（分析化学专业论文）荧光素及中性红染料间能量转移机理研究及其分析应用.pdf

摘要摘要荧光共振能量转移是一种通过荧光物质间发生荧光能量传递进行分析的实验方法。能量转移的应用与单个染料光度测定相比，具有比光度法灵敏度高，与常规荧光法和共振光散射相比受瑞利散射光干扰少，重现性好的特点，该方法已被广泛应用于化学分析、生物结构研究等领域。本文就此类方法进行了初步的机理研究及其相关应用研究，共分以下五部分：第一章：对近年来荧光素类酸性染料及碱性染料中性红在荧光分析中的应用和染料间非辐射荧光共振能量转移的机理研究及在分析化学中的应用进行了较全面的综述，共引用参考文献6 2 篇。第二章：应用荧光光谱法研究了水溶液体系中，酸性染料四溴荧光素( t b f ) 、四碘荧光素( t i f ) 、四氯四碘荧光素( t c t i f ) 、四氯四溴荧光素( t c t b f ) 分别与碱性染料中性红( n r ) 之间的相互作用。实验表明：n r 对各酸性染料的荧光都有较强的猝灭作用，由荧光猝灭结果求得不同温度下n r 与各种酸性染料的结合常数k 。发现k 值随反应温度上升而下降且随酸性染料取代基的电负性增加而增大，进一步证实了该反应为单一静态猝灭过程。由反应焓变、熵变，确定n r 与酸性染料间的结合力主要是静电引力。依据非辐射能量转移机理，得到了不同温度下各酸性染料与n r 相互结合时，能量转移效率、能量给体与能量受体间距离r 等参数，各体系r 2 0 1 0 旧u m 0 1 s ，则证明以上猝灭不是由于动态碰撞而引起的，而是形成了复合物而引起的静态猝灭。在静态猝灭作用中，静态猝灭荧光强度、猝灭剂浓度与结合常数k 之间的关系为【4 1 】：口w = ) = 巧7 + 所7 r 7 ，q ，其中k 的单位是l m o l 。以口w ) 。对，凹7 作图，由曲线截距和斜率可求出染料间的结合常数k ，可推断出染料问的结合能力。根据f 6 r s t e r 能量转移【4 2 ，4 3 1 理论，荧光体与猝灭体之间的能量转移效率( 目和两者之间的距离( 砂的关系【删为e = r 0 6 佃0 6 + 一，其中局为能量转移效率5 0 时对应的距离，r d 6 = & 殆，矿2 澎西矿。厂，式中f 为取向因子，可取受能体和供能体各向随机分布的平均值2 3 ；为介质的折射指数，一般取水和有机物折射指数的平均值1 3 3 6 ，9 为给体的光量子产率，- 厂为给体的荧光发射光谱与受体的吸收光谱的重叠积分，可表示为：，=溯缈出删么五，式中用砂为给体在波长五处的荧光强度，例为受体在波长a 处的摩尔吸光系数，单位l m o l 吼；z 是波长，单位啪。而能量转移效率e 又可以由e = j 觋测定，其中，和而分别为能量接受体存在和不存在时能量给予体的荧光发射强度。显然，只要得到e ，并通过实测光谱求出积分面积- ，就可算出和，。1 3 2 染料间能量转移在荧光分析中的应用染料间能量转移分为碱性染料与碱性染料间、酸性染料与酸性染料间、酸性染料与碱性染料间的能量转移。前两者由于同种染料间的斥力作用，往往需要加入与染料带有相反电荷的表面活性剂，来降低溶液表面张力，拉近染料间的距离，以便发生同种染料间的能量转移。而后者由于酸性、碱性染料带有相反电荷，因为静电引力作用使两者彼此靠近。进而在没有表面活性剂存在时就能够发生能量转移反应。能量转移的应用与单个染料光度测定相比，具有比光度法灵敏度高，与常规荧光法和共振光散射相比受瑞利散射光干扰少，重现性好的特点，该方法已被广泛应用于有机物、无机物等的化学分析、河北大学理学硕十学何论文生物结构研究等领域，其应用见表1 3 。表1 3 染料间能量转移的应用t a bl 一3a p p l i c a t i o no ff l u o r e s c e n c er e s o n a n c ee n e r g yt r a n s f e rb e 粕，e e nd y e s体系擒黻条件嚣努翼器尹鼍尝尹裂誊文献淼4 9 凇蒜嚣们等僦娄罕嘉嘲，竺三4 5 0 5 1 2p h - 7 2 3钙妥绿素4 5 0 俗1 2b r ；蒸4 5 蝴6 罾吖啶橙罗丹明6 gp a r 吖啶黄吖啶橙罗丹明6 g吖啶橙罗丹明6 g吖啶橙罗丹明6 g吖啶橙罗丹明b吖啶黄罗丹明6 g粥2 怒篙霪举銮m ，1 o l 矿1 0 4样中铬。14 8 1 0 7m o l l4 5 0 5 5 6p 鼍- 7 一b s 赴3 2 0 t h s - h c lh s a ：3 3 04 6 5 5 0 54 7 0 5 5 64 5 0 5 5 6p h = 9 2t r i s h c lp h = 7 8t r i s h c lh c lo 0 66 43 5 0。裂旷5 淼筝鬣mm o 。1 0 3 6中他。b s a ：肛3 1 1 0 4h s a ：o 3 0 1 0 40 l o2 1 3 9 8 27 5 1 0 2 6 0 1 0 44 5 0 5 5 6h c l5 o l o 30 0 5 o 7 04 7 0 5 8 0h 2 s 0 42 5 610 0 2 5 04 6 5 5 5 6h 2 s 0 43 7 35 8 5 8 7 7 4番凳登笔-4 5 0 5 8 0吖啶橙。p a n 罗丹明6 g5 4 3 5 5 8h c lp h = 9 5氨1 7 32 0 1 0 1 0 4p 咖l3 5 51 2 6 0 0；言之拿妻雪m ，1 0 3 2中蛋白。1黧篓军砉1 1 m o崩翟；：鐾1 0 4 石水中磊黧蒜1 0 7 d弄年矗【4 9 】【5 0 】【5 1 】【5 2 】【5 3 】【5 4 】【5 5 】【5 6 】罗嬲k5 4 3 ，s s s中性4 o sm3 翟；头誊中【5 7 】罗丹明6 g5 4 3 ，5 5 8中性4 0 51 3 3 6 0j 5一蒹【5 7 】篇季一8 霉n c 粥31 怒一言墨蓄郾，第1 章综述1 4 染料间荧光能量转移的发展与展望目前能量转移体系的研究主要集中在碱性染料间，至于酸性染料间，酸、碱染料间的能量转移机理以及应用的研究报道甚少，其给体和受体之间的结合机理，给体的猝灭类型，结合模型以及热力学性质等都需进一步深入探讨。基于物质间的竞争作用，利用逆向能量转移进行分析测定的研究未见报道。近年来，随着新的供受体对的设计合成，新的f r e t 体系的开拓，以及将f r e t技术与时间分辨荧光检测、激光共聚焦荧光显微和荧光漂白等光物理技术结合使用将成为未来f r e t 技术发展的主要方向。河：i 匕人学理学硕十学何论文第2 章酸、碱染料间能量转移机理的研究：荧光素中性红体系摘要：应用荧光光谱法研究了水溶液体系中，酸性染料四溴荧光素( t b f ) 、四碘荧光素( t ) 、四氯四碘荧光素( t c t i f ) 、四氯四溴荧光素( t c t b f ) 分别与碱性染料中性红( n r ) 之间的相互作用。实验表明：n r 对各酸性染料的荧光都有较强的猝灭作用，由荧光猝灭结果求得不同温度下n r 与各种酸性染料的结合常数k 。发现k 值随反应温度上升而下降且随酸性染料取代基的电负性增加而增大，进一步证实了该反应为单一静态猝灭过程。由反应焓变、熵变，确定n r 与酸性染料间的结合力主要是静电引力。依据非辐射能量转移机理，探讨了不同温度下各酸性染料与n r 相互结合时，能量转移效率、能量给体与能量受体间距离r 等参数，各体系r 2 o 1 0 1 0 0 1 s ( 最大扩散碰撞猝灭常数) ，因此进一步证实猝灭不是由于动态碰撞引起的，而是形成了化合物而引起的静态猝灭。在静态猝灭作用中，静态猝灭荧光强度与猝灭剂之间的关系为【6 9 】：删。7 = 厅7 + 鼢k 7 砑，由删c 2 曲线截距和斜率可求出酸性染料与n r 的结合常数k ，见表2 2 可知：n r对各酸性染料的结合常数k 值的变化、t b f t i f ；t c t b f t c t i f ；这是由于溴的电负性比碘大，因此含溴的荧光素染料与中性红形成能量转移对时比含碘的荧光素染料稳定常数大；、t c t b f 与t b f ，t c t i f 与t i f 比较前者结合常数较大，表明染料b 位置电负性取代基的引入对t i f 结合常数影响较大，对t b f 影响较小，这可能是氯、碘间电负性相差较大而氯、溴间电负性差较小的缘故。、且随温度升高k 值下降。即温度升高，n r - 各酸性染料结合稳定性下降。图2 1t b f 与n r 猝灭反应的荧光光谱f i g 2 1q l u e l l c h i n gf i u o r e s c e i l c es p e c 姐o f t b f ( ct b f = 2 0 lo 7m o n 0 谢吐lv a r i o u sc o n c e n t r a t i o n so f n r舶m ( 1 ) t o ( 1 0 ) c n r ( 1 0 m o l l ) ：o o ，o 1 ，0 2 ，o 3 ，o 4 ，0 5 ，o 6 ，o 8 ，1 o ，1 2第2 章酸、碱染料问能虽转移机理的研究：荧光素一中性红体系表2 1不同温度下中性红对各酸性染料猝灭的s t e m v o l m e r 猝灭常数( m n o l 。s )t l b2 - lt h es t e m - v o l m e rq u e n c hc o n s t a n t sf o rd i f f ；潮tn r 谢t he v e 哆a c i d i t yd y e s t u 行a td i 行e r e i l tt 咖p e r a t u r e s表2 2 不同温度下中性红对各酸性染料猝灭的结合常数k ( l m 0 1 )t l b2 2t h eb i n d i n gc o n s t a n t sf o rd i f f e r e n tn rw i t l le v e ：r ya c i d i 够d y e s t i l 行a td i 仃e r e n tt e i l l p e r a t u r e s河北大学理学硕十学何论文2 3 2 酸性染料与中性红主要结合力的确定分子间的作用力包括氢键、范德华力、静电引力、疏水作用力等。当温度变化不大时，反应焓变4 日可以看作是一个常数，由加俾j 膨= 彳即乃j 黝r ；4 g = 4 厚财s ，彳g = 坝刀枨可以求出焓变4 日、熵变彳s 。彳日 d ，彳s d 分子间作用力主要为色散力，彳日 d ，彳p d 分子间作用力主要为静电引力【7 0 1 。由表2 3 可以看出：么日 d ，彳d ，说明该能量转移反应为放热反应，且反应使体系熵变增加，彳g o 表明酸、碱染料问的能量转移反应能自发进行，且酸性染料中所含电负性取代基的电负性越强、电负性取代基越多能量转移反应越容易进行。由于所研究形成能量转移的染料带有相反电荷，容易以静电引力发生作用即荧光素染料与中性红间主要作用力是静电引力。表2 3 酸性染料与中性红结合过程的热力学参数t 芒l b2 - 3t h et h e m o d y n a m i cc o n s t a n t sf 0 re v e 巧a c i d i 够d y e s t i l f ra n dn e u 仃a lr e d2 3 3 特定结合部位微环境研究测出中性红的紫外一可见吸收光谱，发现其与各种酸性染料的荧光光谱都有部分重叠( 图2 2 阴影部分) 。按照f 6 r s t e r 能量转移机理，能量给体与能量受体间距离，与能量转移效率为5 0 时所对应的临界能量转移距离r d 及能量转移效率e 之间有如下关系【3 9 1 ：e = 尺d 伽0 6 + 力，其中：r 0 6 = 8 殆j 旷澎剑、，o ；p 是和能量给体及受体跃迁矩相互有关的因子取2 3 ；是溶剂的折射率，取水和有机物的平均值1 3 3 6 ；多为当无受体存在时能量给体的荧光量子产率：查文献【7 1 7 3 1 知磷光量子产率为第2 章酸、碱染料问能帚转移机理的研究：荧光素一中性红体系t b f t i f t c t b f t c t i f ，而荧光量子产率正好相反；t b f 、t i f 分别取o 1 9 、o 0 2 ，t c t b f 、t c t i f 近似取o 0 2 ：为光谱的重叠积分，且有：，= 删s 例厶五劂厶a ，通过自行设计计算机程序处理数据得出，值，刑为给体在波长a 处的荧光强度，为受体在波长a 处的摩尔吸光系数，单位l m o l c m ；a 是波长，单位锄。由临界转移距离尺d ( 在计算勘时可认为能量给体与受体间相互取向是无规则的，此时因子髟- 2 3 )和实验测得能量转移效率e = j 娲就可以计算出能量给体与受体间的距离，。见表2 4 ，可知：各体系，c a s s图5 5 能量转移模型f 培5 - 5n em o d e lo fe n e f g y 嘶s 衙5 5 结论低浓度染料分子间发生有效能量转移应具备以下条件( 1 ) ：两染料给体的发射波长3 2 第5 章胶束体系中荧光素丁四溴荧光素间能鞋转移条件及模型研究与受体的吸收波长差值尽量小；( 2 ) ：需在与染料带相反电荷的表面活性剂介质中进行；( 3 ) ：表面活性剂浓度应在c m c 以下且在2 3c m c 左右能量转移效率叩值最大；( 4 ) ：受体荧光强度受叩值及表面活性剂增敏作用共同影响，即荧光强度最大时表面活性剂浓度不一定等于2 3c m c 处值；( 5 ) ：两个带相反电荷染料间的能量转移机理及应用有待进一步研究。河北大学理学硕十学位论文参考文献【1 】翁文婷4 ，6 - 二溴荧光素荧光法测定微量铜离子的研究【j 】泉州师范学院学报( 自然科学) 2 0 0 7 ，2 5 ( 2 ) ：7 l 7 4 【2 】陈兰化，严波过氧化氢氧化二氯荧光素动力学荧光法测定痕量镍【j 】冶金分析2 0 0 7 ，2 7 ( 1 1 ) ：4 l 4 3 【3 】傅丽，刘保生，曹冬林四溴荧光素荧光猝灭法测定司帕沙星【j 】分析试验室2 0 0 6 ，2 5 ( 10 ) ：6 2 一“【4 】范文秀，王泽云2 ，7 - 二氯荧光素荧光光谱法测定食盐中的1 0 3 含量【j 】广东微量元素科学2 0 0 6 ，1 3 ( 3 ) ：5 8 6 1 5 】陈兰化，张英溴酸钾氧化二氯荧光素催化荧光法测定痕量铬( ) j 】中国卫生检验杂志2 0 0 5 ，l5 ( 4 ) ：4 4 2 4 5 2 6 】范文秀，张玉泉2 ，7 - 二氯荧光素荧光光谱法测定饲料中微量总砷 j 】光谱实验室2 0 0 5 ，2 2 ( 2 ) ：3 4 7 3 4 9 【7 】臧运波，张爱梅荧光素钠m n 2 + h 2 0 2 体系荧光法测定常见水果的抗氧化活性【j 】分析科学学报2 0 0 5 ，2 1 ( 1 ) ：8l 8 3 【8 】占达东，王周平，吕家根荧光素- g o d - h l 冲荧光淬灭法测定植物果实组织中的葡萄糖含量【j 】海南大学学报自然科学版2 0 0 4 ，2 2 ( 1 ) ：5 7 6 0 【9 】陈兰化，杨利青过氧化氢氧化二氯荧光素动力学荧光法测定痕量铜 j 】分析试验室2 0 0 3 ，2 2 ( 5 ) ：3 2 3 4 【1 0 】齐香君，刘农南，范文杰，等荧光素汞荧光熄灭法测定海带中微量碘【j 】光谱实验室2 0 0 2 ，1 9 ( 6 ) ：7 2 l 7 2 4 【1 1 】郭畅，王伦二溴荧光素荧光动力学分析法测定痕量钴【j 】安庆师范学院学报( 自然科学版) 2 0 0 2 ，8 ( 3 ) ：2 2 2 5 【1 2 】朱展才，朱红斌，汪静异硫氰酸荧光素荧光法测定痕量铈【j 】分析化学2 0 0 l ，2 9 ( 1 0 ) ：1 2 3 4 【1 3 】朱展才，黄佳英，王佩珊异硫氰酸荧光素荧光猝灭法测定痕量碘酸根 j 】分析测试技术与仪器2 0 0 0 ，6 ( 4 ) ：2 2 5 2 2 7 【1 4 】李学强，龚波林2 ，7 一二氯荧光素荧光法测定环境样品中微量a s ( i i i ) 的研究【j 】光谱学与光谱3 4 分析2 0 0 0 ，2 0 ( 3 ) ：4 2 0 4 2 2 参考文献【1 5 】李学强，田晓燕，龚波林荧光素荧光法测定大气中s 0 2 的研究【j 】宁夏大学学报( 自然科学版) 1 9 9 9 ，2 0 ( 4 ) ：3 3 8 3 3 9 【l 叼i m o r i ，yf q i t a ，k 【u t a ，e ta 1 h i g h l ys e n s i t i v ea n ds e i e c t i v ef l u o r i m e t r i cm e t h o d sf 研m ed e t e r m i l l a t i o no fi r o n ( i i i ) a n dm a n g a n e s e ( i i ) u s i n gf l u o r e s c e i i l h y d r o g e np e r o x i d e t r i e m l e n e t e 协a m i n e锄df l u o r e s ce i 叭l y d r o g e np e r o x i d e t r i e t h l e n e t e 仃a 【m i i l e t i r o n ，r e s p e c t i v e l y j 】f r e s e n i u s 7j o u m a lo fa i l a l 舛c a lc h e n l i s t 够1 9 8 7 ，3 3 4 ( 3 ) ：2 5 2 2 5 5 【1 7 】j i a m i i l gl i u ，“a i l g y u nx u ，s h i r o n gh u ，e ta 1 d e t e m i n a t i o no f g l u c o s eb ya m n 时a d s o r p t - i o ns o l i ds 1 l b s 仃a t e r 0 锄帅e r a t l l r ep h o s p h 砥m e 仃yb a s e do nc o n c a n a v a l i na g g l u t i n i nla _ b e l e dw i ml u o r e s c e i nu s i n g1 5 一g e i l e r a t i o nd e l l d r i m e r sa ss e i l s i t i z e r j 】m i c r o c h i ma c t a 2 0 0 8 ，1 6 l ( 1 ) ：2 1 7 2 2 4 1 8 】ks u v a r d h 船，ks u r e s l l l ( u m a ra n dp c h i r a n j e e v l e x t m c t i v es p e c 的f l u o r o m e t r i cd e t e n n i n a t i o no fq u i n a l p h o su s i i l gf l u o f e s c e i ni i le n v i r o 姗e n t a ls a m p l e s 【j 】e n v i r o m e n t a lm o n i t o m ga n da s s s m t 2 0 0 5 ，1 0 8 ( 1 3 ) ：2 1 7 2 2 7 【l9 】k a t s l l l l i l 【0s a t o 髓dj u n - i c h ia n z a i f l u o r o m e t r i cd e t e m i n a t i o no fs u g a r su s i l l gf l u o r e s c e i n - l a b e l e dc o n c a l l a v a l i na - g l y c o g e nc o n j u g a t e s 【j 】a m a lb i o 锄a lc l l e i n 2 0 0 6 ，3 8 4 ( 6 ) ：1 2 9 7 1 3 0 1 【2 0 】y i i l g - h l l ad e i l g ，h u a - s h 锄z l l a n g 锄dh o n gw a n g r a p i d 觚ds e n s i t i v ed e t e m i i l a t i o no fp h o s p h o 锄i i l oa c i d si 1 1p h o s 访t i nb yn - h y d r o x y s u c c i n i m i d y lf l u o r e s c e i n o a c e t a t ei l e r i v a t i z a t i o na n dc a p i l l a 巧z o n ee l e c 仃o p h o r e s i s 、) l ，i ml a s * i i l d u c e df l u o r e s c e i l c ed e t e c t i o n j 】a n a lb i o a n a lc h e l n 2 0 0 8 ，3 9 2 ( 1 - 2 ) ：2 3 1 2 3 8 【2 l 】h 1 l l l t a l ，a l d 耐f f l u o r e s c e i nm 盯c u r y ( i i ) a c e t a t e 锄ds o d i 啪n u o r e s c e i i l 鸽r e a g e n t sf o rm ed e t e n n m a t i o no fb i s ( 2 - c h l o r o e m y l ) s u l f i d eb yn u o r e s c e i l c eq u e n c h i n g 【j 】a n a l ”i c ac h i m i c aa c t a 1 9 9 9 ，3 8 7 ( 2 ) ：2 0 7 2 1 5 【2 2 】g u o h u i 删，z h 姐c a iz h u 锄d 协gq i u af l u o r o m e 翻cm e t h o d 蠡竹l ed e t e 肋i l l a t i o no fh d n ( i i ) w i t l lf l u o r e s c e i ni s o t h i o c y a n a t e 锄di o d i n e j a n a l y t i c a ls c i 肌c 船2 0 0 2 ，1 8 ( 9 ) ：1 0 5 9 1 0 6 1 【2 3 】朱展才，林德娟，林进妹用荧光素和碘测定抗坏血酸的研究 j 】分析测试技术与仪器2 0 0 l ，7 ( 1 ) ：2 7 3 0 【2 4 】朱国辉，朱展才，薛珲，等荧光猝灭测定痕量钯 j 】分析化学2 0 0 3 ，3 1 ( 1 ) ：4 8 5 1 【2 5 】魏琳琳荧光分析测定苯酚新方法研究【j 】福建分析测试2 0 0 7 ，1 6 ( 1 ) ：1 2 1 4 3 5 河北大学理学硕一卜学位论文【2 6 】b a o l i n gy u a n ，j i u h u iq ua n dq i n g 瑚l i l l f l u o r i m e t r i cd e t e m i n a t i o no fa r s e n i t ea n da r s 锄a t ei nw a t e ru s i n gn u o r e s c e i na i l di o d i n e 【j 】i i l t e n l a t i o n a l j 0 啪a lo fe 州r o 姗e n t a la n a l y t i c a lc h 啪i s 略2 0 0 2 ，8 2 ( 1 ) ：3 l 3 6 【2 7 】b m a l l i e u ) ( e ，m 一c c a 玎6 ，j - c a n d r 6 ，e ta ln i 仃a t en u o m e t r i c 锄a l y s i su s i n ga i la c t i v e0 p t i c a l助e r 【j a m a l u s i s 1 9 9 9 ，2 7 ( 8 ) ：7 3 5 7 4 1 【2 8 】司文会核糖核酸与中性红作用机理及含量测定的研究【j 】光谱学与光谱分析2 0 0 7 ，2 7 ( 6 ) ：1 1 8 1 1 1 8 4 2 9 】鲍所言，成永强，石生勋中性红催化荧光法测定钒( v ) 【j 】河北大学学报( 自然科学版) 2 0 0 3 ，2 3 ( 2 ) ：1 4 4 1 4 6 3 0 】李文友，吴会灵，何锡文，等中性红荧光探针法测定生物大分子核酸【j 】高等学校化学学报2 0 0 3 ，2 4 ( 1 0 ) ：1 7 8 7 一1 7 8 9 【3 l 】唐宏兵，王玉芳，葛态刚，等中性红荧光熄灭法测定食品中亚硝酸盐【j 】江苏预防医学2 0 0 0 ，1 1 ( 2 ) ：6 2 6 3 【3 2 】任慧娟，符连社，张荣冬，等中性红作试剂荧光光度法测定亚硝酸根 j 】分析化学1 9 9 8 ，2 6 ( 1 0 ) ：1 2 6 4 1 2 6 6 【3 3 】d a m i l ( a e l y 狮，v z h a n s m n i ，o g e o k c h y 锄，e ta 1 s o l v 锄te x 咖c t i o nf l u o r i m e t r i cd e t e m i n a t i o no ft l l a l l i 啪( i i i ) i nm 锄g 锄e s eo x i d eo 煅谢t l lan e u 仃a lb 觞i cr e dd y e 【j 】j o u n l a l0 fa n a l 如c a lc h 锄i s 时2 0 01 ，5 6 ( 4 ) ：3 6 8 3 6 9 【3 4 】t y b s h i d a ，y m o r i y a m a 觚dh l i g u c h i 昏m e n l o x y _ 2 一m e t l l y l s u l f o n y l q u i n o l i n e _ 4 _ c a r b o n y lc h l o d d e 够af l u o r e s c e i l c ed 嘶t i z a t i o nr e a g e n t 矗泔a l c o h o l si nh i g l l - 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( 4 c a r b o x y p h e n y l ) -3 6 参考文献6 - m e m o x ) i b e n z o 如啪 j j o u m a lo f c h r o m a t o 蓼a p h y a 1 9 9 6 ，7 2 4 ( 1 - 2 ) ：1 0 7 1 1 5 【3 8 】p e t e ra s s a f ，j e h o s h u a 勋t z l l e n d l e r 孤da b d u l l a hi h a j - y e h i a 2 一( 4 一c a r b o x y p h e l l y l ) 一6 - n ，n - d i e t l l y l 锄i i l o b e i l z o 如m n ：au s e 如lm a g e n tf o rm es e n s i t i v ed e t e n n i i l a t i o no fa l c o h o l sb yh i 9 1 l - p e 响m 孤c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h yw i t hn u o r i m e t r i cd e t e c t i o n 【j 】j o u m a lo fc h r o m a t o g r a p h ya 2 0 0 0 ，8 6 9 ( 1 - 2 ) ：2 4 3 以5 0 【3 9 】颜梅，陈欣，孙舒婷，等荧光光谱法研究二溴羟基卟啉与蛋白质的结合作用机理 j 】光谱学与光谱分析2 0 0 8 ，2 8 ( 6 ) ：13 2 2 一l3 2 6 4 0 y a n j u nh u ，y il i u ，x u e - s o n gs h e i l ，e ta 1 s t l l d i 豁0 nm ei l l t e r a c t i o nb e t w e e nl - h e x y l c a 而锄o y l 一5 一f l u o r o u r a l c i la n db o 恤es e m ma l b u m i n 【j 】j 0 u m a lo f m o l e c u l a rs 缸1 l c t u r e 2 0 0 5 ，7 3 8 ( 1 - 3 ) ：1 4 3 1 4 7 【4 l 】杨曼曼，杨频，张立伟荧光法研究咖啡酸类药物与自蛋白的作用【j 】科学通报1 9 9 4 ，3 9 ( 1 ) ：3 l 3 4 【4 2 】许金钩荧光分析法【m 】，第3 版北京：科学出版社2 0 0 6 ：7 2 7 5 【4 3 】i ：印u t s k a y a 认，e m i l o v e a ，t 肌n e n s ，e ta 1 t h ei i l n u e n c eo f f 6 r s t e re n e r g y 觚l s f 盯o ns p c c 咖l 锄dk i n e t i cc h a r a c t e r i s t i c so fp h o s p h o r e s c e n c e 锄dt h e r m a l l ya c t i v a t e dd e l a y 司n u o r e s c e n c eo fa c r i n 棚ei n 印0 1 灿l y l a l c o h o lm a t r i x 【j 】jl 啪i n e s c 即c e 2 0 0 6 ，1 2 l ( 1 ) ：7 5 8 7 p 吲s w a t id e ，a 盟i s h w a rg i r i g o s w a m i f l u o r e s c 朗c er e s o n 孤c ee i l e r g y 劬n s f 融- as p e c 们s c o p i cp b ef o ro r g 锄i z e ds u 】r f a c t a i l tm e d i a 【j 】j o u m a lo f c o l l o i d 锄dh l t e 而c es c i e n c e 2 0 0 4 ，2 7 l ( 2 ) ：4 8 5q 9 5 【4 5 】江或，吴何珍，高峰，等荧光素酚藏花红荧光能量转移用于测定c u 2 + 【j 】化学研究与应用2 0 0 5 ，1 7 ( 6 ) ：7 6 弘7 7 1 【4 6 】李小燕，李树伟，潘建章，等荧光共振能量转移体系测定c r ( ) 的研究【j 】四川师范大学学报( 自然科学版) 2 0 0 5 ，2 8 ( 6 ) ：7 1 2 7 1 4 【4 7 】刘保生，高静，杨更亮吖啶橙一罗丹明6 g 能量转移荧光猝灭法测定维生素b 1 2 【j 】光谱学与光谱分析2 0 0 5 ，2 5 ( 7 ) ：1 0 8 0 1 0 8 2 【4 8 】刘保生，高静，杨更亮吖啶橙一罗丹明6 g 荧光共振能量转移及罗丹明6 g 荧光猝灭测定蛋白质【j 】分析化学2 0 0 5 ，3 3 ( 4 ) ：5 4 缸5 4 8 4 9 】鲍所言，王桂华，刘保生，等p a r 吖啶黄能量转移荧光猝灭法测定痕量铁( i i ) 的研究【j 】光谱学与光谱分析2 0 0 l ，2 l ( 1 ) ：8 7 8 9 【5 0 】欧阳运富，王永生，薛金花，等吖啶橙- 罗丹明6 g 共振能量转移荧光猝灭法测定尿中l - 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