唾液淀粉酶最适pH值的测定实验设计.docx

生物化学实验考核设计方案唾液淀粉酶最适pH值的测定实验小组成员: 刘倍材 何标才 揭春晓 李芮实验目的：1. 掌握设计性实验的基本思路，并完成设计报告。2. 掌握唾液淀粉酶最适PH的测定原理和方法。3. 熟悉影响酶促反应速度的因素。实验原理： 1酶促反应速度受到许多因素的影响，如温度、PH、激动剂和抑制剂等。上述诸因素对唾液淀粉酶催化淀粉水解反应速度的影响，可用定性或定量的反应来观察。利用碘与淀粉机器不同程度纾解产物反应的颜色，来衡量酶促反应的速度的快慢。蓝色紫红色黄色，颜色由蓝变黄，表示酶促反应速度由慢到快。此为定性观察。 2.进一步利用郎伯比尔定律来判定溶液的吸光度与溶液的浓度符合一定的比例关系。由于在被水解的程度也不一样。当唾液淀粉酶不能将完全水解时，淀粉遇碘呈蓝色，吸收波长位于660nm处。不同PH环境中唾液淀粉酶与淀粉的反应程度不同，吸光度值也不同。因此，通过测量660nm处的吸光度值，可以了解PH对酶促反应的影响，吸光度最小的溶液其PH即为唾液淀粉酶的最适PH。实验步骤： 1.缓冲溶液的配制。取12支试管进行编号1-12，分别按下表加入试剂。编号123456PH5.86.06.26.46.66.80.2mol/LNa2HPO4(ml)0.400.620.931.331.882.450.2mol/LNaH2PO4(ml)4.604.384.073.673.122.55蒸馏水5.005.005.005.005.005.00编号789101112PH7.07.27.47.67.88.00.2mol/LNa2HPO4(ml)3.053.604.054.354.584.740.2mol/LNaH2PO4(ml)1.951.400.950.650.420.26蒸馏水5.005.005.005.005.005.00 2.唾液的采集。先给备取者一杯纯净水让其漱口，将漱口液吐掉, 让备取者下嘴唇抵住干净的杯子口，在备取者眼前放上一些话梅，这时，备取者的唾液会不停地流出来。3.唾液的稀释。取10支试管，进行编号1-10,进行稀释。编号12345678910唾液（ml）0.10.10.10.10.10.10.10.10.10.1蒸馏水（ml）2.04.06.08.010.012.014.016.018.020.04.唾液稀释倍数的选取。另取10支试管，分别编上A-K号，各取上述稀释的唾液各1ml，分别加入相应编号的试管里，向10支试管内同时加入1ml的0.02的淀粉溶液，振荡混匀后放入37 C恒温水浴5分钟后取出，滴加23碘液，振荡混匀，观察颜色，选取颜色变化适中的一支，记录稀释倍数。 5.最适PH的测定。另取12支试管,进行编号,按下表加入试剂。进行测定。编号1234567891011120.02淀粉溶液(ml)1111111111113ml缓冲溶液pH5.86.06.26.46.66.87.07.27.47.67.88.037摄氏度水浴10分钟稀释唾液(ml)11111111111137摄氏度水浴2分钟,取出,分别加入2-3滴碘液,以蒸馏水作为对照管,用660nm波长测定吸光度A660 6.结