。由于剂量大，制成胶囊、片剂应用不方便， 颗粒剂既保持了汤剂作用迅速的特点，又克服了汤剂临用时煎煮不便的缺点，且 服用、贮藏及运输均较方便，故本课题选择制成颗粒剂。研究的内容主要为： ( 1 ) 优选方中有效成分的提取工艺，确定合理可行的工艺路线。 ( 2 ) 研究复方中药颗粒剂的处方工艺，通过单因素试验考察各种因素对颗粒 剂性状的影响，优化处方工艺。 ( 3 ) 建立薄层色谱法鉴别方中麻黄、黄芩、地龙、甘草四味药。建立高效液 相色谱法测定复方中药颗粒剂中麻黄碱、黄芩苷的含量，对复方中药颗粒剂的稳 定性进行了考察，并制定质量标准。 ( 4 ) 通过豚鼠哮喘模型、小鼠哮喘模型，考察口服颗粒剂在平喘、止咳等方 面的作用。 7 复旦大学硕士学位论文第一部分治疗哮喘复方中药颗粒剂的提取工艺研究 第一部分治疗哮喘复方中药颗粒剂的提取工艺研究 中药方剂不仅是我国民族文化中的奇珍异宝，更是我国医药宝库的重要组成 部分，具有广阔的医疗范围和确切的临床疗效，在防病治病、保证人们的健康方 面起着巨大的作用，但也存在中药成分复杂，用药量大等不足，需要选用适当的 方法进行提取精制。如何将方剂中药物的成分得到最大程度的提取和保存，以保 证该制剂在临床有效的发挥作用显得尤为重要。因此本实验对颗粒剂的提取工艺 进行全面的考察，以提高中药制剂的内在质量。 一、材料与仪器 1 1 材料 麻黄、黄芩、地龙等药材 乙腈、甲醇为色谱纯 无水乙醇为分析纯 1 2 仪器 d j 0 4 灵巧型粉碎机 旋转蒸发仪 a e 2 0 0 电子天平 p b 3 0 2 电子天平 真空干燥箱d z f 一6 0 5 0 型 u v 2 4 0 1 p c 紫外可见分光光度仪 i 2 - 1 0 a t , s p d 1 0 a 二、实验方法 购自华宇药业有限公司 上海淀久中药机械制造有限公司 b u c h i 公司 m e t t l e rt o l e d o 仪器公司 m e t t l e rt o l e d o 仪器公司 上海精宏实验设备有限公司 日本岛津公司 日本岛津公司 2 1 提取工艺路线的确定 方中麻黄、黄芩所含麻黄碱、黄芩苷等主要药效成分以及其他药材中成分 均为水溶性成分，在临床上采用汤剂治疗哮喘具有良好的平喘、解痉、抗过敏和 调节免疫、神经、内分泌的功能，能够改善微循环，控制炎症病灶及炎症反应， 因此该处方采取水提，同时探索加醇提取的效果。 2 2 提取工艺的优化 2 2 1 水提取工艺的优化 加水量( a ) 、煎煮时间( b ) 、煎煮次数( c ) 是影响提取效果的主要因素。 8 复旦大学硕士学位论文第一部分治疗哮喘复方中药颗粒剂的提取工艺研究 按三因素两水平，用l 4 ( 2 3 ) 正交表进行正交试验，因素水平表如下见表1 1 ， 正交试验安排见表1 2 。 t a b1 1f a c t o r sa n dl e v e l so ft h ew a t e re x t r a c t i n go r t h o g o n a le x p e r i m e n t a ld e s i g n t a b1 2t h ee x p e r i m e n t a la r r a n g e m e n to fi _ , 4 ( 2 3 ) o r t h o g o n a ld e s i g n 按正交试验表要求，将药材饮片，加入相应量水，按规定时间和次数提取， 合并提取液，浓缩，真空干燥，粉碎，得干浸膏粉1 4 号。 2 2 2 醇沉工艺的优化 按1 号实验条件煎药，对醇沉工艺进行优化。醇浓度( d ) 和醇沉次数( e ) 是影响醇沉效果的主要因素，按两因素两水平，用l 4 ( 2 2 ) 正交表进行正交试验， 因素水平见表1 - 3 ，正交试验安排见表1 4 。 表1 3f a c t o r sa n dl e v e l so ft h ea l c o h o ld e p o s i t i o no r t h o g o n a le x p e r i m e n t a ld e s i g n l e v e l s f a c t o r s d ( a l c o h o lc o n c e n t r a t i o n ) e ( a l c o h o ld e p o s i t i o nt i m e s ) 9 复旦大学硕士学位论文第一部分治疗哮喘复方中药颗粒剂的提取工艺研究 t a b1 4t h ee x p e r i m e n t a la r r a n g e m e n to f1 _ , 4 ( 2 2 ) o r t h o g o n a ld e s i g n 以水提取工艺l 号实验为基础，按正交试验表要求，于1 号水煎液中加入 相应量的9 5 7 , 醇，使达到相应的醇浓度，静置1 2 h ，抽滤醇沉液，浓缩，真空 干燥，粉碎，得干浸膏粉5 8 号。 2 3 提取样品中麻黄碱的含量测赳乒7 】 2 3 1 麻黄碱检测波长的确定 配制合适的麻黄碱标准品溶液，于u v - 2 4 0 1 p c 紫外可见分光光度仪中扫描， 结果见图1 1 。 f i 9 1 1t h e w a v es c a n i n go fe p h e d r i n es t a n d a r d 根据扫描图知，麻黄碱的紫外最大吸收在2 1 0 n m ，故选择2 1 0 n m 为麻黄碱 的检测波长。 2 3 2 麻黄碱的色谱条件 1 0 复旦大学硕士学位论文 第一部分治疗哮喘复方中药颗粒剂的提取工艺研究 根据文献【6 和试验摸索，确定麻黄碱的色谱条件为： 色谱柱：1 t b o n d a p a l 【1 mc 18 ( 5 u r n 3 0 0 m m x 4 6 m m ，w a t e r s ) 流动相：0 1 磷酸一乙腈( 9 5 ：5 ) 流速：1 0m 1 m i n 一；柱温：4 0 ；检测波长：2 1 0 n m 。 2 3 3 麻黄碱线性关系考察 2 3 3 1 麻黄碱标准品溶液的制备 精密称取麻黄碱标准品，以水为溶剂，