（外科学专业论文）reicdkk3基因在结直肠癌中的表达及其意义.pdf

目录 一、摘要 中文论著摘要l 英文论著摘要2 二、英文缩略语6 三、论文 前言“4 刖吾“ 材料与方法”4 结果一6 讨论”8 结论一9 四、本研究创新性的自我评价1 0 五、参考文献1 1 六、附录 综述1 2 致谢1 9 个人简介2 0 中文论著摘要 r e i c d k k - 3 基因在结直肠癌中的表达及其意义 目的 研究r e i c d k k - 3 基因在结直肠癌中的表达及其临床意义。 方法 应用反转录聚合酶链式反应( r e v e r s et r a n s c r i p t i o np o l y m e r a s ec h m nr e a c t i o n ， r t p c r ) 方法检测i 也i c d k k 3 基因在4 0 例结直肠癌组织及正常结直肠上皮组织中 的表达。 钴毋 ：日木 2 3 例( 2 3 4 0 ，5 7 5 ) 结直肠癌组织中r e i c d k k - 3 基因m r n a 的表达明显低于正 常结直肠上皮组织( p o 0 5 ) ，g r e i c 基因的表达水平与结直肠癌的浸润程度成负相 关( p 0 0 5 ) ，而与结直肠癌患者的年龄、性别、肿瘤分化程度，淋巴结转移， 远处转移，肿瘤分期及肿瘤部位无显著相关。 结论 结直肠癌组织中l 礓i c d k l ( 3 基因m r n a 的表达明显低于正常结直肠上皮组 织，而且和肿瘤的浸润程度有关，可能成为结直肠癌基因治疗的潜在靶点。 关键词 结直肠癌r e i c d k k 3 基因r t p c r 抑癌基因 英文论著摘要 t h em r n a e x p r e s s i o na n ds i g n i f i c a n c eo f r e i c d k k - 3g e n ei nc o l o r e c t a lc a n c e r o b j e c t i v e t os t u d yt h ee x p r e s s i o no fr e i c d k k 3m r n a i nc o l o r e c t a lc a n c e ra n di t s c l i n i c a ls i g n i f i c a n c e m e t h o d s t h ee x p r e s s i o no fr e i c d k k 3m r n ai nc o l o r e c t a lc a n c e rt i s s u ea n dn o n n 砒 e p i t h e l i a lt i s s u ew a sd e t e c t e db yr e v e r s et r a n s c r i p t i o np o l y m e r a s ec h a i n r e a c t i o n ( r t p c r ) i n4 0c a s e so fc o l o r e c t a lc a n c e r r e s u l t t h em r n al e v e lo f r e i c d k k 一3g e n ei n2 3o f t h e 4 0 ( 5 7 5 ，2 3 4 0 ) s a m p l e s f r o me o l o r e c t a lc a n c e rt i s s u ei sm a r k e d l yl e s st h a nt h a tf r o mn o r m a l e p i t h e l i a lt i s s u e ( p o 0 5 ) f u r t h e r m o r e ，t h ed e c r e a s e dm r n a e x p r e s s i o no fr e i c d k k 3g e n e c o r r e l a t e dp o s i t i v e l y 谢t hi n v a s i v ed e p t ho fc o l o r e c t a lc a n c e r b u ti th a dn oc o r r e l a t i o n w i t ht h ea g ea n ds e xo f p a t i e n t s ，l y m p hn o d em e t a s t n i s ，d i f f e r e n t i n i t i o nd e g r e e ，t u m o r s t a g ea n dl o c a t i o n c o n c l u s i o n t h ed e c r e a s e dm r n a e x p r e s s i o no fr e i c d k k 一3g e n em a yp l a ya ni m p o r t a n tr o l e i nt h ed e v e l o p m e n to fc o l o r e c t a lc a n c e r a n dt h u sr e i cg e n em i g h tb ean o v e lc a n d i d a t eo f t u m o r - s u p p r e s s o r k e yw o r d s r e i c d k k 3g e n e ，c o l o r e c t a lc a n c e r ，r t p c t l t u m o r - s u p p r e s s o r 2 英文缩略 英文缩写英文全称 中文全称 r t - p c rr e v e r s e t r a n s c r i p t i o np o l y m e r a s e 反转录聚合酶链式反应 c h m nr e a c t i o n r e i cr e d u c e d e x p r e s s i o n i ni m m o r t a l i z e d 细胞永生化表达下调 c e l l s 3 论文 r e i c d k k - 3 基因在结直肠癌中的表达及其意义 刖菁 结直肠癌是人类常见恶性肿瘤之一，近年发病率呈明显上升趋势，有资料表明， 结直肠癌已成为西方各种恶性肿瘤中发病率最高的，并居恶性肿瘤死亡原因的第 二位；在我国大城市发病率已居第三位。抑癌基因在结直肠癌的发生，发展过程 中起着重要的作用。本研究试图提供结直肠癌治疗的一种新靶点。 肿瘤的发生涉及众多因素，其中癌基因的激活与抑癌基因的失活是两大关键因 素细胞永生化( i m m o r t a l i z a t i o n ) 是细胞恶性转化的一个早期过程，它在肿瘤生成 及恶化的过程中起着重要的作用【1 】。如果某基因的低表达能够促进细胞永生化， 那么这个基因就很可能时一种抑癌基因。t s u j i 2 等从几种永生化细胞系中发现一 段新的r e i c 基因序y l j ( r e d u c e de x p r e s s i o n i ni m m o r t a l i z e dc e l l s ，r e i c ) 表达明显 下调，而在正常细胞系中表达正常；进一步研究显示暂时性的外源r e i c 基因导 入可以显著减少人类永生化细胞的d n a 合成，提示r e i c 可能是一种新的抑癌基 因。 本实验应用反转录聚合酶链式反应( r e v e r s et r a n s c r i p t i o np o l y m e r a s ec h a i n r e a c t i o n ，r t p c r ) 方法检测r e i c 基因在4 0 例结直肠癌组织及正常结直肠上皮组 织中的表达，来研究r e i c 基因在结直肠癌中的表达及其临床意义。 材料与方法 一、试验材料 ( 一) 组织标本 本实验的标本取材于2 0 0 9 年3 月2 0 0 9 年9 月在中国医科大学附属盛京医院 接受结直肠癌手术治疗的组织标本4 0 例，男性2 2 例，女性1 8 例；年龄3 8 - - 一8 5 岁，平均5 9 9 岁；直肠癌1 2 例，乙状结肠癌6 例，降结肠癌6 例，横结肠癌6 例，升结肠癌( 包括回盲部癌) 1 0 例；术后病理分期按照2 0 0 3 年u i c c 和美国肿瘤 4 联合会( a j c c ) 联合修订的标准，i 期1 1 例，i i 期1 3 例，i i i 期1 2 例，期4 例； 病理学类型，高中分化3 4 例，低分化未分化6 例。所有患者经术前肠镜和术后 病理检查证实肠癌，且术前未接受任何放化疗及生物治疗。正常结直肠上皮组织 取自距肿瘤边缘5c m 以外的正常肠管。标本离体2 0 r a i n 内保存于液氮内，后于 8 0 保存备用。 ( 二) 试剂 t d z o l 试剂购自宝生物工程( 大连) 有限公司；r e i c 引物以及1 3 - a c t i n 引物均 由宝生物工程( 大连) 有限公司提供，b c a b e s t t mr n a p c rk i tv e r 1 1 试剂盒由 宝生物工程( 大连) 有限公司提供。 二、方法 ( 一) 总r n a 的提取 所有标本均取材2 9 ，装入1 5 m l 离心管，在离体后2 0 m i n 内置于液氮中保存。 取l o o m g 冰冻组织，剪碎，加入l m lt r i z o l 试剂( 宝生物工程有限公司，大连) ，按 照试剂盒说明书操作，提取癌及正常上皮组织总r n a 。紫外分光光度计测定， a 2 6 0 a 2 8 0 比值为1 8 - 2 0 之间；1 5 琼脂糖凝胶电泳显示2 8 s 、1 8 s 条带清晰， 表明r n a 质量符合要求。加d e p c 水稀释至5 0 0 n g g l ，置于8 0 ( 2 保存。 ( 二) 逆转录合成c d n a 按照t a k a r a 公司逆转录试剂盒说明书操作合成，反应体系为1 0 9 l ，其中 r n a l p l ，o l i g od t 引物0 5 9 l ，逆转录聚合酶( b c a b e s tp o l y m e r a s e ) o 5 9 l ，置于 t a k a r at p 6 0 0p c r 仪上6 5 cl m i n ，3 0 。c 5 m i n ，1 5 分钟内匀速升温至6 5 c ， 6 5 1 5 m i n ，9 8 5 m i n ，5 c 5 m i n 所得c d n a 置于2 0 保存。 ( 三) p c r 引物序列由上海生物工程有限公司合成，r e i c 基因扩增片段为3 7 8 b p ，r e i c 上游引物：5 t t cc a cg c ag t tc t tt c c 3 ：下游引物：5 a a tc c ca t tc t c c ，r rc c t t - 3 ；内对照 3 - a c t i n 基因扩增片段为5 1 0 b p ，上游引物：5 - g t gg g gc g c c c ca g gc a cc a 3 ，下游引物5 - c t cc t t a a tg t ca c g c a cg a tt t c 3 。 反应体系为2 5 1 x l ，p c r 反应条件为：9 4 5 m i n ：9 4 4 0 s ，5 3 1 。c 3 0 s ，7 4 。c 4 0 秒，3 5 5 个循环；7 4 c 7 分钟，扩增产物4 c 保存。 ( 四) 半定量分析 取5 9 l p c r 产物行凝胶电泳检测( 图1 ) ，并用激光密度扫描仪分析，以1 3 - a c t i n 的密度为分母，r e i c d k k 3 的密度为分子，二者的比值即为r e i c d k k - 3 基因 m r n a 相对含量( 表达水平) 。见图1 三、统计学分析 采用s p s s l 3 0 统计软件进行分析。差异分析采用l e n v e n e st e s t ，相关分析采 用t 检验，。p 0 0 5 时，认为在统计学上差异具有显著性意义。 枞曹c a r c i n o m an o r m 棚c a r c i n o m an o r m a lc a r c i n o m at l o r m p - a c t i n r e i c 图l ，为结直肠癌及正常组织r e i cm r n a 的表达情况，从左到右依次为 m a r k e r ，c a r c i n o m a ，n o r m a l ，c a r e i n o m a ，n o r m a l ，c a r c i n o m a ，n o r m a l 娃里 ：日7 卜 一、l 也i cm r n a 在结直肠癌及正常上皮组织中的表达 应用r t - p c r 技术检测，在4 0 例结直肠癌患者中，2 3 例( 2 3 4 0 ，5 7 5 ) 癌 组织中的r e i cm r n a 表达明显低于正常上皮组织，r e i cm r n a 在癌组织相对表 达量为( 4 6 7 4 6 4 - 0 8 6 8 7 ) ，在正常上皮组织相对表达量为( 2 9 5 5 0 - a ：0 9 1 6 3 ) ，二者 6 相比差异具有统计学意义( p o 0 5 ) 。其中有3 例经重复试验未见表达。 二、r e i cm r n a 在结直肠癌组织中表达与患者临床病理特征的 关系 r t - p c r 检测结果表明，r e i c 基因水平的低表达与结直肠癌的侵袭成正相关 ( p 0 0 5 ，表1 ) 表1 ，结直肠癌组织中r e i c 的表达与临床病理特征的关系 7 讨论 肿瘤是危害人类健康的最重要的疾病，肿瘤的发生涉及众多因素，其中癌基 因的激活与抑癌基因的失活是两大关键因素细胞永生化( i m m o r t a l i z a t i o n ) 是细胞 向恶性转化的一个早期过程，它在肿瘤生成及恶化的过程中起着重要的作用【1 。 如果某基因的低表达能够促进细胞永生化，那么这个基因就很可能时一种抑癌基 因。t s u j i 2 】等从几种永生化细胞系中发现一段新的r e i c 基因序列( r e d u c e d e x p r e s s i o n i ni m m o r t a l i z e dc e l l s ，r e i c ) 表达明显下调，而在正常细胞系中表达正 常；进一步研究显示暂时性的外源r e i c 基因导入可以显著减少人类永生化细胞的 d n a 合成，提示r e i c 可能是一种新的抑癌基因。k o b a y a s h i 等 3 研究发现了r e i c 基因的全长d n a 序列，该基因位于染色体ll p l 5 上，长4 71 0 0 b p ；包含9 个外显子， 其中在第一外显子上有两个启动子，而起始密码位于第二外显子上，其m r n a 的 开放阅读框架( o r e ) 为第1 9 8 碱基对至第1 2 4 7 碱基对，编码产生的蛋白i 也i c 位于细 胞质，由3 5 0 个氨基酸组成，分子量约为3 8 3 k d a 。经与d d b j 数据库比对，r e i c 蛋白的中心序列与d k k 3 蛋白的序列相同，故认为r e i c 基因隶属于d i c k k o p f 家族 【4 】，故常以r e i c d k k 3 表示。d k k 家族由d k k 1 ，d k k 2 ，d k k 3 ，d k k 4 组成，以 及这四种基因共同表达一种称作s o g g y ( s g y ) 的d k k - 3 相关蛋白。已经发现人类 d k k - 1 和d k k - 4 基因能与跨膜受体k r m 和l r p 5 6 这一w 斛z 受体复合抑制物结合， 进而抑制w m 信号通路，抑制w n t 靶基因的表达，来起到抑癌作用。而d k k 2 ，d k k 3 和s g y 的抑癌机制尚不明确。 t s u j i 等【l 】在自己建立的3 个人类永生化细胞系及另外8 种瘤细胞系中发现 r e i c d k k 3 基因的表达与在正常细胞中相比，明显下调。k u r o s e 等【5 】亦发现肾细 胞癌组织r e i c d k k 3 表达较癌旁组织明显下调，h s i e h 等 6 】亦在对肝细胞癌的研 究中得出类似结论，陶霖【7 等亦在对胃癌的研究中得出类似结论，以上结果提示 r e i c d k k - 3 基因表达产物参与了肿瘤抑制过程。本文应用r t p c r 研究发现，在2 3 例( 5 7 5 ，2 3 4 0 ) ，结直肠癌组织中r e i c d k k 基因m r n a 总体表达水平 ( o 3 8 5 士0 1 5 2 ) 明显低于正常组织( 0 5 4 3 士0 1 9 1 ) ，差异有显著意义( p 0 0 5 ) ，提示 r e i c d k k 3 基因表达产物参与了结直肠肿瘤抑制过程。 经过对纤维原细胞系k _ m s 一6 的研究发现，r e i c d k k 3 的m r n a 水平在细胞周 8 期的g l 晚期达最低水平 8 】，这提示其可能与细胞周期的调节有关。n o z a k i 等【9 】 用荧光定量p c r 以及免疫印迹的方法对5 7 例非小细胞性肺癌及癌旁组织中 r e i c d k k - 3 基因的表达进行研究，发现r e i c d k k - 3 基因的表达与分化程度有关， 分化程度越低，细胞增殖能力越强，r e i c d k k 3 其基因的表达程度越低，提示基 因r e i c d k k 3 的表达下调与细胞快速增殖有关，这与基因r e i c d k k 3 在细胞周期 中的g 1 期表达下调相吻合。本实验中，r e i c d k k 3 基因表达随着结直肠癌浸润深 度的增加而表达下调，提示r e i c d k k 3 基因在结直肠癌浸润当中可能起一定作用， 可能与预后有关。r e i c d k k 3 基因m r n a 相对含量在各组织学分级不同的结直肠 癌组织中无显著性差异，提示r e i c 基因表达在不同肿瘤中所起的作用存在差异。 另外i 冱i c d k k 3 基因表达淋巴结转移，远处转移，患者的年龄及性别，肿瘤的部 位无关。 近年来对于r e i c d k k 3 基因作用机制的研究有了新的进展，a b a r z u af 等人 1 0 】 对人类前列腺癌细胞研究发现，腺病毒介导的高表达的r e i c d k k - 3 基因能够活化 c - j u n - n h 2 k i n a s e 通路，选择性地促进人类前列腺癌细胞凋亡目前尚无其他方面的 进展。 本文初步揭示了r e i c d k k 3 基因与结直肠癌发生，发展的关系，但对于其抑 癌机制需迸一步研究，这对结直肠癌的早期诊断和基因治疗以及预后都有重要的 作用。 结论 结直肠癌组织中i 也i c d k k 3 基因m r n a 的表达明显低于正常结直肠上皮组织 ( p 0 0 5 ) ，说明r e i c d k k 3 基因是一种抑癌基因，且r e i c d k k 3 基因水平的低表 达与结直肠癌的浸润程度成正相关( p 0 0 5 ) ，而与结直肠癌患者的年龄、性别、 肿瘤分化程度，淋巴结转移，远处转移，肿瘤分期及肿瘤部位无显著相关。 9 本研究创新性的自我评价 本研究首次研究了r e i c d k k 3 在结直肠癌中的表达及其临床意义，为未来结 直肠癌的预防和基因治疗提供了靶点。 1 0 参考文献 l n a m b a , m ，t s u j i ，t ，1 9 9 9 e a r l ye v e n t sd u r i n gn e o p l a s t i ct r a n s f o r m a t i o no fh u m a nc e l l si n v i t r o ：g e n e t i ca n db i o l o g i c a la s p e c t so fi m m o r t a l i z a t i o n i n ：s r i v a s t a v a , s ( e d ) m o l e c u l a r p a t h o l o g yo fe a r l yc a n c e r ，l o sp r e s s ，a m s t e r d a m ，p p 2 7 0 8 2 t s u j i , t ，m i y a z a k i ，m ，s a k a g u c h i ，m ，i n o u e ，y ，n a m b a , m ，2 0 0 0 ar e i cg e n es h o w s d o w n - r e g u l a t i o ni nh u m a ni m m o r t a l i z e dc e l l sa n dh u m a nt u m o r d e r i v e dc e l ll i n e s b i o c h e m b i o p h y s r e s c o m m u n 2 6 8 2 阻- 2 4 3 k o b a y a s h iko u c h i d am ，t s u j it ，h a n a f u s ah ，m i y a z a k im ，n a m b am e ta 1 ( 2 0 0 2 ) r e d u c e d e x p r e s s i o no ft h er e i c d k k - 3g e n eb yp r o m o t e r - h y p e r m e t h y l a t i o ni nh u m a nt u m o rc e l l s g e n e 2 8 2 ：1 5 1 - 1 5 8 4 k r u p n i k , v e ，s h a r p ，j d ，j i a n g ，c ，r o b i s o n , k ，c h i c k e r i n g ，t w ，a m a r a v a d i ，l ，b r o w n , d e ，g u y o ld ，m a y s ，g ，l e i b y ，k ，c h a n g ，b ，d u o n g ，t ，g o o d e a r l ，a d ，g e a r i n g ，d p ， s o k o l ，s y ，m c c a r t h y ，s a ，19 9 9 f u n c t i o n a la n ds t r u c t u r a ld i v e r s i t yo f t h eh u m a nd i c k k o p f g e n ef a m i l y g e n e2 3 8 ，3 0 1 - 313 5k u r o s eks a k a g u c h im ，n a s uy ，e ta 1 d e c r e a s e de x p r e s s i o no fr e i c d k k 一3i nh u m a nr e n a l c l e a rc e l lc a r c i n o m a j 】ju r o l ，2 0 0 4 ，1 7 1 ( 3 ) ：1 3 1 4 1 3 4 8 6h s i e hs y ，h s i e hp s ，c h i uc t ，e ta 1 d i c k k o p f - 3 r e l cf u n c t i o n sa sas u p p r e s s o rg e n eo ft u m o r g r o w t h j o n c o g e n e ，2 0 0 4 ，2 3 ( 5 7 ) ：918 3 - 9 18 9 7陶霖姜海行葛莲英刘志明唐国都金群馨吕小平陈远能覃山羽r e i c 基因在胃癌 中的表达及其意义 j 】中国肿瘤临床，2 0 0 6 ，3 3 ( 8 ) ：4 4 9 - 4 51 8 t s u j it ，n o z a k il ，s a k a g u c h im ，e ta 1 a n t i p r o l i f e r a t i v ea c t i v i t yo fr e i c d k k - 3a n di t s s i g n i f i c a n td o w n - r e g u l m i o ni nn o n - s m a l l c e l ll u n gc a r c i n o m a s 【j 】b i o c h e mb i o p h y sr e s c o m m u n ，2 0 0 1 ，2 8 9 ( 1 ) ：2 5 7 - 2 6 3 9n o z a k ii ，t s u j it ，s a k a g u c h im ，e ta 1 r e d u c e de x p r e s s i o no f r e i c d k k 3g e n ei nn o n - s m a l l - c e l ll u n gc a n c e r j i n tjo n c o l ，2 0 0 1 ，1 9 ( 1 ) ：11 7 1 2 1 1 0a b a r z u af ，s a k a g u c h im ，t a k a i s h im ，n a s uy ，k u r o s eke b a r as ，m i y a z a k im ，n a m b am ， k u m o nha n dh u hn h ：a d e n o v i r u s m e d i a t e do v e r e x p r e s s i o no fr e i c d k k - 3s e l e c t i v e l y i n d u c e sa p o p t o s i si nh u m a np r o s t a t ec a n c e rc e l l st h r o u g ha c t i v a t i o no fc 4 u n - n h 2 - k i n a s e c a n c e rr e s6 5 ：9 617 9 6 2 2 ，2 0 0 5 综述 r e i c d k k 抑癌基因的研究进展 摘要：d k k 基因家族( d k k s ) 是一种新的抑癌基因，r e i c d k k 3 是家族成员 之一，也具有抑制肿瘤细胞生长的作用。d k k 基因家族作用于经典的w n 邯c a t e n i n 通路。d k k 基因家族能与脂蛋白受体相关蛋白5 6 组( l r p 5 6 ) 复合受体结合，进 而抑制w r i t 通路，来达到抑制肿瘤生长的作用。而r e i c d k k 3 抑癌机制与w n t 通路无关。 关键词：抑癌基因d k k si 也i c d l 【l ( 3w n t 肿瘤是危害人类健康的最重要的疾病，肿瘤的发生涉及众多因素，其中癌基 因的激活与抑癌基因的失活是两大关键因素细胞永生化( i m m o r t a l i z a t i o n ) 是细 胞恶性转化的一个早期过程，它在肿瘤生成及恶化的过程中起着重要的作用 1 】。 如果某基因的低表达能够促进细胞永生化，那么这个基因就很可能时一种抑癌基 因。t s u j i 2 1 等从几种永生化细胞系中发现一段新的r e i c 基因序列( r e d u c e d e x p r e s s i o n i ni m m o r t a l i z e dc e l l s ，r e i c ) 表达明显下调，而在正常细胞系中表达正 常；进一步研究显示暂时性的外源r e i c 基因导入可以显著减少人类永生化细胞 的d n a 合成，提示r e i c 可能是一种新的抑癌基因。有研究表明，r e i c 基因与人 类d k k - 3 基因有着相同的结构，故认为r e i c 与d k k 3 基因是同一种基因 3 】。本文将 综述l 迮i c d l ( 1 【基因的研究进展。 l 、r e i c d k k 基因的结构特征 k o b a y a s h i 等【4 正式报道了r e i c 基因的全长d n a 序列，该基因位于染色体 ll p l 5 上，长4 71 0 0 b p ；包含9 个外显子，其中在第一外显子上有两个启动子，而起始 密码位于第二外显子上，其m r n a 的开放阅读框架( o r f ) 茭b 第1 9 8 碱基对至第1 2 4 7 碱基对，编码产生的蛋白r e i c 位于细胞质，由3 5 0 个氨基酸组成，分子量约为 3 8 3 k d a 。经与d d b j 数据库比对，r e i c 蛋白的中心序列与d k k 3 蛋白的序列相同， 故认为r e i c 基因隶属于d i c k k o p f 家族【3 ，故常以r e i c d k k - 3 表示。 1 2 2 、d k k 基因家族成员及其结构 d k k 家族编码分泌蛋白，由4 个主要成员d k k 1 ，2 ，- 3 ，- 4 以及s g y 组成。 d k k 基因家族是包含2 5 5 3 5 0 氨基酸的糖蛋白类，经过精确的计算，d k k 1 ，d k k 2 和d k k 4 的分子量在2 4 2 9 k d a 之间，d k k 3 的分子量为3 8 k d a 3 】。d k k 基因家族 包含一个信号序列和两个保守半胱氨酸富集域，在这些半胱氨酸之间和其他的保 守氨基酸之间存在特征性的空间，这使得d k k 基因家族区别于其他基因( 见图1 ) 【5 】。n 端半胱氨酸富集域( 过去称为c y s 1 ) 是d k k 基因家族特有的，而c 端半 胱氨酸富集域( 过去称为c y s 2 ) 含有与辅酶褶相关的1 0 个半胱氨酸 6 】。蛋白序 列和结构分析实验提示d k k 基因家族和辅酶有着相同的硫酸键键结合形式和相似 的褶。辅酶是胰脂酶水解脂质，与脂微胶粒之间的相互作用的必要条件 7 】。 d k k 伪o ( 2 d 嗍 i l g d a f i g u r e1d o m a i ns t r u c t u r eo ft h e d k kf a m i l y h u m a nd k k i - 4 笛w e l l a sd k k l i ( s g y ) a r es h o w nw i t ht h e i r d o m a i n sc o r r e s p o n d i n gt o d k k n ( p f a m 0 4 7 0 6 ，a l s or e f e r r e dt oa sc y s l d o m a i n ) a n d c o l i p a s e f o l d ( p f a m 0 111 4 ，p f a m 0 2 7 4 0 ， a l s o r e f e r r e dt oa sc y s 2d o m a i n ) t h e s g y d o m a i ni so n l yf o u n di nd k k 3 a n d d k k l l ( s g y ) 3 、d k k 基因家族调节w m 信号 d k k 1 ，2 ，- 4 家族的标志是都能调节w n t 信号。通常，他们起抑制作用，然 而证据表明d l ( k 2 还能活化w n t 信号。w n t 基因最早是n u s s ea n dv a r m u s 8 在用小 鼠乳腺瘤毒诱导小鼠产生乳腺癌的过程中被发现的。m i c s e n y i 等；n e l s o n 和n u s s e ， 【9 ，1 0 】证明了w n t 信号通路在早期胚胎发育中的重要作用。w n t 信号通路有3 条主 要的分支：( 1 ) 经典的w n t 1 3 c a t e n i n 通路。这条通路激活后将募集细胞内p c a t e n i n ， 后者活化转移人细胞核，与转录因子l e f t c f 等共同作用激活特异基因的转录 【l l 】；( 2 ) 细胞极性通路( p c p ) 招募r h o c d c 4 2 家族中的d x g t p 酶，激活j u n 激酶 1 3 ( j n k ) ，而这个是由w n t 调控的【1 2 】；( 3 ) w n t c a ：+ 通路，此通路尚有争议， 可能与p c p 通路部分重叠 1 3 】。上述3 种通路，d k k 基因家族作用于经典的 w n t p c a t e n i n 通路。d k k 基因家族能与脂蛋白受体相关蛋白5 6 组( l r p 5 6 ) 复合受 体结合并起到调节作m 1 4 。l r p 5 6 与w n t ，f z 蛋白组成三联复合物( 见图2 ) 5 】。 f i g u r e2m o d e lo fd k ki n t e r a c t i o n sw i t ht h ew n t b c a t e n i np a t h w a y ( a ) w n tf o r m sat e m a r y c o m p l e xw i t hf za n dl r p 6 ，w h i c hp r o m o t e ss t a b i l i z a t i o no fb c a t e n i n , t h e r e b ya c t i v a t i n gt h e p a t h w a y ( b ，c ) d k k lb i n d i n gt ol r p 6b l o c k ss i g n a lt r a n s d u c t i o nb yp r e v e n t i n gw r i t - f zb i n d i n g ( b ) a n d o rl r p 6e n d o c y t o s i si nt h ep r e s e n c eo f t h ed k k lc o r e c e p t o rk r e m e n ( c ) ( d ) d k k 2c a na c t i v a t e l r p 6 4 、d k k 基因家族的非依赖w n t 功能 大量的研究表明d k k 一1 在w n t p c a t e n i n 信号中的功能，然而也有研究表明 d k k - 1 ，2 还有非依赖1 3 c a t e n i n 的功能。例如，敲除间皮瘤细胞系h 2 8 的d c a t e n i n 基因，d k k - 1 仍能高表达，促进细胞凋亡从而达到抑制肿瘤生长的作用 1 5 1 。在h e l a 细胞中也有类似是现象发生 1 6 】 d k k - 3 基因和s g y 基因似乎不参与w n t 信号的调节【3 ，1 7 ，1 8 1 。有研究表明敲除n 端的d k k 3 基因编码i i 型碘化甲状腺氨酸5 脱碘酶( d 2 ) 的基质结合亚基_ p 2 9 1 9 】。 此说法尚有诸多疑点：1 ，在没有p 2 9 的情况下，脱氧化酶硒化质仍然能保持活性； 2 ，在小鼠的大脑中，d k k 3 p 2 9 和d 2 之间不存在太多的关联 2 0 】；3 ，敲除d k k - 3 基因的小鼠表达正常的脱碘化酶和甲状腺激素水平 2 1 1 。 5 、d k k 基因家族与癌症 w n t 翅i 路在癌症的发生过程中有着重要的作用【2 2 ，2 3 ，因此，调节w n t 通路的 d k k 基因家族也参与癌症的发生过程。大量的研究表明d k k 基因在肿瘤细胞系或组 织中表达的改变( 见表1 ) 【5 】。在结肠癌 2 4 g i 人类卵巢子宫内膜腺瘤 2 5 q b d k k l 是 1 3 - e a t e n i n 基因的下游靶基因，在结肠癌中，d k k 1 基因的d n a 高甲基化导致其失活， 这与结直肠癌肿瘤形成的进展期有关 2 4 ，2 6 1 。d k k - 1 在结肠癌和h e l a 细胞系中的高 1 4 表达能减少集落形成和减缓肿瘤的生长，这提示d k k 1 具有抑制肿瘤生长的功能。 在表1 【5 】中，d k k 3 基因在多种肿瘤细胞系中呈低表达，这提示d k k 3 的抑制肿瘤 生长的功能。很多研究表明d k k 3 的高表达能抑制肿瘤细胞的生长 2 7 3 0 ，而d k k 一3 基因的高甲基化也与癌症有关【4 ，2 9 ，3 1 】，但是d k k 3 基因在肿瘤中表达变化的生物 学特征以及可能的抑制肿瘤生长的功能目前尚不明确。重要的是，大鼠的d k k 3 突变并没有出现肿瘤生长的加快 2 1 】。 t a b l e1d k k g e n ed e r e g u l a t i o ni nc a n c e r d k kc a n c e ro rt u m o rc e l l l i n e d k k l m y e l o m at 【3 2 】 c o l o r e c t a lc a n c e r “2 4 ，2 6 h e p a t o b l a s t o m a stf 3 3 】 w i l m st u m o rt 3 3 1 h e p a t o c e l l u l a rc a r c i n o m at 【3 4 】 o v a r i a ne n d o m e t r i o i da d e n o c a r c i n o m a st 【2 5 】 d k k 3s a o s - 2o s t e o s a r c o m al 【3 5 】 h e p a t o b l a s t o m aj 【3 5 】 h e p a t o e e l l u l a rc a r c i n o m al1 3 5 1 c h o l a n g i o c a r c i n o m a “3 5 】 h a c a ti m m o r t a l i z e dk e r a t i n o c y t e s 3 5 】 h e l ac e r v i c a lc a r c i n o m aj 【3 5 】 n o n - s m a l l c e l ll u n gc a n c e r 儿4 ，3 6 】 r e n a lc l e a rc e l lc a r c i n o m al 【3 7 1 a c u t el y m p h o b l a s t i cl e u k a e m i a 3 l 】 h e p a t o m al 3 8 l p r o s t a t ec a n c c r “2 9 ，3 0 d k k 4g a s t r i cc a r l c e rt 【3 9 d k k 2 ，s g y d k k l ! n od a t aa v a i l a b l e a b b r e v i a t i o n s ：d k k ，d i c k k o p f ；d k k l l ，d i c k k o p f - l i k ep r o t e i n1 t r a n s c r i p t i o n a lu p - o r d o w n r e g u l a t i o n ( t1 ) o fd k km e m b e r si nt h ei n d i c a t e dc a n c e ro rt u m o r s 6 、展望 自从1 9 9 8 年d k k 基因家族被发现以来，我们对它的生物学结构及功能有了很 深的了解。d k k 1 和d k k 4 能够抑制w n t 信号与跨膜受体k r m 和l r p 5 6 结合，形成 w n t f z 复合受体抑制物。进而抑制w n t 基因靶基因表达。d k k 基因家族的低表达导 致了肿瘤的发生和恶变，因此d k k 基因家族可以