（外科学专业论文）ebp50在胃癌、癌旁组织及正常胃组织中的表达及其意义.pdf

l 乙x br ? i 中文摘要 i i i iii iii i i i i i1 1 1 1 1 1 1i i i i j 18 018 7 3 e b p 5 0 在胃癌、癌旁组织及正常胃组织中的表达及其意义 摘要 目的：胃癌是当今世界范围内最常见的恶性肿瘤之一，也是癌症致死 的一个主要原因。其发病机制不清楚，涉及多因素、多环节及多基因参与 的复杂过程。研究有关胃癌诊断、转移及预后的生物学标志物是治疗胃癌 的关键。磷酸化蛋白5 0 ( e b p 5 0 ) 是一种多功能连接蛋白，它由3 5 8 个氨基 酸组成，其氨基端含有两个串联的p d z 结构域：p d z i 和p d z i i ，羧基 端含有与e r m 家族蛋白结合的结构域，它可以与3 0 多种蛋白结合，从而 在调节离子转运和第二信使级联反应过程中发挥着重要作用。它在组织中 广泛分布，在肝脏、小肠、胃、肾脏、胰腺、乳腺中高度表达。目前有很 多证据提示，e b p 5 0 是一种新的抑癌基因，它在多种肿瘤中存在异常表达 和定位，并且通过与多种抑癌蛋白的相互作用参与肿瘤的发生与发展。目 前，有关e b p 5 0 在胃癌中表达的研究，国内外均未见报道，我们应用免疫 组化检测e b p 5 0 在胃癌组织、癌旁组织及正常胃组织中的表达水平，分析 三者间的关系，以及其与胃癌患者性别、年龄、分化程度、浸润深度、淋 巴结转移情况、i 临床分期等临床生物学行为的关系，旨在进一步了解胃癌 的生物学行为及判断胃癌患者预后的指标。 方法：选择2 0 0 9 年7 月至2 0 0 9 年1 2 月间在海南省人民医院腹部肿瘤外 科接受胃切除术并经过病理证实的原发性胃癌患者5 0 例，分别采集胃癌 组织和癌旁组织( 距离肿瘤边缘2 5 c m 以上，5 o c m 以内) 标本，术前均未进 行放、化疗。1 0 例正常胃组织标本取自胃镜检查者，且经病理证实为良性 病变( 如慢性胃炎，外伤等) 。采用免疫组化s p 法对5 0 例胃癌、5 0 f f , j 癌旁 胃组织及l o 歹l j 正常胃粘膜组织共1 1 0 例石蜡包埋组织进行e b p 5 0 基因表达 蛋白的检测，分析三者的表达情况及与胃癌患者性别、年龄、分化程度、 浸润深度、淋巴结转移、临床分期等临床生物学行为的关系。应用s p s s 1 1 5f o rw in d o w s 统计软件，采用x2 检验及s p e a r m a n 秩相关分析方法进 行统计学分析，p o 0 5 具有统计学意义。 结果：e b p 5 0 蛋白在正常胃组织、癌旁组织及胃癌组织中均有表达， 中文摘要 且在各组织中的阳性表达率呈下降趋势，正常胃粘膜组织e b p 5 0 蛋白全部 呈阳性表达，癌旁组织中e b p 5 0 蛋白阳性表达率为6 0 ，胃癌组织中e b p 5 0 蛋白阳性表达率为3 8 。三者相比统计学有显著差异( x2 = 1 4 3 7 4 ， p o 0 1 ) ，其中胃癌组织中e b p 5 0 阳性表达率比癌旁组织中e b p 5 0 阳性表 达率低( x 4 4 8 2 ，p o 0 5 ) ，胃癌组织中e b p 5 0 阳性表达率比与正常胃 粘膜中e b p 5 0 阳性表达率低( x2 = 1 2 8 2 8 ，p o 0 1 ) ，差异有显著性，癌 旁组织中e b p 5 0 蛋白阳性表达率比正常胃粘膜中e b p 5 0 蛋白阳性表达率低 ( x2 = 6 0 0 0 ，p o 0 5 ) ，差别有统计学意义。e b p 5 0 蛋白的表达与胃癌的 病理分级、浸润深度、有无淋巴结转移及临床分期之间有统计学意义( p o 0 5 ) 。 结论： 1 、e b p 5 0 在胃癌组织的阳性表达率较正常胃粘膜及癌旁胃粘膜明显 减低，提示e b p 5 0 蛋白的异常表达与胃癌的发生、发展有关。 2 、e b p 5 0 蛋白的表达与胃癌的多种重要临床病理预后因素相关：与 胃癌的临床分期、组织分化程度、有无淋巴结转移、肿瘤浸润程度有关， e b p 5 0 基因可以作为评估胃癌某些生物学特性的辅助指标。 关键词：胃癌，e b p 5 0 ，连接蛋白，抑癌基因，免疫组织化学。 英文摘要 t h ee x p r e s s i o no fe b p 5 0i nt i s s u eo ft h en o r m a lga s t r i c 、 ju x t a c a n c e r 0 u sb a s t r i ca n db a s t r i cc a r c l n o m a tj1 1j 1j _ a b s t r a c t o b j e c t i v e ：g a s t r i cc a r c i n o m ai s o n eo ft h em o s tc o m m o nm a l i g n a n t t u m o ri nt h ew o r l dw i d e ，a n di ti sa l s ot h em a i nr e a s o no fc a n c e rd e a t h t h e p a t h o g e n e s i si ss t i l lu n k n o w n ，w h i c hi n v o l v ef lc o m p l i c a t e dp r o c e s sc o n s t i t u t e d w i t h m u l t i f a c t o r 、m u l t i s t e p a n dp o l y g e n e t o s t u d yt h e b i o m a r k e r so f d i a g n o s i s 、m e t a s t a s i sa n dp r o g n o s i so fg a s t r i cc a n c e ri st h ek e yt ot r e a t m e n t e b p 5 0i sa3 5 8 一r e s i d u ep r o t e i nc o m p r i s e do ft w ot a n d e mp d zd o m a i n s ( p d z ia n dp d z i i ) a n dac - t e r m i n a le br e g i o n ，i ti sw i d e l yd i s t r i b u t e di n t h eo r g a n i z a t i o n s ，i nt h el i v e r , s m a l li n t e s t i n e ，s t o m a c h ，k i d n e y ；p a n c r e a s ，b r e a s t ，i s h i g h l ye x p r e s s e d e b p 5 0i ak i n do fm u l t i - j u n c t i o np r o t e i n ，w h i c hc a nc o m b i n e w i t h3 0k i n d so fp r o t e i n ，s oa st op l a ya ni m p o r t a n tr o l ei nt h e p r o c e s so f r e g u l a t e i o nt r a n s p o ta n ds e c o n d m e s s e n g e rc a s c a d e t h e r e a r eal o to f e v i d e n c et o s u g g e s tt h a te b p 5 0i s an e wt u m o rs u p p r e s s o rg c n e r e c e n t s t u d i e sh a v es u g g e s t e dt h a te b p 5 0i s e x p r e s s e da n dl o c a t e da b n o r m a l l yi n d if f e r e n tc a n c e r s f u r t h e r m o r e ，e b p 50h a sb e e nf o u n dt oi n t e r a c tw i t hs o m e t u m o r s u p p r e s s o rp r o t e i n s ，t h u sb e i n gi n v o l v e di nt u m o r i g e n e s i s a tp r e s e n t ，t h e e b p 5 0 e x p r e s s i o ni ng a s t i cc a n c e rr e s e a c h ，b o t ha th o m ea n da b r o a da r en o t b e e nr e p o r t e d w eu s ei m m u n o h i s t o c h e m i s t r yt od e t e c tt h el e v e l so fe b p 5 0 e x p r e s s e si n c a r c i n o m at i s s u e s 、j u x t a c a n c e r o u sg a s t r i ct i s s u ea n dn o r m a l g a s t r i ct i s s u e s ，t oa n a l y z e t h e r e l a t i o n s h i pb e t w e e nt h e t h r e ea n dt h e i r a s s o c i a t i o nw i t ht h eb i o l o g i c a lb e h a v i o ro fg a s t r i cc a n c e r ，i n c l u d i n gs e x ，a g e ， h i s t o l o g i c a lg r a d e ，i n v a s i o nd e p t h ，m e t a s t a s i so fl y m p hn o d ea n dt n ms t a g e e t c a i m e da tf u r t h e ru n d e r s t a n d i n gt h eb i o l o g i c a lb e h a v i o ro fg a s t r i cc a n c e r a n dj u d g i n gt h ep r o g n o s i so fg a s t r i cc a n c e rp a t i e n t s m e t h o d s ：i nt h i s s t u d y , w e s e l e c t5 0s a m p l e so fg a s t r i c c a n c e r , 5 0 s a m p l e so fj u x t a c a n c e r o u sg a s t r i ct i s s u e ( u p w a r 。d s2 5 c mf r o mt h et u m o r 3 英文摘要 一一 e d g e ，a n dw i t h i n5 0 c m ) a l lp a t i e n t sh a dg a s t r e c t o m yi nt h ea b d o m i n a lt u m o e r s u r g e ro fh a i n a np r o v i n c i a lp e o p l eh o s p i t a lf r o mj u l y2 0 0 9t od e c e m b e r 2 0 0 9 ，a 1 lt h e s es a m p l e sa r ew i t h o u tc h e m o t h e r a p ya n dr a d i o t h e r a p vb e f o r e s u r g e r y ，w h i c ha r ep r o v e db yp a t h o l o g y 10s a m p l e so fn o r m a lg a s t r i ct is s u e s c o m ef r o mg a s t r o s c o p y , w h i c ha r ed i a g n o s e da s b e n i g nl e s i o n s ( 1i k ec h r o n i c g a s t r i t i s ，t r a u m a ，e t c ) w ec o l l e c t e d5 0c a s e so fg a s t r i cc a r c i n o m at i s s u e ，5 0 c a s e so fj u x t a c a n c e r o u s g a s t r i ct i s s u ea n d10c a s e so fn o r m a lg a s t r i c t i s s u e s t h e nw ee x a m i n e dt h ee x p r e s s i o no fe b p 5 0a m o n g t h e110c a s e so f p a r a f f m e m b e d e dt i s s u e s ow ec a na n a l y z et h er e l a t i o n s h i pb e t w e e nt h et h r e e a n dt h e i ra s s o c i a t i o nw i t ht h eb i o l o g i c a lb e h a v i o ro f g a s t r i cc a n c e r ，i n c l u d i n g s e x ，a g e ，h i s t o l o g i c a lg r a d e ，i n v a s i o nd e p t h ，m e t a s t a s i so f l y m p hn o d ea n d t n m s t a g ee t c t h er e s u l t sw a st r e a t e db y ? 2t e s ta n ds p e a r m a nc o r r e l a t i o n a n a l y s i s ，a n dp 0 0 5w e r ec o n s i d e r e ds i g n i f i c a n t r e s u l t s ：e b p 5 0 p r o t e i nw e r ee x p r e s s e di nn o r m a l g a s t r i ct i s s u e ， j u x t a c a n c e r o u sg a s t r i ct i s s u ea n dg a s t r i cc a r c i n o m at i s s u e t h ep o s i t i v er a t e so f e x p r e s s i o no fe b p 5 0i ng a s t r i cc a n c e rw e r e3 8 ，r e s p e c t i v e l y t h o s ei n c o r r e s p o n d i n ga d j a c e n to fg a s t r i cc a n c e rw e r e6 0 ，r e s p e c t i v e l y e b p 5 0 p r o t e i ne x p r e s s e di na l ls p e c i m e n so fn o r m a lg a s t r i cm u c o s a t h ed i f 梵r e n c eo f e b p 5 0 p r o t e i ne x p r e s s i o nw a ss i g n i f i c a n tb e t w e e ng a s t r i cc a r c i n o n l at i s s u e j u x t a c a n c e r o u sg a s t r i ct i s s u ea n dn o r m a l g a s t r i ct i s s u e ( 7 2 = 1 4 3 7 4 ， p 0 0 1 ) o n eo f g a s t r i cc a r c i n o m at i s s u ea n dj u x t a c a n c e r o u sg a s t r i ct i s s u e e b p 5 0 c o m p a r i n gt h er a t eo fp o s i t i v ee x p r e s s i o n ( ? 2 = 4 8 4 2 ，p 0 0 5 ) ，g a s t r i c c a r c i n o m at i s s u ea n dn o r m a l g a s t r i ct i s s u ee b p 5 0c o m p a r i n gt h er a t eo f p o s i t i v e e x p r e s s i o n ( ? 2 = 1 2 8 2 8 ，p 0 0 1 ) ，d i f f e r e n c e s i n t h e r ew a sa s i g n i f i c a n t l y , j u x t a c a n c e r o u sg a s t r i ct i s s u ea n dn o r m a lg a s t r i ct i s s u eo fe b p 5 0 p r o t e i nt h er a t eo fp o s i t i v ee x p r e s s i o nw a ss t a t i s t i c a l l ys i g n i f i c a n td i f f e r e n c e s ( ? 2 = 6 0 0 0 ，p 0 0 5 ) 。t h ee x p r e s s i o no fe b p 5 0p r o t e i nw a ss i g n i f i c a n t i v a s s o c i a t e dw i t hc l i n i c a ls t a g i n g ，d i f f e r e n t i a t i o nl e v e l ，l y m p hn o d em e t a s t a s i s ， a n di n v a s i o nl e v e l ( p o 0 5 ) c o n e l u s i o n ： 1 、t h ee x p r e s s i o nl e v e lo fe b p 5 0i ng a s t r i cc a r c i n o m at i s s u eb e l o w t o 英文摘要 j u x t a c a n c e r o u sg a s t r i c t i s s u ea n dn o r m a lg a s t r i ct i s s u e ， s u g g e s t i n gt h e a b n o r m a l e x p r e s s i o n o fe b p 5 0p r o t e i ni sr e l a t e dt o o n c o g e n e s i s a n d p r o g r e s s i o no fg a s t r i cc a n c e r 2 、t h ee x p r e s s i o no fe b p 5 0p r o t e i ni sa s s o c i a t e dw i t hm u l t i p l e c l i n i c o p a t h 0 1 0 9 i c a lc h a r a c t e r i s t i c sr e l e v a n tt op r o g n o s i s t h ee x p r e s s i o no f e b p 5 0g e n ew a ss i g n i f i c a n t l ya s s o c i a t e dw i t hc l i n i c a ls t a g i n g ，d i f f e r e n t i a t i o n l e v e l ，l y m p hn o d em e t a s t a s i s ，a n dm u s c l e si n v a s i o nd e p t h i ti ss u g g e s t e dt h a t t h ee x p r e s s i o np h e n o t y p eo fe b p 5 0g e n ec o u l db ea na s s i s t a n tp a r a m e t e rf o r t h ee v a l u a t i o no fs o m eb i o l o g i c a lb e h a v i o ro fg a s t r i cc a n c e r k e yw o r d s ：g a s t r i cc a r c i n o m ；e r m b i n d i n gp h o s p h o p r o t e i n - 5 0 ；j u n c t i o n p r o t e i n ；t u m o rs u p p r e s s o rg e n e ；i m m u n o h i s t o c h e m i s t r y 。 5 研究论文 e b p 5 0 在胃癌、癌旁组织及正常胃组织中的表达及其意义 j - j l 刖吾 胃癌是当今世界范围内最常见的恶性肿瘤之一，也是癌症致死的一个 主要原因。在中国，胃癌死亡率2 5 2 1 0 万，占全部恶性肿瘤死亡的2 3 2 n 1 。其发病机制不清楚，涉及多因素、多环节及多基因参与的复杂过程。 研究有关胃癌诊断、转移及预后的生物学标志物是治疗胃癌的关键。 胃癌是起源于胃粘膜上皮细胞，其发病率和死亡率在我国及全世界范 围内都居高不下。胃癌的病因和发病机制十分复杂，其中胃癌发生的分子 生物学学说，越来越受到重视。近年来的一些研究表明，胃癌的发生涉及 到多种癌基因、抑癌基因、生长因子及其受体、细胞粘附分子以及d n a 修复基因等的异常改变，是多基因变化积累的结果。细胞中抑癌基因的表 达缺失和癌基因的过度表达起着非常重要的作用。 磷酸化蛋白5 0 ( e r m b i n d i n gp h o s p h o p r o t e i n 一5 0 ，e b p 5 0 ) 是由3 5 8 个氨基酸组成的多功能连接蛋白。它通过其p d z i 、p d z i i 和e r m 结合 结构域与3 0 多种蛋白质结合，对多条生长信号途径及对细胞迁移进行调 控。e b p 5 0 在组织中广泛分布，在肝脏、小肠、胃、肾脏、胰腺、乳腺中 高度表达。e b p 5 0 通过调控与其结合的抑癌蛋白或致癌蛋白的活性或调控 它们所介导的信号转导途径，从而起到抑制细胞迁移、抑癌等作用。目前 有很多证据提示，e b p 5 0 是一种新的抑癌基因，它在乳腺癌、神经鞘瘤、 5 5 的肝细胞性肝癌中都有报道。e b p 5 0 具有抑癌作用的机制：其一，可 阻止细胞周期进展。e b p 5 0 是细胞周期负调控因子，可阻止g i s 期转换， 抑制细胞增殖。e b p 5 0 蛋白表达降低可使细胞增殖失控，导致增殖与凋亡 失衡，从而促进肿瘤的发生和发展。其二，e b p 5 0 可增强与之相互作用的 抑癌蛋白的活性，参与这些抑癌蛋白所调控的生长信号转导通路。如 e b p 5 0 可与蛋白质p t e n 和p d g f r 形成信号转导复合物，抑制a k t 的磷酸化， 从而抑制磷脂酰肌醇3 激酶a k t ( p 1 3 k a k t ) 信号转导通路的激活，最终达 到抑制细胞生长及促进细胞凋亡的目的；e b p 5 0 能够与m e r l i n ( n f 2 抑癌 基因产物) 相互作用，并使这些蛋白从胞浆迁移至膜上发挥其抑制生长信 号通路的作用。另外，e b p 5 0 与b c a t e n i n 的相互作用将b c a t e n i n 稳 定在细胞表面，并促进b c a t e n i n 与e - c a d h e r i n 结合成复合体，从而抑 制w n t 信号通路的激活，从而抑制细胞的迁移，同时抑制细胞增殖。 目前，有关e b p 5 0 在胃癌中表达的研究，国内外均未见报道，我们应 用免疫组化检i 9 j u e b p 5 0 在胃癌组织、癌旁组织及正常胃组织中的表达水平， 分析三者间关系，以及其与胃癌患者性别、年龄、分化程度、浸润深度、 淋巴结转移、临床分期等临床生物学行为的关系，分析e b p 5 0 在正常胃粘 膜组织向胃癌转变过程中的作用和机制，力图说明其表达在胃癌的发生发 展中所起的作用，探讨其能否作为胃癌早期诊断、判定其生物学行为的指 标，为胃癌的早期诊断、临床预后判断及开展靶向基因治疗提供新的理论 依据及切入点。 研究论文 材料与方法 i 病例选择 选择2 0 0 9 年7 月至2 0 0 9 年1 2 月间海南省人民医院腹部肿瘤外科接受胃 切除术并经过病理证实的原发性胃癌患者5 0 n ，其中男3 1 例，女1 9 例，年龄 2 8 岁- 7 2 岁，平均( 4 4 3 岁1 1 3 ) 岁，组织学类型为高分化腺癌1 2 侈1 j ，中分 化腺癌17 , 万i j ，低分化腺癌21 例；浸润深度：侵及粘膜下层5 n ，侵及肌层2 8 例，侵及全层1 7 例；有淋巴结转移3 7 1 歹i ，无淋巴结转移1 3 例；根据国际新 p t n m 分期标准，i i i 期2 8 例，i i i i v 期2 2 例。术前均未进行放、化疗。 5 0 例癌旁组织组织学类型为正常胃粘膜组织4 7 f f 0 ，腺上皮不典型增生3 例。 1 0 例正常胃组织取自胃镜检查者，且经病理证实为良性病变( 如慢性胃炎， 外伤等) 。 2 组织取材 术后立即选取新鲜胃癌组织，避开缺血坏死组织；癌旁组织选自距癌 组织边缘2 5 c m 以上，5 c m 以内区域，所切取组织块大小均约1 o c m x1 o c m 0 5 c m ；正常胃组织由胃镜活检钳钳取。迅速将所取胃癌、癌旁组织及 正常胃组织固定于1 0 中性福尔马林溶液中2 4 小时，石蜡包埋。 3 实验材料和方法 3 1 仪器 l e i c a 2 1 4 5 型原装石蜡切片机( 德国n u s s l o c h 公司) l e i c at p1 0 5 0 全自动脱水机( 德国n u s s l o c h 公司) 病理切片漂烘仪l e i c a h l - - 1 2 2 0 型( 德国n u s s l o c h 公司) 可调温烤箱s h - 2 0 2 - 0 ( 上杭仪器有限公司) 4 0 c 冰箱( 海尔冰箱厂) o l y m p u s 显微镜b x 4 0 型配t k - c 1 4 8 1 照相装置( 日本j v c 公司) 微波炉( g a l a n z 公司) 微量移液器z l i 一9 1 1 9 型( 北京中杉金桥生物技术有限公司) 孵育盒z l i - - 9 3 2 2 型( 北京中杉金桥生物技术有限公司) 实验冲洗瓶z l i - - 9 3 2 3 型( 北京中杉金桥生物技术有限公司) 日本羽毛牌石蜡切片刀片( r 一3 5 ) z l i 一9 4 0 2 型( 北京中杉金桥生物 研究论文 技术有限公司) 3 2 试剂 e b p 5 0 一抗抗体( 兔抗人e b p 5 0 多克隆抗体) 检测试剂从德国默克公 司购买 p v 一9 0 0 1 即用型二步法免疫组织化学检测试剂盒( 试剂1 ：p o l y m e r h e l p e r ；试剂2 ：p o l y h r pa n t i r a b b i t ) ，购于北京中杉金桥生物技术 有限公司 二氨基联苯胺四盐酸盐( d a b 显色液) ，购于北京中杉金桥生物技术有 限公司 磷酸盐缓冲液( p b s 液) ，购于北京中杉金桥生物技术有限公司 3 过氧化氢液，购于北京中杉金桥生物技术有限公司 3 一氨丙基一3 一乙氧基甲硅烷( 防脱片剂a p e s ) ，购于北京中杉金桥 生物技术有限公司 h a r r i s 苏木素液( 复染剂) 、蒸馏水，实验室自制。 3 3 实验方法和步骤 全部标本甲醛固定，常规石蜡包埋，3 u m 厚度连续切片，先行h e 染色， 显微镜下观察组织类型，再采用免疫组化技术检测标本中e b p 5 0 表达。具 体步骤如下： 切片制备及h e 染色 ( 1 ) 切取组织块，标本用1 0 甲醛固定2 4 、时，取材。 ( 2 ) 石蜡包埋，3um 厚度连续切片。 ( 3 ) 切片常规用二甲苯脱蜡，经各级乙醇至水洗：二甲苯( i ) 5 m i n 一二甲苯( i i ) 5 m i n 一1 0 0 乙醇2 m i n - - ，9 5 的乙醇l m i n 一8 0 乙醇l m i n 一7 5 乙醇1 m i n 一蒸馏水洗2 m i n 。 ( 4 ) 苏木素染色5 m i n ，自来水冲洗。 ( 5 ) 盐酸乙醇分化3 0 s ( 提插数下) 。 ， ( 6 ) 自来水浸泡1 5 m i n 或温水( 约5 0 ) 5 m i n 。 ( 7 ) 置伊红液2 m i n 。 研究论文 ( 8 ) 常规脱水，透明，封片：9 5 乙醇( i ) m i n - - 9 5 乙醇( i i ) l m i n 呻1 0 0 乙醇( i ) l m i n 一1 0 0 乙醇( i i ) l m i n - - - - 甲苯石碳酸( 3 ：1 ) l m i n - ，- - 甲苯( i ) l m i n - - - 甲苯( i i ) 1 m i n 一中性树脂封固。 免疫组化步骤： ( 1 ) 用p b s 液( 磷酸盐缓冲液，0 o l m o l l ，p h = 7 4 ) 冲洗3 次，每次3 分 钟( 37 3 ，下同) 。 ( 2 ) 用p h6 0 的柠檬酸盐修复组织抗原，在1 0 0 。c 微波炉中加热1 5 2 0 分钟，缓慢冷却至室温。 ( 3 ) 每张切片滴2 n 3 h 0 。，3 7 。c 温箱中孵育1 07 ，阻断内原性过氧 化物酶活性，p b s 冲洗37 3 。 ( 4 ) 每张切片加一抗( 兔抗人d , 鼠e b p 5 0 多克隆抗体) 5u1 ， 4 。c 过夜。 ( 5 ) p b s ( p h = 7 4 ) 冲洗37 3 。 ( 6 ) 甩去p b s 液，每张切片应用p v - 9 0 0 1 - - 步法检测试剂盒：滴加试剂l ， 3 7 。c 孵育2 0 分钟，p b s ( p h = 7 4 ) 冲洗37 3 。滴加试剂2 ，3 7 。c 孵育3 0 分钟，p b s ( p h = 7 4 ) 冲洗37 3 。 ( 7 ) 应用d a b 溶液显色3 1 0 分钟，显微镜下控制显色。 ( 8 ) 蒸馏水冲洗，苏木素复染，脱水、透明、封片。 3 4 免疫组化阳性结果判断 结果由本院病理科专科医师在不知临床资料及实验目盼隋况下统计， 选染色均匀区，计数阳性细胞百分率及其着色强弱。e b p 5 0 肛h 性表达的判 断：染色阳性信号呈棕黄色颗粒，主要位于细胞浆，每张切片检测5 个视 野( x 2 0 0 ) ，阳性细胞数 5 0 为( + + + ) 。 3 5 统计学处理方法 应用s p s s11 5f o rw i n d o w s 统计软件，采用? 2 检验及s p e a r m a n 秩相 关分析，p o 0 5 为有统计学意义。 。 研究论文 结果 1e b p 5 0 在胃癌、癌旁组织及正常胃组织的表达情况 标本组织经h e 染色后，胃癌组织镜下表现为胃粘膜腺体排列紊乱，细 胞大小不一，见核分裂，异型细胞弥漫增生等。癌旁组织腺上皮不典型增 生表现为腺体增生，腺腔大小不一，腺体轮廓在正常范围内，腺上皮轻一 中度不典型增生，细胞核浓染致密，并逐步复层化，向腔内移动。而正常 胃粘膜组织则表现为腺体增生，见有炎症细胞浸润。腺体无异型。见图1 3 。 e b p s o 免疫组织化学染色：e b p 5 0 蛋白表达主要定位于胞浆中，阳性细 胞表现为胞浆中出现黄色、棕黄色或黄褐色颗粒。见图4 8 。 e b p s o 蛋白在正常胃组织、癌旁组织及胃癌组织中均有表达，且在各 组织中的阳性表达率呈下降趋势，正常胃粘膜组织e b p 5 0 蛋白全部呈阳性 表达，癌旁组织中e b p 5 0 蛋白阳性表达率为6 0 ，胃癌组织r f = l e b p 5 0 蛋白阳 性表达率为3 8 。三者相比统计学有显著差异( ? 2 = 1 4 3 7 4 ，p o 0 1 ) ，其 中胃癌组织中e b p 5 0 阳性表达率比癌旁组织中e b p 5 0 j 日性表达率低 ( ? 2 = 4 4 8 2 ，p o 0 5 ) ，胃癌组织中e b p 5 0 j 日性表达率比与正常胃粘膜中 e b p 5 0 p h 性表达率低( ? 2 = 1 2 8 2 8 ，p o 0 1 ) ，差异有显著性，癌旁组织中 e b p 5 0 蛋白阳性表达率比正常胃粘膜中e b p s o 蛋白阳性表达率低 ( ? 2 = 6 0 0 0 ，p o 0 5 ) ，差别有统计学意义。见表一。 2 e b p 5 0 表达水平和胃癌临床病理特征问的关系 将5 0 例胃癌按患者年龄、性别、浸润深度、分化程度、是否淋巴转移 及p t n m 分期等临床病理特征分类，统i , t e b p 5 0 免疫组化的阳性表达与胃癌 临床病理特征的关系。见表二。 从表二可以看出，e b p 5 0 蛋白的表达与胃癌的病理分级、浸润深度、 有无淋巴结转移及临床分期之间有统计学意义( p o 0 5 ) 。 附图 f i g 2j u x t a c a n c e r o u sg a s t r i c d y s p l a s i at i s s u e 。f 瓶吼8 1 n f i g 3g a s t r i cc a r c i n o m at i s s u eo fi l es t a i n 瀵 i 襞釜i ，_ _ 。：蔓! ? 泰争。 j 磐之。：豢、专0 一戆 f i g 5n e g a t i v ee x p r e s s i o no f e b p s o i nj u x t a c a n c e r o u sg a s t r i ct i s s u e ( s p x 5 0 ) 毫裁黧簿繁囊鬻 琴搿楚 。、，一，；。歹|i，。蔓 ；0誊耘 参墓警二+ 。 研究论文 f i g 6p o s i t i v ee x p r e s s i o no fe b p 5 0i nn o r m a lg a s t r i ct i s s u e ( s p x 5 0 ) f i g 7p o s i t i v ee x p r e s s i o no fe b p 5 0i ng a s t r i cc a r c i n o m at i s s u e ( s p x 5 0 ) f i g 8p o s i t i v ee x p r e s s i o no fe b p 5 0i nj u x t a c a n c e r o u sg a s t r i ct i s s u e ( s p x 5 0 ) 研究论文 附表 t a b l e1 t h ee x p r e s s i o no fe b p 5 0i nd i f f e r e n tg a s t r i ct i s s u e t y p e o f e x p r e s s i o no fe b p 5 0 t h e p o s i t i v e p o r g a n i z a t i o ne x a m p l e一 +r a t e s g a s t r i cc a r c i n o m at i s s u e 5 03 11 2523 8 a d j a c e n tt i s s u e 5 02 01 7856 0 n o r m a lg a s t r i ct i s s u e1 001 27 1 0 0 o 0 0 l t a b l e 2 t h er e l a t i o n s h i po fe b p 5 0e x p r e s s i o ni ng a s t r i cc a n c e rt i s s u ea n db i o l o g i c a l b e h a v i o r 1 5 研究论文 讨论 胃癌是消化系统最常见的恶性肿瘤之一，它起源于胃粘膜上皮细胞， 其发病率和死亡率在我国及全世界范围内都居高不下。我国的胃癌发病 率以西北最高，东北及内蒙古次之，华东及沿海又次之，中南及西南 最低，每年约有17 万人死于胃癌，几乎接近全部恶性肿瘤死亡人数的 1 4 ，且每年还有2 万以上新的胃癌病人产生出来，胃癌确实是一种严 重威胁人民身体健康的疾病。胃癌可发生于任何年龄，但以4 0 6 0 岁 多见，男多于女约为2 ：1 。胃癌的病因和发病机制十分复杂，可能与多种 因素，如生活习惯、饮食种类、环境因素、遗传素质、精神因素等有 关，也与慢性胃炎、胃息肉、肠上皮化生和胃粘膜异形增生、手术后 残胃，以及幽门螺杆菌( h p ) 感染等有一定的关系。环境和基因因素在 胃癌的发病原因中扮演重要角色。在环境因素中，饮食和幽门螺杆菌感染 被认为是导致胃癌最主要的原因。遗传因素在胃癌发生中也占有重要位 置，异常基因过度表达，或者正常基因不表达，均可导致肿瘤发生。近年 来的一些研究表明，胃癌的发生涉及到多种癌基因、抑癌基因、生长因子 及其受体、细胞粘附分子以及d n a 修复基因等的异常改变，是多基因变化 积累的结果瞳1 。细胞中抑癌基因的表达缺失和癌基因的过度表达起着非常 重要的作用。人体细胞携带着癌基因和抑癌基因，正常情况下，这两种基 因相互拮抗，维持协调与平衡，对细胞的生长、增殖和衰亡进行精确的调 控。许多抑癌基因直接参与细胞周期的调控，或者本身就是细胞周期调控 机制的主要部分，它们如果表达缺失，就会导致细胞周期的失控，引起控 制细胞生长和分化的机制紊乱，使细胞的增殖失控而恶性转化。 磷酸化蛋白5 0 ( e r m b i n d i n gp h o s p h o p r o t e i n 一5 0 ，e b p 5 0 ) 是由3 5 8 个氨基酸组成的多功能连接蛋白，含有6 个外显予，定位在染色体 1 7 q 2 5 1 。它通过其p d z - i 、p d z - i i 和e r m 结合结构域与3 0 多种蛋白质 结合口1 ，包括g 偶联蛋白受体( g p c r s ) ，如b 2 - 肾上腺素受体( j 3 2 一a r ) _ 3 ， k - 阿片受体喵1 和甲状旁腺激素i 型受体( p t h l r ) m 3 ；e b p 5 0 还可与离子通道 结合，如囊性纤维跨膜受体( c f t r ) 口1 ，对p 1 3 k a k t 、p l cb 等多条生长信 号途径及对细胞迁移进行调控，调节多种信号通路。e b p 5 0 在组织中广泛 分布，在肝脏、小肠、胃、肾脏、胰腺、乳腺中高度表达陋1 。e b p 5 0 通过 研究论文 调控与其结合的抑癌蛋白或致癌蛋白的活性或调控它们所介导的信号转 导途径，从而起到抑制细胞迁移、抑癌等作用阳1 玑川。 目前有很多证据提示，e b p 5 0 是一种新的抑癌基因n 剡。其在乳腺癌 n 3 1 包场1 、神经鞘瘤6 i 、5 5 的肝细胞性肝癌n 铂中都有报道。最近研究发现 e b p 5 0 具有抑癌潜能，在细胞的生长和迁移中起着非常重要的作用也l g 。 研究结果显示，5 8 的乳腺癌病人在e b p 5 0 基因位点( 1 7 q 2 5 1 ) 存在杂合 性丢失( 1 0 s so fh e t e r o z y g o s i t y ，l o h ) ，在3 0 的乳腺癌细胞中发现e b p 5 0 表达下调。因此，肿瘤的发生可能由于e b p 5 0 蛋白表达水平较低或消失， 使其抑癌作用减弱或消失而导致。e b p 5 0 的高表达与乳腺癌的低侵袭性也 有联系，s t e m m e r r a c h a m i m o v 等研究发现，9 0 一9 3 雌激素受体( e r ) 阳 性的乳腺癌中表达e b p 5 0 蛋白，而6 2 5 - 7 1 e r 阴性的乳腺癌中几乎完 全不表达，表明e b p 5 0 的低