（分析化学专业论文）化学发光在药物分析中的应用研究.pdf

独创性声明 y9 0 15 42 学位论文题目：丝堂筮趟查麴塑坌堑【主的厘崩婴筮 本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导f 进行的研究工 作及取得的研究成果。据我所知，除了文巾特别加以标注和致谢的地 方外，论文中不包含其他人已经发表或撰“；过的研究成果，也不包含 为获得西南大学或其他教育机构的学位或证书而使朋过的材料。与我 同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的 说明并表示谢意。 学位论文作者：互 为务签字日期：乒5 年牛月8 日 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解西南大学有关保留、使用学位论文的规 定，有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘，允 许论文被查阅和借阅。本人授权西南大学研究生院町以将学位论文的 全部或部分内容编入有关数据库进行检索，叮以采j | j 影印、缩印或扫 描等复制手段保存、汇编学位论文。 ( 保密的学位论文在解密后适用本授权书，本论文：留不保密， 口保密期限至年月止) 。 学位论文作者签名：王端笏 签字日期：舻缉 p 爿砖日 学位论文作者毕业后去向： 工作单位： 通讯地址 乙仁 | y 年 0 黧一 名期 一 样嗍 _ 中文摘要 化学发光在药物分析中的应用研究 分析化学专业硕士研究生：王瑞芬 指导教师：黄玉明教授 摘要 化学发光是根据化学反应所产生的能量来进行物质分析的一种痕量分析方法。与流动技 术相结合，其具有设备简单、分析速度快、灵敏度高、线性范围宽、重现性好、自动化程度 高等特点，在分析化学领域取得了迅速发展。随着药物分析的发展，将化学发光应用于药物 分析中更具有实际意义。 本文分为两部分。第一部分是综述，介绍了化学发光的基本原理、产生及其在药物分析 中的应用。第二部分是研究报告，是根据化学发光的原理来测定了四种药物，同时对各个反 应的机理做了探讨。 1 、c e ( 1 v ) 一罗丹明b 体系对辛弗林的测定 基 二在酸性介质中，辛弗林对c e ( 1 v ) 一罗丹明b 化学发光有较强的增敏作用。据此，采用 流动注射技术建立了简易、快速测定辛弗林的化学发光新方法。在优化的实验条件下，辛弗林 的线性范围为5 0 x 1 0 。9 1 o x l 0 g m l ，检出限为1 0 1 0 一g m l ( 3 0 ) ，对1 0 x 1 0 。g m l 的辛弗 林进行了1 1 次平行测定，其r s d 为2 9 。将本法用 一【f i 】样和尿样及橙皮中辛弗林的测定， 结果令人满意。 2 、铁氰化钾一鲁米诺体系对辛弗林的测定 基于在碱性介质中，辛弗林对铁氰化钾鲁米诺的发光有增强作用，据此，采_ i = 流动注射 技术建立了简易、快速测定辛弗林的化学发光新方法。在优化的实验条件下，辛弗林的线性 范围为8 x 1 0 9 1 x l 旷g m l ，对5 1 0 - 7 9 m l 的辛弗林进行了1 1 次平行测定，其r s d 为2 5 9 。 将本方法用于血样和尿样及橙子中辛弗林的测定，结果令人满意 3 、c e ( r v ) 罗丹明6 g 化学发光体系对金霉素、强力霉素、木犀草素的测定 基于在h n o ，酸性介质中，金霉素、强力霉素、木犀草素与c e ( i v ) 反应产生化学发光， 罗丹明6 g 对该反应有较强的增敏作用。据此，采用流动注射技术建立了简易、快速测定盐酸 金霉素、盐酸强力霉素、木犀草素的化学发光新方法。在优化的实验条件f ，金霉素、强力 中文摘要 霉素、木犀草素的线性范围依次为8 0 1 0 一2 0 1 0g m l 、1 0 x 1 0 一1 o x l o g m l 、 50 1 0 - s20 1 0 6 9 m l ；检出限( 3 a ) 依次为1 6 1 0 。9 9 i n ，、2 0 x 1 0 一g m l 、1 0 1 0 一g m l ，对 1 0 x l o - 6 9 m l 的金霉素、强力霉素、术犀草素进行了11 次平行洲定，其r s d 分别为2 9 0 、 l4 9 、o8 7 。将本法用于金霉亲眼膏、强力霉素药片及血样利尿样中盐酸金霉素、盐酸强 力霉素、木犀草素的测定，结果令人满意。 关键词：化学发光流动注射药物分析 英文摘要 a n a l y t i c a la p p l i c a t i o n so f c h e m i l u m i n e s c e n c ei n p h a r m a c e u t i c a l s a n a l y s i s p o s t g r a d u a t em a j o r i n gi na n a l y t i c a lc h e m i s t r y ：w a n g r u i f e n m e n t o r ：p r o f h u a n gy u m i n g a b s t r a c t c h e m i l u m i n e s c e n c ea n a l y s i si so n eo ft r a c ea n a l y t i c a lm e t h o d s ，w h i c hi sb a s e d0 1 2t h el i g h t e m i s s i o nd u r i n gt h ec o u r s eo fac h e m i c a lr e a c t i o n t h ec o u p l i n go faf l o wi n j e c t i o na n a l y s i s ( f i a ) s y s t e mw i t hc ld e t e c t i o nh a sb e e nr a p i d l yd e v e l o p e d ，b e c a u s ei to f f e r sas e r i a lo fa d v a n t a g e ss u c h a ss i m p l ei n s t r u m e n t ，r a p i da n a l y s i s ，h i g hs e n s i t i v i t y ，w i d el i n e a rr a n g e ，g o o dr e p e a t a b i l i t y ，a n de a s y i m p l e m e n t a t i o n t h u s ，t h i st e c h n i q u ec o u l db ea u s e f u lt o o lf o rt h eq u a l i t yc o n t r o lo f p h a r m a c e u t i c a l p r e p a r a t i o n s t h i sp a p e rc o n s i s t so ft w op a r t s i nt h ef i r s tp a r t ，i tw a ss u m m a r i z e dt h a tt h ep r i n c i p l e ，o r i g i o n ， d e v e l o p m e n t ，a n da p p l i c a t i o no fc h e m i l u m i n e s c e n c et ot h ep h a r m a c e u t i c a l sa n a l y s i s i nt h es e c o n d p a r t ，s o m ee x a m p l e s w e r e g i v e nt o d e m o n a t r a t et h ea p p l i c a t i o n so fc h e m i l u m i n e s c e n c ei n p h a r m a c e u t i c a la n a l y s i s t h e s ee x a m p l e sa r ea sf o l l o w s ： 1 c e r i u m ( i v ) 一r h o d a m i n ebs y s t e mf o rt h ed e t e r m i n a t i o no fs y n e p h r i n e ar a p i da n ds e n s i t i v ef l o wi n j e c t i o nc h e m i l u m i n e s c e n c em e t h o di sd e s c r i b e df o rt h e d e t e m a i n a t i o no fs y n e p h r i n e ，w h i c hi sb a s e do ni t se n h a n c e m e n te f f e c to fl i g h te m i s s i o nf r o mt h e r e a c t i o no fc e r i u m ( i v ) a n dr h o d a m i n ebi na c i dm e d i u m u n d e rt h eo p t i m u mc o n d i t i o n s ，t h e p r o p o s e dm e t h o da l l o w st h em e a s u r e m e n to fs y n e p h r i n eo v e rt h er a n g eo f5 0 1 0 9 1 o x l o 。6 g m lw i t had e t e c t i o no f1 0 x l o g m l ( 3 c o t h er e l a t i v es t a n d a r dd e v i a t i o ni s2 9 ( n 2 11 ) f o r 英文摘要 1o 1 0 g m ls y n e p h r i n e t h em e t h o dh a sb e e na p p l i e d s a t i s f a c t o r i l y t ot h ed e t e r m i n a t i o no f s y n e p h f i n ei nf l u i d sa n dc i t r u sf r u i t s t h er e s u l t sa g r e ew e l lw i t ht h o s eo b t a i n e db yh p c l o nt h e b a s i so fi n v e s t i g a t i o n so ff l u o r e s c e n c es p e c t r u mo ft h er e a c t i o n ，ap o s s i b l em e c h a n i s mf o rt h i s r e a c t i o nw a sp r o p o s e d 2 l u m i n o l f e r r i e y a n i d es y s t e m f o rt h ed e t e r m i n a t i o no fs y n e p h r i n e i tw a sf o u n dt h a tt h el i g h te m i s s i o np r o d u c e db yt h eo x i d a t i o no fl u m i n o lb yp o t a s s i u m f e r r i c y a n i d ei nt h eb a s i cm e d i u mw a se n h a n c e db ys y n e p h r i n e ，ad r u gf o ra n t i o b e s i t yt r e a t m e n t t h e o p t i m u mc o n d i t i o n sf o rt h i sc h e m i l u m i n e s c e n tr e a c t i o nw e r es t u d i e di nd e t a i lb yaf l o wi n j e c t i o n s y s t e m an e w , s i m p l ea n dr a p i dm e t h o dh a sb e e nd e v e l o p e du n d e rt h eo p t i m u mc o n d i t i o n sf o r d e t e r m i n a t i o no fs y n e p h r i n e ap o s s i b l em e c h a n i s mo ft h i sr e a c t i o nw a sp r o p o s e db a s e do nt h e c h e m i l u m i n e s c e n ts p e c t r ao fr e a c t i o ni nt h eo p t i m u mc o n d i t i o n s ，c li n t e n s i t i e sa r ep r o p o r t i o n a lt o c o n c e n t r a t i o n so ft h es y n e p h r i n ei nt h e8 0 x 1 0 - 9 1 0 x 1 0 e 2 m lr a n g e t h el i m i to fd e t e c t i o ni s 16 x 1 0 一g m l ，t h er e l a t i v es t a n d a r dd e v i a t i o n ( n = 1 1 ) i s2 5 9 f o r0 5 g g m ls y n e p h r i n e t h e m e t h o dh a sb e e na p p l i e dt ot h ed e t e r m i n a t i o no fs y n e p h r i n ei nt h eh e r b a lp r o d u c t sa n db i o l o g i c a l f l u i d sa n dc i t r u sf r u i tw i t ht h es a t i s f a c t o r yr e s u l t s 3 c h e m i l u m i n e s c e n c ed e t e r m i n a t i o no f c h l o r t e t r y c y c l i n eh y d r o c h l o r e d e ， d o x y e y e l i n eh y e l a t e ，a n dl u t e o l i n as i m p l ef l o wi n j e c t i o nc h e m i l u m i n o m e t r i cm e t h o df o rt h ed e t e r m i n a t i o no fc h l o r t e t r y c y c l i n e h y d r o c h l o r e d e ( c t c ) ，d o x y c y c l i n eh y c l a t e ( d c ) ，a n dl u t e o l i nh a v eb e e nd e v e l o p e d t h em e t h o d s a r eb a s e do nt h ec e r i u n f f i v ) 一r h o d a m i n e6 gs y s t e m u n d e rt h eo p t i m u mc o n d i t i o n s ，t h el i n e a r r a n g e sa r e 8 0 1 0 9 2 0 1 0 g m l ，1 0 1 0 一1 o x l 0 g m l ，a n d5 0 1 0 - s 2 0 1 0 。6 9 m lf o r c t c ，d c ，a n dl u t e o l i n ，r e s p e c t i v e l yt h el i m i t so fd e t e c t i o n ( s n = 3 ) a r e1 6 10 9g m l , 2 0 1 0 。9 g m l ，1 0 x10 一g m lf o rc t c ，d c ，a n dl u t e o l i n ，r e s p e c t i v e l y t h er e l a t i v es t a n d a r dd e v i a t i o n s ( n = 1 1 ) a r e2 9 0 ，1 4 9 ，o 8 7 f o r1 0 x 1 0 一g m lc t c ，d c ，a n dl u t e o l i n ，r e s p e c t i v e l yt h e m e t h o d sh a v eb e e ns u c c e s s f u l l ya p p l i e dt ob i o l o g i c a lf l u i d sa n dp h a r m a c e u t i c a lp r e p a r a t i o n s t h e m e c h a n i s mo ft h ec h e m i l u m i n e s c e n c er e a c t i o ni sb r i e f l ye x p l a i n e dw i t hs p e c t r a le v i d e n c e k e y w o r d s ：c h e m i l u m i n e s c e n c ef l o wi n j e c t i o np h a r m a c e u t i c a l sa n a l y s i s 4 综述 综述部分 化学发光反应( c h e m i l u m i n e s c e n c er e a c t i o n ) 是指在常温下，在一些特殊的化学反应体系 中，物质进行化学反应时释放出的能量被处于基态的反应物( 或生成物、反应中间体) 分子吸 收，电子从基态跃迁到激发态，当返回基态时，激发态的电子把吸收的能量以光的形式辐射 出来，产生的光称为化学发光。基于化学发光反应而建立起来的分析方法，称为化学发光分 析f c h e m i l u m i n s c e n c ea n a l y s i s ，简称c o ) 。化学发光分析法因其具有仪器简单，易操作、检测 速度快和灵敏度高等特点在分析化学中得到了广泛的应用。本文简单介绍了化学发光的基本 原理、产生及发展，化学发光分析法在药物分析方面的应用。 1 、化学发光的基本原理及其特点 l1 化学发光的原理 化学发光是指在某些化学反应中，反应的中间体或产物由于吸收了反应释放的化学能而 处于电子激发态，当其回到基态时伴随产生的光辐射现象。根据化学发光反应在某一时刻的 发光强度或反应的发光总量来确定反应中相应组分含量的分析方法，称为化学发光分析。 1 2 化学发光的测定原理 一个化学反应要产生化学发光现象，必须满足以下条件：第一是该反应必须提供足够的 激发能，并由某一步骤单独提供，因为前一步反应释放的能量将因振动弛豫消失在溶液中而 不能发光；第二是要有有利的反应过程，使化学反应的能量至少能被一种物质所接受并声称 激发态：第三是激发态分子必须具有一定的化学发光量子效率释放出光子，或者能够转移它 的能量给另一个分子使之进入激发态并释放出光子。 1 3 化学发光的类型 根据化学发光反应类型的不同，可将化学发光分为直接化学发光和间接化学发光。 1 3 1 直接化学发光： 直接化学发光反应是指被测物作为反应物参加化学发光反应，生成电子激发态产物分之， 此初始激发态能辐射光子。可以表示为： a + b + c 4 + d c c + h u 式中a 和b 通过反应生成电子激发态产物c + ，当c + 跃迁回基态时，辐射出光子h u 来。 1 3 2 间接化学发光 间接化发是指被测物分子通过化学反应后初始激发态分子不直接发光，而是将其能量转 移给另一能量接受体，使其处于激发态，而它跃迁回摹态时，产生发光。可由下式表示 a + b 斗c + + d c + + e e 4 + f e 4 e + h u 式中c + 为能量给予体，e 为能量接受体，在化学发光分析中，许多荧光化合物常被用作 能量接受体，接受激活态产物的能量而发光。藉以提高化学发光灵敏度。 2 、化学发光的产生及其发展 2 1 化学发光的发现 发光现象在自然界中通常发生在生物体内，最明显的例子是萤火虫发光，因而人们认识 这种现象是从生物发光开始的。十九世纪后期人们发现简单的非生物有机化合物也能产生化 学发光。1 8 7 7 年，r a d i z i s z e w s k i 1 l 发现咯吩碱( 2 ，4 ，5 三苯基咪唑) 在碱性介质中被过氧化氢 等试剂氧化时发出绿色的光。1 9 2 8 年，a l b r e c h t 2 1 观察到鲁米诺( 3 - 氨基苯二甲酰肼) 在碱性 介质中的化学发光行为。这是化学发光史上的一个重要里程碑。1 9 3 5 年，g l e u 和p e t s c h 3 】第 一个报告了光泽精( n ，n 一二甲基二吖啶硝酸盐) 与过氧化氢反应产生化学发光。 2 卫化学发光体系 2 2 1 鲁米诺化学发光体系 鲁米诺属酰肼类有机化合物。它性质稳定，结构简单，易于合成，而且无毒，不污染环境， 水溶性较好，是迄今应用最广泛且量子效率最高的发光试剂之一。 鲁米诺发光体系的应用主要有以下几种类型：( 1 ) 利用金属离子或金属离子化合物的催 化或抑制进行直接或间接检测。如l i 等人【4 】基于c u ( i i ) 一蛋白络合物对碱性条件下 l u m i n o l h 2 0 2 的发光反应有催化作用，建立了测定人血清白蛋白、人r _ 球蛋白、蛋清蛋白的 化学发光方法，检出限在0 0 3 - 1 9 9 m l 之间。基于c o ( 1 0 对l u m i n 0 1 h 2 0 2 催化作用能够测定 维生素b 1 2 【5j 。( 2 ) 基于对鲁米诺体系化学发光的增加或抑制来进行测定。如对氨基苯酚抑制 l u m i n o l - d m s o - n a o h e d t a 体系发光来测定对氨基苯酚1 6 1 ，其线性范围为 2 5 x 1 0 - i o _ 50 x 1 0 8g m l 。西维因增强鲁米诺高锰酸钾发光来测定其含量【”，检出险为 5 - 1 0 0n gm l1 。基于对鲁米诺铁氰化钾体系抑制发光来测定茚磺苯酰氨 8 j ，线性范围为1x 1 0 书 - 1 o x l 0 1gm l 一。( 3 ) 鲁米诺电化学发光测定物质。m a r q u e t t e 用鲁米诺电化学发光法测定 了葡萄糖和乳酸1 9 1 。s o h e lr a n aa n dk e i e t s ut a m a g a k e 通过电化学产生h 2 0 2 ，鲁米诺体系测定 h ，o ，【1 0 1 。 2 2 2 高锰酸钾化学发光体系 在酸性介质中，高锰酸钾可以氧化某些在还原性药物而发光，如酸性介质中高锰酸钟氧 化头孢羟氨苄，吗啡旧，水杨酰氨【1 3 1 ，抗坏血酸【1 叫而产生化学发光。通常在酸性高锰酸钾 体系中加入一些物质，如甲醛的加入可以使高锰酸钾氧化尿酸 1 5 j 、巯嘌呤 ”1 ，茚磺苯酰氨旧 的化学发光强度增强许多。连二驱硫酸钠的加入可以使高锰酸钟测定维生素b 6 f ”1 、利血平 的发光强度增强。抗坏血酸在酸性介质中能与高锰酸钾反应，从而抑制高锰酸钾一i ，u m i n o l 体 系的化学发光，测定了药物中的抗坏血酸。 2 2 3 c e ( i v ) 化学发光体系 c e 0 v ) 与某些还原性药物反应时，能产生弱的化学发光，加入罗丹明6 g ，罗丹明b 、奎 宁等荧光物质时，利用荧光的化学激发，能大大增强体系的发光强度。c e ( i v ) - r h b 体系对 抗坏血酸川、d n a t 2 ”、酚噻嗪【2 3 】。c e ( i v ) 一r h 6 g 对盐酸氯丙嗪 2 4 、葛黄素、巯丙酰甘氨酸 2 , 5 1 、双氢氯噻嗪1 2 7 j 。c e ( i v ) n 氧化r u ( b i p y ) 32 + 产生化学发光，某些有机酸、有机碱及药物 能增强该体系的发光强度。如t o m a s 等【2 8 l 发现丙酮酸和柠檬酸与c e ( i v ) 反应在r u ( b i p y ) 3 2 + 参与下，分别在不同时间产生强的化学发光。并用停留技术测定了丙酮酸和酒石酸，其检出 限分别为：o 3n g m l 和0 ，1 ) a g m l 。f a t m a 等通过c e ( 1 v ) 反应在r u ( b i p y ) 3 ”体系测定氟灭酸 和甲灭酸，检出险分别为3 6 x 1 0 m o l l 、2 1 1 0 m o l l 。 2 2 4 光泽精化学发光体系 光泽精( 1 u c i g e n i n ) 是使用较早的一种发光试剂，在碱性介质中如被过氧化氢等氧化剂 氧化后的产物吸收了反应放出的热量而处于激发态，激发态将发射蓝绿光并回到基态。在碱 性介质中，可与还原性物质作用发光。m i n gl ia n ds a n gh a kl e e 3 0 1 等研究了a s 增强过氧化氢 一光泽精化学发光强度来测定其含量，检出险为5 0 1 0 。3 g 。利用光泽精体系测定钒叫，检 出险为3 x 1 0 。7 9 几；【3 2 胶束增敏光泽精化学发光测定f e ( i i i ) ，其检出险为2 x 1 0 。2 9 m l 。 2 2 5 过氧化草酸酯化学发光体系 由多氯代水杨酸酯类化合物与草酰氯反应生成的草酸酯、过氧化氢和荧光剂为主要组成 的化学发光体系，简称为过氧草酸酯类化学发光体系，是迄今为止发现的最有效的化学( 非生 物) 发光体系。过氧草酸酯类化学发光体系最早发现于6 0 年代，多用于物质的间接化学发光检 测。在这类化合物中最常用的是双一( 2 ，4 ，6 三氯苯) 草酸酯( t c p o ) 帮i x x 一( 2 ，4 一二氮苯基) 草酸酯 ( d n p o ) 。过氧草酸酯类化学发光体系具有发光效率高( 量子发光效率超过2 0 3 0 ) ，强度大， 寿命长，颜色可调等特点，适合于各种化学光源的研制和开发。革酸酯类衍生物在含水溶剂 中不稳定，部分水解后的单取代衍生物会被进一步降解，脱去羧基和羰基。更严重地是，草 酸脂类和与其搭配的荧光化合物水溶性差，不适于和蛋白质偶合。这些缺陷大大限制了它们 8 综述 在实际中的应用。 过氧草酸酯化学发光体系主要用于过氧化氢的定量或一些荧光团的分析。h i d e t o s h i a r a k a w a 通过过氧化草酸酯化学发光测定儿茶酚郾1 ； v a h a ns t e p a n y a n 用t c p o h 2 0 2 化学发光 来分析橄榄油中的过氧化值1 3 4 】：d o r i ss a l e r n o 通过t c p o h 2 0 2 化学发光来比较不同荧光染料 对膜蛋白的检测口5 j ；m o j t a b as h a m s i p u r 研究了在水杨酸溶液中吖啶黄存在下的过氧化草酸一过 氧化氢化学发光行为 3 6 1 ；一些易被氧化的非荧光发射物质如s 0 2 、n 0 2 、苯胺、有机硫化物等 能碎灭过氧化氢、草酸酷、荧光团之间的化学发光，通过检测发光强度的降低值可以进行这 些物质的分析。m o j t a b as h a m s i p u r 研究了在7 一氨基4 三氟甲基a 苯并毗哺酮溶液中三乙股对 t c p o h 2 0 2 化学发光的猝灭效应 3 7 1 ：m o j t a b as h a m s i p u r 含硫氨基酸l 一半胱氨酸和i 。一蛋氨酸在 7 - 氨基一4 三氟甲基a 苯并吡喃酮中对一t c p o h 2 0 2 化学发光的猝灭效应；与高效液相色谱联 用过氧化草酸化学发光体系测定了牛奶中磺酰氨【3 9 】和苯氧基一n 甲基氨基甲酸酯残留量0 4 m 。 2 3 与其它技术的联用 化学发光分析具有灵敏度高( 检测限可达1 0 。2t o o l l ) ，线性范围宽，适合微量和痕量分 析，分析速度快，仪器设备简单，易于实现自动化等特点，是当前化学分析和痕量分析研究 的热点。然而，化学发光分析由于选择性较差，其与其它分离技术的联用受到越来越广泛的 应用。 2 3 1 与高效液相色谱联用 高效液相色谱法( h p l c ) 是在经典液相色谱法的基础上，引入了气相色谱法的理论和技 术，以高压输送流动相，采用高效固定相及较高灵敏度检测器，发展而成的现代液相色谱分析 方法具有分离效率高、选择性好、分析速度快、操作自动化和应用范围广的特点l 谴着x q 对药物需求的不断增长，开展对药物的药代动力学、毒理学研究和质量控制，建立快速、灵敏、 高选择性的分析方法迫在眉睫实践表明，h p l c 是一种非常重要、有效和普遍使用的药物分 析方法，已被各国药典广泛采用作为药品定性鉴别、纯度检查和含量测定的法定方法液相色 谱法与化学发光联用( h p l c c l ) ，己成为种有效的痕量及超痕量分析技术，并被广泛运用于 环境、医学、生命科学等领域中，用于测定复杂的、含量低的混合物中组分的分析。t 。6 1 近 年来该技术发展较迅速。 23 2 与低压离子色谱联用测定金属离子 金属离子的化学发光分析主要是利用金属离子对化学发光反应的催化或抑制作用来实现 的h ”。此方法灵敏度高，仪器简单，受到广泛的应用。然而，在同条件下，许多金属离子可以 催化或抑制同一体系的化学发光反应，给选择性地测定某些离子带来困难，从而限制了其实际 综述 应用。虽然用掩蔽等方法克服某些干扰，但多数物质的分析必须先采用分离手段。高效液相 色谱作为一中优良的分离手段被广泛应用，但是通常须配有价格昂贵的高压泵。为此，采用 低压离子与化学发光联用测定金属离子。有报道的用该法测定水中的过渡金属离子和铜离子 4 7 - 4 8 。 2 2 3 与毛细管电泳( c a p i l l a r ye l e c t r o p h o r e s i s ) 联用 毛细管电泳作为分离复杂混合物最强有力的分离手段，广泛应用于生物、生物医药、环 境和食品科学领域中。由于它的分析量达到皮克升，因而作为对生物微环境中所要求的极其 限量分析的理想分析方法【4 9 】。同时，这对高灵敏度的检测形成了挑战。化学发光由于其高灵 敏度在流动注射分析，高效液相分析及免疫分析中被广泛应用 5 0 - 5 3 l 。由于它的检测线较低、 线性范围宽，设备简单，与毛细管电泳联用( c e c l ) ，受到越来越广泛的应用。h u 对一元 胺和邻苯二酚州的测定，检出限为o 1 8 。1 1 8 “m ，0 0 9 m ；s u q i n h a n ，e r b a o l i u 对儿茶醛和 儿茶酸【5 5 的分析，检测限分别为7 0 1 0 8 m o l l ，5 0 1 0 m o i l ；柃测三价铬和六价铬 5 6 】：对 氨基酸【5 7 1 、生物碱【5 8 】的分析：在免疫分析的中的应用 5 9 - 6 0 。 3 、化学发光法在药物分析中的应用 药物是用来用来预防、治疗、诊断疾病和帮助机体恢复正常机能的物质。任何药物都必 需达到二定的质量标准。药物检测是研究药物的化学检验、药物稳定性、生物利用度、药物 临床检测和中草药有效成分的定性和定量分析等的一门学科，其目的是保证药物的质量和用 药的安全有效。常用测定药物方法有容量滴定法、紫外一可见光度法、荧光法、原子吸收法、 气相色谱、高效液相色谱、薄层扫描法、红外光谱和质谱等方法。随着药物分析的发展，要 求分析方法灵敏、快速、准确、自动化。原有的一些灵敏度低、操作烦琐的化学分析法将被 逐步淘汰，有些大型仪器由于过于昂贵而难以推广，而化学发光技术具有灵敏度高( 检测限可 达1 0 。2 m ) 、线性范围宽( 3 6 个数量级) 、不需光源，可避免瑞利和拉曼散射等干扰，大大提高 了信噪比，分析速度快，仪器设备简单，易于实现自动化等特点，是当前分析化学研究的热 点。周同惠刚、和庞志功【6 2 1 6 3 】都曾对发光分析在药物检测中的应用作了评述；a n d r e w s 6 4 等介 绍了化学发光在临床及药物检测中的应用。以下对近年来化学发光法在药物测定中的应用作 详述。 3 1 对抗生素药物的分析 抗生素对于治疗人及动物的某些疾病有很好的效果，主要包括b 一内酰胺类、氨基糖苷类、 四环素类、大环内酯类等，用于医疗的抗生素的制备、研究和分析府阳f 成为医学中较重要 的课题。化学发光法对抗生素药物的测定报道。化学发光法对口一内酰胺类药物测定6 5 石6 1 ，对 四环素类药物的测定6 7 1 ；头孢菌素类药物的测定【6 8 - 6 9 。下表是化学发光法对抗生素药的分析 总结。 表1 抗生素的化学发光分析 被测物发光体系检出限 线性范丽 文献 头孢氨苄k m n 0 4 - h + o0 9 6 i a m l 0 8 2 5 i l g m l 7 0 头孢拉定k m n o j h +01 0 i t g m lo8 3 2 t g m l7 0 卷须霉索 c e ( 1 v ) - s o s 2 一一t b 3 7 31 1 0 1 0m 0 1 l 9 o 1 09 _ 10 x 1 0 6m o i l 7 1 l 红霉素k m n 0 4 h + 0 2 0 t t g m lo 7 0 7 0 0 r i g m ， 7 2 士霉素 n a l 0 4 一h 2 0 2 4 _ 3 1 09 9 m lix1 0 - 86 x1 0 一o g h n l7 3 金霉素 n h “h 2 0 2 00 l n m o l o 2 5 2 5 n m o l7 4 四环素 h 2 0 2 乙腈o h 00 6 l ，t m 0 1 0 2 5 k t m o l 7 5 氨氯吡咪 n b s o h 。 0 1 6 1 t g m l0 5 1 5 0 l t g m l 7 6 人黄素l u m i n 0 1 h 2 0 2 一c 0 2 + 1 6 n m 0 1 00 1 2 5 9 u m o i7 7 盐酸环丙沙星 c e ( i v 卜s 0 3 0 2 7 1 t g m l 1 0 0 2 0 0 1 a g m l 7 8 3 2 氨基酸的分析 快速、准确、灵敏地测定生物样品中氨基酸的含量，对于研究生生命科学具有十分重要 的意义。然而由于大多数氨基酸分子对紫外可见光的吸收很弱，也没有特征性的荧光【7 9 1 ，目 前氨基酸的分析主要采用经色谱分离后用分光光度法 8 0 - 8 1 】、荧光法8 2 1 检测器衍生物，但衍生 反映操作复杂且测定灵敏度较低。用化学发光法可以直接测定氨基酸。 表2 氨基酸的化学发光分析测定 被测物发光体系检出限 线性范围文献 脯氨酸 r u ( b i p y ) 3 2 + 1 0 1 0 8 m8 3 酪氨酸 铁氰化钾一1 3 糊精- 甲酸 00 5 9 9 m l1 0 一1 0 9 9 m l 8 4 半胱氨酸 c e ( i v ) 一奎宁 25 x 1 0 9 m 35 x 1 09 - 35 x 1 06 m8 5 鸟氢酸 l u m i n o l - h 2 0 2 4 x 1 0m 10 x 1 0 - 6 _ 24 1 0m 8 6 赖氨酸5 1 0 6 m1x1 0 16 1 0 - 4 m 8 7 3 3 生物碱类药物的分析 生物碱( a l k a l o i d ) 是生物体内一种含氮的具有显著生理活性的有机碱性物质，其分子结 构多属于仲胺、叔胺或季胺，常含有含氮杂环。按照生物碱的基本结构，可分为6 0 类左右， 如有机胺类、吡咯烷类、吡啶类、异喹啉类、吲哚类、莨菪烷类、嘌呤类和甾体类等。生物 碱类药物的含量测定方法很多，其测定多利用其整个分子的碱性，但不够灵敏， 化学发光法 以其高灵敏度的优点在生物碱类药物的分析中已得到越来越广泛的应用。海洛因、吗啡、可 待因、马钱予碱、麻花碱都是一些极易导致成瘾的生物碱，对它们的分析及研究在药物分析 领域中有较重要的意义。化学发光法对生物碱类药物的分析有对马钱子碱的分析【8 8 】：对吗啡 的分析1 8 9 。9 0 ；对多巴胺的分析i ：9 1 ；肾上腺索的分析 9 2 - 9 3 1 。 3 4 维生素的分析 化学发光法在维生素分析中被广泛应用。h o n gg e n g 采用l u m i n 0 1 s 0 3 2 - 体系测定v c 9 4 1 z h e n g h u as o n g 9 5 】采用l u m i n o l 0 2 一c o 、i i ， i 能, 够b 】2 ，检出限为5 0 x 1 0 1 1g l ，线性范围 为2 0 1 0 1 0 1 2 1 0 一g l ；w e iq i n 9 6 1 采用l u m i n 0 1 h 2 0 2c o ( n ) n 定b 1 2 ，检出限为 3 5 1 0 一g g m l ，线性范围为1 0 1 0 - 31 0 肛g m l ； 3 5 抗结核、降压药物的分析 普萘洛尔、卡维地尔、利血平、卡托普利是临床i 二常用的降血压药物；利福平、异烟肼 是抗结核药物。它们的化学发光分析测定见下表。 表3 抗结核、降压药物的化学发光测定 被测物发光体系线| 生范围检出限文献 普綦洛尔 c e o v ) 一r h b8 0 1 0 - 8 8 0 1 0 。6 9 m l2 x 1 0 8 m l 9 7 卡维地尔 l u m i n 0 1 c l o 12x 1 0 - 7 _ 3 0x 1 0 一m o l l8 7 1 09 m o l l9 8 利血平k 1 0 4 酸钾一h 2 0 2 h + 1 0 x 1 0 1 0 x 1 0 4 m l 27 1 0 “g m l9 9 l u m i n o l h 2 0 2 50 1 0 乙5 0 x 1 0 。g m l 2 o x o 。g m l 1 0 0 卡托普利 c e o v ) 一r h 6 g 1 1 0 _ 0 2x1 0 1 m o l l2 1 0 m o l l 1 0 1 利福平h 2 0 2 - c u 2 + 1 0 1 0 - 73 0 x1 0 6g m l8 0 1 0 。8 g m l 1 0 2 异烟肼 k m n 0 4 o h 10 x1 0 。8 5 0 x1 0 6g m l7 0 x 0 。9g m l1 0 3 参考文献 【i 】r a d z i s z e w s k ib b e r ，1 8 7 7 ，1 0 ，7 0 ：3 2 1 【2 a l b r e c h t h0 ，p h y sc h e m ，1 9 2 8 ，a 1 3 6 ：3 2 1 3 g l e u ，p e t s c h a n g e wc h e m ，1 9 3 5 ，4 8 ：5 7 【4 】庞志功，汪宝琪，分椭f 学学援，1 9 9 7 ，1 3 ：2 4 3 5 n i c o l a up i z h ，m a n u e lm i r 6 ，a n a l c h i m a c t a ，2 0 0 2 ，4 6 7 ：l5 5 6 h o n g x u ，c h u n f e n g d u a n ，z h i f e n g z h a n g ，w a t e r r e s e a r c h ，2 0 0 5 r3 9 ( 2 ) ：3 9 6 ( 7 j o s 4f e r n a n d o h u e r t a s p d r e z ，a n a mg a r c i a - c a m p a f i a ，a n a lc h i ma c t a ，2 0 0 4 ，5 2 4 ( 1 ) ：1 6 1 8 8z h o u p i n gw a n g ，z h u j u nz h a n g ，p h a r m b i o m e da n a l ，2 0 0 4 ，3 5 ( 1 ) ：1 9 】9c a m a r q u e t t e ，l j b l u m ，a n a lc h i ma c t a 1 9 9 9 ，3 8 1 ( 1 ) ：1 f 1 0 s o h e l r a n a a n d k e i e t s u t a m a g a k e b i o e l e c t r o c h e m i s t r y , 2