体内药物分析分析方法在滥用药物检测中的应用.ppt

第六章分析方法在滥用药物检测中的应用,制作人：组员：,第六章分析方法在滥用药物检测中的应用,滥用药物及其危害,分析方法在滥用药物检测中的应用,滥用药物及其危害,药物滥用（drugabuse）指的是与医疗目的无关的反复大量使用一些具有依赖性或称依赖性潜力的药物，用药者采用自身给药形式，导致精神依赖性和身体依赖性，造成精神混乱和一些异常行为习惯称药物滥用为“吸毒”。,第一节滥用药物及其危害,其他类药物滥用,苯并二氮杂类药物,苯丙胺类中枢兴奋剂,体育比赛中兴奋剂的滥用,临床上滥用,鸦片等毒品,临床上滥用药物,抗生素的滥用,激素的滥用,危害,掩盖病情使感染加重盲目给患有严重高血压病溃疡病糖尿病及霉菌感染患者应用激素会使病情加重,中药及补药的滥用,中药中成药滥用补药滥用中药（巴豆、苍耳子、六神丸、雷公藤、甜瓜蒂、木通、苦楝子等）偶致中毒。长期服用带朱砂的中成药（朱砂安神丸、活络丹、天王补心丹）而致汞中毒不在辩证施治的基础上盲目用药都会有一定的毒副作用,体育比赛中兴奋剂的滥用,上世纪60s以前滥用的“传统兴奋剂”有刺激剂麻醉剂，60s以后合成甾体激素为主，主要目的是增强肌肉合成代谢，80s以后内源性激素成为主要的滥用对象，其中比较典型的是促红细胞生长素（EPO）,体育比赛中兴奋剂的滥用,2受体激动剂,鸦片类毒品的滥用,鸦片类毒品,种类：海洛因吗啡6-单乙酰吗啡3-单乙酰吗啡可待因等,在体内的代谢与排泄：水解氧化结合态形式进行排泄,苯丙胺类中枢兴奋剂的滥用,1996年11月25日，联合国禁毒署在上海召开的国际兴奋剂专家会议上一致认为苯丙胺类药物将逐步取代鸦片海洛因大麻等将成为21C全世界范围内最为广泛的毒品主要品种有：冰毒3,4-亚甲基二氧甲基苯丙胺和3,4-亚甲基二氧基苯丙胺等,苯并二氮杂卓类药物的滥用,镇静催眠类药物，属于国家控制的第二类精神药物常被用于麻醉抢劫和致人昏睡后进行犯罪活动本类药物有：地西泮硝西泮氯硝西泮氟硝西泮去甲地西泮三唑仑等其他类氯胺酮麻醉药滥用致死,滥用药物及其危害,分析方法在滥用药物检测中的应用,尿液,毛发,血液,唾液,取样易不足之处：易造假稀释引起假阴性,取样易能将滥用药物与临床药物相区别,血样可以准确定量取样困难顺应性差,少用,样品预处理提取及分析方法,酸水解酶水解,液液萃取法、固相萃取法、固相微萃取法、超临界流体萃取法（应用多）等,薄层色谱法、气相色谱法、高效液相色谱法、气质联用、液质联用、高校毛细管电泳、放射免疫测定法、酶免疫测定法等,分析方法,GC/MS,HPLC,LC/MS,应用最多的方法是GC/MS、HPLC、GC,免疫,应用于鸦片类药物的分析，难挥发性的要先水解或衍生化处理,不需水解和衍生化，对药物可直接分析，用于生物样品中鸦片类药物检测,有极性的、难挥发性的，热不稳定性的药物，不需水解和衍生化处理,不需要前处理，简单、快速、方便,气相色谱分析法示例,尿中吗啡的氮磷检测,吗啡不仅是毒品，还是海洛因和可待因在体内的主要代谢物，摄入海洛因和可待因后尿中较难检出原形而只能检出吗啡。尿中吗啡的分析方法多为GC和GC/MS,提取法主要采用液液萃取法和固相萃取法。吗啡分子中含有酚羟基，一般需衍生化后分析。,方法与结果,（1）色谱条件,色谱柱,HP熔融石英毛细管柱,柱温：120（保持1min），以20/min升温至280（保持10min）进样口：260；不分流进样检测器温度：300,载气（高纯氮）：2.0ml/min；尾吹气（高纯氮）：10ml/min检测器：NPD,（2）提取方法,取尿样1ml，加内标烯丙吗啡，加浓盐酸0.1ml，置沸水浴中水解30min，放冷，用1mol/ml氢氧化钠溶液调pH值近于9，加pH8.9缓冲溶液0.5ml，加三氯甲烷异丙醇（9:1，V/V）5ml，涡旋2min，离心（3000r/min）3min，分取水相，调pH值近9，加pH8.9缓冲溶液0.5min，加三氯甲烷异丙醇(9:1，V/V）5min，涡旋2min，离心(3000r/min）3min，分取有机相,（2）提取方法,酸水解液液萃取法,酶水解液液萃取,（2）提取方法,取尿样1ml，加内标烯丙吗啡，加葡萄糖醛酸溶液0.1ml和pH4.8缓冲液50l，置55水浴中水解2h，放冷，用1mol/ml氢氧化钠溶液调pH值近于9，加入pH8.9缓冲溶液0.5ml，以下操作按“酸水解液液萃取”项下进行,酸水解固相萃取,（2）提取方法,取尿样1ml，酸水解液液萃取法法，加内标、水解、调pH值，加pH8.9缓冲液0.5ml后加水稀释至5ml。取0.3mlGDX403树脂，加0.3ml甲醇活化，倒入处理的尿样中，振摇5min，过滤收集树脂于小层析柱中，用pH8.9的水溶液淋洗，用三氯甲烷洗脱，收集洗脱液5ml。,酶水解固相萃取,（2）提取方法,取尿样1ml，同酶水解液液萃取法，加内标、水解、调pH值，加pH8.9缓冲液0.5ml后加水稀释至5ml，同酸水解固相萃取法，萃取,（3）衍生化,将提取液置具1ml刻度尾管的20ml鸡心瓶中，于氮气流下50吹干，加乙酸乙酯50l和BSA2l，尾管插入60油浴中反应30min，氮气流下50吹干，加甲苯100l溶解反应物，吸取1l进样分析,（4）标准曲线和检测限,另取空白尿1ml，不加吗啡，其余同左处理，以此样品和添加0.02g吗啡样品的色谱图按照S/N=3计算检测限为2.8ng/ml,取空白尿1ml8份，分别加入吗啡0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0g，并各加烯丙吗啡内标1.0g，进行水解，提取和衍生化并进样分析，以峰面积(Y)对吗啡浓度(C)进行线性回归，得方程为：Y=0.758X+0.040，r=0.999吗啡浓度在202000ng/ml范围内呈良好线性关系,萃取率,回收率,专属性,取空白尿1ml，加入吗啡1g，进行水解，提取液中加内标烯丙吗啡1g，挥干，衍生化，进行分析。计算吗啡与内标色谱峰面积比值。另取吗啡和内标各1g混合，衍生化处理并进行分析，计算萃取率为61%,取空白尿1ml，加入吗啡0.5g和烯丙吗啡1g，进行水解、萃取、衍生化、进样分析，计算平均回收率为98.1%，RSD为7%,从空白尿及标准添加尿经萃取分析后所得色谱图，可见杂质色谱峰对吗啡和内标色谱峰不干扰。结构相似的可待因、狄奥宁均不干扰测定,(8)实际吸毒者尿液分析,一名疑为海洛因致死者的血、尿进行吗啡检验。取尿样分离后按第四法检验，检出吗啡浓度为3420ng/ml尿中吗啡以游离和葡萄糖醛酸缀合物两种形成存在。经水解后所得的吗啡用溶剂提取，用四种提取方法提取分析均得满意的线性关系。检测限、准确度和精密度，均适合于实际案件中尿样的检验。,方法与结果,高效毛细管电泳法示例,毒品滥用人员尿液中吗啡的含量,检测对象：随机选择兰州市戒毒所7名初期戒毒病人，平均年龄24.5岁。电泳条件：缓冲液：100mmol/L磷酸盐缓冲液（PH3.2）,含15mmol/L-环糊精。电压：20kv。温度：25。检测：紫外，205nm压力进样：0.5psi，5s。每次运行前毛细管用0.1mol/LNaOH溶液冲洗5min,水洗5min,运行缓冲液冲洗5min。从电泳分离图可见吸毒人员中吗啡出峰时间为7.2min,与吗啡对照品出峰时间一致。,方法与结果,高效毛细管电泳法示例,毒品滥用人员尿液中吗啡的含量,样品储备液的制备：取尿液样本10ml于25ml试管中，加入1ml浓盐酸，于沸水浴中水解30min。冷却后以40%NaOH溶液调节PH值至9左右，加入5ml碳酸盐缓冲液（PH9），混合均匀。用乙酸乙酯25ml分三次萃取，合并萃取液，于45水浴以氮气吹干。残留物用2ml水溶解。经0.45m微孔滤膜滤过后，作为样品溶液,方法与结果,高效毛细管电泳法示例,毒品滥用人员尿液中吗啡的含量,标准曲线：精密吸取对照品贮备溶液（200g/ml）0.5、1.0、2.0、4.0、6.08.0、10.0ml分别置10ml容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，每一标准液进样2次。测定峰面积，取平均值。以对照品峰面积为纵坐标Y,相应对照品的浓度（g/ml）X,计算得回归方程为：Y=43.0712X89+89.8364,r=0.9982。结果表明吗啡在10200g/ml的浓度范围内线性关系良好。最低检测限按（S/N=3