（动物学专业论文）口虾蛄口胃神经系统的解剖学研究.pdf

鲁东大学硕士学位论文 摘要 采用神经节离体培养、h r p 追踪技术和l u c i f e ry e l l o w 追踪技术对甲壳动物口虾蛄 ( o r a t o s q u i l l ao r a t o r i a ) 的口胃神经系统( s t o m a t o g a s t r i cn e r v o u ss y s t e m ，s t n s ) 进行了 初步研究。分别经侧胃神经( 1 a t e r a lv e n t r i c u l a rn e r v e ，l v n ) 、口胃神经( s t o m a t o g a s t r i cn e r v e ， s t n ) 食道下神经( i n f e f i o r e ro c s o p h a g e a ln e r v e ，i o n ) 、食道上神经( s u p e r i o r eo e s o p h a g e a l n e r v e ，s o n ) 和贲门下神经( i n f e r i o r v e n t r i c u l a r n e r v e ，i v n ) 对口虾蛄口胃神经系统的口 胃神经节( s t o m a t o g a s t r i cg a n g l i o n ，s t g ) 、食道神经节( o e s o p h a g e a lg a n g l i o n ，o g ) 和围食道神经节( c o m m i s s u m lg a n g l i o n ，c o g ) 的支配关系进行了追踪。结果显示：( 1 ) 用h r p 追踪技术经一侧的侧胃神经追踪时，可见大约8 个阳性标记神经元位于口胃神 经节远端胞体层的腹侧缘，中央神经纤维网也呈较强阳性反应；经口胃神经追踪时，s t g 前端胞体层可见5 6 个弱阳性标记胞体及阳性标记的神经纤维，o g 中可见2 个胞体被 标记，中央纤维网中也有较强的阳性标记末梢；经一侧i o n 追踪时，o g 胞体层中可见4 个阳性标记胞体及部分阳性纤维，而c o g 中仅见阳性标记纤维存在于中央纤维网。( 2 ) 运用l u c i f e ry e l l o w 追踪技术结果表明：经一侧的l v n 追踪时，s t g 腹面观可见阳性标 记的一束神经纤维从l v n 延伸到s t g 的中央神经纤维网，然后再有神经突起向胞体区延 伸到阳性标记神经元大约1 4 个；从s t n 切口端追踪，在s t g 远端胞体区可见大约1 5 个 弱阳性标记神经元和中央神经纤维网的阳性标记；从s o n 切口端向s t g 方向追踪，阳性 突起沿s o n 有3 5 条神经纤维经s t n 进入s t g ，一条在进入s t g 神经纤维网并发出分支。 另一条神经突起进入神经节后在s t g 近端右侧一强阳性神经元紧密连接；经i o n 切口端 追踪，在o g 的腹侧胞体层中4 个神经元标记为阳性，在神经纤维网有数条粗的神经元 突起被标记为阳性；经i o n 切口端追踪c o g s ，在c o g s 的远端胞体层有大约7 个神经元 标记为阳性；经i v n 切口端追踪，在o g 的腹侧胞体层中有6 7 个神经元标记为阳性； 中央神经纤维及神经末梢也有大量阳性标记。 运用组织化学方法对口虾蛄s t n s 的s t g 和o g 进行了a c h e 组织化学定位。结果 表明a c h e 主要定位于s t g 和o g 的中央神经纤维网( n e u r o p i l e ) ，在胞体区主要标记 到神经元的外膜，细胞内没有阳性反应。运用免疫组织化学染色方法，研究了传统神经 递质乙酰胆碱( a c e t y l c h o l i n e ，a c h ) 、谷氨酸( g l u t a m a t e ，g l u ) 、丫氨基丁酸( 丫- a m i n o b u t y r i c a c i d ，g a b a ) 、5 - 羟色胺( 5 - h y d r o x y t r y p t a m i n e ，5 h t ) 、多巴胺( d o p a m i n e ，d a ) 和神经肽生长抑素( s o m a t o s t a t i n ，s o m ) 、p 物质( s u b s t a n c ep ，s p ) 和促皮质激素 鲁东大学硕士学位论文 ( a d r e n o c o r t i c o t r o p i ch o r m o n e ，a c t h ) 在口虾蛄s t n s 中的分布。结果表明：( 1 ) a c h e 的阳性标记主要定位在s t g 和o g 的神经纤维网和细胞膜及细胞间隙。( 2 ) 在单胺类 神经递质中d a 在s t g 中仅见阳性神经纤维无阳性神经元，但在o g 中有1 1 个神经元 被标记为阳性，并且可见其发出的神经突起也被标记为阳性，c o g s 中的阳性神经元分 散分布于整个神经节：5 - h t 免疫组化染色中，在s t g 腹侧和远端的胞体区有大约1 5 个神经元有弱阳性标记，在o g 腹侧5 个神经元有阳性标记，s t g 和o g 神经纤维网也 大面积被标记为阳性。( 3 ) 在氨基酸类神经递质中，g l u 和g a b a 主要分布在s t n s 各神经节的神经纤维网，细胞间隙和神经元外膜上，标记的神经元阳性较弱。( 4 ) 神 经肽类，s o m 在s t g 的腹侧胞体层标记了大约有2 0 个左右的神经元的细胞核区域， 在o g 标记了3 个神经元的细胞核；s p 在s t g 的腹侧中央偏左有聚集在一起的4 个小 型神经元标记为阳性，在o g 中部有4 个神经元标记为阳性。而a c t h 的阳性反应呈颗 粒状弥散分布在整个s t n s 。 结论：通过神经束路追踪技术，我们的研究大体勾画出了s t n s 各神经节，以及和 脑神经节之间的部分联系，能够从形态上更直观清楚地展示口胃神经系统各神经节的神 经传输与支配关系。通过组化及免疫组化的方法，我们大体了解乙酰胆碱等五种神经递 质和s o m 等三种神经肽在口虾蛄口胃神经系统都有分布，为进一步了解s t n s 的生理 功能奠定了一定的基础。 关键词口虾蛄，口胃神经系统，神经束路追踪技术，组织化学，免疫组织化学 i i 鲁东大学硕士学位论文 a b s t r a c t t h ei n n e r v a t i o no fs t o m a t o g a s t r i cg a n g l i o nv i al a t e r a lv e n t r i c u l a rn e r v e ，s t o m a t o g a s t r i c n e r v ea n ds u p e r i o r eo e s o p h a g e a ln e r v e ，o e s o p h a g e a lg a n g l i o nv i as t o m a t o g a s t r i cn e r v e ， i n f e r i o ro e s o p h a g e a ln e r v ea n di n f e r i o rv e n t r i c u l a rn e r v e ，a n dc o m m i s s u r a lg a n g l i av i a i n f e r i o ro e s o p h a g e a ln e r v ei nt h es t o m a t o g a s t r i cn e r v o u ss y s t e mo fo r a t o s q u i l l ao r a t o r i aw a s s t u d i e db yh r pt r a c kt r a c i n gt e c h n i q u ea n dl u c i f e ry e l l o wb a c k f i l l i n gm e t h o d 、析t l lg a n g l i a i nv i t r oc u l t u r e t h er e s u l t si n d i c a t e d ：( 1 ) b yh r pt r a c kt r a c i n gt e c h n i q u e ：a b o u t8h r p p o s i t i v es o m a sw e r el o c a t e di np o s t e r i o rv e n t r a lo fs t o m a t o g a s t r i cg a n g l i o na n ds t r o n g p o s i t i v en e r v ee n d i n gi nn e u r o p i l ew h e nt r a c i n gv i ao n es i d el a t e r a lv e n t r i c u l a rn e r v e a n d t r a c i n gv i as t o m a t o g a s t r i cn e r v e ，a b o u t5 - 6w e a k l yp o s i t i v es o m a sw e r el o c a t e di n s t o m a t o g a s t r i cg a n g l i o na n d2p o s i t i v es o m a si no e s o p h a g e a lg a n g l i o n ；w h e nt r a c i n gv i ao n e s i d ei n f e r i o ro e s o p h a g e a ln e r v e ，a b o u t4p o s i t i v es o m a sl o c a t e di no e s o p h a g e a lg a n g l i o na n d o n l ys o m ep o s i t i v en e r v ef i b e ri nn e u r o p i l eo fc o m m i s s u r a lg a n g l i a ；( 2 ) b yl u c i f e ry e l l o w b a c k f i l l i n gm e t h o d ：ab o u q u e to fn e r v ef i b e r se x t e n d e df r o ml v nt ot h en e u r o p i l e ，t h e nt h e y t u r nb a c ka n dc o n n e c t e d 、析t l la b o u t14p o s i t i v es o m a si np o s t e r i o rv e n t r a lo fs t o m a t o g a s t r i c g a n g l i o na n ds t r o n gp o s i t i v en e r v ee n d i n gi nn e u r o p i l ew h e nt r a c i n gv i ao n es i d el a t e r a l v e n t r i c u l a rn e r v e a n dt r a c i n gv i as t o m a t o g a s t r i cn e r v e ，a b o u t15w e a k l yp o s i t i v es o m a sw e r e l o c a t e di ns t o m a t o g a s t r i cg a n g l i o n w h e nt r a c i n gv i ao n es i d ei n f e r i o ro e s o p h a g e a ln e r v e ， a b o u t4p o s i t i v es o m a sl o c a t e di no e s o p h a g e a lg a n g l i o na n d7p o s i t i v es o m a si nn e u r o p i l eo f c o m m i s s u r a lg a n g l i a ；t r a c i n gv i ao n es i d eo fs u p e r i o r eo e s o p h a g e a ln e r v e ，3 - 5p o s i t i v en e r v e f i b e r se x t e n dt ot h es t o m a t o g a s t r i cg a n g l i o n ，a n do n er e a c ht h en e u r o p i l ee x t e n d e df r o ml v nt o t h en e u r o p i l e a n o t h e rc o n n e c t e d 、i t l las t r o n gp o s i t i v es o m ai ns t o m a t o g a s t r i cg a n g l i o n w h e nt r a c i n gv i ai n f e r i o rv e n t r i c u l a rn e r v e ，a b o u t6 - 7p o s i t i v es o m a sl o c a t e di no e s o p h a g e a l g a n g l i o n h i s t o c h e m i c a ls t u d i e so ft h es t o m a t o g a s t r i cn e r v o u ss y s t e mo fo r a t o s q u i l l ao r a t o r i a s h o w e dt h ep r e s e n c eo fa c e t y l c h o l i n ee x p r e s s i n gf i b e r sw i t h i nt h eg a n g l i a , b u tn oe x p r e s s i n g c e l l s t h ed i s t r i b u t i o no fa c e t y 7 l c h o l i n e ，s e r o t o n i n ，d o p a m i n e ，g l u t a r n i n e ，t - a m i n o b u t y r i ca c i d ， s o m a t o s t a t i ns u b s t a n c epa n d a c t h c o n t a i n i n g c e l l sh a v e b e e n a n a l y s e du s i n g i m m u n o h i s t o c h e m i s t r yi nt h es t o m a t o g a s t r i cn e r v o u ss y s t e mo fo r a t o s q u i l l ao r a t o r i a t h e i i i 鲁东大学硕士学位论文 m a i nc o n c l u s i o n so fo u rs t u d i e sc a l lb es u m m a r i z e da sf o l l o w i n g ：( 1 ) a c e t y l c h o l i n el o c a t i o n w a sc o n s i s t e n t 埘t l lt h et h er e s u l to fh i s t o c h e m i c a ls t u d i e sa b o v e ；( 2 ) o n l yp o s i t i v en e r v e f i b e r sw i t h o u t p o s i t i v e n e u r o ne x i s ti nt h e s t o m a t o g a s t r i cg a n g l i o nb y d a i m m u n o h i s t o c h e m i s t r ys t u d y ；i nt h eo e s o p h a g e a lg a n g l i o na b o u t11n e u r o n sw e r el a b e l e d ； t h ep o s i t i v en e u r o n ss c a t t e r e dt h r o u g h o u tt h ec o m m i s s u r a lg a n g l i o n a b o u t15w e a k l y p o s i t i v en e u r o n sw e r el o c a t e di np o s t e r i o rv e n t r a lo fs t o m a t o g a s t r i cg a n g l i o n , a n da b o u t5 p o s i t i v es o m a sa n dl o to fp o s i t i v en e r v e f i b e rw e r el o c a t e di no e s o p h a g e a lg a n g l i o nb y5 一h t i m m u n o h i s t o c h e m i s t r ys t u d y ( 3 ) g l ua n dg a b a a r em a i n l yd i s t r i b u t e di nt h en e u r o p i l ea n d s o m ec e l lm e m b r a n eo fs t o m a t o g a s t r i cn e r v o u ss y s t e m ( 4 ) n e u r o p e p t i d e s ：t h es o mp o s i t i v e g r a n u l a rs c a t t e r e da l lt h es t o m a t o g a s t r i cn e r v o u ss y s t e m a b o u t2 0s o m a si nt h ev e n t r a l s t o m a t o g a s t f i cg a n g l i o na n d3s o m a si no e s o p h a g e a lg a n g l i o nw a ss t a i n i n g ，b u ti to n l yl a b b e d o nt h en u c l e u s 4s u b t a n c ep p o s i t i v en e u r o n sw e r el o c a t e di nt h ei e rv e n t r a lo fs t o m a t o g a s t r i c g a n g l i o n , a n d4l o c a t e di nt h ec e n t r e lo e s o p h a g e a lg a n g l i o n a c t hp o s i t i v eg r a n u l a rs c a t t e r e d a l lt h es t o m a t o g a s t r i cn e r v o u s s y s t e m c o n c l u s i o n ：o u rs t u d ys k e t c h e do u tag e n e r a lc o n t a c t ，a n dt h en e r v et r a n s m i s s i o na n d c o n t r o lr e l a t i o n s h i pb e t w e e ng a n g l i ao fs t o m a t o g a s t r i cn e r v o u s s y s t e mo fo r a t o s q u i l l a o r a t o r i am o r ec l e a r l y a n df o u n dm o s tt h ec l a s s i ct r a n s m i t t e ra n dn e u r o p e p t i d ew es t u d i e d p r e s e n ti nt h es t o m a t o g a s t r i cn e r v o u ss y s t e m k e yw o r d s ：o r a t o s q u i l l ao r a t o r i a ；s t o m a t o g a s t r i cn e r v o u ss y s t e m ；t r a c kt r a c i n gt e c h n i q u e ； h i s t o c h e m i s t r y ；i m m u n h i s t o c h e m i s t r y i v 鲁东大学硕士学位论文 英文缩写 s t n s s t g o g c o g c p g s s t n l v n l o n s o i l l v n h i 冲 a c h e a c h d a 5 h t g l u g a b a s p s o m a c t h p b s d a b h 2 0 2 英文全称 缩略词 中文名称 s t o m a t o g a s t r i cn e r v o u ss y s t e m 口胃神经系统 s t o m a t o g a s t r i cg a n g l i o n o e s o p h a g e a lg a n g l i o n c o m m i s s u r a lg a n g l i o n c e n t r a lp a t t e mg e n e r a t o r s s t o m a t o g a s t r i cn e r v e l a t e r a lv e n t 6 c u l a rn e r v e i n f e r i o ro e s o p h a g e a ln e r v e s u p e f i o r eo e s o p h a g e a ln e r v e i n f e r i o rv e n t d c u l a rn e r v e h o r s e r a d i s hp e r o x i d a s e a c e t y l c h o l i n e s t e r a s e a c e t y l c h o l i n e d o p a m i n e 口胃神经节 食道神经节 食道旁神经节 中央模式发生器 口胃神经 贲门侧神经 食道下神经 食道上神经 贲门下神经 辣根过氧化物酶 乙酰胆碱酯酶 乙酰胆碱 多巴胺 s e r o t o n i n ，5 - h y d r o x y t r y p t a m i n e5 一羟色胺 g l u t a m a t e t - a m i n o b u t y r i ca c i d s u b s t a n c ep s o m a t o s t a t i n a d r e n o c o r t i c o t r o p i ch o r m o n e p h o s p h a t eb u f f e r r i ss o l u t i o n 3 ，3 - d i a m o n o b e n z i d i n e h y d r o g e np e r o x i d e 谷氨酸 丫- 氨基丁酸 p 物质 生长抑素 促皮质激素 磷酸盐缓冲液 3 ，3 一二氨基联苯胺 过氧化氢 鲁东大学学位论文原创性声明和使用授权说明 学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的论文是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成 果。除了文中特别加以标注引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表 或撰写的成果作品。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式 标明。本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。 作者签名：击印日期：似哟年月召e t 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向 国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权鲁 东大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、 缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。 本学位论文属于 保密口，在年解密后适用本授权书。 不保密团。 ( 请在以上相应方框内打“4 ) 作者签名：卉韦 导师签名：豫 日期：w 刀苫年6 月刁e t 日期：训弋年6 月爹e t 鲁东大学硕士学位论文 刖舌 了解像走路游泳等节律运动模式一直是神经科学研究的基本目的。研究发现脑在活 动时同时存在若干节律模式，并且这些节律还会相应的发生改变，这更有力的增强了研 究节律运动的重要性。解剖学上高等动物的中枢系统高度集中，给研究带来了很大困难， 而与之相比无脊椎动物神经系统具有以下优点：神经系统分布比较分散，神经元胞体大， 有固定的神经元群体和突触联系，离体后较易培养等。无脊椎动物神经系统的这些优点 使它在该研究中发挥了非常重要的作用。 本研究的主要研究对象是口胃神经系统( s t o m a t o g a s t r i cn e r v o u ss y s t e m ，s t n s ) ， s t n s 是甲壳动物中枢神经系统的延伸，有实验表明在该系统的神经节内存在中央模式 发生器( c e n t r a lp a a e mg e n e r a t o r s ，g p r s ) ，能够控制节律运动，使食物穿过前肠向后 运动。其中口胃神经节( s t o m a t o g a s t r i cg a n g l i o n ，s t g ) 仅有3 0 个左右的细胞构成，并 且这些细胞在不同的动物体内可以重复辨认。该神经节部分神经元具节律性自发放电， 而且在离体培养的情况下能逐步恢复其原有的节律性输出。因此它成为研究动物神经节 律性活动机制的一个较好的实验模型。 甲壳动物的s t n s 尤其适用于研究各神经递质对节律性中央模式发生机制的作用。 s t g 神经元层叠排列构成胃磨和幽门通路，调节胃磨和幽门的节律运动。s t g 的某些神 经元及突触性质也已得到验证。包含几个紧密的节律神经元回路即所谓c p g s ，尤其是 这个幽门网络c p g 是神经调节实验的主要模型。尽管神经回路及其内在的神经化学机 制相对简单，但它能够产生多种多样的活性模式，表现出显著的灵活多变性。一些神经 递质能够通过口胃神经传递到幽门网络，调节神经网络的动力学过程。 本研究的实验目的主要体现在以下几个方面： l 、运用神经通路追踪技术，用h r p 、l u c i f e ry e l l o w 等神经通路追踪剂来完成口胃 神经系统各组成部分之间的神经网络联系，为分析神经调节机制提供形态学依据。 2 、运用组织化学、酶组织化学及免疫组织化学技术，对口虾蛄口胃神经系统进行 部分神经递质的定位研究，探讨a c h 、g l u 、5 - h t 、d a 等递质的形态学定位，为进一步 的电生理研究提供化学神经解剖学依据。 通过该项研究，能够全面了解口胃神经系统的基本结构特征，为神经节律输出相关 生理学研究提供实验模型和丰富的背景资料，为研究高等动物神经节律的发生机制提供 依据。 2 鲁东大学硕士学位论文 第一章口胃神经系统研究概况 1 口胃神经系统 早在1 8 8 3 年m o c q u a r d 等首次描述了甲壳动物十足类前肠的胚胎发育，证实其由胚 胎期外胚层的口凹发育而成，呈管状。甲壳动物的前肠一般由贲门和幽门两部分组成， 其中贲门在前面，较大、呈囊状，用于储存从口摄入的食物；幽门在后面，用于过滤进 入中肠的食物颗粒。在甲壳动物前肠的肠壁覆盖一层软角质膜，并有部分钙化为小骨。 在贲门后的背外侧区域，小骨重新构建成胃磨。胃磨的作用是浸软从贲门通过的食物。 然后，食物颗粒经贲门一幽门瓣转移到幽门。整个食道、贲门、胃齿和幽门的节律运动 由横纹肌来维持【l j 。 s t n s 位于甲壳动物胃壁肌肉群中，是甲壳动物中枢神经系统的延伸，含有神经细 胞的数量相对少，并有食道旁神经节( 定位于食道旁) 水平连接腹神经索和脑。s t n s 由4 个神经节组成，c o g s ( 每个大约有5 0 0 个神经元) 一对，o g ( 大约1 4 个神经元) 一个和s t g ( 2 6 3 0 个左右的神经元) 一个。s t n s 包含运动神经元，控制食物通过甲壳 动物的食道和胃( 贲门、胃磨和幽门) 。食道负责把食物从口腔运送到贲门，在这里食 物与消化液充分混合。食物软化后首先经胃齿咀嚼，再经幽门过滤，一部分直接吸收， 一部分再次经胃齿进一步咀嚼，最后剩余部分排出体外。 p a n u l o r u s 的s t g 连续切片细胞体计数的结果显示其胞体数量在2 7 3 2 间变化【2 ， 3 1 。在小龙虾和蟹体内，o g 含有l o 1 5 个神经元胞体，位于在i o n 和i v n 连接处【4 1 。在 龙虾体内，o g 包含两个区域，前面区域在i o n i v n 结合处大约有1 1 个胞体，后面区域 在s o n 结合处大约4 个胞体。后区的这些细胞有的发出神经突起延伸到s t n 5 1 。成对的 c o g s 在围食管的联合处，每个c o g 包含数百个细胞体，这使得在该神经节中确切的辨 认某个特殊的神经元非常困难【6 】。目前在不同的种类中，仅有六个神经元已得到确认。 第一个得到确认的是l 神经元( l a r g en e u r o n ) ，它是c o g 中胞体直径大于9 0 0 m 的一 类神经元。其突起经同侧围食道神经环延伸到脑，并有分支向后到达食道下的神经节【7 j 。 l 细胞的活性受前肠的食管，贲门，胃和幽门的四种节律运动模式的影响【8 】。 在所有的大型十足类研究中，s t g 中3 0 个左右的细胞体中有2 4 个的神经突起在 口胃神经节的运动神经内，属于运动神经元，另外6 个伸出突起借助s t n 同其它神经节 的神经突起相连属于中间神经元。在2 4 个已辨认的运动神经元中，有2 个支配贲门肌 肉群，9 个支配胃齿肌肉系统，2 个支配心一幽门瓣，还有1 1 个支配幽门肌肉。另外， 鲁东大学硕士学位论文 几乎所有运动神经元的轴突都经神经节后部的贲门背神经远离神经节【1 】。贲门背神经有 一个复杂的分枝模式( 见图1 2 和1 3 ) 。 s 侣锄- ，nd - p l nd v np s ai v nd - i n np - q n 罅 v - p i n p d n 图1 1p a n u l i n u s 的前肠的口胃神经系统左侧面模式图【3 】 图例说明：s t gs t o m a t o g a s t r i cg a n g l i o n ；c o gc o m r n i s s u r a lg a n g l i o n ；o go e s o p h a g e a lg a n g l i o n ：a l n a n t e r i o rl a t e r a ln e r v e ；a m na n t e r i o rm e d i a nn e r v e ；a p na m p u l l a r yn e r v e ；a v da n t e r i o rv e n t r i c u l a rd i l a t o r n e r v e ；a v na n t e r i o rv e n t r i c u l a rn e r v e ；c m nc a r d i a cb r a n c ho fm v nn e r v e ；d d nd o r s a ld i l a t o rn e r v e ；d g n d o r s a lg a s t r i cn e r v e ；d - i v nd o r s a ll a t e r a lv e n t r i c u l a rn e r v e ；d p i nd o r s a lb r a n c h o fp i n ；d p md o r s a l p o s t e r i o rs t o m a c h ；d - p o nd o r s a lp o s t e r i o ro e w p h a g c a ln e r v e ；d v nd o r s a lv e n t r i c u l a rn e r v e ；h d n h e p a t o p a n c r e a sd u c tn e r v e ；i o ni n f e r i o ro e w p h a g c a ln e r v e ；i v ni n f e r i o rv e n t r i c u l a rn e r v e ；l g nl a t e r a lg a s t r i c n e r v e ；i i m g nl a t e r a lp o s t e r i o rg a s t r i cn e r v e ；i - p i nl a t e r a lb r a n c ho fp l n ；i p nl a t e r a lp y l o r i cn e r v e ；l v nl a t e r a l v e n t r i c u l a rn e r v e ；m g nm e d i a ng a s t r i cn e r v e ；m v nm e d i a nv e n t r i c u l a rn e r v e ；p d np y l o r i cd i l a t o rn e r v e ；p i n p o s t e r i o r - l a t e r a ln e r v e ；p - m g np o s t e r i o r - m e d i a ng a s t r i cn e r v e ；p s np o s t e r i o rs t o m a c hn e r v e ；p y np y l o r i c n e r v e ；s o ns u p e r i o ro e w p h a g e a ln e r v e ；s t ns t o m a t o g a s t r i cn e r v e ；y e nv e n t r a lc a r d i a cb r a n c ho fp i n ；v - l v n v e n t r a ll a t e r a lv e n t r i c u l a rn e r v e ；v - p i nv e n t r a lb r a n c ho fp i n ；v - p o r tv e n t r a lp o s t e r i o ro e w p h a g e a ln e r v e 图1 2 完整解剖出的s t n s 示意副9 】 图例说明：同图1 1 2 神经束路追踪相关研究现状 神经元间相互联系的研究是神经科学领域研究的一个基本问题。目前纤维联系研究 4 呐蛳哪汕叩砸呻舯 鲁东大学硕士学位论文 中应用最广泛的是利用神经元轴浆运输现象的追踪技术。k r i s t e n s o n 等( 1 9 7 1 年) 及 l a v a i l 等( 1 9 7 2 ) 先后将h r p 用于追踪周围神经及中枢神经系统的纤维联系，创造了 h r p 追踪技术。将h r p 注射于神经末梢所在部位，h r p 随即被神经末梢通过非特异性 整体胞饮的方式摄入，逆向运至胞体，然后用组织化学方法显示h r p 的运输结果。以 后发现h r p 也可以被神经元的胞体摄入，顺向运送至末梢部位，因而也可用作顺向追 踪。在国内外这种方法都己成功的应用于高等脊椎动物【1 0 1 以及鲫鱼【1 1 ，1 2 】等脊椎动物神经 系统的研究。在无脊椎动物水蛭【1 3 - 16 1 、淡水螺【1 7 1 、裸鳃类软体动物1 8 1 、蝇【1 9 , 2 0 、蝗虫口1 ， 2 2 1 、龙虾【2 3 , 2 4 】，螃蟹嘲等无脊椎动物的神经系统研究中都得到了很好的结果。在这些研 究中，h r p 追踪技术大多与电镜及激光共聚焦显微镜结合用于研究神经元突触间的联系 及突触的其它相关性质。 l u c i f e ry e l l o w 是s t e w a r t ( 1 9 7 8 ) 开发的一种极好的荧光染料。s t e w a r t 描述了染料的 合成及实验相关的用法。在蝇的神经系统注入l u c i f e ry e l l o w ，可使其神经系统中的一 些相关结构被染色【2 6 1 。l u c i f e ry e l l o w 也被用于脊椎动物【2 7 2 9 1 、软体动物【3 3 1 、甲壳动 物1 3 4 】的研究，另外它还被用于昆虫细胞再生【3 5 1 以及神经发育过程中的神经元形态变化的 研刭3 6 - 3 9 1 。 运用h r p 与l u c i f e ry e l l o w 及其他染料的双标记技术，也对龙虾的s t g 2 4 1 、蝗虫f 3 6 1 、 水魁1 4 , 4 0 】等无脊椎动物的神经通路进行过一些研究。将追踪技术与激光共聚焦、电镜技 术及免疫细胞组化方法结合能够更加完整和细致揭示不同神经结构之间关系。 3s t n s 相关组织化学和免疫细胞化学研究现状 甲壳纲十足目动物口胃神经系统的活动同时受神经肽、生物胺以及传统的神经递质 的调节，这为研究神经回路的内部调节提供了一个很好的模型体系。幽门和胃磨两个神 经回路调节前肠，使其节律性的完成食物的咀嚼和消化运动，但是这两个回路的输出不 是一成不变的，它们受内源化合物的广泛调节【4 1 4 3 1 。这些调节物质是由突触终末释放， 或是从神经体液器官分泌进入血淋巴1 4 4 4 7 】。它们能够改变s t g 内神经元胞体或突触的 活动，致使幽门和胃磨的节律运动模式产生一系列的改变。 神经递质对动物机体的影响包括改变单个离子通道的活性1 4 引，在单神经网络基础上 实现交替开关两个网络节律活性的功能【4 9 1 ，及神经网络再次完全恢复5 m 5 2 1 。运用离体 s t n s 标本，可进一步阐明特定调节神经元是如何通过其多种辅助递质( c o t r a n s m i t t e r s ) 来完成对神经网络活动的调节【弱巧5 1 。 很显然，研究神经元之间的化学传递物质必然会倾向于采用细胞组成较少且相对简 鲁东大学硕士学位论文 单的系统【5 6 1 。而无脊椎动物的神经系统具备这一特点，为该类研究提供大量较好的系统 研究材料【5 7 1 ，甲壳动物十足目的口胃神经系统是该研究的完美标本。 3 1s t n s 乙酰胆碱类神经递质的研究进展 在甲壳动物神经肌肉结合处发现a c h ，类胆碱能递质的阻断剂( 箭毒和阿托品) ， a c h e 抑制剂( 毒扁豆碱) 。几乎同时，在蟹的神经组织检测到了a c h 5 引。在随后的几 年里在甲壳纲，昆虫纲的神经组织5 9 ，删也发现存在大量的a c h ，另外在外周神经干 ( t r u n k ) 也发现a c h 。f l o r e y 和b i e d e n n 锄【6 1 】证实蟹的前螯肢感觉神经丛内存在a c h ( 通 过生物分析测得) ，而在兴奋型和抑制型神经突起上不存在。这使f l o r c y 6 2 】意识到a c h 可能是甲壳动物感觉神经递质化合物，但以往应用水浴在甲壳动物中枢神经系统很难验 证它的存在【6 3 ，6 4 。在这些动物中观察到高密度的乙酰胆碱酯酶与围绕在细胞胞体和神经 毡分支的神经胶质细胞相连【6 5 1 ，但没有发现生理学作用。另外，有实验证实在甲壳动物 的外周组织缺少类胆碱能的物质陋】。 在龙虾步行足神经丛提取的样本中，w e l s c h 和d e t t b a m ( 1 9 7 0 ) 【d 7 】验证了a c h ，胆 碱乙酰化酶( c h o l i n ea e e t y l a s e ，c h a t ) 和a c h e 亚细胞水平的分布。d e t t b a r n 掣d 7 1 也初 步推测在神经突起传导中可能包含a c h 系统，并且还引证了a c h 随神经干周围离子环 境的改变而自发释放来支持这一观点。 3 2s t n s 单胺类神经递质的研究进展 虽然s t n s 神经回路的突触联系和内在神经化学机制相对简单，但该系统能够产生 多种活性模式。其中，单胺类神经调节物质是该系统重要的神经网络调节物质【6 引。单胺 类神经递质虽然不是由s t g 的神经元合成，但它们能够通过s t n 进入幽门网络，到达幽 门相关的神经元。并且单胺类的生物物理方面的功能在幽门系统已得到充分验证【钞7 2 1 。 通过调节电脉冲的振幅和时间间隔，单胺类神经递质能够使幽门网络发生特有的变化。 由于单胺类能有效调节放电的时间间隔和脉冲数量等参数，而这些参数又是运动输出最 重要的决定因素【7 3 】，所以早期研究大都集中在幽门活性的这些相关参数的研究上