（分析化学专业论文）cds荧光技术在食品蛋白质检测中的应用研究.pdf

关于学位论文独创声明和学术诚信承诺 iyltlllltlllllll9llllllollllll9llllll2lllll3llltlll2ltlly 19 0 9 2 3 2 本人向河南大学提出硕士学位申请本人郑重声明：所呈交的学位论文是 本人在导师的指导下独立完成的，对所研究的课题有新的见解据我所知，除 文中特别加以说明、标注和致谢的地方外，论文中不包括其他人已经发表或撰 写过的研究成果，也不包括其他人为获得任何教育、科研机构的学位或证书而 使用过的材料与我一同工作的同事对本研究所做的任何贡献均已在论文中作 了明确的说明并表示了谢意。 在此本人郑重承诺：所呈交的学位论文不存在舞弊作伪行为，文责自负。 学位申请人( 学位论文作者) 签名： 2 0 11 年乒月2 2 e l 关于学位论文著作权使用授权书 本人经河南大学审核批准授予硕士学位。作为学位论文的作者，本人完全 了解并同意河南大学有关保留、使用学位论文的要求，即河南大学有权向国家 图书馆、科研信息机构、数据收集机构和本校图书馆等提供学位论文( 纸质文 本和电子文本) 以供公众检索、查阅。本人授权河南大学出于宣扬、展览学校 学术发展和进行学术交流等目的，可以采取影印、缩印、扫描和拷贝等复制手 段保存、汇编学位论文( 纸质文本和电子文本) 。 ( 涉及保密内容的学位论文在解密后适用本授权书) 学位获得者( 学位论文作者) 签名： 2 0 1f 年午月7 2 - e 1 学位论文指导教师签名：荔否芝 2 0 11年牟月2 l 日 摘要 蛋白质是生命的物质基础，是构成生物体细胞组织的重要成分，是生物体发育及 修补组织的原料。蛋白质在维持人体内的酸碱平衡、传递遗传信息、调节代谢、催化 生物体内各种反应进行等方面都起着至关重要的作用。食品中蛋白质的分离、定性及 定量分析是食品检验中最重要的工作。随着分析手段的不断进步，对食品中蛋白质含 量的测定方法也正向准确和快速的方向发展。 近年来，利用荧光试剂或有机染料与蛋白质作用，结合荧光光度法定量测定蛋白 质含量的方法得到了很大的发展，此方法具有灵敏度高，线性范围宽，检出限低，操 作简单、快速等特点，适用于常规分析。而新型荧光试剂量子点的出现，对该方法的 研究起了很大的推动作用，量子点具有激发光谱宽且连续分布、发射光谱窄而对称、 光谱可调谐、稳定性好、抗漂白能力强等优点，这些特殊的光学性质，使其在分子生 物学、细胞生物学、基因组学、药物筛选、生物大分子相互作用等研究中有极大的应 用前景，但是利用量子点测定食品中蛋白质含量的研究报道较少。 本文以荧光光度法为检测手段，合成具有优异光学性质的荧光试剂，使其与蛋白 质作用，探寻定量测定蛋白质更简单、更灵敏的方法，并用于样品检测。主要研究内 容包括： 一综述了蛋白质测定方法，量子点合成及其在生物分子检测中的应用。 二建立了c d s 牛血清白蛋白( b s a ) 荧光光度法测定蛋白质含量的新方法：在p h 为7 5 0 的b r 缓冲溶液中，c d s 与b s a 作用，使c d s 本身的荧光强度显著增 强。该方法用于牛奶、蛋清中蛋白质含量的测定，并与双缩脲法作对照，结果 满意。 三研究了多种表面活性剂对c d s b s a 体系荧光特性的影响：结果表明，阳离子表 面活性剂如十六烷基三甲基溴化铵( c t m a b ) 对体系有显著的增敏作用，而阴离 子表面活性剂如十二烷基硫酸钠( s d s ) 有猝灭作用，且有乳状沉淀产生，非离子 表面活性剂如吐温2 0 对体系的荧光强度影响较小，在此基础上选择c t m a b 与 体系作用，建立了测定蛋白质含量的新方法。在p h8 5 0 的硼酸硼砂缓冲溶液 i i 中，c t m a b 的加入，可以使体系的荧光峰显著增强。该方法可用于肉松、豆 浆中蛋白质含量的测定，与考马斯亮蓝法作对照，结果满意。 四前文中基于b s a 能使c d s 荧光强度显著增强，建立了测定蛋白质的方法。但是 b s a 直接与c d s 作用，在使c d s 荧光强度增强的同时，其荧光吸收峰发生蓝 移，从而给测定结果造成一定的影响。本文经研究发现，先使8 羟基喹啉与 c d s 作用( p h8 9 0 的硼酸一硼砂缓冲溶液) ，c d s 的荧光强度降低，且吸收峰蓝 移至5 1 0 n m ，然后再加入b s a ，体系的荧光吸收峰仍在5 1 0 n m 处不变，荧光强 度显著增强，并且在一定浓度范围内，体系的荧光强度与b s a 的浓度呈良好的 线性关系，据此建立了c d s _ - 8 羟基喹啉荧光光度法测定蛋白质的新方法。该 法用于肉松、鸡精、奶粉等食品中蛋白质含量的测定，并与双缩脲法做对照， 结果满意。 五实验以水溶法制备了具有核壳结构的c d s z n o 微粒，研究了该微粒与牛血清白 蛋白作用后体系的荧光特性，建立了c d s z n o 荧光光度法测定蛋白质的新方 法：在p h6 1 0 的k h 2 p 0 4 - n a e h p 0 4 缓冲溶液中，c d s z n o 与牛血清白蛋白 ( b s a ) 反应后，荧光强度显著增强，并且荧光强度的增强与牛血清白蛋白的 浓度有良好的线性关系。该法用于食品和尿液中蛋白质的测定，并与考马斯亮 蓝法比较，结果满意。 六与课题相关的其它研究：( 1 ) 以乙酸锌为锌源，硫化钠为硫源，巯基乙酸为修 饰剂水相合成了z n s 微粒。基于z n s 微粒能与结晶紫反应使结晶紫的吸光度降 低，加入牛血清白蛋白反应后，体系的吸光度显著增强，据此建立了结晶紫 z n s b s a 分光光度法测定蛋白质的新方法。该法用于肉松、酸奶等食品中蛋白 质含量的测定，与考马斯亮蓝法做对照，结果满意；( 2 ) 研究了食品中糖精钠 含量的一种新的测定方法，在p h7 0 0 的b r i t t o n r o b i n s o n ( b r ) 缓冲溶液中，结 晶紫与糖精钠作用可使结晶紫吸光度显著增强，据此建立了结晶紫紫外光度法 测定食品中糖精钠含量的新方法。该方法应用于食品中糖精钠含量的测定，与 国标法高效液相色谱法对照，结果满意。 关键词：量子点，蛋白质，荧光技术 a b s t r a c t p r o t e i ni st h em a t e r i a lf o u n d a t i o no fl i f e ，i ti sa l s o c o n s t i t u t ea l li m p o r t a n tp a r to ft h e b i o l o g i c a l s o m a t i ct i s s u e ，a n di sal a wm a t e r i a lo fb i o l o g i c a ld e v e l o p m e n ta n dr e p a i rt i s s u e p r o t e i np l a y sa c r i t i c a l r o l ei nm a i n t a i n i n ga c i d b a s ei nh u m a n b o d y ，p a s sg e n e t i ci n f o r m a t i o n , r e g u l a t i n gm e t a b o l i s m ，c a t a l y t i c v a r i o u sr e a c t i o ni no r g a n i s m s ，a n de r e i t ss e p a r a t i o na n dt h eq u a l i t a t i v ea n dq u a n t i t a t i v ea n a l y s i si st h e m o s ti m p o r t a n tw o r ki nb i o c h e m i s t r ya n do t h e rb i o l o g i c a l d i s c i p l i n e s ，s u c ha sf o o di n s p e c t i o n , c l i n i c a l e x a m i n a t i o n ，d i a g n o s ed i s e a s e ，b i o l o g i c a lm e d i c i n es e p a r a t i o n ，p u r i f i c a t i o na n dq u a l i t yi n s p e c t i o n w i t ht h e p r o g r e s so fa n a l y s i sm e t h o d su n c e a s i n g ，t h ed e t e r m i n a t i o nm e t h o do fp r o t e i nc o n t e n ti nf o o da l s op r o e r e s s t oa c c u r a t e l ya n dq u i c k l y u t i l i z a t i o no ff l u o r e s c e n c er e a g e n to ro r g a n i cd y e sw i t hp r o t e i nr e a c t i o n , a n dt h ed e t e r m i n a t i o no f c o m b i n e dw i t hf l u o r e s c e n c es p e c t r o p h o t o m e t r yq u a n t i t a t i v ed e t e r m i n a t e p r o t e i nc o n t e n th a sag r e a t d e v e l o p m e n t t h i sm e t h o dh a sm a n yc h a r a c t e r i s t i c s ，s u c ha sh i g hs e n s i t i v i t y , w i d el i n e a rr a n g e ，l o wd e t e c t l i m i t ，s i m p l ea n df a s to p e r a t i o na n ds oo n ，s oi ta p p l i e st h ec o n v e n t i o n a la p p l i c a t i o n b u t 弱an e w f l u o r e s c e n tr e a g e n te m e r g e n c eo fq u a n t u md o t s ，i tp l a y e da ni m p o r t a n tr o l ei n p r o m o t i n gt h i sm e t h o d r e s e a r c h ，q u a n t u md o t sh a v em a n ya d v a n t a g e s ，s u c h 觞b r o a de x c i t a t i o ns p e c t r aa n dt h ec o n t i n u o u s d i s t r i b u t i o n , n a r r o wa n ds y m m e t r i ce m i s s i o ns p e c t r u m ，s p e c t r u mc a nb et u n e d ，g o o ds t a b i l i t ya n ds t r o n g r e s i s t a n c et ob l e a c h i n g , a n ds oo n t h i ss p e c i a lo p t i c a lp r o p e r t i e sh a v eg r e a tp r o s p e c t si nm o l e c u l a r b i o l o g y , c e l l b i o l o g y ，g e n o m i c s ，d r u gs c r e e n i n g ，t h es t u d yo fb i o l o g i c a lm a c r o m o l e c u l e si n t e r a c t i o n s ，b u tu s i n g q u a n t u md o t si nd e t e r m i n a t i o no fp r o t e i nc o n t e n th a saf e ws t u d i e s t h ea i mo ft h i sd i s s e r t a t i o ni st oe x p l o r es i m p l e r , m o r es e n s i t i v ed e t e r m i n a t i o nm e t h o d so fp r o t e i n , t h r o u g hs y n t h e t i ce x c e l l e n to p t i c a lp r o p e r t i e so fn a n o m e t e rp a r t i c l e ，w i t hu s i n gs p e c t r o p h o t o m e t r ya s r e s e a r c hm e a n s ，a n dt h i sm e t h o dh a du s e df o rs a m p l et e s t i n g t h em a j o rc o n t e n t sa r ed e s c r i b e da sf o l l o w s ： 1 s u m m a r yo f t h ep r o t e i nd e t e r m i n a t i o nm e t h o d s ，q u a n t u md o ts y n t h e s i sm e t h o d sa n di t sa p p l i c a t i o n s i nb i o m o l e c u l a rd e t e c t i o ni sg i v e ni nt h i sp a r t i i i 2 e s t a b l i s h e daf l u o r o m e t r yf o rt h ed e t e r m i n a t i o no fp r o t e i n ：t h ei n t e r a c t i o nb e t w e e nc d sa n d b o v i n es e r u ma l b u m i n ( b s a ) i np h7 5 0b r i t t o n - r o b i n s o nb u f f e rs o l u t i o n r e s u l t e di naf l u o r e s c e n c e i n t e n s i t yo fc d si n c r e a s e m e n t t h i sm e t h o dh a sb e e na p p l i e df o rt h ed e t e r m i n a t i o no fp r o t e i ni nm i l ka n d e g g , a n dc o m p a r e dw i t ht h eb i u r e tm e t h o dt h er e s u l t sw e r es a t i s f a c t o r y 3 i n v e s t i g a t e dv a r i e t yo fs u r f a c t a n t si m p a c to nt h ec d s b s as y s t e m t h er e s u l t ss h o w e dt h a tc a t i o n i c s u r f a c t a n t ss u c ha s c e t y l t r i m e t h y l a r n m o n i u mb r o m i d e ( c t m a b ) o nt h es y s t e mh a v eas i g n i f i c a n t s e n s i t i z i n ge f f e c t , a n da n i o n i cs u r f a c t a n t ss u c h 舔s o d i u md o d e c y ls u l f a t e ( s d s ) q u e n c h e d ，a n dt h e r ei s m i l k yp r e c i p i t a t e ，n o n - i o n i cs u r f a c t a n ts u c ha st w e e n 2 0e f f e c to nt h ef l u o r e s c e n c ei n t e n s i t yo fl e s se f f e c t s oan e wm e t h o df o rt h ed e t e r m i n a t i o no fp r o t e i nw a se s t a b l i s h e da st h er e a c t i o nc t m a bw i t hs y s t e m i n p h8 5 0b o d ea c i d _ b o r a xb u f f e rs o l u t i o n , t h ef l u o r e s c e n c ei n t e n s i t yo fs y s t e mi n c r e a s i n gs e n s i t i v i t ya f t e r j o i n e dc t m a bi n t ot h es y s t e m t h em e t h o dh a v eb e e nu s e df o rd e t e r m i n a t i o no fp r o t e i ni nf o o ds u c ha s c r u s h e dd r i d ep o r ka n ds o y b e a nm i l k c o m p a r i n gw i t ht h ec o o m a s s i eb r i l l i a n tb l u em e t h o d ，t h er e s u l t s w e r es a t i s f a c t o r y 4 am e t h o df o rt h ed e t e r m i n a t i o no fp r o t e i nw a se s t a b l i s h e db a s e do nc d sf l u o r e s c e n c ei n t e n s i t y s i g n i f i c a n t l yi n c r e a s e da f t e rc d sw i t hb s ae f f e c ti na b o v e b u tb s aw i t hc d se f f e c td i r e c t l yc a nm a k e c d sf l u o r e s c e n c ei n t e n s i t yo fe n h a n c e d a tt h es a m et i m e ，i t sf l u o r e s c e n c ea b s o r p t i o np e a k ss h i f tt o l e f t , a n dt h ed e t e r m i n a t i o nr e s u l t sh a ds o m ee f f e c t i nt h i s p a p e r , t h es t u d yf o u n dt h a tf i r s tm a k e8 h y d r o x y q u i n o l i n ea n dc d se f f e c t ( p h8 9 0b o d ea c i d - b o r a xb u f f e rs o l u t i o n ) ，c d sf l u o r e s c e n c ei n t e n s i t y s i g n i f i c a n t l yd e c r e a s e d ，a n dt h ef l u o r e s c e n c ea b s o r p t i o np e a k sm o v et o510 n m ，t h e na d d e dt ob s a ，t h e f l u o r e s c e n ta b s o r p t i o np e a k so fs y s t e mw e r es t i l li np l a c eo f51o n t o ，f l u o r e s c e n c ei n t e n s i t yi n c r e a s e d s i g n i f i c a n t l y , a n dt h ef l u o r e s c e n c ei n t e n s i t yo fs y s t e mi sag o o dl i n e a rr e l a t i o n s h i pw i t hb s ac o n c e n t r a t i o n i v i nc e r t a i nc o n c e n t r a t i o nr a n g e s oan e wm e t h o df o rt h ed e t e r m i n a t i o no fp r o t e i nw a se s t a b l i s h e d t h e m e t h o dh a v eb e e nu s e df o rd e t e r m i n a t i o no fp r o t e i ni nf o o ds u c ha sc r u s h e dd f i d ep o r k , c h i c h e np o w d e r , s o y b e a nm i l kp o w d e r ，a n ds oo n a n dc o m p a r e dw i t ht h e b i u r e tm e t h o d ，t h er e s u l t sw e r es a t i s f a c t o r y 5 c d sn a n o p a r t i c l e sw e r es y n t h e s i z e di na q u e o u ss o l u t i o ni nt h i se x p e r i m e n t , a n de s t a b l i s h e dan e w m e t h o do f p r o t e i nd e t e r m i n a t i o nw i t ht h ec d s z n of l u o r e s c e n c es p e e t r o p h o t o m e t r y t h er e s u l ts h o w e dt h e f l u o r e s c e n c ei n t e n s i t yo fc d s z n oi n c r e a s e da f t e rr e a c t e dw i t hb s ai nt h ep h6 10k h 2 p 0 4 - n a 2 h p 0 4 b u f f e rs o l u t i o n a n dt h ef l u o r e s c e n c ei n t e n s i t yo fs y s t e mh a v eg o o dl i n e a rr e l a t i o n s h i pw i t hb s a c o n c e n t r a t i o n t h i sm e t h o dh a v eb e e nu s e df o rd e t e r m i n a t i o no fp r o t e i ni nf o o da n du r i n e a n dc o m p a r e d w i t ht h ec o o m a s s i eb r i l i a n tb l u em e t h o d ，t h er e s u l t sw e r es a t i s f a c t o r y 6 t h eo t h e rr e s e a r c hr e l a t e dt ot h ei s s u ei n t r o d u c e d ：i nt h i se x p e r i m e n t ，z n sn a n o p a r t i c l e st h a th a v e s p e c i a ls p e c t r a lp r o p e r t i e sw e r ep r e p a r e dw i t hz i n ca c e t a t ea st h ez i n cs o u r c e ，s o d i u ms u l f i d ea ss u l f u r s o u r c e ，m e r c a p t o a c e t i ca c i da sm o d i f i e rb yh y d r o t h e r m a ls y n t h e s i sm e t h o d b a s e do nt h ed e c r e a s eo f a b s o r b a n c eo fc r y s t a lv i o l e ta f t e rz n sr e a c t e dw i t hc r y s t a lv i o l e ta n dt h ea b s o r b a n c eo fs y s t e mi n c r e a s e d s i g n i f i c a n t l yb ya d d i n gd i f f e r e n ta m o u n t so f b o v i n es e r u ma l b u m i n ，an e wm e t h o da b o u td e t e r m i n a t i o no f p r o t e i nw a se s t a b l i s h e d t h em e t h o dh a v eb e e nu s e df o rd e t e r m i n a t i o no fp r o t e i ni nc r u s h e dd r i d ep o r k , y o g h o t , a n do t h e r s ，a n dc o m p a r e dw i t ht h ec o o m a s s i eb r i l l i a n tb l u em e t h o d ，t h er e s u l t sw e r es a t i s f a c t o r y a n o t h e ri n t r o d u c e dak i n do fm e t h o do fd e t e r m i n a t i o no fo - s u f o b e n z o i ca c i dl m i d e ( n a ) i nt h ef o o d i nb r i t t o n r o b i n s o n ( b - r ) b u f f e rs o l u t i o no fp h7 0 0 ，t h ea b s o r p t i o nw a v e l e n g t ho fv i o l e tm a r k e d l y i n c r e a s e da f t e rr e a c t i n gw i t ht h eo - s u f o b e n z o i ca c i di m i d e ( n a ) i nv i e wo ft h ea b o v e t h ed e t e r m i n a t i o no f o - s u f o b e n z o i ca c i dl m i d e ( n a ) i nt h ef o o db yu vs p e c t r o p h o t o m e t r ye s t a b l i s h e d i th a sb e e nu s e dt ot h e d e t e r m i n a t i o no fo - s u f o b e n z o i ca c i dl m i d e ( n a ) i nf o o d ，c o m p a r i n gw i t hg u o b i a ol a w h p l c ，t h er e s u l t s v a r es a t i s f a c t o r y k e y w o r d s ：q u a n t u md o t , b o v i n es e r u ma l b u m i n ( b s a ) ，f l u o r e s c e n c et e c h n o l o g y v i 目录 摘要i a b s t r a c t i i i 目录v i i 育行言1 第一章绪论3 l 蛋白质测定方法研究进展3 1 1 测定蛋白质含量的经典方法3 1 2 紫外光度法5 1 3 荧光光度法6 2 量子点的合成及其在生物分子中的应用8 2 1 量子点的结构与发光原理8 2 2 量子点的性质一8 2 3 量子点的制备9 2 4 量子点在生物分子中的应用9 课题的提出。1 1 参考文献1 2 第二章硫化镉荧光光度法测定蛋白质含量的研究2 3 1 引言2 3 2 实验部分2 3 2 1 试剂与仪器2 3 2 2 荧光微粒c d s 的制备2 4 2 3 实验方法2 4 3 结果与讨论2 4 3 1c d s 合成条件的选择2 4 3 2c d s b s a 体系的荧光光谱2 4 v h 3 3 酸度对体系荧光强度的影响2 5 3 4c d s 用量的影响。：一2 6 3 5 反应温度和时间的影响2 6 3 6 工作曲线2 6 3 7 共存离子的干扰2 7 3 8 样品测定及对照实验j 2 7 3 9 加标回收试验2 7 本章小结2 9 参考文献2 9 第三章表面活性剂对c d s b s a 荧光体系的影响及其应用31 1 引言31 2 实验部分一3l 2 1 试剂与仪器3l 2 2 实验方法31 3 结果与讨论3 2 3 1 表面活性剂的选择3 2 3 2 荧光光谱3 2 3 3p h 的影响、缓冲体系及用量的选择一：3 2 3 4c d s 用量的影响3 3 3 5c t m a b 溶液用量的选择3 4 3 6 反应温度和时间的影响3 4 3 7 工作曲线3 4 3 8 共存离子的干扰3 5 3 9 样品测定及对照试验3 5 3 1 0 加标回收试验。3 5 本章小结3 7 参考文献3 8 第四章c d s 一8 羟基喹啉荧光光度法测定蛋白质含量的研究3 9 v l n 1 引言3 9 2 实验部分3 9 2 1 试剂与仪器一3 9 2 2 实验方法4 0 3 结果与讨论4 0 3 1 荧光光谱4 0 3 2 酸度对体系荧光强度的影响4 1 3 3c d s 溶液用量的影响4 l 3 48 羟基喹啉溶液用量的影响4 l 3 5 反应温度和时间的影响4 2 3 6 共存离子的干扰。4 3 3 7 工作曲线4 3 3 8 样品测定及对照实验4 4 3 9 加标回收试验4 5 本章小结4 6 参考文献4 7 第五章c d s z n o 荧光光度法测定蛋白质的研究4 9 1 引言4 9 2 实验部分4 9 2 1 试剂与仪器4 9 2 2c d s z n o 荧光试剂的制备5 0 2 3 实验方法5 0 3 结果与讨论5 0 3 1 荧光光谱5 0 3 2p h 的影响、缓冲体系及用量的选择5 0 3 3c d s z n o 溶液用量的影响。5 l 3 4 反应温度和时间的影响5 2 3 5 工作曲线5 2 i x 3 6 共存离子的干扰5 2 3 7 样品测定及与对照试验5 3 3 8 加标回收试验5 3 本章小结5 5 参考文献5 5 第六章其它相关研究工作5 7 第一节结晶紫z n s b s a 体系分光光度法测定食品中蛋白质的含量5 7 1 引言5 7 2 实验部分5 7 3 结果与讨论5 8 4 结论6 2 参考文献6 2 第二节结晶紫一紫外光度法测定食品中糖精钠的含量6 3 l 引言6 3 2 实验部分6 3 3 结果与讨论6 4 参考文献6 7 本章小结6 8 结束语6 9 致谢7 1 攻读学位期间发表的学术论文目录7 3 x 前言 j 上j l _ 月u吾 蛋白质是复杂的含氮有机化合物，分子量大，高达数万甚至数百万，通常由2 0 多 种氨基酸通过酰胺键以一定的方式结合起来，并且具有一定的空间结构，包含的主要 化学元素有c 、h 、o 、n ，某些蛋白质中还含有微量的c u 、p 、f e 、i 等元素，但是含 氮是蛋白质区别于其它有机化合物的主要标志【l 】。 蛋白质是生命的物质基础，在生物体内占有特殊的地位，它和核酸是构成原生质 的主要成分，同时也是生物体发育及修补组织的原料，一切有生命的活体都含有不同 类型的蛋白质。食物中的蛋白质是人体中氮的唯一来源，具有糖类和脂肪不可替代的 作用1 2 1 。人体内的酸碱平衡、水平衡的维持，遗传信息的传递，营养代谢，细胞结构， 酶，激素，病毒，免疫，物质的代谢及运转都与蛋白质有关，所以蛋白质是人体重要 的营养物质。 蛋白质可以被酶、酸或碱水解，最终产物为氨基酸。氨基酸是构成蛋白质最基本 的物质，现在从各种天然源中分离得到的氨基酸已达1 7 5 种以上，但是构成蛋白质的氨 基酸主要是其中的2 0 种。而构成蛋白质的氨基酸中，亮氨酸、色氨酸、苏氨酸、异亮 氨酸、赖氨酸等8 种氨基酸在人体内不能合成，必须依靠食品供给，故被称为必需氨基 酸，它们对人体有着极其重要的生理功能，常会因其在体内缺乏而导致患病。 随着食品营养知识的普及，食物中蛋白质含量的高低愈来愈得到人们的重视，但 是近几年来发生的食品中毒事件也让人毛骨悚然。目前国际上采用的标准方法如凯氏 定氮法只能测定食品中总含氮量( 蛋白质氮和非蛋白质含氮化合物) ，再通过换算计算 出蛋白质的含量，所以这种方法本身就存在很大的缺陷。如2 0 0 8 年轰动全国的“三聚氰 胺事件”，一些不法商人向牛奶和奶粉中加入三聚氰胺，目的是为了提高食品中的含氮 量，造成蛋白质含量高的假象，从而对消费者的身体健康造成了严重危害。甚至有些 不法奸商将废旧皮革制品甚至动物毛发予以“水解”后生成的粉状物质混入牛奶中， 用于提高蛋白质含量，这种皮革奶长期食用可能会致癌。由于皮革水解蛋白本身 就是一种蛋白质，所以其检测难度比三聚氰胺还大。另外食品中蛋白质的种类很 多，目前在鉴别蛋白质的种类及各类的检测上尚无更为准确的方法。因此，探究食品 c