（法医学专业论文）大鼠血液、玻璃体液、肌肉乙醇浓度关系的研究.pdf

中文论著摘要 大鼠血液、玻璃体液、肌肉乙醇浓度关系的研究 刖吾 乙醇俗称酒精，是各种酒类饮料的主要成分，驾驶员酒后驾车是引发交通事 故的重要原因之一。道路安全法规定血液中乙醇浓度( b l o o da l c o h o lc o n c e n t r a t i o n ，b a c ) 作为判断酒后驾车或醉酒驾车的依据。为了给交通警察提供酒后驾车 或醉酒驾车的证据，必须对受检者的血液乙醇浓度进行测定。但当受检者由于严 重机械性创伤、身体肢解等原因造成血液流失，无法取得血液样品时，法医毒物 学家通常采用死后较为稳定、受环境因素干扰较小的体液和组织( 玻璃体液、胆 汁、脑脊液、骨髓、肌肉等) 对乙醇含量进行测定 1 , 2 1 ，以此来推断b a c ，但目 前还没有被公认为可靠的、适用的推断方法。本实验采用顶空气相色谱法( h e a d s p a c e g a sc h r o m a t o g r a p h y ，h s g c ) 澳, y 定了大鼠灌服乙醇后血液、玻璃体液及肌肉 中乙醇浓度，研究了灌服后不同时间大鼠血液、玻璃体液、肌肉之间乙醇浓度关 系，为推断b a c 提供参考依据。 方法 采用顶空气相色谱法分别测定灌服乙醇l 、2 、3 、4 、5 h 后处死大鼠的血液、 玻璃体液、肌肉的乙醇浓度。 钴甲 耋口7 i 弋 数据进行线性相关及回归统计分析，结果如下：大鼠血液、玻璃体液、肌肉 的乙醇平均浓度与时间( 1 - - 一5 h ) 线性回归方程：y = 2 2 6 3 4 0 2 3 5 6 0 9 1 x ，r2 = 0 9 7 9 8 ， r = 0 9 8 9 8 和y = 2 2 9 3 0 6 7 3 0 0 9 4 4 x ，r 2 = o 9 7 9 4 ，r 一0 9 8 9 6 和) r = 1 8 1 3 2 8 5 2 1 7 7 9 1 x ， r2 = o 9 8 9 5 ，r = 0 9 9 4 7 。 在灌服乙醇l - 5h 时段内，对血液、玻璃体液、肌肉三者之间的乙醇平均浓 度进行线性相关及回归统计分析：玻璃体液与血液乙醇平均浓度线性回归方程： y = 4 4 5 0 3 1 9 + 1 1 7 9 7 7 x ，r 2 = 0 9 9 4 6 ，r = 0 9 9 7 3 ；肌肉与血液乙醇平均浓度线性回归 方程：y 一6 6 7 3 2 3 9 + 1 6 0 5 6 9 x ，r2 = o 9 5 5 l ，r = o 9 7 7 3 ；玻璃体液液与肌肉乙醇平均 浓度线性凹归方程：y = 1 7 9 5 9 6 + 0 7 0 5 l x ，r 2 = 0 9 5 9 2 ，r = o 9 7 9 4 ，对测定结果作相 关系数的显著性检验，用单侧检验查相关系数界值：n = 5p ( 1 ) 界值为0 9 5 l ，测 定结果r 值 0 9 5 1 ，p 0 0 0 5 ，因此判断相关系数有高度显著性。 讨论 本研究中，大鼠灌服乙醇3 、4 d , 时后处死所测得的b a c v a c 分别为0 8 5 、o 7 9 ， 这充分表明乙醇进入大鼠体内3 d 时后即己达到分布平衡( 即吸收后期) 。而2 小 时组的b a c n a c 、b a c m a c 均高于理论值，说明此时乙醇进入大鼠体内尚未达到 分布平衡( 即处于吸收期) 。从大鼠灌服乙醇1 、2 、3 、4 、5 、8 、1 0 、1 2 d 时实 验组的b a c v a c 、b a c m a c 看出：b a c v a c 、b a c m a c 的数值随时间呈逐渐 下降的趋势，其消除速率l i , b a c 消除速率慢。 在灌服乙醇1 5h 时段内，血液、玻璃体液、肌肉三者之间的乙醇平均浓度 进行线性相关及回归统计分析结果呈正相关，其相关系具有高度显著性 ( p o 0 0 5 ) 。结果表明：由大鼠玻璃体液、肌肉推算血液乙醇浓度的方法是可行 的。 结论 通过实验建立了大鼠血液、玻璃体液、肌肉间浓度推导关系，在灌服乙醇1 5h 时段内：b a c = 4 4 9 0 4 5 + 0 5 9 4 8 v a c ；b a c = 6 6 7 3 2 3 9 + 1 6 0 5 6 9 m a c ，这为b a c 的推断提供了参考依据。 关键词 气相色谱法；乙醇；血液；玻璃体液；肌肉 2 英文论著摘要 s t u d yo nt h er e l a t i o n s h i p so ft h ec o n c e n t r a t i o no f e t h a n o li nt h eb l o o d ，v i t r e o u sh u m o ra n dm u s c l eo f r a t s o b je c t i v e a l c o h o li st h em a j o rc o n s t i t u e n t so fh a r dd r i n k a n da l s oo n eo ft h em a i nr e a s o n s t oc a u s et r a f f i ca c c i d e n td r i v ew h e ni n t o x i c a t e do rd r u n kd r i v ei sb a s e do nt h eb l o o d a l c o h o lc o n c e m t r a t i o n ( b a c ) o ft h er o a dt r a f f i cs a f e t ya c t b u tw h e nt h ed r i v e rl o s s e s b l o o dc a u s e db yh u r ta n do t h e rr e a s o n s ，p o l i c e m a nc o u l d n td e t e c tt h eb l o o da l c o h o l c o n c e r n t r a t i o n a tt h i st i m e ，l e g a lm e d i c a l e x p e r tm a yd e d u c eb l o o da l c o h o l c o n c e m t r a t i o nb yb o d yf l u i d sa n dt i s s u e s ，s u c ha sv i t r e o u sh u m o r , g a l l ，n c u r o l y m p h ， m a r r o w , m u s c l ea n ds oo n w ea d o p th e a d s p a c eg a sc h r o m a t o g r a p h yt od e t e c tt h e a l c o h o lc o n c e n t r a t i o no fb o o l d ，v i t r e o u sh u m o r , a n dm u s c l ei nr a t sw i t ha l c o h o l ，a n d e s t a b l i s ham e t h o df o rd e d u c i n gt h er e l a t i o n s h i pb e t w e e nt h ea l c o h o li nt h eb l o o d ， v i t r e o u sh u m o ra n dt h em u s c l eo fr a t m e t h o d a d o p th e a d s p a c eg a sc h r o m a t o g r a p g yt od e t e c tt h ea l c o h o lc o n c e n t r a t i o ni nt h e b l o o d ，v i t r e o u sh u m o ra n dt h em u s c l eo fr a t sw i t ha l c o h o la f t e r1 , 2 ，3 ，4 ，5h o u r s r e s u l t s a f t e rt h ei n t r a g a s t r i ca d m i n i s t r a t i o nw i t he t h a n o l ，t h er a t sw e r ek i l l e da tlh ，2 h ，3 h ， 4 h ，5 h ，t h eb l o o d ，v i t r e o u sh u m o ra n dm u s c l ew e r eg e ta n da n a l y z e db yl i n e a r i t y r e g r e s s i o n t h el i n e a re q u a t i o nb e t w e e nt i m e ( 1h 5 h ) a n dt h ec o n c e n t r a t i o no fe t h a n o li n b l o o di sy = 2 2 6 3 4 0 2 3 5 6 0 9 1 x ( r 2 = o 9 7 9 8 ，r = 0 9 8 9 8 ) ，p 0 0 0 5 t h el i n e a re q u a t i o n b e t w e e nt i m ea n dt h ec o n c e n t r a t i o no fe t h a n o li nt h ev i t r e o u sh u m o ri s y = 2 2 9 3 0 6 7 - 3 0 0 9 4 4 x ( r2 = o 9 7 9 4 ，r 一0 9 8 9 6 ) ，p 0 0 0 5 ，n l el i n e a re q u a t i o nb e t w e e n t i m ea n dt h ec o n c e n t r a t i o no fe t h a n o li nt h em u s c l ei s y = 18 1 3 2 8 5 21 7 7 91x ( r2 - - - 0 9 8 9 5 ，r2 0 9 9 4 7 ) ，p 0 0 0 5 3 d i s c u s s i o n i nt h ep r e s e n ts t u d y ，a f t e rr a t sw e r ef e dw i t he t h a n o l ，t h e3a n d4h o u r s b a c v a cw e r e0 8 5a n do 7 9 ，w h i c hf u l l yd e m o n s t r a t e dt h a tt h ed i s t r i b u t i o no fe t h a n o lh a d r e a c h e dab a l a n c ei nt h er a tb o d yi n3h o u r s ( a b s o r p t i o no ft h el a t t e r ) t h eb a c v a c ， b a c m a co ft h e2h o u r sg r o u pw e r eh i g h e rt h a nt h et h e o r e t i c a lv a l u e ，w h i c hs h o w s t h a tt h ed i s t r i b u t i o no fe t h a n o lh a dn o ty e tr e a c h e dab a l a n c ea tt h i st i m e ( i nt h e a b s o r p t i o np e r i o d ) a f t e rt h er a t sw e r ef e dw i t he t h a n o l ，t h e1 , 2 ，3 ，4 ，5 , 8 ，1 0 ，1 2 一h o u r s b a c v a c ，b a c m a co ft h ee x p e r i m e n t a lg r o u ps h o w e dt h a t ：b a c v a c ，b a c m a cv a l u e sd e c r e a s e dg r a d u a l l yw i t l lt i m e a n di t se l i m i n a t i o nr a t ew a ss l o w e rt h a n t h ee l i m i n a t i o nr a t eo fb a c t h er e s u l to ft h el i n e a rc o r r e l a t i o na n dr e g r e s s i o ns t a t i s t i c a l a n a l y s i sf o rt h e a v e r a g ec o n c e n t r a t i o no fe t h a n o li nb l o o d ，v i t r e o u sh u m o ra n dm u s c l ew a sp o s i t i v e ，t h e c o r r e l a t i o ni sh i g h l ys i g n i f i c a n t ( p 0 0 0 5 ) t h er e s u l ts h o w e dt h a tt h em e t h o df o r d e d u c i n gt h er e l a t i o n s h i pb e t w e e nt h em c o h o lc o n c e n t r a t i o ni nt h eb l o o d ，v i t r e o u s h u m o ra n dm u s c l eo ft h er a t si sr e a s o n a b l e c o n c l u s i o n t oe s t a b l i s ham e t h o df o rd e d u c i n gt h er e l a t i o n s h i pb e t w e e nt h ea l c o h o l c o n c e n t r a t i o ni nt h eb l o o d ，v i t r e o u sh u m o ra n dm u s c l eo ft h er a t sw i t ha l c o h o lf r o mlh t o5 h ，b a c = - 4 4 9 0 4 5 + 0 5 9 4 8 v a c ，b a c = 一6 6 7 3 2 3 9 + 1 6 0 5 6 9 m a c ，t h i sp r o v i d e sa r e f e r e n c ef r a m ef o rd e d u c i n gb a c k e y w o r d s h e a d s p a c e g a sc h r o m a t o g r a p h y ；e t h a n o l ；b l o o d ；v i t r e o u sh u m o r ；m u s c l e 4 英文缩略写 5 中国医科大学研究生学位论文独创性声明 本人申明所呈交的学位论文是我本人在导师指导下进行的研究工作及 取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论 文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得我校或 其他教育机构的学位或证书而使用过的材料，与我一同工作的同志对本研 究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。 论文作者签名：吴主纽堡 e t 期：劢d c 支( ， 中国医科大学研究生学位论文版权使用授权书 本人完全了解中国医科大学有关保护知识产权的规定，即：研究生在 攻读学位期间论文工作的知识产权单位属中国医科大学。本人保证毕业离 校后，发表论文或使用论文工作成果时署名单位为中国医科大学，且导师 为通讯作者，通讯作者单位亦署名为中国医科大学。学校有权保留并向国 家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅。学 校可以公布学位论文的全部或部分内容( 保密内容除外) ，以采用影印、缩 印或其他手段保存论文。 论文作者签名： 指导教师签名： 日 期： 论文 大鼠血液、玻璃体液、肌肉乙醇浓度关系的研究 刖罱 乙醇俗称酒精，是各种酒类饮料的主要成分，也是重要的化工和医药原料及 实验室重要试剂。在生活中乙醇的用处亦很广泛，因饮酒而造成的暴力死和交通 事故时常发生，交通事故现己成为社会的第一大公害，给人类带来重大的人员伤 亡和财产损失，因此对生物检材中乙醇分析展开了不断的深入研究。 目前，驾驶员酒后驾车是引发交通事故的重要原因之一。道路安全法规定血 液中乙醇浓度( b l o o da l c o h o lc o n c e n t r a t i o n ，b a c ) 作为判断酒后驾车或醉酒驾 车的依据，中华人民共和国国家标准g b1 9 5 2 2 - - - 2 0 0 4 中规定车辆驾驶人员血液中 乙醇浓度大于或者等于0 2 m g m l 、小于0 s m g m l 的驾驶行为为酒后驾车。大于 或者等于0 8 m g m l 的驾驶行为为醉酒驾车。因此为了给交通警察提供酒、后驾车 或醉酒驾车的证据，必须对受检者的血液乙醇浓度进行测定。但当受检者由于严 重机械性创伤、身体肢解等原因造成血液流失，无法取得血液样品时，法医毒物 学家通常采用死后较为稳定、受环境因素干扰较小的体液和组织( 玻璃体液、胆 汁、脑脊液、骨髓、肌肉等) 对乙醇含量进行测定1 1 , 2 1 ，以此来推断b a c ，但目 前还没有被公认为可靠的、适用的推断方法。本实验采用顶空气相色谱法( h e a d s p a c e g a sc h r o m a t o g r a p h y ，h s g c ) i 贝! 定了大鼠灌服乙醇后血液、玻璃体液及肌肉 中乙醇浓度，研究了灌服后不同时间大鼠血液、玻璃体液、肌肉之间乙醇浓度关 系，为推断b a c 提供参考依据。 材料与方法 一、试剂与仪器 试剂：实验用无水乙醇( 沈阳市生威试剂厂) 、正丙醇( 沈阳市生威试剂厂) 均为分析纯品；氯化钠晶体( 分析纯) ；肝素钠粉末：乙醇储备液( 1 0 0 0 m g l o o m l ) ： 正丙醇内标液( 5 0 m g 1 0 0 m l ) 。 仪器：g c 1 4 a 气相色谱仪配有f i d 检测器( 日本岛津) ；e c 2 0 0 0 色谱工作 6 站( 大连依利特) ；恒温加热器( 国产) ：封口钳( 同本) ；l m l 气密注射器；青霉 素瓶。 色谱条件：色谱柱为2 m m x 5 m m 玻璃柱；内填p e g 2 0 m 固定相；柱温6 5 ，进 样口、检测器均为1 5 0 。c ；载气压力3 m g c m ，氢气压力0 5 m g c m ；空气压力1 m g c m 2 。 二、方法 ( 一) 检材采取 s d 雄性大鼠( 2 0 0 a ：2 0g ) 3 6 只，购于中国医科大学动物部，随机分七组， 第一组空白组8 只，第二组至第六组每组5 只，第七组3 只。第二组至第七组均 禁食2 4 小时，经胃管灌入5 0 乙醇液( 6 9 k g ) 3 1 分别于灌服后1 、2 、3 、4 、5 h ( 第七组于灌服后8 、1 0 、1 2 h ) 处死，然后取心脏血液、眼球玻璃体液、后肢深 部肌肉进行乙醇测定。 ( 二) 样品中乙醇浓度的测定方法 1 、标准曲线的绘制 由乙醇储备液配制成6 0 0 m g 1 0 0 m l 、5 0 0 m g 1 0 0 m l 、4 0 0 m g 1 0 0 m l 、 3 0 0 m g 1 0 0 m l 、2 0 0 m g 1 0 0 m l 、1 0 0 m g 1 0 0 m l 、2 0 m g 1 0 0 m l 、1 0 m g 1 0 0 m l 的标 准液，取肝素抗凝空白血液( 玻璃体液) 5 0 u l ，分别加入上述系列标准液5 0 u l ， 混匀添加配制成血液( 玻璃体液) 标准品，从中分别取标准品5 0 u l 和内标液5 0 u l 置于装有氯化钠晶体( 0 5 9 ) 的青霉毒瓶中，密封，6 5 c 水浴3 0 m i n ，取瓶内液上 气体l m l 注入气相色谱仪进行乙醇浓度测定，以浓度作横坐标，乙醇与内标物峰 面积比值作纵坐标，绘制血液( 玻璃体液) 乙醇标准曲线。 取空白肌肉( 0 4 9 0 5 9 ) ，分别加入3 0 0 m g 1 0 0 m l 、2 5 0 m g 1 0 0 m l 、 2 0 0 m g 10 0 m l ，15 0 m g 10 0 m l ，lo o m g 10 0 m l ，5 0 m g 10 0 m l ，10 m g 10 0 m l ， 5 m g 1 0 0 m l 标准液5 0 u l 和内标液5 0 u l 置于装有氯化钠晶体( o 5 9 ) 的青霉毒瓶中， 密封，6 5 c 水浴3 0 m i n ，取瓶内液上气体l m l 注入气相色谱仪进行乙醇浓度测定， 以浓度作横坐标，乙醇与内标物峰面积比值作纵坐标，绘制肌肉乙醇标准曲线。 2 、血液乙醇浓度( b a c ) 测定 7 将检血( 5 0 u l ) 和内标液( 5 0 u l ) 置于装有氯化钠晶体( 0 5 9 ) 的青霉毒瓶 中，密封，6 5 。c 水浴3 0 m i n ，取瓶内液上气体l m l 注入气相色谱仪进行乙醇浓度 测定。 3 、玻璃体液浓度( v a c ) 测定 将待检玻璃体液( 5 0 u l ) 和内标液( 5 0 u l ) 置于氯化钠晶体( o 5 9 ) 的青霉 毒瓶中，密封，6 5 。c 水浴3 0 m i n ，取瓶内液上气体l m l 注入气相色谱仪进行乙醇 浓度测定。 4 、肌肉乙醇浓度( m a c ) 测定 取肌肉检材适量剪碎称取( 0 4 - - 0 5 9 ) 和内标液( 5 0 u l ) ，置于装有氯化钠晶 体( o 5 9 ) 的青霉毒瓶中，密封，6 5 。c 水浴3 0 m i n ，取瓶内液上气体l m l 注入气 相色谱仪进行乙醇浓度测定。 实验结果 一、血液、玻璃体液、肌肉乙醇浓度标准曲线的建立 血液样品标准曲线：y = 0 0 0 9 4 + 0 0 1 5 9 x ，r2 = o 9 9 8 5 ，r = o 9 9 9 3 玻璃体液样品标准曲线：y = 0 1 3 5 7 + 0 0 1 1 7 x ，r 2 = 0 9 9 2 2 ，r = o 9 9 6 1 肌肉样品标准曲线：y = 一0 0 5 1 4 9 + 0 0 2 5 0 9 x ，r 2 = 0 9 9 9 8 7 ，r = 0 9 9 9 9 4 方法线性范围，检出限在上述分析条件下，乙醇含量在3 0 0 m g 1 0 0 m l 5 m g 1 0 0 m l 范围内呈良好线性关系，选用分析条件下以色谱基线噪音3 倍计算出 检出限为l m g 1 0 0 m l 。 ：- 曹 、 键 誊 时鲫( m i n ) 图l ，乙醇和正丙醇的气相色谱图乙醇保留时间为1 1 6 m i n ；正丙醇保留时 间为1 9 4 m i n 测 丑3 9 警 瞳 嚣2 r 6 链 腔 倒 璺1 3 磕 门 o o2 五n 浓度( m g l o o m l ) 图2 ，血液样品标准曲线图y ：0 0 0 9 4 + 0 0 1 5 9 x ，r 2 = o 9 9 8 5 ，r = o 9 9 9 3 9 趔 蛔 铎 匡 髫 链 医 捌 四 锸 门 蠢 2 1 o o8 0 浓度( 蠢l l ) 2 4 03 2 0 图3 ，玻璃体液样品标准曲线图y = o 1 3 5 7 + 0 0 11 7 x ，r 2 = 0 9 9 2 2 ，r = o 9 9 6 1 翔 越 泽 l 叵 髫 盛 窿 糊 豫 矬 门 l 事3 6 2 2 一o 1 o8 0 3 2 0 浓度( m l o o m l ，) 图4 ，肌肉样品标准曲线图y = 0 0 5 1 4 9 + 0 0 2 5 0 9 x ，r 2 = o 9 9 9 8 7 ，r = 0 9 9 9 9 4 二、回收率测定结果 配制浓度为1 5 0 m g l o o m l ，l o o m g l o o m l ，5 0 m g l o o m l 的3 份乙醇血液、 肌肉样品，分别测试( n = 5 ) ，乙醇在血液、肌肉样品中的回收率见表l 、表2 ；配 l o 制浓度为2 0 0 0 m g l o o m l ，1 5 0 m g 1 0 0 m l ，1 0 0 m g , 1 0 0 m l 的3 份乙醇玻璃体液样 品，分别测试( n = 5 ) ，其回收率见表3 ，刚收率符合定量分析的要求，测定方法 可靠。 表1 ，大鼠血液样品的回收率测定结果( n = 5 ) 表2 ，大鼠玻璃体液的回收率测定结果( n = 5 ) 表3 ，大鼠肌肉的回收率测定结果( n - 5 ) 三、稳定性考察结果 取上述血液、肌肉、玻璃体液乙醇各样品2 0 。c 冷藏，经3 次反复冻融实验后， 分别于当天的9 ：0 0 、1 3 ：3 0 、1 7 ：0 0 ( n 一3 ) 进样测得日内误差；取各样品连续 3 天分别于上午9 ：0 0 ( n = 3 ) 进样测得日间误差。结果( 见表4 9 ) 表明浓度没 有明显改变( c v 0 9 5 1 ，p 图6 ，时间( 1 5 h ) 与玻璃体液乙醇平均浓度相关关系，y = 2 2 9 3 0 6 7 3 0 0 9 4 4 x r2 - - 0 9 7 9 4 ，r 一0 9 8 9 6 1 5 19 0 ，、1 r _ 善 1 为 毽毽 璐1 7 0 o 71 93 14 3置5 时阉( h ) 图7 ，时间( 1 5 h ) 与肌肉乙醇平均浓度相关关系，y = 1 8 1 3 2 8 5 2 1 7 7 9 1 x ， r2 = 0 9 8 9 5 ：r = 一0 9 9 4 7 j 耋 蚤 喾篁 型 残 整 心 均苍 铡 5 0 1 0 7 0 7 01d 013 0 16 019 0 玻璃体液己醇浓度( m 1c l l m t l ，) 图8 ，1 5 h 玻璃体液与血液乙醇平均浓度相关关系，) ，= 4 4 5 0 3 1 9 + 1 1 7 9 7 7 x r2 = 0 9 9 4 6 ，r = 0 9 9 7 3 1 6 霪 壶 篇 赳 燃 滏 心 燃 雹 9 0 5 0 1 0 7 0 3 0 6 09 01 2 015 0 胍肉己醇浓度( 狮1 0 0 m l ) 图9 ，l 5 h 肌肉与血液乙醇平均浓度相关关系，) ，= 6 6 7 3 2 3 9 + 1 6 0 5 6 9 x ， r2 = 0 9 5 5 1 ，r = 0 9 7 7 3 j 髫 、 b c 景 巡 装 餮 门 - 区 爨 17 0 1 搴d 1 i1 0 9 0 7 0 7 01t 3 0 1 ：3 016 01 - q o 玻璃体液乙醇浓度( r a g 1 0 0 m l ) 图1 0 ，l 5 h 玻璃体液与肌肉乙醇平均浓度相关关系，y = 1 7 9 5 9 6 + 0 7 0 5 1 x ， r2 = o 9 5 9 2 ，r = 0 9 7 9 4 1 7 表1 2 ，不同采样体积单因素方差分析结果( n = 5 ) 表1 3 ，不同加盐量对乙醇浓度测定的影响( n _ 5 ) 讨论 大鼠的玻璃体液量约为5 0 u l , - 一l o o u l ，对3 0 u l 、4 0 u l 、5 0 u l l 、2 0 0 u l 不同采 样体积进行检测，经s p s s 软件单因素方差分析结果无差异( 见表1 2 ) ，这为痕量 检测提供良好的依据。本实验还对加入0 5 9 、1 o g 盐量进行检测，经分析结果 无差异，取0 5 9 氯化钠晶体适宜( 见表1 3 ) 。 道路安全法规定血液中乙醇浓度作为判断酒后驾车或醉酒驾车的依据，乙醇 含量测定结果的分析和判断，通常着眼于血醇的测定，必须对受检者的血液乙醇 浓度进行测定，但当受检者由于严重机械性创伤、身体肢解等原因造成血液流失， 无法取得血液样品时，璃体液是死后较为稳定、受环境因素干扰较小的体液，玻 璃体液对于法医毒理学而言是很重要的生物检材，这有很多原因。首先，玻璃体 液是不需要进行完整尸检就可以间接得到的相对干净，稀薄的液体。第二，相对 于肠道来说，眼睛的位置使玻璃体液受死后乙醇的再分布影响降到最低。玻璃体 液因受到特殊组织结构的隔离保护，通常不含有乙醇，因而死后玻璃体液中出现 1 8 乙醇，一般认为是摄入乙醇死时体内的恒定分布。 根据扩散定律，乙醇分布到周身，当达到分布平衡时，其各组织和体液中的乙醇 浓度与其水分含量成正比，这一比值被称为理论平衡点1 5 1 。本研究中，大鼠灌服乙醇 3 、4h 后处死所测得的b a c 厂v a c 分别为0 8 5 、o 7 9 ，这一结果与文献6 1 报道的结 果基本一致。这充分表明乙醇进入大鼠体内3 小时后即已达到分布平衡( 即吸收后 期) 。而2h 组的b a c v a c 、b a c m a c 均高于理论值，说明此时乙醇进入大鼠体内 尚未达到分布平衡( 即处于吸收期) 。从大鼠灌服乙醇1 、2 、3 、4 、5 、8 、1 0 、 1 2 h 实验组的b a c v a c 、b a c m a c 看出：b a c v a c 、b a c m a c 的数值随时间呈 逐渐下降的趋势，这是因为v a c 达到平衡后，其消除速率l g b a c 消除速率慢。 血液、玻璃体液、肌肉三者之间的乙醇平均浓度进行线性相关及回归统计分 析结果呈正相关，其相关系具有高度显著性( p 0 0 0 5 ) 。本实验着重对乙醇代谢 前5 个时间点来分析，结果较为理想，当受检者由于严重机械性创伤、身体肢解等 原因造成血液流失，无法取得血液样品时，可以间接的了解血中乙醇的浓度，据 此，由大鼠玻璃体液、肌肉推算血液乙醇浓度的方法是可行的。 从总的数据来看，个体之间还存在一定的差异，这与众多因素有关，如个体 对酒精的耐受、食物、饮酒速度、种属等等，由于本实验动物数量有限，条件所 限，且动物与人之间尚存在差异，若建立更精确更可靠的数量关系，还需充实样 本量并综合大量人体检测数据来实现。本研究对以后实践尚存在一定理论指导意 义。 结论 通过实验建立了大鼠血液、玻璃体液、肌肉间浓度推导关系，在灌服乙醇l 5h 时段内：b a c 一4 4 9 0 4 5 + 0 5 9 4 8 v a c ；b a c = 6 6 7 3 2 3 9 + 1 6 0 5 6 9 m a c ，这为 b a c 的推断提供了参考依据。 1 9 本科研创新性的自我评价 目前关于血液乙醇代谢动力学报道较为常见，而大鼠血液与玻璃体液、肌肉 三者之间乙醇浓度的相关关系的研究国内外未见报道，本实验研究灌胃不同时刻 处死后各检材之间乙醇浓度推导关系，结果表明：由大鼠玻璃体液、肌肉推算血 液乙醇浓度的方法是可行的。 2 0 参考文献 lb a c kr c t h ec o m p a r i s i o no fa l c o h o lc o n c e n t r a t i o ni np o s t m o r t e n f l u i d sa n dt i s s u e s j f o r e n s i cs c i 19 8 0 ；2 5 ：3 2 7 3 31 2 j o s e p hb o n v e n t r e e v a l u a t i o no fe t h a n o la n a l y s i so nb r a i na n d l i v e rb yh e a d s p a c eg a s c h r o m a t o g r a p h y f o r e n s i cs c ii n t 19 8 2 ；l9 ：7 5 8 3 3 史海清，伏建峰，路西春等酒精灌胃大鼠血浆中乙醇浓度变化【j 】实用预防医学，2 0 0 6 ； 1 3 ( 5 ) ：1 3 2 2 - 1 3 2 3 4 石乐鸣，俞念恩，田春林，张小红等顼空气相色谱法测定血液中乙醇含量【j 】滨州医学 院学报，1 9 9 6 ；1 9 ( 1 ) ：7 8 5 h a r g e rr n t h es p e e dw i t hw h i c hv a r i o u sp a r t so fb o d yr e a c he q u i l i b r i u mi nt h es t o r a g eo f e t h y la l c o h o l j 】jb i o lc h e m 19 3 7 ；12 0 ：6 8 9 7 0 4 6 蒋和平生物样品中乙醇浓度测定的探讨【j 】j l l ：l l ：医学院学报，2 0 0 5 ；2 0 ( 3 ) ：3 2 2 3 2 4 7 张振宇，单晓梅，梅利华，陈俊波等驾驶员酒后呼出气和血中乙醇浓度，时间反应关系 的研究【j 】劳动医学，1 9 9 9 ；1 6 ( 4 ) ：2 3 2 2 3 3 8 邓新国，张清炯，胡世兴，高杨等葛根素经全身用药在兔眼房水和玻璃体中的药代动力 学【j 】眼科学报，2 0 0 8 ；2 2 ( 4 ) ：2 7 5 - 2 7 9 9 赖江华，胡炳蔚等酒精在人体内的药代动力学研究【j 】中国法医学杂志，1 9 9 6 ；l l ( 1 ) ： 1 - 5 1 0 陈水平，张思强等乙醇的气相色谱法测定及其药代动力学研究【j 】福建医药杂志，2 0 0 3 ； 2 5 ( 6 ) ：1 2 8 - 1 2 6 1 1 银春，涂家生，郑宇，徐盛杰等眼部药物动力学研究中的取样技术【j 】药学进展，2 0 0 6 ； 3 0 ( 2 ) ：2 1 6 - 2 2 0 2 1 综述 体内乙醇含量相关问题的研究 摘要近年来涉及酒后行为的案件增多，对乙醇的研究不断的深入。本文从乙 醇的毒理作用、中毒表现、分布代谢规律、乙醇引发肇事的原因、检材收集及检 测方法等方面系统分析，找出其中蕴含的法医学信息，为继续深入研究提供理论 依据。 关键词乙醇；乙醇代谢动力学；乙醇测定 乙醇俗称酒精，是各种酒类饮料的主要成分，也是重要的化工和医药原料及 实验室重要试剂，医疗上用做消毒剂。在生活中乙醇的用处亦很广泛，因饮酒而 造成的暴力死和交通事故时常发生。交通事故现己成为社会的第一大公害，给人 类带来重大的人员伤亡和财产损失。因此对乙醇展开了不断的深入研究，下面将 有关研究进展综述如下： 一、乙醇的毒理作用中毒表现及分布代谢规律 乙醇的主要毒理作用是抑制中枢神经系统。首先选择抑制网状结构上行激动 系统，干扰大脑皮层的高级整合功能，使较低级功能失去控制，而呈现一时性兴 奋状态，在短时间内自我控制能力减弱，表现出精神亢奋、易激惹、语无伦次、 身体稳定性、协调性、反应性、知觉功能和运动能力等下降。当乙醇作用进一步 加强时，皮下中枢、脊髓和小脑功能受到抑制，饮酒者出现步态蹒跚共济失调等 运动障碍，分辨力、记忆力、洞察力、注意力减退甚至消失，视觉、语言、判断 力失常。最后抑制延髓血管运动中枢和呼吸中枢出现虚脱、呼吸浅表等症状。呼 吸中枢麻痹是重度乙醇中毒者死亡的主要原因【。 乙醇中毒分为急性和慢性两种，法医学上有意义的是急性中毒。急性中毒一 般指一次大量饮酒引起的一种暂时性精神障碍。据案例报道【2 l 因“赤脚医生”输液 治疗，输液次日发现患者口唇发紫没有呼吸死亡，怀疑输错药导致患者死亡而报 案。毒物检验：死者心血中检出乙醇成份，其质量浓度为5 1 4 l ；案发现场输液 瓶内的残余药液中检出乙醇成份。酒精中毒致死量因个体差异雨悬殊较大，一般 酒精中毒量为7 5 - - 8 0g ，致死量为2 5 0 - - - - 5 0 0g ，致死血质量浓度为4 5g l 。如 在短时问内( 1 - - - , 2 小时) 内饮入白酒5 0 0 一1 0 0 0 m l ，可因急性中毒造成呼吸抑制 死亡。 酒精对中枢神经的抑制作用由浅人深，一般分为三期，即兴奋期、共济失调 期和抑制期【1 1 。兴奋期( 3 0 l o o m g d l ) ：饮酒者有舒适感，情绪好，自觉精神与 体力倍增。兴奋现象为高谈狂笑，手舞足蹈，面红热，眼发亮，脉搏加速。此时 意志力减弱，自制力部分损失，感情冲动或无理争论，容易犯法。属于最高级大 脑功能的判断力与辨别力减弱，所以有夸大狂和盲目冒险的行为表现。肌肉运动 方面，也因失去高级控制而呈冲动性及爆发性，力气可比平时大，但不能持久， 反射动作的灵活性也减低，易发生交通事故。所以在交通管理方面很多地方早已 重视小量饮酒与汽车、飞机失事的关系。因为这时候的醉态可不形于外，而判断 力的减弱与反射动作的不够灵活，已足够使司机发生意外的危险【3 1 。共济失调期 ( 1 0 0 - 2 0 0 m g d l ) ：言语动作均失调，表现为舌重1 3 吃，语无伦次，步态不稳。此 时可发生喷出性呕吐。酒味明显，随即昏睡，醒后全身乏力。抑制期( 3 0 0 5 0 0 m g d l ) ：迅速进入深睡，摇撼不醒，失去知觉。表现出颜面苍白，皮肤湿冷， 紫绀，呼吸表浅而有鼾声，脉搏快速，血压下降，体温降至正常以下，昏迷，可 持续l o h 左右，有的可因呕吐物吸人窒息并发肺炎、呼吸衰竭而死亡。 一般认为口服乙醇通过滤过和简单扩散方式主要由十二指肠和空肠吸收，- - 5 m i n 开始入血，经1 5 h 血浓度达到高峰，2 5 h 全部吸收。在空腹状态下，乙醇吸 收最快，约o 5 l h 即可达到血浓高峰，而脂类及富含蛋白质的食物可使吸收变 慢。胃炎、溃疡病及胃切除术后的患者吸收加快。吸收的乙醇在体内通过乙醇脱 氢酶和过氧化氢酶氧化为乙醛，进一步氧化为二氧化碳和水，乙醇主要在肝内代 谢，摄入体内的乙醇9 0 在肝被氧化，还有少量乙醇未经过氧化出现在尿液、呼 吸、汗、唾液及乳汁中，这并非排泄而是一种简单的扩散1 1 1 。乙醇具有极高的脂 溶性和水溶性，乙醇通过血流广泛分布于全身的组织和体液中。乙醇在组织重分 布与其含水量相关，当体内乙醇恒定分布时，在富水的体液，如血清、血浆、玻 璃体液，其乙醇的含量均高于血液中的乙醇含量。当个体处于乙醇吸收期时，血 中的乙醇含量高于玻璃体液，而后者乙醇含量高于尿液；而在乙醇排泄期，尿中 则高于血和其他组织。因此通过多种检材中乙醇含量的测定和比较，可对酒后时 间做推测和分析f 4j 。乙醇的吸收速率在个体间存在较大的差异。 研究表明乙醇的体内代谢动力学符合非线性消除伴一级吸收的一室开放模 型。当血中乙醇质量浓度( b a c ) 超过0 1 m g m l 时酶反应饱和，乙醇消除不随 浓度增加而增加，呈零级代谢动力学过程川。卓先义等吲对人体内血中乙醇消除 速度与质量浓度推算关系进行大量研究，认为交通肇事者体内乙醇的消除是呈线 性的，提出了肇事时与抽血时的b a c 可按o 1 m g ( m 1 h ) 进行回推，建立交警 执法的b a c 推算公式：c o = c + o 1 t c o ：肇事时的b a c ( m g m l ) ；c ：抽血时的b a c ； t ：肇事至抽血之间相隔的时间 根据乙醇在人体内分布代谢规律，可以得到摄入 乙醇总量、饮酒时间与血醇质量浓度之间的规律。对此，国内已有学者进行了研 究，并取得较为成熟的成果。最初王雪梅等 6 1 用猴作实验对象建立了乙醇在中毒 者体内动态规律的数学模型，由此模型可求得酒后任意时刻中毒者体内的乙醇总 量。赖江华等 7 1 通过1 6 名受试者饮酒实验建立了乙醇在人体内的动态变化的数学 模型 i n c = i n c o + 0 7 4 3 3 i n f1 5 8 8 0 c o + 6 6 5 51 ) ( 1 5 8 8 0 c + 6 5 51 ) 卜0 4 0 7 6 t c o ：为所饮酒精量全部被吸收的血醇质量浓度，c ：为抽血时的血醇质量浓 度，t ：为酒后时间 据此数学模型，如果知道饮酒量和饮酒时间则无需抽血测定，也可推算出酒 后任意时刻的血醇质量浓度；如果知其饮酒量及酒后某一时刻的血醇质量浓度， 也可确定饮酒时间。此研究成果在我国司法实践中具有一定的实用价值。 二、乙醇引发肇事原因分析 乙醇滥用常造成许多意外事故发生，如车祸、打架斗殴工伤事故及其他暴力 犯罪等，极少数由于医疗上误投所致。也有在酒饮料中掺杂其他药物( 如催眠药) 自杀他杀案例时常发生。乙醇同某些药物联合使用，会使药物药效增强或毒性增 强，表现为协同作用i s 。这些药物包括巴比妥类、吩噻嗪类安h 民药，导眠能、甲 丙氨酯、甲喹酮、阿片类毒品及其它中枢呼吸抑制剂和麻醉剂。乙醇还可以加剧 机体某些疾病( 如肝炎、心血管疾病等) 的病情和损伤( 如脑损伤) 程度。 酒精作为引起交通事故的第一大因素，引起了全社会的重视。陈伟等1 9