（分析化学专业论文）碱性染料间能量转移荧光分析的研究.pdf

中文摘要 中文摘要 本文共分五章。第一章为文献综述，对荧光共振能量转移技术的原理、分析 技术及其应用进行了较全面的综述。引用文献5 6 篇。 第二章对碱性荧光染料吖啶橙( a 0 ) 、吖啶黄( a y ) 、罗丹明6 g ( r 6 g ) 、罗丹明 1 3 ( v , b ) 、乙基罗丹明b ( e r b ) 、丁基罗丹明b ( b r b ) 、碱性藏花红( s t ) 组成的各 种染料混合体系的能量转移进行了研究。研究了各种表面活性剂对碱性阳离子染 料间能量转移的影响，以及转移效率的影响因素。 第三章介绍了荧光能量转移在测定无机离子中的具体应用。第一节吖啶橙一 罗丹明6 g 能量转移荧光猝灭法测定痕量磷；第二节p a r 一吖啶黄能量转移荧光 猝灭注测定痕量铁( i i ) 的研究。 第四章罗丹明b 7 一碘一8 一羟基喹啉一5 一磺胶束体系荧光熄灭法测定钒。 第血章苯基荧光酮荧光分光光度法测定粉煤狄中的痕量锗。 关键词能量转移，荧光分析，染料，表面活性剂 a b s t r a c t a b s t r a c t t h i sp a p e rc o n s i s t so ff i v ec h a p t e r s i nt h ef i r s tp a p e r , a p p l i c a t i o no ff l u o r e s c e n c e a n a l y s i sb a s e d o nr e s o n a n c ee n e r g yt r a n s f e r ( f r e t ) i sr e v i e w e dw i t h5 6r e f e r e n c e s t h e r e v i e wi n c l u d e sf 6 r s t e rt h e o r yo ff l u o r e s c e n c er e s o n a r i c e e n e r g yt r a n s f e r , a n a l y s i s t e c h n i q u e sa n da p p l i c a t i o n i nt h es e c o n dc h a p t e rt h ef l u o r e s c e n c ee n e r g yt r a n s f e rb e t w e e ns o m eb a s i cd y e s ， s u c ha sa c r i d i n eo r a n g e ( a o ) ，a c r i d i n ey e l l o w ( a y ) ，r h o d a m i n e6 0 ( r h 6 0 ) ，r h o d a m i n e b ( r h l 3 ) ，e t h y le s t e ro f r h o d a m i n e b ( e r h b ) ，b u t h y r h o d a m i n eb ( b r h b ) a n d s a f r a n i n e t ( s t ) ，w a si n v e s t i g a t e d t h ee f f e c t o fv a r i o u ss u r f a c t a n t so i lf l u o r e s c e n c e e n e r g y t r a n s f e ro fb a s i c d y e s w a ss t u d i e d ，t o o t h ec o n d i t i o n s e f f e c t i n ge n e r g y t r a n s f e r e f f i c i e n c yw e r e d i s c u s s e d ， p r a c t i c a l a p p l i c a t i o n o ff l u o r e s c e n c e e n e r g y t r a n s f e rt ot h ed e t e r m i n a t i o no f i n o r g a n i ci o n sw a s i n t r o d u c e di nt h et h i r dc h a p t e r i nt h ef i r s ts e c t i o n ，t h ed e t e r m i n a t i o n o ft r a c e p h o s p h o r u sb yu s i n ge n e r g yt r a n s f e r f l u o r e s c e n c eq u e n c h i n gf r o ma c r i d i n e o r a n g et or h o d a m i n e 6 gw a ss t u d i e d i nt h es e c o n ds e c t i o n ，s t u d yo nt h ee n e r g yt r a n s f e r f l o r e s c e n c eq u e n c h i n ga m o n gc o m b i n a t i o no fa c r i d i n ey e l l o w - p a rd e t e r m i n a t i o no f t r a c ei r o l l i nt h ef o u r t h c h a p t e r ，d e t e r m i n a t i o n o ft r a c e v a n a d i u m ( v ) b yaf l u o r e s c e n c e q u e n c h i n g m e t h o dw i t h r h o d a m i n e b 一7 一i o d o 一8 h y d r o x y q u i n o l i n e 。5 一s u l f o n i c a c i d s u r f a c t a n ts y s t e mw a ss t u d i e d i nt h ef i f t hc h a p t e r ，s p e c t r o f l u o r o m e t r i cd e t e r m i n a t i o no ft r a c eg e r m a n i u mw i t h p h e n y l f l u o r o n ei nf l y a s hw a si n v e s t i g a t e d k e y w o r d s ：e n e r g y t r a n s f e r ：f 】u o r e s c e n c ea n a l y s i s ；d y e s ；s u r f a c t a n t ； 第一章综述 = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = 第一章综述 共振能量转移荧光分析 摘要对荧光共振能量转移技术的原理、分析技术及其应用进行了较全面的综 述。引用文献5 6 篇。 关键词荧光分析，能量转移，综述 在分子发光光谱研究中，常规的荧光分析法只利用了荧光激发和发射这一信 息；现代荧光分析则利用现代科学的最新成就，深入发掘了分子发光光谱的各种 特征信息，并利用这些信息和参数，建立起三维荧光、同步荧光、荧光偏振、时 帕j 分辨荧光、相分辨荧光、荧光探针、荧光免疫、荧光传感器和荧光能量转移等 新技术和方法。在灵敏度和选择性方面都有很大的突破，成为现代分析化学重要 发展方向之一。 荧光共振能量转移( f r e t ) 分析法由于其仪器简单、灵敏度高、所需样品量 少、分析速度快等优点，与色谱分离手段相结合，它己成为一种有效的痕量及超 痕量分析技术。所谓f r e t 是指电子激发能在适当的能量给予体( d ) 和能量接受 体( a ) 对之间的传递，传递距离最大可达7 o 1 0 0n m 。1 9 4 8 年，f 6 s t e r 。3 对 于这种实验现象提出了偶极一偶极相互作用发生能量转移理论。1 9 6 7 年s t r y e r h a u g l a n d 睢。提出能量转移可以作为光学尺，用来测量1 0 - 6 o n m 之问的距离。f r e t 因其对距离的敏感性，广泛地被用于生物大分子结构、性质、反应机理以及定量 分析等方面的研究。因此，能量转移荧光分析非常适合于对环境、生物医学科学 和临床化学等方面复杂、低含量组分的分析，也是基因工程中的一种新手段。 本文简述了能量转移的理论，实验技术，应用等几个方面，最后展望能量转 移技术在今后的发展前景。 l f 6 s t e r 能量转移理论 荧光共振能量转移是能量给体分子( d o n o r ) 和受体分子( a c c e p t o r ) 偶极一 偶极相互作用的结果。给予体分子被激发后，当接受体分子与给予体分子相距一 l 河北大学理学硕士学位论文 定距离( 一般为2 5 n m ) ，且给予体和接受体的基态及第一电子激发态的振动能 级间的能量差相互适应时，或者说d 的发射光谱与a 的吸收光谱能有效重 叠，处于激发态的给予体将把一部分或全部能量转移给接受体，使接受体被激发， 在整个能量转换过程中，不涉及光于的发射和重新吸收。如果接受体的量子产率 为零，则发生能量转移荧光熄灭；如果接受体也是一种荧光发射体，则呈现出接 受体的荧光，并造成次级荧光光谱的红移。能量转移效率由下式决定e 2 4 3 ： 2 了杀 式中，r = 给体d 与受体a 之间的距离；r 0 - e 为5 0 时d a 间的距离。r l 与光谱重叠因子、d 与a 之间介质的折射指数、偶极一偶极相互的 定向因子及d 的荧光量子产率等有关。所以，能量转移效率既与染料本身的性质 有关，又与染料间的距离有关。当染料混合体系确定后，为定值，染料间的距 离越小转移效率越高。根据这一理论，通过实验测得e ，就可求出r ，获得关于 分子结构的信息”卅。 2 实验技术 常规荧光分析中，荧光体的选择应符合下列几个条件口。：第一，要有较高的 量子产率：第二，荧光的激发和发射必须同所用的光源和检测器相适应：第三， 在所要求的浓度范围内，对待测物质要有足够的灵敏度；第四，在多组分样品中， 对待测物质要有较好的选择性。以上条件限制了荧光分析法中试剂的选择，并把 许多灵敏度和选择性都很好的显色剂排除在外。如果利用能量转移原理，选择合 适的d a 对，就可以提高反应的灵敏度和选择性。 d a 对的选择及标记方法：d a 对之间发生能量转移的条件是很苛刻的，主 要包括：d 的发射光谱与a 的吸收光谱必须重叠，这是发生能量转移的必要条件； d 与a 的荧光生色团必须以适当的方式排列；以及d 、a 之间必须足够接近，这样 发生能量转移的几率才会高。此外，对于合适的d 、a 分子在量子产率、消光系 数、水溶性、抗干扰能力等方面还有众多的要求。要找到一个台适的d a 对是很 不容易的。 表面活性剂溶于水中形成胶束，溶液的微环境发生很大变化，而使胶束溶液 具有增溶、聚集、区域化、有序化和定位反应物的许多独特的性质阳j 。在水溶液 第一章综述 中，染料间的能量转移许多都需要表面活性剂的存在。在水溶液中，染料间的能量 转移见表1 其它人对染料体系间的转移也由研究i s 4 - 。 表1 水溶液中染料间能量转移的研究 t a b l ei s t u d y o i le n e r g y 咖s f e rb e t w e e n d y e si nw a t e rs o l u t i o n 表2 一些常片 荧光标记分子的性质 t a b l e 2c h a r a c t e r so f s o m ef l u o r e s c e n ti a b e li f tc o m m o nu s e f i t c t r i t c d n s c l a n c b p m i 4 508 5 1 4 1 6 l o 3 0 9 0 5 o 8 4 9 2 5 1 8 3 4 0 3 8 5 5 1 8 4 8 0 5 2 0 4 7 l 3 6 0 7 2 0 0 0 4 8 0 0 0 3 4 0 0 2 8 0 0 0 荧光胺 70 13 9 44 7 56 3 0 0 f i u o r e s c a m i n e 藻胆蛋白质一 o 5 , - - 0 9 85 5 0 - - 6 2 05 8 0 - 6 6 0 7 0 0 0 0 0 1 1 ：1 2 11 1 1 旦：2 1 曼! 呈兰 f i t c ：异硫氰基荧光素( f l u o r e s c e i n i s o t h i o e y a n a t e ) ；d n c c i ：丹酰氯( d n a s y l c h o r i d e ) ；t r l b c ：四甲基罗丹明( t e t r a m e t h y l r b o d a m i n e i s o t h i o c y a n a t e ) ；a n s - 1 - 苯胺基一8 一萘磺 酸( 1 a m o l i n o 8 n a p h t h a i e n e s u i p h o n i ca c i d ) ；b p m i ：n - ( p 一2 - 苯并咪唑基一苯基) 马来酰亚胺( n 一( p 2 - b e n z o x a z o l y i p h e n y i ) m a l e l m i d e ) 3 河北大学理学硕士学位论文 = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = 在生物大分子的能量转移中，在选择d 、a 对时，首先要确定生物大分子本身 内有没有内原性的荧光基团可以作为d 或a ，如色氨酸残基( t r p ) 1 51 6 、具有荧 光的碱基“、血红素1 、还有核苷酸的荧光类似物m 一1 等，这样可大大简化繁琐 的标已步骤。在实际应用中，使用最普遍的标记方法是将荧光标记物共价键合到 待测大分子上去。生物大分子中大多含有的一s h 、- n h 。基就是最常用的结合点。例 如，与s h 基反应进行标记的有碘乙酰胺类荧光衍生物、马来酰亚胺类荧光衍生 物、氮丙锭、汞的化合物等；与一n h ：基反应的标记物有磺酰氯、异硫氰基化合物 等。表2 为一些常用荧光标记分子的性质。 3 应用 3 1 荧光能量转移法测定无机离子 聚乙烯醇是一种可溶于水的高分子化合物，先通过氰脲酰氯将荧光胺( 给予 体) 和铬黑t ( 接受体) 分别固定在聚乙烯醇的两个羟基上，将它作为试剂。在 氨缓冲溶液中( p h = 9 6 ) ，由于铬黑t 的吸收光谱与荧光胺的荧光光谱重叠都很小， 不发生荧光能量转移，试剂溶液呈现出荧光；当加入镁离子后，镁同铬黑t 形成 络合物，其吸收光谱向紫移，并与荧光胺发射光谱重叠，发生荧光能量转移，导 致荧光熄灭，荧光熄灭程度与镁离子浓度成比例。用此法测定镁，比相应的铬黑 t 光度法灵敏度提高i o 倍以上i ”1 。 一在阴离子表面活性剂十二烷基硫酸钠存在下，吖啶黄有效的将其能量转移给 f e ( i i ) 的络合物，导致吖啶黄荧光猝灭，其猝灭程度与f e ( i i ) 离子的浓度成比例。 比相应的p a r 光度法灵敏度提高了5 0 倍以上口”。 在阴离子表面活性剂十二烷基苯磺酸钠( d b s ) 存在下，吖啶橙有效的将其能 量转移给罗丹明6 g ，使罗丹明6 g 荧光增强，用于吖啶橙一罗丹明6 g 能量转移荧光 熄灭法测定磷，比普通罗丹明6 g 荧光熄灭法测定磷的检出限降低了4 4 倍耻“。 3 2 酶的活性的测定 l a t t 等i ”设计了一种底物，在该底物中丹酰单元作为能量受体，它在甚至相 隔三个甘氨酰基的情况下也能猝灭色氨酸的荧光，当色氨酸一甘氨酰基之间的键断 裂时，又能恢复色氨酸的荧光。基于这种能量转移，他i f i n 定了羧肽酶的活性。 第一章综述 如果将发荧光的供体和生色团受体分别键合到反应过程中断裂基团的两侧， 那么当水解进行时，监测受体荧光的下降或供体荧光的增强，可用于分析水解酶。 o 羧基荧光素与卵磷脂脂质体( l e c i t h i nl i p o s o m e ) 混合时，荧光被猝灭，酶破 坏了脂质体并释放出荧光素而恢复荧光， 淀粉酶是由多个葡萄糖单元通过1 ， 从而提供了测定磷脂酶活性的方法1 2 9 i 。 4 位置联结成的一种聚合物，每个葡萄 糖都含有3 个羟基，将4 ，6 - 二氯三吖嗪氨基荧光素( d t a f ) 作为给予体，普 施安红m x 一8 b 作为接受体，同时标记在淀粉上。d t a f 的最大激发波长是4 9 6 n m ， 最大发射波长是5 3 6 n m ，并具有很高的量子产率。固定化普施安红m x 8 b 的吸 收光谱存在两个吸收峰，波长分别为5 1 8 r i m 和5 4 5 n m ，且d t a f 的荧光发射光谱 与普施安红m x 8 b 的吸收光谱重叠度很大，从而可以通过荧光能量转移达到最 大的荧光熄灭，是固定有这两种化合物的淀粉试剂不呈现荧光。在淀粉试剂中加 入淀粉酶时，淀粉酶将催化淀粉发生水解，生成葡萄糖麦芽糖和有3 4 个葡萄糖 单元的葡聚糖。使接受体和给予体分开存在溶液中，距离增大，能量转移消失， 重新呈现出d t a f 的荧光，据此可以确定血清及其它样品中淀粉酶的活性1 3 “。 3 3 能量转移免疫分析 这是能量转移荧光分析中，应用最多和最成功的领域，最早由u l l m a n t ”1 等人 提出( 1 9 7 6 年) 。常用的实验方法有两种：竞争法和夹心法。 在竞争法中u l l m a n 等人选择荧光素作为给予体( d ) ，四甲基罗丹明异硫氰 酸盐作为接受体( a ) 。将抗原( a g ) 用荧光素标记，抗体( a b ) 用四甲基罗丹明标 记，让未被标记的抗原( 分析物) 与标记抗原和标记抗体的免疫复合按下式发生 竞争反应： a g + a 旷a b r 斗a 矿+ a g - a b 8 在免疫复合物种，荧光素标记的抗原( a 9 5 ) 转移激发能量到四甲基罗丹明标 i 已的抗体( a b 8 ) 上，导致荧光素荧光的熄灭。当这一免疫复合物中加入待测分 析物( a g ) 时，随着未标记的抗原浓度的增大，与抗体结合的标记抗原由于竞争 反应的结果而部分脱离抗体，能量转移荧光熄灭降低，荧光强度增加。 央心法是将抗体的一半用荧光素标记，另一半用四甲基罗丹明标记。被分析 的抗原有两个位置能同抗体结合生成夹心免疫复合物，同时导致能量转移荧光熄 s 河北大学理学硕士学位论文 灭。其反应方程式为：a g + a b 7 + a b r _ a g f - a g a b 8 试样中被分析的抗原浓度逾高，生成的夹心免疫复合物也逾多，荧光强度也 逾小。这两种方法对抗原的测定，灵敏度可达1 0 。范围，并已用于多种抗原或抗 体的测定，见表3 。 表3 能量转移荧光免疫分析 t a b l e3f u o r e s c e n c ee n e r g yt r a n s f e ri m m u n o a s s a y 3 4 荧光能量转移p h 传感器m i 将荧光剂曙红作为给予体，非荧光p h 指示剂酚红作为接受体，固定在一聚 合物膜( 如聚乙烯醇或牛血清蛋白) ，置于光导纤维的公共端。当p h = 8 时，酚红 的吸收光谱与曙红的发射光谱有最大程度的重叠。由于荧光能量转移的猝灭作 用，导致荧光强度随p h 值增高而降低，在p h 6 8 0 范围内，荧光强度与p h 值 变化成比例。 还有人将杂氧花青( o x a c y a n i n e ) 作为给予体，双十八烷基二硫代氨基甲酸盐 作为接受体，固定在单分子l b 膜上，做成了基于荧光能量转移的金属离子荧光 光纤为传感器【。 3 5 荧光共振能量转移在生物大分子结构、功能研究等方面的作用 f r e t 技术对生物大分子结构的分析在溶液中进行，无须复杂的结晶等样品 处理步骤，因而快速、灵敏，同时与x 一射线晶体衍射法相比，其测定结果更能 6 第一章综述 = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = 反映生物大分子结构与功能间的关系。 f r e t 技术可以轻松的分析生物大分子三维结构及特定位点间的距离。 n i c o l a s l 6 1 等人以标记于特定非催化位点的1 一苯胺基8 一萘磺酸( a n s ) 作为a ， 催化位点中t r p 残基为d ，测定了人类a 型及突变体型胞浆谷胱甘肽转移酶中 d 、a 间的距离，发现二者有所区别：c 【型中距离为2 2 n r n ，型中为1 8 2 r i m 。 l s a c e l 4 1 1 等人测定了对基因表达有调节作用的蛋白质分子中d n a 接合部为 m s x l 片断的空间结构。f r e t 还可用于单分子膜组成的描述【4 2 ，”1 、d n a 点突 变的探测、生物功能分子在激活前后结构变化m i 、生物小分子聚合成大分子的 方式及结构变化4 “”、分子游离态与结合态结构的变化情况”“”、分子结构转变 中间体等等【如1 。 3 6 核酸杂交分析方面的应用 f r e t 技术以常规荧光仪就可以灵敏、快速的测定核酸杂交。这一技术也可 用于固相分析或利用特殊的荧光显微镜进行单细胞分析，但需要特殊的辅助设 备。i i 前，f r e t 技术已经可以测定1 0 0 p l 体积中1 0 - ”m o l 数量级1 的杂交反应， 与放射分析具有相当的灵敏度，却避免了繁琐的分离手续。 f r e t 核酸杂交分析的原理很简单：当分别带有d 、a 标记物的核酸探针单链 杂交时，给体、受体之间的距离发生变化，就会引起荧光强度的变化。探针的设 计有以下几种模式：( a ) 在核酸双链探针的每条单链5 端进行标记，但只适用于 碱基数在6 - - 2 0 之间的较短的寡聚核苷酸链；( b ) 当链较长时，一条单链标记5 端，其互补链标记3 端；( c ) 将核酸双链探针中的一条链截断，在生成的两条短 链相邻端进行标记；( d ) 作为更加简便的标记方法，只需要在一条链的一端进行 共价标记，而使用嵌入式加入另一种荧光分子作为另一标记。但这种方法不能确 定d 、a 问距离，因为不知嵌入的荧光分子的位置与数量。 s i x o u 等人瞰l 咀f r e t 技术首次做到了对或细胞内核酸杂交反应的研究，他们 以上述( b ) 方式标记了含2 8 个碱基的寡聚核苷酸单链及其互补链，并将二者的 杂交物注入活细胞中，观察其降解反应，发现注入细胞的寡聚核苷酸可以与胞浆 中及核内非同原的互补链杂交。 f r e t 也可以用于核酸的定量分析。如在5 1 和3 端分别标记的d n a 杂交双 7 河北大学理学硕士学位论文 = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = ：= = = = = = = = = = 链中加入不同量未标记互补链，分别测出能量转移效率e ，以e 对加入的未标物 量做工作曲线，用于未知量的测定。m o r r i s o n 等人m 1 以荧光素标记寡聚核苷酸单 链5 端作为d ，罗丹明标记其互补链3 端作为a ，形成一对探针，可测出6 d m o l 的靶d n a 分子。 p a r k h u r s t 等人”4 1 采用了一种特殊的标记方法：在一条含1 6 个碱基的寡聚核苷 酸单链探针的3 ”端以荧光素( f ) 标记作为d ，5 。端以罗丹明( r h * ) 标记作 为a ，其在溶液中以随机盘绕状态存在，首位平均距离很近，可发生有效能量转 移。而当其形成杂交双螺旋时，由于1 6 个碱基相当于1 5 圈，f 、r h * 分别位于 螺旋直径的两端，距离变大，e 下降。用这种方法，p a r k h u r s t 等人可在n m o l - g m o l 范围内测定探针互补链。他们还观察了探针与其互补寡聚核苷酸链以及m 1 3 m p l 8 ( + ) d n a 杂交反应动力学之间的差别( 探针与m 1 3 m p l 8 ( + ) d n a 中6 2 9 1 6 3 0 6 序列的碱基互补) ，发现杂交反应均为二级，反应常数分别为5 7 1 0 ，t 0 0 1 l s - 和 5 7 x 1 0 4m o ll 。f 。，这1 0 倍的差别被归于由d n a 大分子互补序列两端其它部分结 构的波动变化引起。 4 前景与展望 能量转移荧光分析法是最灵敏的检测方法之一，其检测限可达f m o ( 0 - 1 5 哪o l l 1 ) 。但由于能够发生能量转移的染料对较少或反应产物的不溶性，转移条 件苛刻等不利因素，尤其对于适用于无机离子测定的转移对很少，适用范围还不 是太宽。能量转移荧光分析如同色谱分离手段相结合，利用转移的灵敏度高，仪 器设备简单的优点，加上色谱的高效分离手段，使其非常适合于环境、生物医学 科学和临床化学等方面复杂、低含量组分的分析。 f r e t 技术己经有效的作为l _ 0 一1 0 0 n m 距离范围内的元素尺来研究生物大分 子结构方面的问题。这以方法明显的特性是高时间分辨率、低空间分辨率、高灵 敏度及适合于复杂体系。 f r e t 技术以其独特的优越性，在今后科研领域，将与荧光显微镜结台用于单 个活细胞的分析，使人们对生命现象奥秘的探索向前迈进。 第一章综述 参考文献 1f 6 s t e rt a n n p u y s ，1 9 4 8 ，2 ：5 5 7 5 2s t r y e rl ，h a u g l a n dlp r o c n a t l a c a d s e i u s a ，1 9 6 7 ，5 8 ：7 1 9 - 7 2 6 3 祝大昌，陈剑宏，朱世盛译分子发光分析法( 荧光法和磷光法) 上海，复旦大学出版 社1 9 8 5 ：1 3 2 4s c h u l m a nsg m o l e c u l a rl u m i n e s c e n e es p e c t r o s c o p ym e t h o da n d a p p l i c a t i o n s p a r ti ，j o h n w i l e y & s o n s ，n e wy o r k ，1 9 9 5 ，7 3 4 5l a k o w i c zjr p r i n c i p l e so f f l u o r e s c e n c es p e c t r o s c o p y ，p l e n u mp r e s s n e wy o r k1 9 8 3 _ 3 1 5 6k o b a y a s h is ，t a m i y aee ta 1 p r o c e l e c t r o c h e ms o c ，1 9 8 7 ：8 7 8 9 ，3 7 0 - 3 7 2 7 章竹君能量转移发光分析，分析试验室，1 9 9 3 ，1 2 ( 1 ) ：2 5 8 魏亦男，李元宗，常文保，慈运祥荧光共振能量转移技术在生物分析中的应用分析化 学1 9 9 9 ，2 5 ( 4 ) ：4 7 7 4 8 4 9 张帆，刘振鸣胶束在化学发光分析中的应用和发展分析化学，1 9 8 9 ，1 7 ( 1 1 ) ：1 0 5 1 1 0 5 6 1 0d a v i dm g e n e r g yt r a n s f e rb e t w e e nd y e s - - as t u d yu s i n gf l u o r e s c e n c eq u e n c h i n ga n df 6 r s t e r t h e o r y j c h e m e d u c a t i o n1 9 8 5 ，6 2 ( 8 ) ：7 1 1 7 1 4 1 1 吴世康姜永才染料与表面活性物质间的相互作用一在胶束形成前的能量转移，化学学 报1 9 8 2 ，4 0 ( 1 0 ) ：9 3 9 1 2 何锡文，唐志新，于贵英，杨万龙，张贵珠史慧明吖啶橙一罗丹明6 g 一罗丹明b 组合 成各种染料体系能量转移的研究分析化学1 9 9 4 ，2 2 ( 4 ) ：3 3 2 - - 3 3 5 1 3s i n g h a lgs ，r a b i n o w i t c he ，h e v e s ij ts d n i v a s a nv p h o t o e h e m p h o t o b l 0 1 1 9 7 0 ，1 1 ，5 3 l 1 4e s c a b i p e r e zj r ，n o m ef f e n d l e rj h j a m e r c h e m s o c 1 9 7 7 ，9 9 ：7 7 4 9 15 g u p t a s a r m ap r u m a n b a n a l b i o c h e m - 1 9 9 5 ，2 3 0 ( 1 ) ：1 8 7 1 9 1 16s l u i s c r e m e rn ，n a i d o on n ，k a p l a nm h ，m a n o h a r a nth e u r j b i o e h e m 19 9 6 ，2 4 1 ( 2 ) ： 4 8 4 4 8 8 1 7b e a r d s l e yk ，c a n t o rcr p r o c n a i l a e a d s c i u s a ，1 9 7 0 ，6 5 ( 1 ) ：3 9 - - 4 6 1 8w e b e rg ，t e a l efw j d i s c u s sf a r a d a ys o c 1 9 5 9 ，2 7 ：1 3 4 - 1 4 1 1 9l e o n a r dj j ，y o n e t a n it ，c a n i sjb b i o c h e m 1 9 7 4 ，1 3 ( 6 ) ：1 4 6 0 1 4 6 4 2 0v a n d e r k o o ijm ，a d a rf ，e r e c i n s k am e u r j b i o e h e m 1 9 7 6 ，6 4 ( 2 ) ：3 8 1 3 8 7 9 河北大学理学硕士学位论文 2 1d i v i t a g ，g o d d y r s ，g a n t h e r o n d c ，p i e t r o a d j b b i o c h e m 1 9 9 3 ，2 6 8 ( 1 8 ) 1 3 1 7 8 1 3 1 8 6 2 2 w o l f df w i n i s k i ap b o c i a n b k , p a g a n o r e b i o e h e m ，1 9 9 2 ，3 1 ( 1 1 ) ：2 8 6 5 2 8 7 3 2 3 u d e n f r i e n d s ，s t e i n s ，b o h l e np d a i r m a n w ，l e i m g r u b e r w s c i e n c e 1 9 7 2 ，1 7 8 ( 4 0 6 3 ) ：8 7 1 - 8 7 2 2 4 陈国珍黄贤智郑朱梓许金钩王尊本编著荧光分析法( 第二版) 北京科学出版社， 1 9 9 0 ：1 2 2 1 3 2 2 5w a n g b a im a , z h u 6 u n z h a n g e t a 1 c h e m i c a ls e n s o r sa n dm i e r o i n s t r u m e n t a t i o n a c s ，w a s h i n g t o ni x ：，1 9 8 9 ，2 7 3 2 6 鲍所言，王桂华，刘保生等p a r - 吖啶黄能量转移荧光猝灭法测定痕量铁( i i ) 的研究光 谱学与光谱分析2 0 0 1 ，2 1 ( 1 ) 8 8 9 2 7 刘保生，王桂华，孙汉文等吖啶橙一罗丹明6 g 能量转移荧光猝灭法测定痕量磷分析 化学2 0 0 1 ，2 8 ( 1 ) ，4 2 4 4 2 8l a t tsae ta 1 a n a l b i o c h e m 1 9 7 2 ，5 0 ：5 6 2 9c h e nrfe ta 1 a n a lk 忆，1 9 7 7 ，1 0 ：7 8 7 3 0z h u j u nz h a n g ，s e r ewr a n a lc h i m a c t a - 1 9 9 0 ，2 3 6 ：2 5 1 3 lu i i m a nef ，s c h w a r z b e r g m e t a l j b i o l c h e m 1 9 7 6 ，2 5 1 ( 1 4 ) ：4 1 7 2 - 4 1 7 8 3 2h a s s a nm l a n d o n ji m m n n o a s s a y 1 9 8 2 ，3 ( 1 ) ：1 3 3m i l l e rjn ，l i mcse ta 1 a n a l y s t 9 8 0 ，1 0 5 ：9 1 3 4k a m e sh te ta 1 c l i nc h e m 19 8 3 。2 9 ：8 8 9 3 5s h a wef w a o t o nra a e ta 1 jc l j np a t h 0 1 1 9 7 7 ，3 0 ：5 2 6 3 6s n u t hds f e b sl e t l1 9 7 7 ，7 7 ：2 5 3 7k o b a y a s h i 弘t s u b o t an e ta 1 s t e r o i d s 1 9 8 0 + 3 6 ：117 3 8v a n d e w e r f p , c h a n gc ji m m u n d ，m e c h 1 9 8 0 ，3 6 ：3 3 9 3 9w a l td r ，m u n k h o l mc e ta 1 i b i d a c sp r e s s ，w a s h i n g t o nd c ，1 9 8 9 ，2 6 5 4 0a h u j arc ，b u d a c hw e ta 1 e l o ee a r o p t r o d el , g r a za u s t r i a ，1 9 9 2 ，7 0 4 1l s s a a cve p a t e ll ，c u r r a nt ，a b a t e s h e nc b i o e h e m 1 9 9 5 ，3 4 ( 4 6 ) ：1 5 2 7 6 - - - 1 5 2 8 1 4 2w i s t r o i nca j o n e sgm 。t o b i a sps ，s k l a rla b i o p h y s ，j 1 9 9 6 ，7 0 ( 2 ) ：9 8 8 - 9 9 7 4 3d u r r aak ，l a v o i c eh ，o h mk ，s a l r s s ec l a n g m u i r1 9 9 7 ，1 3 ( 4 ) ：8 0 1 - 8 0 7 4 4p a r k h u r s tkm ，p a r k h u r s tl j jb i o c h e m o p t 1 9 9 6 ，1 ( 4 ) ：4 3 5 - - 4 4 1 1 0 第章综述 = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = ! = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = 4 5s t e e r b a ，m e r r i l l a r b i o c h e m 1 9 9 4 ，3 3 ( 5 ) ：1 1 0 8 - - 1 1 1 5 4 6s c h w i n e f u sjj ，w a n g s c ，h a m o n d r w ，m o r r i s m j e l e c t r o p h o r e s i s l 9 9 6 ，1 7 ( 6 ) ：1 1 1 0 1 1 1 4 4 7 m o e n s p d j ，y e e dj ，r e m e d i o s c g b i o c h e m1 9 9 4 3 3 ：1 3 1 0 2 - 1 3 1 0 8 4 8 c h e q ，l e n t z b r b i o c h e m 1 9 9 7 ，3 6 ( 1 5 ) ：4 7 0 】 4 7 1 1 4 9o z a k ih ，1 w a s en ，s a w a ih ，k a d o m at k y u g o k uy b i o c h e m b i o p h y s r e s c o m m u n 1 9 9 7 ，2 3 1 ( 3 ) ：5 5 3 - 5 5 6 5 0c a ik ，s c h i r c hv j b i n c h e m ，1 9 9 6 ，3 5 ( 4 9 ) ：1 5 9 1 5 1 5 9 2 2 51k e a a l e rc ( e d ) n o n r a d i o a c t i v el a b e l i n ga n dd e t e c t i o no f b i o m o l e c u l e s s p r i n g e rl a b o r a t o r y , 1 9 9 2 ：4 1 4 5 2s i x o us ，s z o k afc j r ，g r e e nga ，a i u s t ib ，z o ng ，c h i ndj n u c l e i ca c i d s r e s ， 1 9 9 4 ，2 2 ( 4 ) ：6 6 2 - - 6 6 8 5 3m o r r i s o nle a n a k b i o c h e m 1 9 8 9 1 8 3 ：2 3 i 2 4 4 5 4k a l y a n a s u n d a r a m k c h e m s o c r e v 1 9 7 8 ，( 7 ) ：4 5 3 5 5g r a e v t l m ，t h o m a sjk j c h e m s o c1 9 7 3 ，9 5 ：6 8 8 5 5 6k u s u m o t oy ，s a t oh c h e m p h y s l e t t 1 9 7 9 ，6 8 ：1 3 f l u o r e s c e n c e a n a l y s i s b a s e do nr e s o n a n c e e n e r g y t r a n s f e r a b s t a c t a p p l i c a t i o n o ff l u o r e s c e n c e a n a l y s i s b a s e do nr e s o n a n c e e n e r g y t r a n s f e r ( f r e t ) i sr e v i e w e dw i t h5 6r e f e r e n c e s t h er e v i e wi n c l u d e sf 6 r s t e rt h e o r yo f f l u o r e s c e n c er e s o n a n c ee n e r g y t r a n s f e r , a n a l y s i st e c h n i q u e sa n da p p l i c a t i o n k e y w a r d s r e v i e w ；f l u o r e s c e n c ea n a l y s i s ；e n e r g yt r a n s f e r 河北大学理学硕士学位论文 = = = = = = = 竺= = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = 詈= = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = = 第二章几种碱性荧光染料间能量转移的研究 摘要对碱性荧光染料吖啶橙( a 铆、吖啶黄( a y ) 、罗丹明6 g ( r 6 g ) 、罗丹明b ( r b ) 、已基罗 丹明b ( e r b ) 、丁基罗丹明b ( b r b ) 、碱性藏花红组成的各种染料混合体系的能量转移进行了 研究。结果表明：在十二烷基苯磺酸钠水溶液中，吖啶橙分别与罗丹明6 g 、罗丹明b 、乙基 罗丹明b 、丁基罗丹明b 和碱性藏花红：吖啶黄分别与罗丹明6 g 、碱性藏花红；罗丹明6 g 分剐