植物组织中可溶性糖含量测定方案.doc

植物组织中可溶性糖含量的测定蒽酮比色法一、原理糖类在浓硫酸作用下经脱水反应生成糠醛或羟甲基糖醛，生成的糠醛或羟甲基糖醛与蒽酮(C14H10O)脱水缩合，形成糠醛的衍生物，呈蓝绿色。该物质在630 nm处有最大吸收，在150 g/mL范围内，其颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。该方法的特点是几乎可以测定所有的糖类（包括单糖：戊糖、已糖；多糖：蔗糖、淀粉、纤维素），所以用该方法测出的糖类含量是溶液中全部可溶性糖类含量。二、仪器、试剂和材料1.仪器：电子天平，电热恒温水浴锅，分光光度计，容量瓶，刻度吸管等2.试剂：(1) 蒽酮浓硫酸试剂：1.0 g蒽酮溶于100 mL浓 H2SO4中，贮藏于棕色瓶中（当日配置）(2) 浓硫酸 3.材料：草莓新鲜果实三、实验步骤1、标准曲线的制作1、1 1 %蔗糖标准液：将分析纯蔗糖在80下烘干至恒重，精确称取1.000g。加蒸馏水溶解，转入100mL容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度。1、2 100ug/mL蔗糖标准液：精确吸取1%蔗糖标准液1mL至100mL容量瓶中，加水至刻度。取10mL刻度试管11支，从010分别编号，按下表一次加入蔗糖标准液和蒸馏水。管号01、23、45、67、89、10100ug/mL蔗糖标准液（mL）00.20.40.60.81.0蒸馏水（mL）1.00.80.60.40.20蔗糖浓度（g/mL）0204060801001、3 按顺序依次向试管中加入5mL蒽酮浓硫酸试剂，充分振荡，立即将试管放入96沸水浴中，每管均保温3min，取出后流水冷却后取出至室温下放置15min，以空白作参比，在630 nm处测其吸光度，以吸光度为横坐标，以糖浓度为纵坐标，绘制标准曲线，并求出标准线性方程。2、可溶性糖提取 称取具有代表性样品的可食部分100 g，放人组织捣碎机中，迅速捣成匀浆（或研磨），称取0.50 g浆状样品，共三份。分别放入3支试管中，加入10 mL蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min(提取2次)，提取液过滤到50 mL容量瓶中，用蒸馏水反复洗涤试管及残渣并定容至刻度。吸取上述1.0mL提取液至10mL容量瓶中，用蒸馏水定容。3、显色测定 吸取稀释后的样品提取液1.0mL至10mL刻度试管中，重复三次，按顺序依次向试管中加入5mL蒽酮浓硫酸试剂，充分振荡，立即将试管放入96沸水浴中，每管均保温3min，取出后流水冷却后在室温下放置15min，在630 nm处测其吸光度。四、结果计算C V总 D样品含糖量（%）= 100% W V测 106其中：C在标准曲线上查出的糖含量（g），V总提取液总体积（mL），V测测定时取用体积（mL），D稀释倍数，W样品重量（g），106样品重量单位由g换算成g的倍数参照李合生 植物组织中可溶性糖测定流程取蒽酮1g，溶于50mL乙酸乙酯中，贮藏于棕色瓶中（蒽酮乙酸乙酯试剂）取1.000g蔗糖加蒸馏水溶解，转入100mL容量瓶中，加0.5mL浓硫酸，定容（1 %蔗糖标准液）取上述1%蔗糖标准液1mL至100mL容量瓶中，定容（100ug/mL蔗糖标准液）取10mL刻度试管11支，从010分别编号，按下表一次加入蔗糖标准液和蒸馏水。管号01、23、45、67、89、10100ug/mL蔗糖标准液（mL）00.20.40.60.81.0蒸馏水（mL）2.01.81.61.41.21.0蔗糖含量（g）020406080100按顺序依次向试管中加入0.5mL蒽酮乙酸乙酯试剂和5mL浓硫酸，充分振荡，立即将试管放入沸水浴中，每管均保温1min，取出后自然冷却至室温，以空白作参比，在630 nm处测其吸光度，以糖含量为横坐标，以吸光度为纵坐标，绘制标准曲线，并求出标准线性方程。称草莓果实100 g，制成匀浆，称取0.100.30 g浆状样品，共三份。分别放入3支试管中，加入510 mL蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min(提取2次)，提取液过滤到25 mL容量瓶中，用蒸馏水反复洗涤试管及残渣并定容至刻度。吸取样品提取液0.5mL至10mL刻度试管中，重复三次，加蒸馏水1