（水产养殖专业论文）南方鲇主要免疫器官发育的研究.pdf

华中农业大学2 0 0 7 届硕士学位论文 摘要 本文应用解剖学、组织学、电镜技术对南方鲇胸腺、头肾、脾的大体形态和 组织结构、超微结构和发育进行研究，结果表明：南方鲇胸腺、头肾、脾为主要 免疫器官( 组织) ，其发育成熟顺序为胸腺、头肾和脾。 南方鲇胸腺位于第3 对鳃弓背侧，左右各一，对称分布。出膜3 6 h ，第3 对 鳃弓背后观察到胸腺原基；5 d p h ，在胸腺浅层观察到直径为4 - , 5 u m 的胸腺细胞； 6 d p h ，外部胸腺细胞排列致密而内部分布稀疏；7 d p h ，观察到有小梁深入胸腺实 质，但小梁不明显，此时胸腺系数在南方鲇发育过程中是最大的：1 6 d p h ，胸腺 由位于外层的皮质和内层的髓质及致密的被膜构成，大致可以划分为外区、中区 和内区三个部分。外区由粘液细胞、柱状上皮细胞、网状上皮细胞和少量淋巴细 胞组成。中区主要由小的致密深染的淋巴细胞组成，有时形成模糊的网状，也有 少量的网状上皮细胞、巨噬细胞、微血管分布，还可以观察到深入的小梁。内区 淋巴细胞的数量较中区少，且网状上皮细胞、成纤维细胞数量明显增多，血管也 比较丰富。 南方鲇头肾组织中无中肾单位，是主要的淋巴器官、内分泌器官。最外由一 层极薄的闻皮细胞包裹。头肾包括三个不同的区域：淋巴细胞聚集区、粒细胞聚 集区、内分泌组织区。另外，头肾中还有动脉、静脉以及丰富的血窦。南方鲇出 膜时即可观察到血管形成类似肾小体的球状结构，位于体腔的最前端；2 d p h ，前 肾内开始迁入零星嗜碱性的间质细胞；6 d p h ，前肾区嗜碱性淋巴样间质细胞大量 增值，并且连成一片；1 6 d p h ，前肾开始解体，前肾小体血管球肿胀，有的细胞 已崩解；2 8 d p h ，前肾小体细胞已经完全解体，前肾中还观察有肾小管的存在。 4 0 d p h ，头肾组织中可以明显区分淋巴组织和内分泌组织，头肾基本形成。 南方鲇脾呈暗红色，位于胃和肠曲附近，胃中部的背侧，鳔的腹侧。脾的组 织结构大致可分为白髓、红髓、被膜及小梁。被膜外是一层扁平上皮，小梁由弹 性纤维、网状细胞、成纤维细胞和平滑肌组成。小梁彼此连接形成网状结构；白 髓由动脉和动脉周围淋巴鞘组成；红髓包括脾索和脾窦等部分，两者相间分布。 4 d p h ，观察到脾原基；6 d p h ，脾原基前端细胞增殖膨大，分叶，脾后端细胞增殖 膨大而盾圆，形状类似梨；1 7 d p h ，脾迁入细胞核4 - - 5 u r n 的强嗜碱性细胞，3 5 d p h ， 脾实质内有大量未成熟的红细胞存在； 此外，分别以不同饵料和6 个水丝蚓投喂水平，培育6 日龄南方鲇稚鱼，测 定了不同投喂率下稚鱼的摄食水平、生长、存活率和残食率，观察了免疫器官的 发育情况。发现前7 d 投喂浮游动物有利于免疫器官的发育，7 d 后投喂水丝蚓有 利于生长和免疫器官的发育。鱼苗体长小于5 c m 时，投喂鱼苗体重6 0 的饵料 鱼苗生长最快，特定生长率高达1 9 1 ；体长大于5 c m 时，体长增长和体重特定 南方鲇主要免疫器官发育的观察 生长率以5 0 投喂率组较高，但与6 0 投喂率组的差异不显著。a 、b 、c 、d 、 e 和f 组的存活率分别为5 6 、7 5 、8 7 、8 9 、9 1 和9 0 。a 、b 组的残食 率较高，分别是3 0 和1 9 ，e 、f 组最小，分别是4 和4 5 。免疫器官观察 发现，低投喂率组免疫器官发育明显滞后，且在2 1 d 时电镜观察脾有水肿现象。 关键词：南方鲇；胸腺；头肾；脾；发育 华中农业大学2 0 0 7 届硕士学位论文 a b s t r a c t t h i si st h es t u d yo nm o r p h o l o g ya n dd e v e l o p m e n to ft h y m u s ，h e a dk i d n e ya n d s p l e e ni ns o u t h e r nc a t f i s h ( s i l u r u sm e r i d i o n a l i s ) u s i n gh i s t o l o g yh i s t o - e h e m i s t r y a n a t o m ya n de l e c t r o nm i c r o s c o p e t h er e s u l t ss h o wt h a tt h et h y m u s ，h e a dk i d n e ya n d s p l e e na m a i ni m m u n eo r g a n s a n dt h eo r d e ro fm a t u r a t i o ni st h y m u s , h e a dk i d n e y a n ds p l e e n t h y m u so fs o u t h e mc a t f i s hl o c a t e so ud o r s a lo ft h et h i r dg i na r c h e s o n cp a i ra n d s y m m e t r yd i s t r i b u t i n g a t3 6 ha f t e rh a t c h i n g , t h et h y m u sa n l a g ea p p e a r s ；5d a y s p o s t - h a t c h i n g ( d p h ) 4 - 5 u r nt h y m o c y t e sc a nb eo b s e r v e d 缸s u p e r f i c i a ll a y e ro ft h y m u s t h et h y m o c y t e sa r r a n g e dd e n s eo u t e ra n ds p a r s ei n n e ra t6d p h ；7d p h , t r a b e c u l a e a p p e a r e da tp a r e n c h y m ai nt h y m u s b u tt h et r a b e c u l a ea r en o to b v i o u s 1 6d p h , t h y m u sc o m p r i s eo ft h r e er e g i o n s ，t h eo u t e r , m i d d l ea n di n n e r t h eo u t e rc o m p r i s e so f m u c u sc e l l , h i s t o - e p i t h e l i u m ，r e t i c u l a t i o n e p i t h e l i u ma n daf e wl y m p h o c y t e s t h e m i d d l ec o m p r i s e so fl y m p h o c y t ea b u n d a n c e ，e p i t h e l i a lr e t i c u l a rc e l l ，m a c r o p h a g i c 址 t i n yv a s c u l a r i t ya n dt r a b e c u l a ee p e i r i c t h ei n n e rc o m p r i s co fa f e wl y m p h o e y t e sa n d m o r ee p i t h e l i a lr e t i c u l a rc e l l sa n di n c r e a s i n gf i b r o b l a s t b l o o dv a s c u l a r i t yi sa l s o a m p l e i ni n n e rr e g i o n h e a dk i d n e yi st h em a i nl y m p h o i do r g a na n de n d o c r i n eo r g a n ，w h i c hb e l o n g st o r e t i c u l a t el y m p h o i dt i s s u e t h e ei sn on e p h r o ni nh e a dk i d n e yo fs o u t h e mc a t f i s h t h eo u t e rl a y e ro fh e a dk i d n e yi sw r a p e ab yt h i nm e s o t h e l i a lc e l l s h e a dk i d n e y c o n t a i n st h r e ed i f f e r e n tr e g i o n s ：l y m p h o c y t ea g g r e g a t er e g i o n , g r a n u l o c y t ea g g r e g a t e r e g i o na n de n d o c r i n et i s s u er e g i o u i na d d i t i o n , t h e r ea r ca r t e r y , v e l l aa n da m p l e s i n u s o i d a f t e rh a t c h i n g , w ec a no b s e r v et h eg l o b o s i t ys t r u c t u r ew h i c hl o o k sl i k er e n a l c o r p u s c l el o c a t i n gi nt h ef o r e p a r to fc o e l o m 2d p h , t h e r ea r eaf e wb a s o p h i l i a m e s e n c h y m a lc e l ls e t t l i n gi np r i n e p h r o n 6 d p h ，b a s o p h i l i al y m p h o u sm e s e n e h y m a l c e l lp r o l i f e r a t er e m a r k a b l yi nf o r ek i d n e ya n dl i n kt o g e t h e r 1 6 d p h , t h ep r o n e p h r i c b e g i nt od i s a s s e m b l e 2 8 d p h , r e n a lc o r p u s c l ec e l l so f f o r ek i d n e yd i s a s s e m b l e d c o m p l e t e l y , b u tr e n a lt u b u l ec a n s t i l lb eo b s e r v e d 4 0 d p h , h e a dk i d n e yc a nb ed i v i d e d i n t ol y m p h o i dt i s s u ea n de n d o c r i n et i s s u e h e a dk i d n e yc o m ei n t ob e i n g s p l e e no fs o u t h e mc a t f i s hl o o k sd u l lr e da n dl o c a t sn e a rt h es t o m a c ha n dt h e b e n d i n gp l a c eo fg u t , d o r s a lt om i d d l es t o m a c ho rv e n t r a lt os w i mb l a d d e r s p l e e nc a n b ed i v i d e di n t ow h i t ep l u p ，r e dp h i p ，c a p s u l ea n dt r a b e c u l a t h ee x t e r i o ro fc a p s u l ei s s i m p l es q u a m o n se p i t h e l i u m t r a b e c u l ac o m p r i s e so fe l a s t i cf i b e r , r e t i c u l o c y t e ， f i b e r b l a s ta n ds m o o t hm u s c l ec e l l t r a b e c u l a ec o n n e c te a c ho t h e ra n df o r mt o m 南方鲇主要免疫器官发育的观察 r e t i c u l a t i o n w h i t ep l u pc o m p r i s e so fp e r i a r t e r i a ll y m p h a t i cs h e a t ha n da r t e r y r e d # u pc o n t a i n ss p l e n i cc o r da n ds p l e n i cs i n u s s p l e n i cc o r da n ds p l e n i cs i n u sa l t e r n a t e e a c ho t h e rd i s t u r b u t i n gi nr e dp l u p 4 d p hs p l e e na n l a g ew a so b s e r v e d 6 d p h t h ef r o n t e n do fs p l e e na n l a g ee x p a n d e da n ds u b l o b e t h eb a c ke n do fs p l e e na n l a g ep r o l i f e r a t e a n de x p a n d t h ea l ls h a p el o o k sl i k ea na p p l ea tt h i st i m e 1 7 d p h ，t h e r ea r eaf e w b a s o p h i l i ac e l ls e t t l i n gi ns p l e e n 3 5 d p h ，al o to fi m m a t u r er e dc e l l se x i s t e di ns p l c 髓 a n da tt h e7 0 d p h s p l e n i ch i s t o l o g ys t r u c t u r ec 姐b es 湖s u c h a sm a t u r e ds p l e e n i na d d i t i o n ，g r o w t hs u r v i v a lr a t e sa n di m d l a n eo r 皆a u so f6 d a ys i b r m e r i d i o n a l i sj u v e n i l e sf e e d i n go nl i m n o d r i l ua td i f f e r e n tf e e d sa n d6d i f f e r e n tl e v e l s f o r2 1d a y sw c g ei n v e s t i g a t e d a th e a do f7 d , f e e d sz o o p l a n k t o ni sp r o p i t i o u st o i m m u n eo r g a n sd e v e l o p i n g a f t e r7 d , f e e d sl k n n o d r u ui sp r o p i t i o u st og r o w t ha n d i m m u n eo r g a n so n t o g e n y t h er e s u l t ss h o w e dt h a tt h ej u v e n i l e sa t6 0 f e e d i n g q u o t i e t yg r o w e df a s t e rt h a na n yo t h e rl e v e l sw h e nt h eb o d yl e n g t hw a sl e s st h a n5 c e n t i m e t e r sa n d5 0 f e e d i n gq u o t i e t yg r o w e df a s t e rw h e nm o r et h a n5c e n t i m e t e r s t h es u r v i v a lr a t e so f g r o u p a ，b ，c ，d ，ea n dfw e r e5 6 ，7 5 ，8 9 、9 3 ， 9 4 a n d9 1 r e s p e c t i v e l y t h ec a n m b a lr a t eo faa n dbw a s3 0 a n d1 9 h i g h e r t h a no t h e rg r o u p s t h ec a n n i b a lr a t eo fg r o u pea n dfw a sl o w e r , 4 a n dt 5 r e s p e c t i v e l y h i s t o l o g ys t u d yo fi m m u n eo r g a n so b s e v e r dd e v e l o p m e n tl a g g i n ga tl o w f e e d i n gl e v e la n de d e m ac a nb es e e na tt h es m e t i m e k e yw o r d ：s o u t h e mc a t t t m h ；t h y m u s ；h e a dk i d n e y ；s p l e e n ；o n t o g e n y i v 华中农业大学学位论文独创性声明及使用授权书 学位论文 是否保密 如需保密，解密时间年月日 ， 独创性声明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究3 _ - 作及取得的研究成 果尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经 发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得华中农业大学或其他教育机构的学位或 证书而使用过的材料，指导教师对此进行了审定与我一同工作的同志对本研究所 做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明，并表示了谢意 研究生签名：递刎墼时问：9 年多月，弓? 学位论文使用授权书 本人完全了解。华中农业大学关于保存，使用学位论文的规定”，印学生必须按 照学校要求提交学位论文的印刷本和电子版本；学校有权保存提交论文的印刷版和 电子版，并提供目录检索和阅览服务，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、 汇编学位论文本人同意华中农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表，传播学 位论文的全部或部分内容 注：保密学位论文在解密后适用于本授权书 学位论槲斟：枷p 导师獬：修缈 签名日期：，7 年月r 多日签名日期：吵年莎月，；日 华中农业大学2 0 0 7 届硕士学位论文 1 文献综述 器官发生和发育是发育生物学研究的基本内容之。有关鱼类器官发育的研究 较多，主要集中在海洋养殖鱼类，如鳕( g a d u sm a c r o c e p h a l u s ) 、黑线鳍( m e l a n o g r a m m u s a e g l e ) 、大比目鱼( h i p p o g l o s s u sh i p p o g l o s s u s ) 、狼鱼( a n a r h i c h a sl u p u s r ) 、大菱鲆 ( s c o p h t a l m u sm a x i m u s ) 、鳎( s o l e as o l e a ) 、箱( s e r r a n u sc a b r i l l a ) ，海鲷( s p a r u sa u r a t a ) 、 齿鲷( d e n t e xd e n t e x ) ：淡水鱼类斑马鱼( b r a c h y d a n i or e r i o ) 、青锵( o , y z 缸sl a t i p e s ) 、罗 非鱼( i i l a p i am o s s a m b i c a ) 等。在组织学层次上，对鳟的器官发育作了较为系统的工 作，其它可见的报道比较零散，且大多针对神经感官和消化系统。目前免疫系统的 研究也是一大热点，但由于鱼类种类繁多，各种鱼类免疫系统以及它们差异的研究 还不够深入和彻底。国内仅见青鱼( m y l o p h a r y n g o d o np i c 口s ) ( 王瑞霞，1 9 8 2 ) ， 泥鳅( m i s g u r n u sa n g u i l l i c a u d a t u s ) ( 高令秋等，1 9 9 3 ) 和南方鲇( $ i l u r u sm e r i d i o n a 垴) ( 岳兴建，2 0 0 4 ) 等器官系统发育的研究。 1 1 硬骨鱼类主要免疫器官及其发育 硬骨鱼类的免疫器官( 组织) 主要包括胸腺、头肾、脾以及粘膜相关淋巴组织 ( 卢全章，1 9 9 1 ；m u i s w i n k e ll a m e r & r o m b a u t , 1 9 9 1 ；f a n g e , 1 9 9 4 ；m a n n i n g , 1 9 9 4 ) 。 淡水鱼类免疫器官发育研究表明：胸腺原基是最早形成的，然后是头肾和脾脏；而 海水鱼类最先出现的是头肾，接着是脾脏和胸腺，但海水鱼和淡水鱼免疫器官发育 成熟顺序是一致的，依次为胸腺、头肾和脾( 吴金英，2 0 0 3 ) 1 1 。l 鱼类的胸腺及其发育 1 1 1 1 鱼类胸腺 胸腺一词来源于古希腊的h e r b 和h e a r t ，人们将胸腺看作机体健康的心脏。1 9 0 1 年l a q u a e r 等报道了一名重症肌无力患者伴有胸腺肿瘤，1 9 1 1 年s a u e r b m c h 胸腺切 除治疗重症肌无力首次获得成功，但人们仍然把胸腺看作一个多余的器官，此阶段 胸腺的研究主要集中在形态学方面。直到1 9 6 6 年，c r o l d s t e i n 等报道了小牛胸腺提纯 物具有生物活性，并命名为胸腺素( t h y m o s i n ) ，引起免疫学家们极大的关注，对哺 乳类胸腺做了相当广泛和深入的研究。随着科学的发展，目前胸腺的研究已达到分 子以及分子调控水平。现已认识到胸腺对淋巴系统的发育和维持免疫系统的平衡起 着重要作用，在抗肿瘤免疫和抗微生物感染等方面的作用地位十分重要。 硬骨鱼类的胸腺大多位于鳃腔背后方( j o s c f s s o n & t a t n e r l 9 9 1 ) ，鳃盖与咽腔交界 南方鲇主要免疫器官发育的观察 的背上角，起始于鳃弓背后方，终于鳃盖骨联合处的皮下，为鳃盖粘膜所覆盖，呈 一对卵圆形的薄片组织，左右对称分布。鱼类胸腺具体位置与鳃弓有关，不同鱼类 之间有细微的差别( e l l i s ，1 9 7 7 ；g r a c e & m a n n i n g , 1 9 8 0 ；b o t l l 锄m n n i n g , 1 9 8 1 ； 0 n e i i i , 1 9 8 9 ) ，鲤( c y p r i n u sc a r p i o ) 胸腺位于第2 鳃弓和第3 鳃弓的背上方( 1 v l e n g , 1 9 9 9 ；r o m a n o ，1 9 9 9 ) ；丽鱼( c i c h l ao c e l l a r i s ) 胸腺位于第3 和第4 鳃弓背上方 ( f i s h e l s o n ，1 9 9 5 ) ，鲢( h y p o p h t h a l r a i c h l h y sm o u l r i x ) 胸腺位于第4 和第5 鳃弓的背 方、翼耳骨之下；胡子鲇( c l a r i a sb a t r a c h u s ) 胸腺位于副呼吸器官的后方( 孟庆闻， 1 9 8 7 ) ：鳜( s i n i p e r c ac h u a t s i ) 胸腺在鳃盖与背肌交界的背上角处( x i e ，2 0 0 6 ) ：虹蹲 ( s a l m og a i d n e r i 0 胸腺在咽腔上皮下( t a m e r ，1 9 8 2 ) ，觖壕( l o p h i u s p i s c a t o r i u s ) 胸腺 特别大且远离咽腔( f i n g e ，1 9 8 5 ) ；喉盘鱼( g o b i e s o xc e p h a l u s ) 随着进一步发育而继 续内殆( g o r g o l l 6 n ，1 9 8 3 ) ，且咽腔每侧都有1 对胸腺，外胸腺发育不良，位于咽腔 上皮下，而内胸腺则仅以其延伸的一小部分与咽腔上皮相连。一般而畜，硬骨鱼类 的胸腺位于浅表，并且在其个体发育过程中不与咽腔上皮相分离，而软骨鱼的胸腺 则有些内陷( c h i l m o n c z y k , 1 9 8 5 ；1 9 9 2 ) 。有关胸腺外表形状的报道，卢全章( 1 9 9 1 ) 在研究胸腺的结构，通过鱼体纵向组织切片发现草鱼胸腺呈三角形状，前角接近假 鳃，后角沿上耳咽锁肌向后伸展，项角( 即胸腺突起部分) 深入到下颞窝接近头部 顶骨。 鱼类胸腺以网状细胞构成粗支架，淋巴细胞、淋巴样母细胞、浆母细胞、分泌 样细胞、以及游离问充质细胞( 巨噬细胞、肌样细胞和肥大细胞) 分布于网状上皮 细胞形成的基质网孔中( 孙德文，2 0 0 2 ) 。通常研究者把胸腺分为皮质区和髓质区 ( s a i l e d r i ，1 9 7 5 ) ，皮质区由淋巴细胞组成，髓质区由大量的树突状细胞和巨噬细胞 组成( t a m e r & m a n n i n g , 1 9 8 5 ：c h a n t a n a c h o o k h i 。1 9 9 1 ；c h i l m o n e z y k ，1 9 9 2 ；j o s e f s s o n & t a m e r , 1 9 9 3 ；a b e l l i 1 9 9 4 ；f i s h e l s o n , 1 9 9 5 ；r o m a n o , 1 9 9 7 ；s c h r o d e r , 1 9 9 8 ) 也有些工作 者把胸腺分为外区、中区和内区( 卢全章，1 9 9 1 ；黄艳青，2 0 0 4 ) 。外区相当于胸腺 结缔组织被膜，由淋巴细胞、网状上皮细胞、粘液细胞和一层扁平上皮细胞等组成， 这层使胸腺与咽腔相隔，有效防止抗原性或非抗原性物质通过咽腔进入胸腺实质 ( c a s t i l l o ，1 9 9 8 ；o t t e s e n o l a f s e n , 1 9 9 7 ) ；中区相当于皮质区，而内区相当于髓质 区。有些硬骨鱼类的胸腺不能明显的分为皮质区和髓质区( e 1 h s ，1 9 7 7 ) ，而有些鱼的 胸腺可以分成2 到6 个区( c h i l m o n c z y k ，1 9 9 2 ) 。被膜、皮质区和髓质区的分区方 法为大多数学者所采用， 2 华中农业大学2 0 0 7 届硕士学位论文 胸腺外是一层上皮细胞膜，齐口裂腹鱼( 潘康成，2 0 0 2 ) 被膜由淋巴细胞、巨 噬细胞、网状上皮细胞、粘液细胞、成纤维细胞构成，粘液细胞主要分布于外区浅 层，淋巴细胞位于网状上皮细胞纤状突起所构成的网眼里，而成纤维细胞在外区深 层则分布比较丰富；胸腺的皮质区位于胸腺的外层，主要由淋巴细胞和网状上皮细 胞构成，淋巴细胞处于网状上皮细胞形成的网状结构中，皮质区的主要特征就是此 区的淋巴细胞丰富，另外还分布有许多微血管：髓质区网状上皮细胞较中区多而淋 巴细胞较少，网状上皮细胞的细胞突彼此相连成网，淋巴细胞、粒细胞、巨噬细胞、 囊细胞以及成纤维细胞等分布于网络支架上。 由于鱼类种类繁多，胸腺在种问在形态学上存在差异，所以产生了很多分区结 果，但所有分区方法都由胸腺内各类细胞的分布特点决定。本文由在发育过程中为 了描述的方便，采用被膜、皮质区和髓质区的分区方法。 1 1 1 2 鱼类胸腺的发育 胸腺是淋巴细胞发育最早的免疫中枢淋巴器官，许多研究证明硬骨鱼胸腺是t 细胞发育的重要场所，在免疫系统发育和免疫应答中起着重要的作用( c h i l m o n c z y k , 1 9 9 2 ；t r e d e z o n , 1 9 9 8 ) 。有关胸腺的来源，r o m a n o ( 1 9 9 9 ) 认为胸腺起源于咽囊， 但不同种类咽囊对胸腺形成的贡献或者咽上皮内胸腺原基的数量有所变化。虽然从 第1 到第4 鳃弓与胸腺形成有关的鳃弓数量和胸腺形成有关，但只有邻近的2 对或 3 对鳃弓背部才是胸腺形成的具体位置，如在虹鳟胸腺跨越第1 和第2 鳃弓( g r a c e & m a n n i n g , 1 9 8 0 ) 。有报道虹鳟出膜前第4 d 的胸腺原基中则可见少量淋巴细胞，出膜 后第4 d 的鱼苗中已有大量淋巴细胞( b i g a i ，1 9 8 7 ) 。胸腺发育成熟的时闻，有报道 5 - 9 月龄草鱼胸腺已分化形成外区、中区和内区，胸腺细胞并已开始转输到外周淋巴 器官和血液( a l v a r e z , 1 9 9 8 ) ，腹腔注射免疫的远东红点鲑，在第蹦可见胸腺肥大， 在第1 2 d 可见胸腺萎缩并伴随髓质大淋巴细胞减少，到第1 6 d 胸腺恢复到原来的大 小，表明受免疫鱼胸腺受抗原刺激后首先发生胸腺细胞增殖和分化，这个过程需要 蹦( n u n o m u r a 。1 9 9 1 ) 。鱼类胸腺随着性成熟和年龄的增长或环境胁迫或者激素等 外部刺激作用下可发生退化( 卢全章，1 9 9 1 ：r a z q u i n ，1 9 9 0 ) ，有研究表明一年内 各月闻胸腺细胞的数量、胸腺大小及其各区闻的比例也呈现出规律性变化( 卢全章， 1 9 9 3 ) 。大多数鱼胸腺在发育过程中都保留和咽上皮的联系。鲤胸腺皮质起初位于 胸腺外区，在发育过程中与髓质交错分布，最终到达幼鱼胸腺内区。从幼鱼到成鱼， 胸腺从圆锥形变成不规则形状，最终皮髓质错位分布( r o m a n o ，1 9 9 8 ) 。 3 南方鲇主要免疫器官发育的观察 1 1 2 鱼类头肾及其发育 1 1 2 1 鱼类的头肾 硬骨鱼类的肾脏可以分成头肾、中肾和后肾。成体中肾和后肾主要是泌尿器官； 头肾是主要的造血、中枢免疫器官、外周免疫器官和内分泌器官。硬骨鱼类头肾位 于腹腔的最前端，一般分为左右两叶，左右叶在解剖学上是对称的。有些鱼的左右 头肾又可以分成若干小叶，鲤头肾每一叶由一个近似三角形和一个近似四边形的前 后两小叶构成，左右叶和前后小叶以血管相连( 龚宁，2 0 0 1 ) 。 在组织结构上，头肾最外由一层胶原纤维包围着。头肾实质内包含着动脉、静 脉和血窦。早在1 9 6 7 年s m i t h 等就报道了硬头鳟的头肾实质由淋巴网状组织构成，沿 中央血管呈放射状捧列( s m i t h ，1 9 6 7 ) 。s a i l e n d r i 等1 9 7 s 年报道罗非鱼的头肾有门状 区、淋巴管、被膜下窦和淋巴滤泡等，并认为与哺乳动物的淋巴结相似( s a i l e n d r i ， 1 9 7 5 b ) 。静脉与血窭相通，静脉可分成两种( 卢全章，1 9 9 8 ；i m a g a w a ，1 9 9 0 ) ，一 种是静脉内皮外是较薄的结缔组织，而另一种静脉外是腺上皮细胞。根据1 9 9 0 年 i m a g a w a 报道，这种腺上皮细胞是类固醇细胞和嗜铬细胞。头肾实质内含有大量的 淋巴细胞和粒细胞，淋巴细胞聚集在第一种静脉周围，形成淋巴细胞聚集区，而粒 细胞则聚集在第二种静脉及血窦周围，形成粒细胞聚集区。另外有些鱼类头肾中还 有甲状腺滤泡，c h o v i n ( 1 9 5 6 ) 研究了金鱼头肾内存在甲状腺滤泡，认为头肾内和 颈部所见的甲状腺滤泡是一种相同的结构：国内秉志( 1 9 8 3 ) 在鲤鱼组织一书 中提到头肾中有甲状腺滤泡分布；卢全章( 1 9 9 8 ) 也报道草鱼头肾中存在甲状腺滤 泡。1 9 5 1 年r a s q u i n 等在矮似脂鲤属鱼的头肾中发现由两种细胞组成的前肾问组织， 这些细胞与后主静脉及其分技的管壁密切联系( r a s q u i n ，1 9 5 1 ) 。许多研究这在鱼 头肾内发现黑色素巨噬细胞中心，e l l i s 等将鲽( p l e u r o n e c t e sp l a t c s s a ) 头肾的黑色 素巨噬细胞中心描述为一个含有淋巴细胞和嗜派若宁细胞，外被薄层结缔组织的黑 色素球形体( e n i s ，1 9 7 4 ) 1 9 8 6 年h e r m e z 报道鲫( c a r a s s i u sa u r a t u 岱) 头肾黑色素 巨噬细胞中心的亚微结构为含有退化碎片的巨噬细胞球体( h e r r a e z ，1 9 8 6 ) ，且周 围有不连续的扁平网状细胞层围绕。 各种鱼类头肾的组织结构可能稍有差异。鲤头肾中，主要为淋巴细胞聚集的深 染淋巴样组织，没有淋巴区、非淋巴区之分，肾问组织和肾上组织在头肾中没有分 布，头肾中有甲状腺滤泡( 秉志，1 9 8 3 ) ；在莫桑比克罗非鱼( 2 曙l a p i am o s s a m b i c a ) 4 华中农业大学2 0 0 7 届硕士学位论文 头肾中包括淋巴区带、非淋巴区带，两个区带之间没有明显的界限，前者构成淋巴 小囊，后者包括网状细胞、粒细胞等( s a i l e n d o r i ，1 9 7 5 a ) ；草鱼头肾与莫桑比克罗 非鱼相似，但是淋巴细胞聚集区不形成囊状结构( 卢全章，1 9 9 7 ) 。硬头鳟头肾组 织结构包括淋巴细胞聚集区域、内分泌区域( 华鼎可，1 9 8 1 ) 。南方鲇头肾包括淋 巴细胞聚集区、粒细胞聚集区、内分泌组织区( 岳兴建，2 0 0 4 ) 。虽然头肾组织结 构上稍有差异，但功能相似。 关于头肾的功能，有试验研究表明头肾是主要的淋巴样器官：r i j k e r s ( 1 9 8 0 ) 和杨倩等( 1 9 8 9 ) 先后用绵羊红细胞和辣根过氧化物酶免疫鲤，结果都证明在头肾 内抗体形成细胞最多，从而提出鲤的头肾在体液免疫应答中是最为重要的免疫器官； 鱼类头肾不依赖抗原刺激产生红细胞和b 淋巴细胞等细胞，是免疫细胞的发源地， 相当于哺乳动物的骨髓，另一方面受到抗原刺激后，头肾和后肾的造血实质细胞出 现增生，而且存在抗体产生细胞，表明头肾是硬骨鱼类重要的抗体产生器官，因此 硬骨鱼类兼具中枢免疫器官和外周免疫器官的双重功能( s m i t h , 1 9 6 7 ；m a n n i n g , 1 9 9 4 ； 李长玲，2 0 0 2 ) 。而z a p a t a ( 1 9 7 9 ) 通过对拟鲤( r u t l u sr u t l u s ) 头肾超微结构的研 究结果表明，这两种鱼头肾的结构类似于哺乳动物的红骨髓，认为其主要功能是造 血。有些鱼成体的头肾含有肾单位，且与中肾的肾单位很难区分开来，如弹涂鱼 ( p e r i o p h t h a l m u sc a n t o n e n s i s ) ( s a f e r ，1 9 8 2 ) ，表明其成体还保留着一些泌尿功能。 由上我们可以总结出，大多数鱼类头肾具有造血、免疫和内分泌功能或者至少 其中两项功能；很少的鱼类在整个发育过程中都保留着泌尿功能。 1 1 2 2 鱼类的前肾( 头肾) 的发育 硬骨鱼类肾脏在系统发育上要经过前肾、中肾和后肾3 个阶段，前肾是胚胎期 主要的泌尿器官，由中胚层衍生而来，位于体腔最前方，由头后若干对生肾节发育 而成，从胚胎发育或从种系发生来看，肾脏都是由按体节成对排列的肾管所组成， 原始脊椎动物的肾管就是按体节排列形成，左右对称，这是在体腔内唯一由中胚层 发生而按体节排列的内脏器官，常被称为生肾节。发育成前肾的生肾节数目并不是 一致的，七鳃鳗( l a m p e t r a f l u v i a t i l i s ) 是1 1 - 1 2 节，电鳐( t o r p e d ot o r p e d o ) 是7 - 8 节，多鳍鱼( p o l y p t e r u sb i c h i r ) 是7 - 9 节，鲟( a c i p e n s e r $ c h r e n k i ) 是6 - 8 节，鲑( s a l m o s a l a r ) 是4 5 节。在真骨鱼类成体中，前肾向后发育成为中肾，前肾部分保留下来 称为头肾，除了光鱼和绵鳙( z o a r c 帮v i v i p a r u s ) 等少数鱼类外头肾己失去排尿的功 能，完全由淋巴样组织构成，保留造血和内分泌功能( 楼允东，1 9 9 9 ) 。鲤孵化的最 5 南方叠占主要免疫器官发育的观察 后1 d 就出现生肾节( m e n g ，1 9 9 9 ：龚宁，2 0 0 1 ) ，钟明超研究表明鲇在出膜当d 就 出现生肾组织，出膜第2 d 就可见一对肾小球，出膜第5 d ，鳔分隔肾为头肾和中肾， 出膜第2 8 d 头肾发育成与成体样( 钟明超，1 9 9 5 ) 。还有研究发现石斑鱼 ( c e p h a l o p h o l i s f o r m o s a n u s ) 出膜当天肾只有一对肾管，第l o d 才出现淋巴样细胞， 出膜后第6 0 d 仍然未发育成和成体一样( 吴金英，2 0 0 3 ) 。 肾内尚存有色素细胞黑色素吞噬细胞，它的作用主要是吞噬来自血流中的 异源物质，包括微生物、自身衰老细胞及细胞碎片等。 1 1 3 鱼类脾脏及其发育 1 1 3 1 鱼类的脾脏 有颌鱼类才出现真正的脾脏，软骨鱼类的脾脏较大，内含有椭圆体，主要是一 个造血器官，分化为红髓和白髓；硬骨鱼类脾脏没有完全分化为明显的红髓和白髓， 但同时具有造血和免疫功能( 张永安，2 咖) ，是鱼类红细胞、粒性白细胞生产、贮 存和成熟的主要场所。硬骨鱼类脾脏种间存在组织学结构差异，如鳕( m o l o v am o l v a ) 脾脏自髓发达，狼鲈( m o r n o el a b r a x ) 白髓形成脾小结( 尾崎久雄，许学龙，1 9 8 2 ) ； 而观察黄鳝( m o n o p t e r u sa l b a ) 脾时发现不仅具有脾小结，同时具有生发中心( 张 训蒲等，1 9 9 3 ) ，鲤、鲫( 秦国强等，1 9 8 3 ) 和鳗鲡( a n g u i l l aa n g u i l l a ) l 障- 髓淋巴组织 不密集，也没有脾小结和生发中心( 郭琼林，1 9 9 4 ) 。 真骨鱼类的脾脏是形态结构比较固定的淋巴样组织，位于胃和肠曲附近，通常 是一个，但某些鱼类可分裂为两个或更多的小脾。根据组织学特点大致可以把脾脏 分为白髓、红髓和边缘区3 个部分： 鱼类脾脏外都包有薄层的结缔组织被膜，被膜的薄层结缔组织向髓质延伸，构 成小梁，把脾脏分隔成许多不规则的小叶( i m a g a w a ，1 9 9 1 ) ，小梁是脾脏的粗支架。 小梁内常有分支构成小梁动脉，而小梁动脉分支离开小梁则构成中央动脉，大量t 淋巴细胞和少量巨噬细胞组成弥散淋巴组织，包绕在中央动脉周围，在解剖切面上 呈散在分布的灰色小点，称之为白髓。花尾胡椒鲷( p l e c t o r h y n c h u s c i n c t u s ) 脾的白 髓还可以进一步分为动脉周围淋巴细鞘( 简称淋巴鞘) 和脾小结( 李长玲，2 0 0 2 ) 。 然而有些鱼类没有脾小结，而是功能类似于脾小结的淋巴滤泡，椭圆形的淋巴小泡 内有大量的淋巴细胞、巨噬细胞和嗜黑色素细胞( s m i t h ，1 9 6 7 ：s e c o m b e s ，1 9 8 0 ) 。 红髓占据脾脏的2 3 ，含有大量的血细胞，由脾索和脾窦相间排列组成。脾索为 6 华中农业大学2 0 0 7 届硕士学位论文 弥散淋巴组织，呈不规则条索状并相互联结成网，含较多b 淋巴细胞、浆细胞、巨 噬细胞和树突状细胞。中央动脉进入脾索后分支成笔毛状的笔毛微动脉，笔毛微动 脉开口于脾索，少数与脾窦相连。脾血窦的内皮细胞里长杆状，沿血窦长轴平行排 列，细胞间隙大，脾索内的血细胞可穿越血窦壁进入血窦，巨噬细胞不能穿过间隙， 但是其细胞突可以通过内皮细胞间隙伸入血窦腔。脾窦彼此连接构成网状结缔组织， 其间含有大量血细胞，如红细胞、淋巴细胞、粒细胞等。脾血窦汇入有扁平内皮细 胞围成的髓微静脉，髓微静脉再汇入小梁静脉，最后经脾静脉出脾。边缘区是红髓 和白髓交界处的狭窄区域，硬骨鱼类脾脏红髓和白髓的分界不十分明显，所以边缘 区很难界定。 脊椎动物的脾脏具有滤血、造血、贮血和免疫应答的功能，具体到各种动物其 功能各有差异。张训浦通过组织学研究黄鳝的脾脏，认为脾是黄鳝的主要的造血器 官，y o f f e y 认为猫鲨( s o y l i o r h i n u sc a n i c u l u s ) 的脾脏是主要的造血器官，而m z a i m o v 认为脾脏是红细胞的破坏部位，c a r t