（动物学专业论文）mirna在lps活化天然免疫反应中的表达、调控作用研究.pdf

m i r n a 在l p s 活化天然免疫反应中的表达、调控作用研究 mir n a 在l p s 活化天然免疫反应中的 表达、调控作用研究 专业： 学位申请人： 导师： 动物学 牛玉娜 陈瑶生教授 摘要 天然免疫是机体在进化中形成的古老免疫系统，构成机体抵御病原生物入侵 的第一道防线。病原入侵后，天然免疫系统识别病原，产生细胞因子，同时激活 炎症反应。适当的炎症反应反有利于杀死、清除病原体，促使组织损伤愈合，但 过度的炎症反应则导致疾病的发生，甚至死亡。m i r n a 通过靶向编码基因m r n a 3 u t r ，在转录后水平上对基因表达进行调控。目前的研究证明，m i r n a 参与 天然免疫系统的多个环节，包括免疫细胞分化、发育，t l r 受体基因表达，胞 内1 1 l r s 信号转导，细胞因子生成、分泌，病毒感染、复制等。在病原感染时， m i r n a 不仅是重要的天然免疫活化后的信号调节分子，而且能够直接参与机体 清除病原的过程。深入理解m i r n a 对天然免疫的调控作用有助于调节机体免疫 应答和维护免疫平衡，控制过度的免疫反应，引导炎症反应向着有利子动物健康 方向发展。本研究以小鼠为动物模型，首先腹腔注射l p s 构建全身系统性炎症 综合症( s y s t e m i ci n f l a m m a t o r yr e s p o n s es y n d r o m e ，s i r s ) 小鼠，从基因学水平 中山大学博士学位论文牛玉娜 比较s i r s 小鼠与对照小鼠脾脏微小r n a ( m i r n a ) 表达谱，获得l p s 效应m i r n a 基因；其次，结合m i r n a 靶基因预测和表达谱分析确定对l p s 所引起的炎症反 应有调节作用的基因m i c r o r n a - 1 2 2 4 ( m i r - 1 2 2 4 ) 。然后检测了m i r - 1 2 2 4 对炎 性基因t n f 0 【、i l ld 生成，以及对n f r b 转录活性的作用，以验证m i r 1 2 2 4 是 否参与了l p s t l r 4 信号通路和对炎性基因生成的影响。最后，检测了m i r - 1 2 2 4 对靶基因偶联荧光素酶活性、靶基因表达的干扰作用，探讨1 1 1 i r 1 2 2 4 对 l p s t l r 4 信号通路调控作用的分子机制。 ( 1 ) 成功构建内毒素所致小鼠s i r s 模型。 采用腹腔注射l p s 的方法，诱使小鼠出现s i r s m o d s 症状。组织病理学检 查结果显示，s i r s 小鼠肝、脾、肺、肾均可见充血水肿、炎性细胞浸润、组织 结构坏死。与对照相比，s i r s 小鼠肝、脾、肺、肾中t l r 4 、i l 1 p 和t n f a 基 因表达量在注射后6 h 、1 2 好、均发生明显改变。t l r 4 基因在脾、肺中表达量 呈现震荡升高的趋势，m r n a 水平在6 h 下降后，1 2 h 后都显著升高( p 0 0 5 ) ， 尤其在肺中，t l r 4 的表达量上升了6 4 5 。相对脾、肺，t l r 4 在肝中表达量不 高，但当l p s 刺激6 h 后，其m r n a 水平上升4 5 9 。i l 1 1 3 在肝、脾、肺中表 达量都急剧上升。在l p s 刺激后6 h 和1 2 h ，i l 1 1 3 在肝中表达量分别上升5 6 8 倍和1 3 1 倍，而在脾上i l 1 d 水平呈现先高后低的事态：6 h 后生生3 6 9 倍，1 2 h 后下降至6 5 8 。i l 1 1 3 在l p s 刺激后的肺中表达则呈现先降低后升高的趋势： 在6 h 后，i l l d 水平下降至检测极限，而1 2 h 后又较之对照上升4 3 9 倍。在应 答l p s 刺激过程中，其在这四个组织中表达呈现不同趋势。l p s 刺激后，t n f a 在肝中表达持续下降，至1 2 h 时下降超过5 0 ；在脾上，6 h 后达到高峰，1 2 h 下降低于对照水平；而在肺中，t n f a 基因持续上升，1 2 h 上升7 9 倍。 ( 2 ) 获得1 9 个l p s 效应m i r n a ，画出m i r n a m r n a 相互作用图，网络 解析m i r n a 在应答l p s 刺激过程作用及潜在的分子机制。 使用m i c r o r n a 表达谱芯片比较l p s 注射小鼠和对照小鼠的脾脏的m i r n a 表达变化，结果发现在l p s 注射小鼠脾脏中有1 9 个m i r n a 表达量上调。其中 m i r - 1 4 6 b 、m i r 1 5 5 、m i r - 4 9 4 和m i r - 1 2 2 4 最大变化倍数分别为1 6 l 、2 7 5 、4 1 7 和5 7 5 倍。用s t e m 1 0 0 pr e a l t i m ep c r 检测试验样品中这四个m i r n a 水平，发 现其变化趋势跟芯片结果一致。用生物信息学分析差异表达m i r n a ，预测到1 7 8 1 l i m i r n a 在l f s 活化天然免疫反应中的表达、调控作用研究 个靶基因。对这些靶基因进行功能聚类分析( g o 分析) ，结果显示与l p s 信号 转导和应答过程直接相关基因有1 6 9 个，包括m a p k 信号转导通路基因5 7 个， j a k - s t a t 信号转导通路基因2 6 个，细胞因子受体相互作用通路基因3 4 个，钙 离子信号转导通路基因2 7 个，趋化因子信号转导通路基因2 5 个。根据靶基因预 测与g o 分析，获得m i r n a m r n a 网络式的相互作用图，解析m i r n a 潜在的 作用机制。根据这张图，我们推测m i r 1 2 2 4 在应答l p s 刺激中可能起负反馈调 节作用。 ( 3 ) m i r - 1 2 2 4 负调控t n f a 、i l 1b 、i l 6 表达，但不是通过调节n f r , b 转录活性而实现的。 在小鼠类巨噬细胞洲2 6 4 7 细胞系中，过表达m i r - 1 2 2 4 导致t n f a 、 i l 1 p 、i l 6m r n a 明显表达下降，而功能缺失m i r - 1 2 2 4 时n 师a 、i l 1 p 、i l 6 m r n a 水平高于对照细胞。表明m i r 1 2 2 4 负调控t n f a 、i l 1 p 、i l 6m r n a 。 这验证了前面我们的推测。有趣的是，在r a w 2 6 4 7 细胞中过表达m i r - 1 2 2 4 ， n f r , b 转录活性高于对照，表明m i r - 1 2 2 4 正调节n f r d 3 转录因子的活性，同时 也说明m i r - 1 2 2 4 对耵姬a 、i l 1 1 3 、i l 6 基因表达的负调控作用不是通过调节 n f - r , b 转录因子活性而实现的。 ( 4 ) m i r 1 2 2 4 靶向调节s p l 蛋白 h e k 2 9 3 细胞中共转染m i r - 1 2 2 4m i m i c s 和携带s p l3 u t r 序列的融合质粒 p s i e h e e k 2 s p l 3 u t r ，荧光素酶活性比对照下降6 4 。r a w 2 6 4 7 细胞中转染 m i r - 1 2 2 4m i m i c s ，检测s p lm r n a 水平和蛋白水平；r e a l - t i m ep c r 和w e s t e r nb l o t 结果表示m i r - 1 2 2 4 在转录后水平靶向调控s p l 基因。 ( 5 ) 成功构建、纯化腺病毒介导的m i r n a 前体表达载体。 在h e k 2 9 3 细胞中共转染p c d p r e m i r - 1 2 2 4 融合质粒和腺病毒骨架治理，转 染6 天后出现c p e ，1 2 天后c p e 增多，大部分细胞变圆脱落，反复冻融法收毒 ( p 1 代) 。用p l 代重组腺病毒复感染h e k 2 9 3 细胞，扩大培养，收毒后氯化铯 梯度离心纯化腺病毒颗粒。用针对病毒基因组的p c r 和针对感染病毒h e k 2 9 3 细胞总r n a 的r t - p c r 验证病毒正确性和活力。 关键词：天然免疫、m i c r o r n a 、m i r - 1 2 2 4 、脂多糖、表达谱芯片 m i r n a 在l p s 活化天然免疫反应中的表达、调控作用研究 s t u d y 0 1 1e x p r e s s i o n ，r e g u l a t o r yr o l eo fm i r n ai n i n n a t ei m m u n e r e s p o n s et r i g g e r e db yl p s m a j o r ：z o o l o g y n a m e ：n i u y u n a s u p e r v i s o r ：c h e ny a o s h e n g a b s t r a c t t h ei n n a t ei m m u n es y s t e m , v e r ye v o l u t i o n a r i l ya n c i e n t ，i st h ef i r s tl i n ed e f e n d i n g u sf r o mi n v a s i o nb ym i c r o o r g a n i s m a f t e ri n v a s i o n ，p a t h o g e nw a sr e c o g a n i z e db y i n n a t ei m m u n es y s t e m ，p r o d u c e s c y t o k i n e s ，a n dt r i g g e ri n f l a m m a t i o n w h i l e a p p r o p r i a t ei n f l a m m a t o r yr e s p o n s eh e l p st ok i l l ，r e m o v ep a t h o g e n s ，a n dt i s s u ei n j u r y r e c o v e r y , t h ee x c e s s i v ei n f l a m m a t o r yr e s p o n s ew i l lc a u s ed i s e a s e sa n de v e nd e a t h m i c r o r n a ( m i r n a ) i san o v e lr e g u l a t o ro fg e n ee x p r e s s i o na tp o s t - t r a n s c r i p t i o n a l l e v e l t h ec u r r e n ts t u d i e sh a v es h o w nt h a tm i r n ai si n v o l v e dt l r ss i g n a l i n g ，o ra sa r e g u l a t o ri nt l r ss i g n a lt r a n s d u c t i o n i np a t h o g e ni n f e c t i o n , m i r n ai sn o to n l ya n i m p o r t a n tf a c t o rw h i c ha c t i v a t i n gs i g n a lt r a n s d u c t i o n ，b u ta l s od i r e c t l yi n v o l v e di nt h e p r o c e s so ft h eb o d yt oe l i m i n a t ep a t h o g e n s i n - d e p t hu n d e r s t a n d i n go ft h ee f f e c t o r y r o l eo fm i r n ao ni n n a t ei m n a u n er e s p o n s eh e l p st oc o n t r o lt h ed e g r e eo fi m m u n e r e s p o n s e ，a n dg u i d ei n f l a m m a t i o nt o w a r d st o h e a l t ho ft h eb o d y i nt h i ss t u d y , w e s e l e c tm o u s ea st h ea n i m a lm o d e l b a b l cm i c e w e r ei n t r a p e r i t o n e a li n j e c t i o no fl p s t oi n d u c es y s t e m i c i n f l a m m a t o r yr e s p o n s es y n d r o m e ( s i r s ) f o l l o w e db yt h e c o m p a r i s i n gm i r n ae x p r e s s i o np r o f i l ei ns p l e e no fs i r sm o u s et oc o n t r o lm o u s et o 中山人学博士学位论文牛玉娜 i d e n t i f yl p s r e s p o n s i v em i r n a s a m o n gt h e s em i r n a s ，m i r 一12 2 4 w a ss e l e c t e df o r f u r t h e rs t u d y ( 1 ) b u i l d i n gam o d e lo fe n d o t o x i n - i n d u c e ds i r ss u c c e s s f u l l y u s i n go fi n t r a p e r i t o n e a l l yi n j e c t i o no fl p st oi n d u c es y m p t o m so fs i r s m o d s i n m i c e h i s t o p a t h o l o g i c e x a m i n a t i o ns h o w e dt h a t c o n g e s t i o n a n de d e m a ， i n f l a m m a t o r yc e l li n f i l t r a t i o n ，n e c r o s i so ft h eo r g a n i z a t i o n a ls t r u c t u r ew e r es e e ni n l i v e r ，s p l e e n ，l u n g ，k i d n e yo fs i r sm o u s e t h ee p r e s s i o n a ll e v e lo ft l r 4 ，i l 一11 3a n d t n f og e n e si nl i v e r , s p l e e n ，l u n g ，k i d n e yo fm o u s ew i t hs i r sw a sc h a n g e dg r e a t l y , c o m p a r i n gt ot h eg e n e si nt h ec o n t r 0 1 t h ee x p r e s s i o np a a e mo ft l r 4g e n ei nt h e s p l e e n ，l u n gs h o w e dat r e n d t oi n c r e a s e ，w h i c hg e n el e v e ld e c r e a s e da f t e r6 h ，12 ha f t e r t h ew e r es i g n i f i c a n t l yh i g h e r ( p 0 0 5 ) e s p e c i a l l yi nt h el u n g ，t l r 4e x p r e s s i o nh a d a ni n c r e a s eo f6 4 5 t oc o n t r 0 1 h o w e v e r , t l r 4e x p r e s s i o nl e v e li nt h el i v e ri sn o t 1 1 i g h ，t h em r n a l e v e lw a si n c r e a s e db y4 5 9 l p ss t i m u l a t i o na f t e r6 h t h el e v e lo f i l 一11 3l i v e r , s p l e e n ，a n dl u n gw a sr a i s e ds h a r p l ya f t e rl p ss t i m u l a t i o n6 h ( 5 6 8t i m e s ) a n d12 h ( 13 1t i m e s ) u p o nl p ss t i m u l a t i o n ，t n f ae x p r e s s i o ni nt h el i v e rc o n t i n u e d t od e c l i n e ，d o w nt o ，m o r et h a n5 0 a f t e r12 h t n f ( ig e n el e v e li ns p l e e np e a k e da f t e r 6 hi n e c t i o n ，a n dd e c r e a s e da t12 hb e l o wt h ec o n t r o ll e v e l i nl u n g ，t n f ag e n e c o n t i n u e dt oi n c r e a s e ，12 hi n c r e a s e db y7 9t i m e s ( 2 ) 1 9 l p s r e s p o n s i v em i r n a s w e r e i d e n t i f i e d ，a n d am i r n a m r n a i n t e r a c t i n gn e t w o r kw a sd r a w nt ou n d e r s t a n dt h ep r o c e s so fm i r n ar e s p o n s i n gt o l p ss t i m u l a t i o na n dt h ea n d e r l y i n gm o l e c u l a rm e c h a n i s m s u s i n gm i c r o a r r a yt oc o m p a r em i c r o r n ae x p r e s s i o np r o f i l i n gi ns p l e e no fl p s i n j e c t e d - m i c et o t h a to ft h ec o n t r o lm i c et h a ti n j e c t e dw i t hs a l i n e ，w ef o u n dt h e e x p r e s s i o no f19m i r n aw e r eu p r e g u l a t e d t h eg r e a t e s tc h a n g e so fm i r - 14 6 b ， m i r - 1 5 5 ，m i r - 4 9 4a n dm i r - 1 2 2 4w e r e1 6 1 ，2 7 5 ，4 1 7a n d5 7 5t i m e s ，r e s p e c t i v e l y w i t hs t e m l o o pr e a l t i m ep c rd e t e c t i o no ft h ef o u rm i r n a sl e v e l si nt e s t e ds a m p l e s ， w ef o u n dt h a tt h et r e n d si nq - p c rw e r ec o n s i s t e n t 、析t l lt h a tf r o mm i c r o a r r a y b i o i n f o r m a t i c sa n a l y s i so ft h e s ed i f f e r e n t i a l l ye x p r e s s e dm i r n a s ，17 81t a r g e tg e n e s w e r ep r e d i c t e d f u n c t i o nc l u s t e ra n a l y s i s ( g oa n a l y s i s ) o ft h et a r g e tg e n e s ，w ef o u n d 16 9g e n e st h a td i r e c t l yr e l a t e dt ol p ss i g n a lt r a n s d u c t i o n ，i n c l u d i n g5 7m a p ks i g n a l t i m i r n a 在l p s 活化天然免疫反应中的表达、调控作用研究 t r a n s d u c t i o np a t h w a yg e n e s ，2 6j a k s t a ts i g n a lt r a n s d u c t i o np a t h w a yg e n e s ，3 4 c y t o k i n e c y t o k i n er e c e p t o ri n t e r a c t i o ng e n e s ，2 7 c a l c i u ms i g n a lt r a n s d u c t i o np a t h w a y g e n e s ，2 5c h e m o k i n es i g n a l i n gp a t h w a yg e n e s a c c o r d i n gt ot h eg oa n a l y s i so ft h e t a r g e tg e n ea n dm i r n a m r n ai n t e r a c t i o nn e t w o r k , w eh y p o t h e s i z e dt h a tm i r - - 12 2 4 i nr e s p o n s et ol p ss t i m u l a t i o nm a y p l a yan e g a t i v ef e e d b a c kr e g u l a t i o n ( 3 ) m i r - 12 2 4n e g a t i v e l yr e g u l a t i n gt n f a ，i l - 1p ，i l 一6e x p r e s s i o n , n o tb y r e g u l a t i n gn f - r bt r a n s c r i # o n a la c t i v i t y i nm o u s er a w 2 6 4 7m a c r o p h a g ec e l ll i n e s ，o v e r e x p r e s s i o no fm i r - 12 2 4l e dt o t n f q ，i l 一1d ，i l - 6m r n ae x p r e s s i o ns i g n i f i c a n t l yd e c r e a s e d ，w h i l el o s so ff u n c t i o n i nm i r - l2 2 4r e s u l t e di nt h el e v e l so ft n f a ，i l - 11 3 ，i l 一6h i g h e rt h a nt h a ti nc o n t r o l c e l l s ，w h i c hs h o w i n gt h a tm i r - 1 2 2 4n e g a t i v ec o n t r o ln 疆a ，i l 一1p ，i l 一6g e n e p r o d u c t i o n i n t e r e s t i n g l y , o v e r e x p r e s s i n gm i r - 1 2 2 4i nr a w 2 6 4 7c e l l sl e dt oah i g h e r i n c r e a s ei nn f - r , bt r a n s c r i p t i o n a la c t i v i t yc o m p a r i n gt ot h ec o n t r o l ，i n d i c a t i n gt h a t m i r - 12 2 4h a v eap o s i t i v er o l ei nr e g u l a t i o no ft r a n s c r i p t i o nf a c t o rn f r , ba c t i v i t y i t w a sc o n c l u d e dt h a tm i r - 1 2 2 4w a san e g a t i v er e g u l a t o rf o rm o d u l a t i n gt h ep r o d u c t i o n o ft n f a ，i l 1 1 3 ，i l 一6g e n ee x p r e s s i o n , n o tb yr e g u l a t i n gt h ea c t i v i t yo ft r a n s c r i p t i o n f a c t o rn f r d 3a c h i e v e d ( 4 ) m i r - 1 2 2 4t a r g e t e dr e g u l a t i n gs plg e n e h e k 2 9 3c e l l sw e r ec o t r a n s f e c t e dw i t hm i r 12 2 4m i m i c sa n ds p13 u t r e a r r i n g - r e p o n e rp l a s m i dc a u s e dad e c r e a eo f6 4 i nl u c i f e r a s ea c t i v i t y , c o m p a r i n gt o t h a ti nc o n r o lc e l l a n dm o r e e v e r , s p lp r o t e i nl e v e li nm i r - 12 2 4t r a n s f e c t e d r a w 2 6 4 7c e l l sw a sd e c l i n e df r o mr e s u l t e so fw e s t e mb l o te x p r e m e n t ，i nw h i c h a n t i s p lw a su s e dt od e t e c ts p lp r o t e i n ( 5 ) s u c c e s s f u l l yc o n s t r u c t e da n dp u r i f i e da d e n o v i r u s - m e d i a t e dm i r n ap r e c u r s o r e x p r e s s i n gv e c t o r h e k 2 9 3c e l l s 、e r ec o t r a n s f e c t e d 、 ，i 吐lp c d p r e m i r - 12 2 4f u s i o np l a s m i da n d a d e n o v i r u sb a c k b o n ep l a s m i d s i xd a y sl a t e rc p ew a sp r e s e n t 12d a y sa f t e r t r a n s f e e t i o n ，t h en u m b e ro fc p ew a si n c r e a s e d , a n dm o s to ft h ec e l l sr o u n d e do f f b y f r e e z i n ga n dt h a w i n gm e t h o d ，r e c o m b i n a n ta d e n o v i r u s ( p 1g e n e r a t i o n ) w a so b t a i n e d v i r u sg e n o m eb a s e dp c ra n dr t - p c rf o rt e s t i n gm a t u r em i r n ai nv i r u s i i i 中山大学博士学位论文牛玉娜 i n f e c t e d h e k 2 9 3c e l l sw e r ep e r f o r m e dt ov e d f yt h ec o r r e c t n e s sa n dv i t a l i t yo f r e c o m b i n a n ta d e n o v i r u s k e y w o r d s ：i n n a t ei m m u n e ，m i c r o r n a ，m i r - 1 2 2 4 ，l p s ，m i c r o a r r a y i v m i r n a 在l p s 活化天然免疫反应中的表达、调控作用研究 原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下， 独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容 外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品 成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以 明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 学位论文作者签名：拳孑螂 日期：协护年 占月( 日 使用授权声明 本人完全了解中山大学有关保留、使用学位论文的规定，即： 学校有权保留学位论文并向国家主管部门或其指定机构送交论 文的电子版和纸质版，有权将学位论文用于非赢利目的的少量复 制并允许论文进入学校图书馆、院系资料室被查阅，有权将学位 论文的内容编入有关数据库进行检索，可以采用复印、缩印或其 他方法保存学位论文。 学位论文作者签名：锋易协尸 日期mp 年钥佣 导师签名： 日期：年月 日 m i r n a 在l p s 活化天然免疫反应中的表达、调控作用研究 第一章前言弟一早刖苗 i i 天然免疫及炎症反应 哺乳动物免疫系统分为两个子系统：获得性免疫系统( i n n a t ei m m u n es y s t e m ) 和天然免疫系统( a d a p t i v ei m m u n es y s t e m ) 。获得性免疫系统主要由b 、t 淋巴细 胞组成，通过不同的抗原特异性受体维持免疫记忆。b 、t 淋巴细胞的免疫记忆 和对抗原的亲和作用是源自淋巴细胞发育过程中的正、负选择，而这种正、负选 择又是基于细胞表面上能特异识别来自其他细胞呈递抗原的受体，即获得性免疫 的免疫性需要通过非特异天然免疫系统的激活。淋巴细胞的进一步成熟、增值为 识别特异抗原提供选择作用，有助于清除感染、阻止再感染。从感染到b 、t 淋 巴细胞正、负选择，特异性抗体产生，这个过程约1 周时间。天然免疫系统主要 由树突细胞、中性粒细胞、单核细胞、巨噬细胞和肥大细胞组成。天然免疫系统 对细菌及其产物的识别和应答是非特异性的，因子能够对入侵的病原体立即做出 应答，从而成为机体防御系统的第一道防线。天然免疫系统通过免疫细胞表面受 体识别位于细菌、病毒、真菌上面病原相关分子模式( p a t h o g e n a s s o c i a t e d m o l e c u l a rp 甜e 玛p a m p ) ，而这种受体就叫模式识别受体( p a t t e r nr e c o g n i t i o n r e c e p t o r , p r r ) 。通过直接识别微生物表面p a m p ，天然免疫对入侵性刺激快速做 出免疫反应，无需像b 、t 淋巴细胞的正、负选择和增值、成熟过程。在天然免 疫反应中，识别病原体的受体主要是t l r 。( t o l l 1 i k er e c e p t o r ) 。第一个被鉴定出 来的t l r 是t o l l 1 i k er e c e p t o r4 ( t l r 4 ) ，它是革兰氏阴性菌细胞壁主要致病成分 脂多糖( 1 i p o p o l y s a c c h a r i d e ，l p s ) 的受体【心】。配体l p s 与受体t l r 4 的结合， 激活细胞信号传导，诱导趋化因子( c h e m o k i n e ) 、细胞因子( c y t o k i n e ) 和炎性 介质( i n f l a m m a t o r ym e d i a t o r ) ( 表1 1 ) 的产生，以及随后的血管扩增、噬菌细胞 和抗原呈递细胞的招募。 中山大学博士学位论文牛玉娜 表1 1l p s 激活巨噬细胞所诱导表达的基因3 】 t a b l e1 - 1 g e n ee x p r e s s i o ni n d u c e db yl p ss t i m u l a t e dm a c r o p h a g e g e n ee s p r e s 蜘ni n d u c e d 蚵l 陷s t i m u l a t e dm s c r o p l 埝g e s ( 孓5 l p r o t e l ub 即n a m ef u n c t i o n q t o i d 麟 t n f l o c a li n f l a m m a t i o n , e v d o t h c l i a lc e i l , m n e r o p h a g e a c t i v a t i o n i l - i f e v e r , t - e e l la n dm 馘l a ；萨粼蛙蝴嚏l o n n 以t - c d lp r o l i f e r a t i o n ， 1 1 - 3 s y n e r g i s t i ca c t i o ni ne a d yh e m a t o p o e i s i s l b - c e i la c t i v a t i o n , i g ec l 鲻s 嘶s u p p r m s t h l c c l i s 内印约精 t r u m a p t i o l af a c t o r s l 王，s 黝i s i 删lg r o w t ha n dd i f f e r e n t i a t i o n l l 石1 - a n dbe , e l lg r o w t ha n d 成撩骶嘲i a i 【i o 如a c u t ep h a s e 矽o l c i l ls r n t l a e s i s , f e v e r i l - l o s u p p r e s s o ro fm a a e p h a g ef u n c t i m i l - 1 2 a c t i v a t e sn kc e l l s , i n d u c e sc t - c e l l d i f f e m a t i a t i o ni n t ot h lc e l l s i l - 1 7 i n d u c ec 归k i n cp r o d u c t i o l l 妨印i l h e i i a l 镛d o t h e l 鲥 a n df i b r o b l a s te d l s g ：s fs t i m u l a r e sn , = u t m p h i l8 r o w t ha n dd i f f a u a t i a t i o n q m c ! 游s t i m u l a l 髂g r o w t ha n dd i f f e z e n t i a t i o no f m y c l o m o 眦y a cl i n e a g ec e i l s l 磁唧m 瓤飙叫嗡轳a c f i v a f i 眠i n 凹训m h c 仞哆糟妣 1 2c l a s ss w i t c k i ：n g , 翱秘埘鹧略t h 2 唧 r a n t l 滔c h i 踟l a c l 主cf o r ：知l o n “：y t e s t c c l l 3 n k 珏s b 蚴p h i 坟烈酒崩) p 牺i s d e 删t i cc e i l s 纯- 8 c h e m o m c 也蠡嗽n a q z o p l f i l xb 鑫p 蝴氛t - c d b m c p ia 瑚瑚铀嘶cf o r ：t - c e i l xm o n o 懈b a s o p h i l s m l p l ac h c m o m c t i cf a r ：i d o a o e y t e s tc e l l s , n kc e l l s , b 喇的p 撕i 瓢d 袖- i t i c 仪狐b o n 参嘲r 内啊c e l b 田鼬内魄w 珏，2 r a p 5 0 o - p e l e g r - i l r f o l i n m b i t o m h 国组 f a z y m 锚 嘏o sg e n e r a t i o no f n i 嫡co x q d c lu l l i i n lc io x 2s y nn n i e s i so f 刚啪幽。耐= n 泌a l i do 口财n 珏咝m 型壁垒苎2 一-_-_-_-_-_-_ 炎症( i n f l a m m a t i o n ) 是动物最常见而复杂的病理过程，可以发生于机体的 任何部位和任何组织。随着现在分子生物学和技术的发展也应用，对炎症的认识 有了长足的进步。许多炎症反应过程实质上主要是由一系列被称作炎症介质的内 源性化学分子或生物大分子介导实现的，它们影响整个炎症过程。炎性反应主要 由巨噬细胞和肥大细胞介导，它们识别入侵微生物，产生化学信号，引发血管反 应和白细胞渗出、聚集、吞噬清除入侵微生物。当感染被解决或组织受损减轻时， 2 m i r n a 在l p s 活化天然免疫反应中的表达、调控作用研究 炎症反应就需要减弱或受到控制。如果炎症没有得到适当的引导或控制，炎性反 应持续就会引发纤维化，肉芽形成，d n a 损伤，甚至最终导致癌症发生。在人 上，过度的炎症反应会导致多种免疫疾病发生，如脓毒性休克( s e p t i cs h o c k ) 、 阿尔茨海默氏病( a l z h e l m e r sd i s e a s e ) 、类风湿关节炎( r h e u m a t o i da r t h r i t i s ) 、血 管炎( v a s c u l i t i d e s ) 和炎症性肠病( i n f l a m m a t o r yb o w e ld i s e a s e ) 等。这些免疫性 疾病都是源自炎性通路的不适当激活或抑制，所以，如何控制炎症反应一直是一 个比较重要的研究领域。了解病理及疾病发展过程，研究限制或减弱炎性反应的 内源性通路显得尤为重要。使用l p s 激活其受体t l r 4 这一方法常被用来作为 模型来研究细胞应答炎症和炎性信号。了解细胞内限制、减弱l p s 反应的机制 为调节炎症反应，避免由于急性炎症发生而导致的机体损伤。 1 2 内毒素损伤 在革兰氏阴性菌感染时，l p s 由菌体释放进入血液，诱导巨噬细胞、树突细 胞释放t n f a 、i l 1 p 、i l 6 等炎性因子。这些细胞因子能够导致炎症，过度的炎 症反应可导致系统性炎症反应综合症( s y s t e m i ci n f l a m m a t o r yr e s p o m es y n d r o m e ， s i r s ) 的发生，包括呼吸衰竭、心脏、肾脏和神经功能障碍，肝功能受损，最 终发展成为过器官功能不全综合症( m u l t i p l eo r g a nd y s f u n c t i o ns y n & o m e 。 m o d s ) ，成为危害外科手术病人死亡的主要原因。l p s 引起组织损伤主要源于 两个方面：1 ) 直接损伤作用，即l p