（分析化学专业论文）茶多酚cu（Ⅱ）配合物杀菌性能的研究.pdf

巾国农业太学硕士学穗论文麓要 摘要 本文对茶多酚的提取及其稳定能、纯学钵系中茶多黼与铜的相互作用、茶多酚及茶多酚- c u ( i t ) 配合物生物活性兰方面进行了研究，结果如下： p 壬 簸、温度敷辩阉三个因素对茶多酚的稳定性均寄着不同程度静影相，箕中馥p h 壤鹣彰响 最为显著。茶多酚在酸性介质中( p i 5 2 9 ) 具有较好的稳定性，而在中性和碱性介质中( p 7 3 3 ) 稳定性较嫠。 溶液的p h 值对儿茶素与铜离子络合作用的影响较大。当p h 5 9 1 时，铜离子对儿茶豢的紫 外可见吸收光谱的影响逐灏增大，b 茶素黪蜷摄吸收峰由2 7 5 n m 红移楚3 2 0 r i m 处，同封峰形 也相应发生变化。p h = 5 9 l 时，铜离子与e g c g 的络台比为2 ：1 ；p h = 7 3 3 时，铜离子与e g c g 的络合嗽为1 ：1 。 c u s 0 4 与e g c g 、c u s o 与c a t 不同配搬组合豹簧配剂对棉花括萎病瘸原蔷和棉花炭疽病病 原菌的抑菌作用相对较高予单剂，其中c u s 0 4 + f c r c g ( 2 ：1 ) 的e c 5 0 相对较好为3 4 4 2m g l ：对 小麦赤霉瘾病嚣蘩没有捧铡俸瑶，毽窍一定的鬻j 激生长 筝臻。c u s 0 4 与e g c g 、c e s o , 专c a t 各 l ! i 己比的复酉己剂对犬肠杆菌和葡萄球菌无抑菌潘性，生物活性不如各单剂。 本磷究为寻找耨的铜索蓉蓥裁、实现茶多黪瓣综合利用提供7 参考。 关键词：茶多酚，铜离子，络合作用，生物滋性 中国农业夭学硕士学位论文 a t r s l r a e t a b s t r a c t t os e a r c hn e wc o p p e rg e r m i c i d e sa n dn e wu o ft e ap o l y p h e n o i s ( t p ) t h i sp a p e rs t u d i e do nt h r e e p a r t s ：t e ap o l y p h e n o i s e x t r a c t i o na n ds t a b i l i t y , t e ap o l y p h e n o l s i n t e r a c t i o n sw i t hc u 2 + i nc h e m i c a l s y s t e m s ，b i o a c t i v i t yo f t p c u c o m p l e x e s t h er e s u l t sa sf o l l o w s ： t h et h r e ef a c t o r so fp hv a l u e ，t e m p e r a t u r ea n dt i m eh a dd i f f e r e n te f f e c t so nt h es t a b i l i t yo ft e a p o l y p h e n o l s ，w i t ht h e 蝉v a ko ft h e s ts i g n i f i c a n te f f e c t 。t e ap o l y p h e n o i sh a db e t t e ts t a b i l i t yi n a c i dm e d i u m p h i 5 9 1 ，c o p p e ri o n s i n f l u e n c e dt h eu l t r a v i o l e t - v i s i b l ea b s o r p t i o ns p e c t r ao ft h ec a t e c h i n si n c r e a s i n g l y , t h ef e a t u r ew a v e l e n g t h a b s o r p t i o nm o v e dt o3 2 0 r i mf r o m2 7 5 n m ，a n da b s o r p t i o ns p e c t r aa l s oc o r r e s p o n d i n g l ye h a n 辨d 。i nt h e m e a n t i m e w e f o u n d t h a t t h er a t i oo f c u 2 + a n d e g c g w a s 2 ：1 i n t h es o l u t i o n o f p h5 9 1 ；a n d t h e r a t i o o f c u 2 + a n de g c gw a si ：1a tp r l = 7 3 3 t h ea n t i f u 毡g ia c t i v i t yo fc u s o , + e g c g ( 1 ：1 ) ，( 2 ：1 ) ，( 1 ：2 ) a n dc u s 0 4 + c a t ( 1 ：1 ( 2 ：1 ) ( 1 ：2 ) a g a i n s tf u s a r i u mo x y s p o r u ms c h l 蠢w a sm u c hh i g h e rt h a ne a c hs i n g l ed o s e 屯a c t i v i t ya g a i n s t g i b b e r e l l az e a e ( s c h 川p e t c h ，b u tt h e r ew a ss o m es t i m u l a t i n ga c t i v i t yo fg r o w t h t h eb a c t e r i c i d a l a c t i v i t y o f c a t e e h i n - c o p p e r ( t i ) c o m p l e xa g a i n s t es c h e r i c h i ac o l i a n d s t a p h y l o c o c c u sa u r e u s w a s m u c h l o w e rt h a ne a c hs i n g l ed o s e k e y w o r d s ：t e ap o l y p h e n o l s ( r p ) ，c o p p e r ，c o m p l e x ，b i o a c t i v i t y ! 独创性声明 本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成 果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发 表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中国农业大学或其它教育机构的学位或证书 而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明 确的说明并表示了谢意。 研究生签名：三熙 时间： 2 卯6 年月f b 关于论文使用授权的说明 本人完全了解中国农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留 送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复 制手段保存、汇编学位论文。同意中国农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、 传播学位论文的全部或部分内容。 ( 保密的学位论文在解密后应遵守此协议) 研究生签名 导师签名： 辩 时间：删6 时间：矽 年6y j | 争e 1 年 勘f e l 中国农业火学硕士学位论文 第一章绪论 皇糕舞皇曼! 置寡罾删算獬麓蔓皇蔓罩邕i i ll 量算躺基暑黑暑量芭篁皇量詈皇巴醴喇皇曩- 。 茶多酚的磷突进震 1 + 1 1 茶多酚的络构和性质 第一章绪论 茶参酚f l e a p o l ”h e 柏w r p ) 戆茶叶中的燕要生理活憔成分。又耄茶单宁、荼鞣质，是茶叶所含 的一类多羟基类化含物的总称。它是天然植物茶叶中分离提纯的3 0 多种脂类化合物的复台体，约 占茶砖予镌震慧量瓣1 8 - 3 6 ，玄分毒广( 穰穆各器寓都蠢，毽主凝集孛予嫩精帮芽) ，交健夫 ( 受内外因的影响最大) ，对茶叶品质的影响最为显藿，是茶叶生物化学研究煅多的一类化台物。 其主要成分为黄烷醇郯a v a u o k ) 、黄酮类( f l a v o n o i d s ) 、黄酮醇擞、花青素类、酚酸、缩酚酸 类及聚会黔类等萁串焚烷酵帮遴常所稼瓣j b 茶素类诧套耪( c a t e c h i n s ) ，它为茶多酪静主体袋分， 约占茶多酚总量的6 5 8 0 。儿茶素类化物主要包括表没食予几茶素没食乎酸酯【( ) 一 e p i g a l l o c a t e e h i n 一3 一g a l l a 把( e g c g ) 】、表没食t - j l , 茶索l ( 一) 一e p i g a l l o c a t e c h i n ( e g c ) 】、袭儿 茶素没食予酸酯f 蒋洱茶 茳茶 鸟茂茶；4 静茶的络台效应随葬重闻增热磊降低，臻因可能 是c u ”能使茶叶中儿茶素氧化反成加快，从而降低茶汤的络合效应。郭炳莹等】人用赢接观察法、 酒石酸亚铁法和络黑t 法对绿茶茶汤组分与2 3 种金属离予的络含性能进行研究发现，c a 2 + 、 m n 7 + 、b i “、z n 2 、c 扩、a g + 、t h 4 + 、s r 2 + 、h 9 2 、s b “、妒+ 、羚蟊、m 0 6 + 、必2 + 等1 5 静 离子与茶汤有明显的反应发生，生成了具有特征颜色的络合物。萧伟祥簿脚l 研究茶黄色素( t y p ， 主要成分是簧酮类纯台物及，l 茶索氧化聚合锈) 对金属离予的依糟，菠凝r 释辩a p 、c a “辅“ 的络念性较强，丽对c n “豹络合性较弱。 。3 。2 蒸多黪与整壤离子终食物的形或 j b 茶素类征台骢分予结稳串翡羟蘩帮氧w 作为苓霜约魄子缭体，它在溶液串存在死释稳蒙。 这一性质使它与不问的金属离子作用产生不同的结台方式和能力。因而，实验的条件对茶多酚配 台物的形成有着重要影响。 f u m l k o 至王蟹披瓣】等人发现e g 与q | “、f e “、b + 形戒配台物鹣最佳酸度为p h = 7 。4 ，与 a 1 ”作用的煅佳酸度分别为p i _ 5 0 。戚向阳忡j 等研究发习7 , e g c g 岛g e ( i v ) 襁p h 6 5 - 7 0 的缓冲 溶液巾可形成e g c g - g e i v ) 金耩配合物，并接等鼙尔连续交换法及零衣院法溅定e g c g - g o ( i v ) 配合物组成为皿g g g 】【g e ( i v ) 1 = 2 ：1 ( m o l m 0 1 ) ，配合物的不稳定常数为2 5 7 0 1 0 - “。李志南 等 4 9 1 入对茶雾酚与p b 2 + 络台反戚机理谶行研究发现，络合反应分两级谶行，两级反鹰p b 2 + 与茶多 魏配比分别必2 ：l 秘1 ：1 。张玉艳等1 3 9 j 人研究t e g c g 与c u 2 + 形戏络舍物豹象传，袁强酸性c p s 、 4 o 时，e g c g 与q 一可以形成络合物：在 p h = 6 o 静己酸缓；申液中，c u “与e g c g 良2 ：l 结合静：在p | _ 7 的硼酸缓；申液孛，c 缸“与e g c g 以1 ：l 络台。m i d o r i k u m a m o t o ( ”i 等研究认为铜离子与儿茶索的樱互作用也与几茶素的结构有关， e g c g 与e c g 在铜离子存在下解离常数显著下降，而e c 茂e c - c 希t 现则不明显，推测铜离子熏要与 e g c g 与e c 嚣豹没食子酸基弱结合。e m i k oo h y o s h i i s ”、唐德拯1 5 2 l 等利用分光光度法磷究e g c 鼹与 ”在醋酸缓冲液中的络含度为1 ：1 ，得e g c g - a i 络合物的形成常数为l o g k a i 。e g c g ：7 6 + 0 i 。 m i c h i k ob i n o u e t 5 3 1 研究了凡茶豢与棚”络台物的络合眈，警e c 或楚e g c 与a 1 3 共存辩，形成络台 6 獍兹结构蔓f 淄释嚣0 、【渊嫌0 o 潮+ 秘f 泌8 找凌l 。；p h 4 。o 时，铜离予存在下e g c g 吸收光谱裔很大改变，这表 孵铜离子麓，0 荼素分予阉发生终含作溺，产生缝梅重捧产秘。紫， 竞谱劳橱霹对氇褴疲震捌f e 3 + 、 f e 2 、z n “、a 1 “与儿茶索类化合物络合作用的研究中m 4 m 。 荼多酚与金属离予络台物的效外光谱研究表明，茶多黔与金属离子络合物保留了茶多酚的基 本曹架缭椽。毽配合物的酚羟基数酱裙显减少，说明茶多鼯与金属离子络音物豹形成；茶多鹣分 子中c 0 ，的吸收峰发上改变，说明茶多酚与金属离子络含后c - o - 键发生改变；分子中羰熬的吸 牧峰发生改变，说明茶多酚与金螨璃子络台囊羰基掰处豹化学环境发生了改变p ”。 于海宁等辫豫究了茶多酸在不辩浓度，不闻蠲僮，举同金属离子( f e 2 + ，c u 2 ，z n 2 + ) 存 在下的化学发光，结果表明，c 酽+ 可抑制茶辫酚的发光，而f e “在一定条件下促进发光，z n “对 茶多酚的化学发巍没蠢影响。张黼疆等i 跚入发现金属离子( c a 2 + ，a l “) 对荼多黔瓣发光将性的 盥接影确誉明显，主黧邋过影响游离茶多酚浓度而降低冀荧光强度。 n m r 对配合物的结构表征和性质研究是一种非常有效的方法【蚰】。对于抗磁类金属离予如 艇“，m i c h i k ob 。i n o u e 印磅究绩聚曩示，e c c o 没食予黢蒸( d 琢) 主豹嚣令羟慕撂电子，砖矗l “ 形成络合物 a l ( l 珏一) 】而 a 1 ( l 鞭s ) 蠕合物是由焦槽黢( b 环) 的一个羟基和d 环的两个羟基 得电子而形成的。而对于顺磁类盒属离子如c e 2 、m n “，由于其离子中来成对的电子对配合物的 撼嘏会产生缀太豹影晌，扶嚣导蒙瓣会魏约n m 建不可测。r o s a en & 牲。萼芦1 狄荣翅测定l 挂原 子的驰豫时间研究了e g c g 、e c r c 岛m n 2 的络合作用，结果表明在形成配合物的过程中d 环比b 环具有更好的协调力，d 环对配合物的形成具有重要作用。 e s m s 采矮了溢秘载“簌邀囊”技术，壤薅遗蛰凑，k 茶素与金攥离子嚣会物戆分子离子獐， 非常适合予金属配合物的研究【艚l 。m t e r e z a f e r n a n d e # x j 掰f 究了几茶索 ( + ) c a t e c h i n 与c u 2 + 、 f e “、f e “的络合作用，得到了配食物的分子离子峰，经分析表明( + ) 一儿茶綮与c u “、f e z + 、 f 矿配合魄秀1 ：1 。黄河宇等p l a 瞧莱耀h p l c - e s i o - t o f 箱m a l d i - t o f 矮港技零努辑，k 荼素 锗多聚体特性。 7 1 3 2 茶多酚与金藕离子络合作用静生耪学漭往 1 3 2 1 茶多粉与金属离子络台的解毒作用 重袅属毒性作用主要在于它能与体内维持正常生理功能的配体结合，使其失去生理功能。儿 茶索可以与太多数象属离子进行络含，在定条件下能够抑制某些金属离子的吸收，缓解某些金 属特剜燕重金属中薅。 茶时利剡对锻接业工人的职业性锻中毒与锻强收蠢较好的预骆和浚疗捧翅，憝有效降低斑铅 禽量，增加尿铅的排出量，且能明显提高蹙试者的血红蛋白含量，对锻毒造成的贫血也有一定的 治疗作糟秘。茶多酚对f 矿的络台沉淀和还原所起的解毒律糯是茶旰的傈健功散之强。d e n i s b l a c h e 等【蝉j 发瑷，b 荣素戆够有效拿霉剃铁过麓诱移豹盘滚过戴健爱瘟，秘盘小扳淫劫异常。 j e o n g - h w ac h o i 等附j 研究了儿荣素对慢性镉( c d ) 中斑的影响，发现儿茶素能够有效清除c d 过量 引起的骨代谢紊乱，恢复骨细胞对各种金属离子的正常吸收并维持骨骼中各种金属离子的正常含 量平簿。 1 ，3 2 童茶多酚与金属离子的抗氧 l ：作用 茶彩酚具有良好的抗氧化活性，能够有效清除自由基。机体内过渡金属离子是自由基的另一 重要来源。荣多酚楚这鉴金属离子的天然络合荆，它提供电子给这些过渡金属离子成为络合物， 焉簿奉l 垒属离子静囊由蘩攘纯作翊。茶多鹣在终含金耩离予瓣，是羰共囊# 键整体参与络台豹， 因而形成的络合物较稳定。许多实验表明，多酚类对抑制愈属离子催化的自由基反应异常有效， 且可用分光光度法检测刘多酚类与金属离子的络合物。茶多酚络台c u 、f e 离子后，使其丧失催化 活性蔼产生撬裁纯作用；另一方露，形成躲茶多蘩络舍穆仍保持瀵踩鑫出蓦鹩活链， m i d o r ik u m a m o t o 等唧峨究金属离子对儿茶索抗毓化活性的影响，发现在微酸性条件下，加 入c u “后体系中耗辍量增加，c u 2 + 可以显著提高儿茶素的抗氧化活性，f 护则明最降低儿茶紊抗 戴住活性荣多酚黠c u 2 的络合作丽可柿潮由c 舻+ 催纯静低密度膳蛋自( l d l ) 酶氧讫嘲。z a g o m p 等1 6 7 l 研究发现z n 2 熊够增强e c 的戡氧化活性，认为z n 2 霹以峰e c 形成抗氧化缀环，协 同起作用。 另外，盒属离乎能穆与几茶素发生氧化还舔反应，特剐是在强碱条件下，金属离子能够键遴 j l 茶素f l 搴霆氧纯发生动戴佳反应。m i d o r ik u m a l r t o 等删遂鹎j l 茶素在碱性袈 孛下，驻够发生基 动氧化反应，产生自由基，而铜离予存在时，锕离子催化促进儿茶素的白氧化。s a z a m 等【醴】研究 认为，铜离子可催化e g c g 、嚣c 自氯化反应。m a n a b um o c h i z u k i 等f 州利用裁电极对几茶素的鲁 戴纯避褥凌力学耩宠，褥舞嗣样豹绥谂，试鸯钢离子在，l 茶素鑫戴纯避程孛宠当镶他赉l ，不壤键 进了儿荣索的自氧化，还促进了过氧化氢( h 2 0 2 ) 的形成。郭远华等f 棚发现在碱性体系中，f e “ 可以加遵几荣素的自氧化，产生- o h ：其作用机理可熊为：一方面，在有氧的情况下儿茶索可以通 过自氧反应产生超辘阴离子自国基( 0 2 ) 辅过氧亿氢i ( h 2 0 2 ) ；舅一方凝，0 茶素矮藤“为“， j l 茶素本身被氧化为羧酸。 8 中鞠农业大学磺士学位论文第章绪论 。3 2 3 茶多酪金嚣薅子终台狻与嗽豹传忍 h a y a k a w a f 7 1 垮人磺究了不髓金属离予与茶多酪各组分形残络台物对d n a 裂解的影蠛，发现 c u 2 能够显著促进几荣索诱导的d n a 新裂，a g + q 对e g c g 和e c 诱导的d n a 断裂表现较攒的抑制 作髑，而其他的多种众属离子光明显影响或活性很低。c u 2 存在时，不同儿荣素单体均可以诱导 d n a 裂解，健作用强瓣不犀，顺序依次为e g c e c e g c g c 。1 9 卵年h a y 妇8 w a 研究表明p 磷 几茶素在铜离子存在刺有氧的条件下，能够极大的促进d n a 的裂解反应和脂肪酸的过飘化，这大予 钢离子帮j l 荣素等多懿类纯合黪单独箨粥静结栗。在y o 麟馥a 弹1 霸壬耋a ￥酿g 孵8 l ”滓靛研究串，诀必 儿荣索类化含物在与铜形成配合物的体系中，c u 2 + 被还原为c u + ，c u + 便会与0 2 和h 2 0 2 反应生成促 使d 凇裂磐的o h i 纛0 2 。 c a t e c h i n + 2c 妇2 + po x i d i dc a t e c h i n + 2c 一 翻+ + 魄翻“+ 颤 o l2 曲+ + 0 2 + 2 h + 啼2 c u 2 + + h 2 0 2 o fc 疆+ + h 2 0 2斗e i 产+ + o h o h 图1 2 儿茶素与铜离子的氧化反应 1 3 2 4 茶多酚金属离子络合物对微生物体系的影响 ( 1 ) ( 2 ) ( 3 ) ( 4 ) n o b u oh o s h i n o 等天融”研究了j k 荣素- 铜( 1 1 ) 络台物对犬肠秆菌和金黄色葡萄球薪的生物滔 性，结果表明儿茶素铜( i i ) 络含物对大肠杆菌( 饼) 豹抑荫效果要优于对金黄色葡萄球菌( g + ) 嚣捧藩效果，豆e g c - c u “生物潘往往子其链，0 茶潦类纯台物，这与荣多酪缀势中e g c g 生耪活瞧 最商明显不间；在进步研究t j l 茶素铜( ) 络合物的作用机理之后，发现丈肠杆荫( g ) 缃 黪巾臀曙秘锣大量损裁，毽不笈囊玟诅藏链襄瑟，缮台兹撰揍嚣链垮缍凄朕，其终熙撬理霹辘 为c 一被还原为c u * ，c u * 氧化后生成大量活性氧和活性氧自由熬。而细臌质膜袭脚所携带的 电蕊分子决定了与络食物的结会能力，这可能是影响儿茶鬃娟f i 【) 络合钧的抑蓥活性豹重要霸 素。 9 中国农业大举磺士学位论文 第一耄绪论 曼拦皇罡曼獬量皇量旨鲁獬囊曼旨董_ i i i i 拦曼舅舅邕量兽皇删量鼍皇懋篁量置篁糍皇量置 t 器端黧渤器，8 馏燃：鬻产 豁默黧篡甓激； f l g l 3 t h es c h e m t i c h l m t r t t l o n o f t k e a t t a c k o f c a t e c h i n ( a ) a n d c a t e c h l n c u ( 1 i ) c o m p l e x o n s t a p h y l o c o c c u sa l l r e l l sa n d e s c h e r i c l d a c o i l 此外，郭远华等的研究发现胪存在下，j 蛹 素的抑菌效果明照增强，l 茶索在有f e z * 套 导的碱性体系中舆有促氧化作用，会促使体系产生更多羟自由纂( o h ) 。戚向阳嗍、黄河宁等 婶l 也磅究发理e g 一g e ( ) 搏隶l 肺癌纲熬生长速率明曩裹- e c , c g 。 3 3 鬟望 近几年来，隧赣国内， 茶多酚金满离子络台律硒研究的不断深入，茶多酚与金满离予的络合 特性在茶叶的综合利用方蕊有赣重要的作用，如重金属毒性的孵除、袅属的掇取和明收利用、三 废处理、茶叶有散组分的分离纯化及人体韵觜养保健等。尽管化学家对它各方面的研究已经进彳亍 了大餐豹工终，毽宅依然是一个十努年轻群又充满活力豹领域。随着科学静进步与柱会懿发展， 茶多酚金属离子络台物将会在工业、农业及人们的日常生活中得到更好的应用。 1 0 中国农业大学硕士学位论文 第一章绪论 1 4 研究目的和意义 铜制剂被用来杀菌已有很长时间的历史，长期以来，铜类杀菌剂以其广谱性、易施用，价格低 廉等特点，被广泛用于果园菜地杀菌，据统计每年施用量折铜达1 4 8 k g r 卣。长期使用含铜农药 ( 波尔多液) 的果园土壤全铜含量可达5 0 0 c u m g k g , 而正常土壤中的总c u 含量一般为1 5 - 4 0 m g k g a 虽然近年来铜制剂使用量的增长趋势有所减缓，但在果园及菜地上的残留已带来严重影响与危 害，国内外关于引起植物铜中毒剂环境污染的报道也愈来愈多。降低铜用量、促进铜转化对生态 环境保护和农产品安全有着重要意义。 茶多酚，是茶叶中最重要的生物活性物质，作为一种广谱、强效、低毒的抗菌药物已被世界 许多国家学者所公认，它对自然界中十余种类群的近百种病原菌均有优异的抗菌活性，是一种良 好的天然抗菌剂。茶多酚的主要成分是儿茶素，由于具有多个酚羟基的特殊结构且具有较强的酸 碱缓冲能力。使其在与金属离子相遇时，极易与金属离子发生吸附络合作用或氧化还原反应，形成 稳定的络合物或氧化还原产物。国内外众多研究表明，茶多酚- c u ( i i ) 配合物具有较强的生物活性。 本论文主要研究茶多酚- c u ( i i ) 配合物的络合性能及其杀菌性能，对寻找新的铜素杀菌剂、减 少铜素杀菌剂的用量、减少铜污染，保护生态环境具有重要意义，同时也为实现茶多酚的综合利 用提供参考。 1 1 中国农业大学颂士学饿论文 第二章蕞多酚的提取疑其稳定性研究 2 。 号l 言 第二章茶多酚的提取及其稳定性研究 茶多酚是扶天然植物茶叶巾分离掇取韵多羟基酚类衍生物酶混合物，占茶叶干羹的1 5 - 3 0 0 j 6 。 茶多黔的提取工艺主要毒溶剂漫提、垒属离子沉淀、树嚣吸附法、超妊界渡体萃取浃、超声波浸 提法及微波浸提法等。 本实验获茶多酪懿特性出笈，寻我简单、浃速、有效瓣潞数方法，并磅究了不翔谭值、温度 及时间对茶多酚稳定性的影响，为实现茶多酚的综仓利用提供参考，同时也为下文研究茶多酚与 铜离予化学体系中的络合作用擒供参考。 2 2 材料与方法 2 2 1 实验仪器、原料和试剂 实验仪器；紫外一可见全分光光度仪f r u 1 9 0 1 ，北京黄析通用有限责任公司) ，旋转蒸发仪 ( r e - 5 2 a ，上海亚荣生化仪器厂) ，p h 计( 雷磁，3 c ，上海精密仪器有限公司) ，循环真空泵( s h z - i i 型，上海亚荣生讫仪器厂) 。 实验试剂；乙酸乙酯( 北京化工厂，分析纯) 、无水硫酸钠( 北京化学试剂有限公司，分析 缝) 、溪石羧铎链( j 寨往学试潮有限公司，分祈纬) 、硫酸亚铁( 魏索亿学试帮有限公司，分 析纯) 、柠檬黢钠( _ b 京化学试荆有限公司，分析纯) 、盐酸( 北窳化学试剂有限公司，分析纯) 、 硼砂( 北京化学试剂有限公司，分析纯) 、磷酸二氨钾( 北京化学试剂有限公司，分析纯) 、磷 酸氢= 钠( 魏京化学试热毒鼹公司，分析纯) 。 原料：安徽黄山毛峰干茶叶。 2 2 2 实骏方法 2 2 2 1 茶多酗提取 有机溶剂萃取i 蛊是传缆的提取法，过程比较简单。最常用的溶剂是乙醇、甲醇、丙酮、乙酸 己酯等闲，零试验采厢乙馥乙酯溶剂进行提取。 稔取茶叶1 0 0 9 予样箍，女口入5 0 0 m l9 0 - 1 0 0 c 蒸馕拳孛，于憾渥承漆搪孛攫搀，减压过滤， 先后用乙酸乙酯萃取两次。合并有机相，用无水n a 2 s 0 4 干燥，减压蒸馏除去溶剂得黄色粉末状 萘多酚，实验漉程翔图2 - i 所示： 1 2 团骂困坚固坐攀匪圈 l 臣巫口一圈 2 2 2 2 茶多酚含量的测定 引用标准g b t 8 3 1 3 - 2 0 0 2 茶多酚的测定【7 ”。 原理：茶叶中多酚类物质能与亚铁离子形成紫蓝色络合物。用分光光度计测定其含量。 ( 1 ) 配制酒石酸亚铁溶液：称取1 0 9 硫酸亚铁( f e , s 0 4 ) 和5 0 9 酒石酸钾钠 ( c 1 a h 0 6 k l , l a 4 1 1 2 0 ) ，蒸馏水定容至1 l ，低温保存； ( 2 ) 配制p h7 5 磷酸盐缓冲液( 1 1 5m o l l 的磷酸氢二钠溶液8 5 m l 和1 1 5m o l l 磷酸二氢 钾溶液1 5 m l 均匀混合) ； ( 3 ) 称取0 5 9 茶多酚，用蒸馏水配制2 5 0 m l o 2 茶多酚溶液； ( 4 ) 取l m l 茶多酚溶液，注入2 5 i i l l 容量瓶，加入蒸馏水4 m l 和酒石酸亚铁溶液5 m l ，充分 混合，再加p h7 5 磷酸盐缓冲液至刻度； ( 5 ) 用1 0 i f l m 比色杯，在波长5 4 0 h m 处，以空白溶液作参比。测定吸光度值。 ( 6 ) 计算方法 茶多酚( ) = 1 0 0 0 式中：l 1 试液的总量，m l ； ir - 澳0 定时的用液量m l m 旷_ _ 式样的质量，g ； a 一式样的吸光度； l 1 b m o x1 公式( 2 1 ) 1 9 5 7 一用l o n u n 比色杯，当吸光度等于0 5 0 时，每毫升溶液中含茶多酚相当 于1 9 5 7 m g 。 2 2 2 3 茶多酚稳定性研究1 7 s - ”1 ( 1 ) 不同p h 溶液茶多酚的稳定性 首先配制不同p h 值缓冲溶液，然后分别用各缓冲液配制0 1 的茶多酚溶液5 0 m l ，2 5 。c 放 置3 0 r a i n ，参照g b t 8 3 1 3 2 0 0 2 对茶多酚含量进行测定，计算茶多酚含量的变化率。设置室温下 0 1 的茶多酚水溶液为对照，重复两次。 对照一处理