（影像医学与核医学专业论文）非酒精性脂肪肝成像方法的实验研究.pdf

上海交通大学 2 0 0 6 级博士学位论文 舢舢舢f f f i 删洲删 y 18 3 6 0 7 4 非酒精性脂肪肝成像方法的实验研究 s t u d yo fn o n a l c o h o l i cf a t t yl i v e ri m a g i n gt e c h n i q u e s 研究生姓名 研究生学号 指导老师 学科专业 研究方向 申请学位级别 论文提交日期 培养单位 张仲伟、 p t b 0 6 0 3 、 陈克敏教授 影像医学与核医学 腹部影像 博士学位 2 0 0 9 年9 月 交大医学院附属瑞金医院 关键词非酒精性脂肪肝，大鼠，c t , 磁共振成像，磁共振波谱成像 上海交通大学 学位论文原创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下， 独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本 论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本 文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。 本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。 学位论文作者虢缈嘶 嘞彳年夕月彳日 上海交通大学 学位论文版权使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定， 同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版， 允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的 全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫 描等复制手段保存和汇编本学位论文。 保密口，在一年解密后适用本授权书。 本学位论文属于 不保密回。 ( 请在以上方框内打“ ) 指导教师签名： 一 隰干伽铂 l万f ， 付，r 缈矿 名 啁 堑中， 者 手 储 矿 文 獗 敝 咖 位 期 学 日 非酒精性脂肪肝成像方法的实验研究 摘要 目的建立非酒精性脂肪肝的动物模型。以脂肪肝的病理分级为“金 标准”，对脂肪肝的多种成像方法的价值进行评价，成像方法主要包括 c t 和磁共振成像技术。 材料与方法3 2 只雄性s d 大鼠随机被分为对照组和高脂组( 一组， 二组和三组) ，对照组以基础饲料喂养l o 周后进行影像学和病理学检查； 高脂组以高脂饲料喂养，并在不同时期进行影像学和病理学检查。影像 学成像技术主要包括：肝脏的c t 检查；磁共振2 d 水脂分离技术、3 d 水脂分离技术、化学位移成像技术、磁共振弥散加权成像和磁共振质子 波谱成像。以脂肪肝的病理分级作为参照标准，采用r o c 曲线，对以上 的成像技术进行价值评价。本研究还将对照组和高脂组的血液生化指标、 生物指标进行比较，并将生化指标与1 h m r s 结果作p e a r s o n 相关分析。 结果磁共振质子波谱成像峰值比值、肝脏与腰大肌的c t 值比值、 2 d 水脂分离技术脂肪信号比值、磁共振质子波谱成像波峰下面积比值、 3 d 水脂分离技术脂肪信号比值、肝脏的c t 值、化学位移成像技术脂肪 信号值和磁共振弥散加权成像a d c 值的r o c 曲线下面积分别为o 8 5 1 ， 0 7 8 3 ，0 7 7 7 ，0 7 3 1 ，0 7 2 6 ，0 7 1 7 ，o 7 0 9 和0 6 9 1 。在血液生化指标中， 高脂二组的t c 明显高于高脂三组( 基础饲料后) 和对照组，p 0 0 0 0 1 。 高脂二组的l d l 明显高于高脂三组( 基础饲料后) 和对照组，p 0 0 0 0 1 。 高脂二组的t g 明显高于对照组，p = 0 0 0 8 7 ；高脂三组( 基础饲料后) 的 t g 明显高于对照组，p = o 0 0 4 3 。p e a r s o n 相关分析显示：t g ，l d l ，t c 与1 h m r s 结果之间的相关系数分别为r = 0 4 4 4 ，r = 0 3 7 8 ，r = 0 3 5 7 。高脂 二组的肝指数和肝脏湿重均明显高于高脂三组( 基础饲料后) 以及对照 组，p = 0 0 0 0 8 ，p = 0 0 2 8 1 ；p = 0 0 1 1 2 ，p 0 0 0 1 。高脂二组体重指数大于对 照组以及高脂一组，p = 0 0 0 5 7 ，p 0 0 0 0 1 。 结论本研究所用的造模方法可以较快地建立s d 大鼠脂肪肝模型， 操作简便，动物生存率高。高脂饲料可导致大鼠的肝脏增大，体型肥胖。 大鼠血液生化数据和生物指标的变化提示饲料配方的改变对于大鼠血液 中t c 和l d l 均有影响；t g ，l d l ，t c 与1 h m r s 之间存在轻度相关。 根据r o c 曲线，1 h m r s ，c t ，2 di d e a l ，3 di d e a l ，i p o p ，d w i 等 各种成像技术对于脂肪肝检查均有诊断效率，而以1 h m r s 峰值比值的诊 断效率最高。 【关键词】非酒精性脂肪肝；大鼠；c t ；磁共振成像；磁共振波谱成像 s t u d yo fn o n a l c o h o l i cr a t t yl i v e ri m a g i n gt e c h n i q u e s a b s t r a c t o b j e c t i v e m o d e lo fn a f la n i m a l si se s t a b l i s h e d ，a n dt h ev a l u eo f m u l t i p l ei m a g i n gt e c h n i q u e sf o rf a t t yl i v e ri m a g i n gi n s p e c t i o ng e t sa s s e s s e d b a s e do n t h e g o l ds t a n d a r d f o rp a t h o l o g i c a lg r a d i n g t h ei m a g i n g t e c h n i q u e si n c l u d ec t a n dm r i m a g i n gt e c h n i q u e s m e t h o d s3 2m a l es dr a t sw e r er a n d o m l yd i v i d e di n t of o u rg r o u p s ，o n e c o n t r o lg r o u pa n dt h eo t h e rh i g hf a t t yd i e tg r o u p s ( g r o u p # 1 ，g r o u p 拌2a n d g r o u p 拌3 ) c o n t r o lg r o u pw a ss u b j e c tt oi m a g i n ga n dp a t h o l o g ye v a l u a t i o n e n s u i n ga10 - w e e kn o r m a ld i e t ，w h e r e a st h eh i g hf a t t yd i e tg r o u pw a sf e d h i g hf a t t yd i e tf o r m u l a ，a n dw e n tt h r o u g hi m a g i n ga n dp a t h o l o g ye v a l u a t i o n a tv a r i o u ss t a g e s i m a g i n gt e c h n i q u e si n c l u d el i v e rc ts c a n ，2 di d e a l ，3 d i d e a l ，i o p , d w ia n d1 h m r s t h ep a t h o l o g i c a lg r a d i n gf o rf a t t yl i v e rg o t u s e da st h es t a n d a r df o rr e f e r e n c e s ，a n dt h ee f f e c t i v e n e s so ft h ei m a g i n g t e c h n i q u e sa f o r e s a i dg o ta s s e s s e dt h r o u g hr o cc u r v e t h i ss t u d ya l s o c o n d u c m dc o m p a r i s o no fb l o o db i o c h e m i c a li n d e xa n db i o l o g i c a li n d e xf o r b o t hc o n t r o lg r o u pa n dh i 曲f a t t yd i e tg r o u p ，a n ds t a t i s t i c a la n a l y s i sg o t a p p l i e db e t w e e n t h eb i o c h e m i c a li n d e xa n d1 h m r sv i ap e a r s o nc o r r e l a t i o n r e s u l t st h ep e a kr a t i of o r1 h m r s ，t h ec tv a l u er a t i oo fl i v e rt op s o a s m a jo r , 2 di d e a ll i p o s i g n a lr a t i o ，a r e au n d e rt h ep e a ko f1 h m r s ，3 d i d e a l l i p o s i g n a lr a t i o ，l i v e r sc tv a l u e ，i o pl i p o - s i g n a lr a t i oa n dd w i s a d c v a l u e ，p r e s e n t e db yt h ea u c o fr o c ，w e r er e s p e c t i v e l ye q u a lt oo 8 51 ， o 7 8 3 ，0 7 7 7 ，o 7 31 ，0 7 2 6 ，o 7 1 7 ，0 7 0 9a n d0 6 9 1 t h et cl e v e lo f h i g hf a t t y d i e tg r o u p 撑2w a sm u c hh i g h e rt h a nt h a to fh i g hf a t t yd i e tg r o u p 撑3 ( a f t e r n o r m a ld i e ta d m i n i s t e r e d ) a n dt h ec o n t r o lg r o u p ，p 0 0 0 01 t h el d ll e v e lo f h i g hf a t t yd i e tg r o u p 拌2w a sm u c hh i g h e rt h a nt h a to fh i g hf a t t yd i e tg r o u p 撑3 ( a f t e rn o r m a ld i e ta d m i n i s t e r e d ) a n dt h ec o n t r o lg r o u p ，p = 0 0 0 0 2 t h et g l e v e lo ff a t t yd i e tg r o u p # 2w a sm u c hh i g h e rt h a nt h a to fc o n t r o lg r o u p p = 0 0 0 8 7 t h et gl e v e lo ff a t t yd i e tg r o u p # 3 ( a f t e rn o r m a ld i e ta d m i n i s t e r e d ) w a sm u c hh i g h e rt h a nt h a to fc o n t r o lg r o u p ，p = 0 0 0 4 3 t h ep e a r s o n c o r r e l a t i o na n a l y s i ss h o w s ：t h erv a l u e sb e t w e e nt gl d l ，t ca n d1 h m r s w e r e0 4 4 4 ，0 3 7 8 ，0 3 5 7 t h el i v e ri n d e xa n dl i v e rw e i g h tl e v e lo fh i g hf a t t y d i e tg r o u p 撑2w e r ec o n s i d e r a b l yh i g h e rt h a nt h a to f h i g hf a t t yd i e tg r o u p 3 ( a f t e rn o r m a ld i e ta d m i n i s t e r e d ) a n dt h ec o n t r o lg r o u p ，p = 0 0 0 0 8 ，p = o 0 2 8 1 ； p = 0 0 11 2 ，p 0 0 0 0 1 t h eb m i l e v e lo fh i g hf a t t yd i e tg r o u p # 2w a sm u c h h i g h e rt h a nt h a to fb o t hc o n t r o lg r o u pa n dh i g hf a t t yd i e tg r o u p 拌1 ，p = o 0 0 57 ， p 0 0 0 0 1 c o n c l u s i o nt h em o d e lm e t h o da d o p t e di nt h i ss t u d ye n a b l e st h em o d e l o fs dr a t sf a t t yl i v e rt ob eq u i c k l yb u i l tu p ，w h i c hi se a s yt ob em a n a g e da n d h i g hl i v i n gr a t e h i g h f a t t yd i e tm a yr e s u l ti nr a t s l i v e rh y p e r t r o p h ya n d o b e s i t y t h er a t s b i o c h e m i c a lt e s tr e s u l t sa n dt h es h i f to fb i o l o g i c a ll e v e l s s u g g e s t st h a tt h ec h a n g eo f d i e ti n g r e d i e n t sm a ya f f e c tt h el e v e l so fb o t ht c a n dl d l a n dt h e r ea r es l i g h tc o r r e l a t i o nb e t w e e nt g ，l d l ，t ca n d1 h m r s b a s e do nt h er o c c u r v e ，t h ei m a g i n gt e c h n i q u e s ，s u c ha s 1h m r s ，c t ，2 d i d e a l ，3 di d e a l ，i o p ，d w ip r e s e n te f f e c t i v e n e s si nd i a g n o s i so ff a t t y l i v e r , a n d + 1 h m r sp e a kr a t i op r e s e n t st h eh i g h e s te f f e c t i v e n e s sa m o n ga l l t h e s et e c h n i q u e s 【k e yw o r d s l n o n a l c o h o l i cf a t t yl i v e r ( n a f l ) ；r a t s ； t o m o g r a p h y , x r a yc o m p u t e d ( c t ) ；m a g n e t i cr e s o n a n c ei m a g i n g ( m r i ) ； m a g n e t i cr e s o n a n c es p e c t r o s c o p y ( m r s ) 目录 前言1刚吾“一“”“”一”“”一“”“”一“”一”一”l 论文正文o ooobo 2 第一章大鼠非酒精性脂肪肝模型的建立2 l 材料和方法2 1 1 动物的选择、分组与饲养2 1 2 大鼠解剖，血液生化检查和肝脏取材3 1 3 大鼠的生化指标和生物学指标，以及统计学方法4 1 4 大鼠脂肪肝模型的病理学检查o oo d oo oo0 4 2 结果d oo o oo 4 2 1大鼠血液生化检测结果4 、 2 2 大鼠生物学指标7 2 3 大鼠组织病理学检查结果9 3 讨论1 0 第二章大鼠非酒精性脂肪肝模型的成像研究1 7 第一节大鼠肝脏的c t 检查1 7 l 材料和方法1 7 1 1大鼠的分组1 7 1 2 大鼠肝脏的c t 检查方法1 7 1 3 c ，i 值的测量1 7 _ 1 4统计学方法1 8 2 结果o oooo i 1 8 第二节大鼠肝脏的m r i 检查2 0 1 材料与方法o oo ooooqo 一2 0 1 1 大鼠的分组2 0 1 2 大鼠肝脏的m r i 检查方法2 0 1 3 一m r i 结果处理以及统计学方法2 1 2 结果2 2 第三节大鼠非酒精性脂肪肝模型的m r s 检查2 5 1 材料与方法2 5 1 1大鼠的分组2 5 1 2 大鼠肝脏的m r s 检查方法2 5 1 3m r s 后处理以及统计学分析2 6 2 结果o oo ooq 2 7 2 1m r s 统计结果2 7 2 2各种成像方法的r o c 曲线和曲线下面积a u c 2 8 2 3各种成像方法的临界点、灵敏度和特异度3 0 。 2 4 大鼠血液的t g ，l d l ，t c 与1 h m r s 结果的p e a r s o n 相关分析3 1 3 讨论3 1 4 本研究不足之处3 8 5 结论3 8 6 参考文献3 9 附录一脂肪肝无创性影像学检查4 2 附录二m r 对非酒精性脂肪肝的评价价值研究4 7 致谢0 0 010ooo0 5 5 英文缩写 a d c a l t a n o v a a s t a u c a w 4 4 b b m i d w i f o v f s e f s p g r g g t h d l i h m r s i h c l i p l d l m e t s m 砒 m r s n a f l n a s h n e x o p 符号说明 英文全称 a p p a r e n td i f f u s i o nc o e f f i c i e n t a l a n i n ea m i n o t r a n s f e r a s e a r ! a l y s i so f v a r i a n c e a s p a r t a ta m i n o t r a n s f e r a s e a r e au n d e rt h ec a l v e a d v a n t a g ew o r k s t a t i o n 4 4 d i f f u s i o ns e n s i t i v ef a c t o r b o d ym a s si n d e x d i f f u s i o nw e i g h t e dm r i m a g i n g f i e l do fv i e w f a s ts p i ne c h o f a s ts p o i l e dg r a d i e n t e c h o g a m m ag l u t a m y lt r a n s f e r a s e l l i g h - d e n s i t yl i p o p r o t e i n p r o t o n m a g n e t i c r e s o n a n c e s p e c t r o s c o p y i n t r a h e p a t i cc o m e mo fl i p i d i n p h a s e l o w d e n s i t yl i p o p r o t e i n m e t a b o l i cs y n d r o m e m a g n e t i cr e s o n a n c ei m a g i n g m r s p e c t r o s c o p y n o n - a l c o h o l i cf a t t yl i v e r n o n - a l c o h o l i cs t e a t o h e p a t i t i s n u m b e ro fe x c i t a t i o n o p p o s e dp h a s e 中文全称 表观弥散系数 丙氨酸氨基转移酶 方差分析 门冬氨酸氨基转移酶 曲线下面积 工作站4 4 弥散敏感因子 体重指数 弥散加权成像 视野 快速自旋回波 快速扰相梯度回波 y 一谷酰转肽酶 高密度脂蛋白 磁共振质子波谱成像 肝内脂质含量 同相位 低密度脂蛋白 代谢综合征 磁共振成像 m r 波谱成像 非酒精性脂肪肝 非酒精性脂肪性肝炎 激励次数 反相位 r o c r o i s a s s d s e s i s p s s t l w i t 2 w i t c t e t g 豫 一 2 d i d e a l 3 d i d e a l r e c e i v e ro p e r a t i n gc h a r a c t e r i s t i c受试者工作特征曲线 r e g i o no f i n t e r e s t 感兴趣区 s t a t i s t i c a la n a l y s i ss y s t e ms a s 统计软件包 s i g n a li n t e n s i t ys t a n d a r dd e v i a t i o n信号强度标准差 s p i ne c h o ” 自旋回波 s i g n a li n t e n s i t y 信号强度 s t a t i s t i c a lp a c k a g ef o rs o c i a ls c i e n c es p s s 统计软件包 t 1w e i g h t e di m a g i n gt 1 加权像 t 2w e i g h t e di m a g i n gt 2 加权像 t o t a lc h o l e s t e r o l总胆固醇 e c h ot i m e回波时间 t r i g l y c e r i d e 甘油三酯 r e p e a tt i m e 重复时间 2 di t e r a t i v ed e c o m p o s i t i o no f w a t e r a n df a tw i t he c h oa s y m m e t r ya n d2 d 水脂分离技术 l e a s t - s q u a r e se s t i m a t i o n 3 di t e r a t i v ed e c o m p o s i t i o no fw a t e r a n df a tw i t h e c h oa s y m m e t r ya n d3 d 水脂分离技术 l e a s t - s q u a r e se s t i m a t i o n 上海交通大学博士学位论文 非酒精性脂肪肝成像方法的实验研究 前言 随着我国人口老龄化、生活水平的改善、饮食结构和生活方式的改变，我国脂 肪肝及其相关疾病的发病率增长的势头不减，对民众健康的危害日渐明显非酒精性 脂肪肝病( n a f l d ) 的早期多为轻微病症( 非酒精性脂肪肝，n a f l ) ，无明显症状，所以没 有引起足够的重视，造成诊断和治疗上的滞后。如果任其发展，部分n a f l 会转变为非 酒精性脂肪性肝炎( n a s h ) 和肝硬化，甚至有肝癌的风险。因此，有效的影像学检查和 血液生化指标、生物学指标的检测对n a f l 的临床诊断非常有价值。本研究将对1 h m r s 、 肝脏c t 检查、2 di d e a l 、3 di d e a l 、i o p 、d w i 与脂肪肝的病理结果进行对照研究， 经过统计分析得出它们的工作效率。本研究还将对脂肪肝大鼠模型的血液生化指标、 生物学指标与正常对照组进行对照。 ， 非酒精性脂肪肝动物体内模型的实验动物以大鼠、小鼠、家兔最为常见。造模 方式主要分为营养失调性大鼠脂肪肝模型、药物性脂肪肝动物模型和化学损伤性脂 肪肝模型，其中以营养失调性大鼠脂肪肝模型模拟人类饮食习惯，具有模型稳定、可 重复性高、方法简便、动物死亡率低等特点，被广泛使用。本研究也采用s d 大鼠高 脂饮食来进行动物脂肪肝造模，并且对高脂配方作了调整，加入了低剂量的甲状腺 素抑制药丙基硫氧嘧啶。以我们的造模结果来看，此法造模时间较短，肝脏的脂肪变 性明显，而且大鼠存活率高。 上海交通大学博士学位论文 第一章大鼠非酒精性脂肪肝模型的建立 脂肪肝动物模型主要有体外和体内两种，目前体外模型在国内外的研究较少， 体内模型主要分为非酒精性脂肪肝模型和酒精性脂肪肝模型，实验动物以大鼠、小 鼠、家兔模型最为常见。非酒精性脂肪肝动物模型主要分为营养失调性大鼠脂肪肝 模型、药物性脂肪肝动物模型和化学损伤性脂肪肝模型。营养失调性大鼠脂肪肝模 型模拟人类饮食习惯，具有模型稳定、可重复性高、方法简便、动物死亡率低等特 点，被广泛使用。本研究也采用s d 大鼠高脂饮食来进行动物脂肪肝造模。 1 材料和方法 1 1 动物选择、分组与饲养 三月龄大雄性s d 大鼠3 2 只，来自上海斯莱克实验动物有限公司，中国科学院 实验动物中心，国家啮齿实验动物种子中心上海分中心。 基础饲料为：斯莱康s l a c o m ( 上海斯莱康实验动物有限责任公司) 辐照灭菌配合 饲料小鼠大鼠生长、繁殖颗粒饲料。原料组成：鱼粉、小麦、玉米、豆粕、麸 皮、植物油奶粉、苜宿草粉，以及各种维生素、矿物油、必需氨基酸等。 高脂饲料配方如下：基础饲料8 8 9 + 胆固醇1 + 丙硫氧嘧啶0 1 + 猪油1 0 ， 丙硫氧嘧啶( 上海复星朝晖药液有限公司) 。 3 2 只s d 大鼠分为4 组，对照组和高脂组( 一组、二组和三组) 。对照组给予基 础饲料喂养；高脂组的三组给予相同高脂饲料喂养。每笼4 只s d 大鼠，自由进食进 水。饲养条件为清洁级，由上海交通大学医学院实验动物科学部饲养( 见图1 4 ) 。定 ， 。 期观察s d 大鼠的活动、进食、反应、大便等。 对照组喂养1 0 周后影像学检查并做病理学检查，高脂一组喂养4 周后影像学检 查并做病理学检查，高脂二组喂养l o 周后影像学检查并做病理学检查，高脂三组喂 养1 0 周后影像学检查，然后该组再以基础饲料喂养8 周后行影像学检查并做病理学 检查，则为高脂三组( 基础饲料后) 。 2 上海交通大学博士学位论文 影像学检查之前的s d 大鼠麻醉均采用3 戊巴比妥按照l m l k g 进行腹腔注射麻 醉，麻醉药物注射后观察5 - , - , 1 0 分钟，待大鼠麻醉后再进行影像学检查，影像学检查 结束后s d 大鼠自然苏醒，本研究组无一例s d 大鼠因为麻醉而死亡。饲养过程中未 出现s d 大鼠死亡，未发现腹泻。 图l饲养环境，清洁级图2大鼠鼠笼，4 只一笼，自由进食 图3 大鼠高脂饲料，较基础饲料颜色深，油感 图4大鼠基础饲料 1 2 大鼠解剖，血液生化检测和肝脏取材 所有s d 大鼠的解剖均在上海交通大学医学院实验动物科学部进行。获得体重后 腹腔注射戊巴比妥，s d 大鼠被固定在解剖板上，剪开皮肤和腹部肌肉层，分离肠管， 3 上海交通大学博士学位论文 看清下腔静脉，抽取静脉血约4m l 有待生化检查，然后测量身长和尾长。分离肝脏， 檫净肝脏表面血迹，称重( 上海精密仪器厂，h a n g p i n g ，j y l 0 0 0 1 ) 。肝脏被即刻切下 两条，放在1 0 9 6 福尔马林液中固定，至少固定4 8 小时后送组织病理学检查。 静脉血被送到上海交通大学医学院附属瑞金医院临床检验科进行生化检测。生 化检测的仪器为b e c k m a nc o u l t e rs y n d r o n rc l i n i c a ls y s t e mu n i c e l rd x c8 0 0 ， 试剂为b e c k m a n 原装配套试剂。 1 3 大鼠的生化指标和生物学指标，以及统计学方法 所检测生化指标包括：谷草转氨酶a s t ( i u l ) 、谷丙转氨酶a l t ( i u l ) 、碱性磷 酸酶( i u l ) 、y 一谷酰胺转肽酶( i u l ) 、总胆红素( pm o l l ) 、甘油三酯( m m o l l ) 、 胆固醇( m m o l l ) 、高密度脂蛋白( m m o l l ) 和低密度脂蛋白( m m o l l ) 。 s d 大鼠主要观察的生物学指标为体重，身长，肝脏湿重；计算得到的数据为体 重指数( 体质量指数) ，肝指数。体重指数的计算公式如下：体重( k g ) 身长的平方 一 ( m 2 ) 。肝指数计算规划如下：肝脏湿重体重xi 0 0 。 计量资料采用单因素方差分析a n o v a ，f 检验，结果用均数标准差表示， 显著性水平取0 0 5 。统计软件使用s a s 9 1 。 1 4 大鼠脂肪肝模型的病理学检查 大鼠的肝脏标本经过1 0 福尔马林液固定后，逐级酒精脱水，常规石蜡包埋， 切片，he 染色，光镜观察，低倍视野下脂肪肝分级，高倍视野下观察肝细胞内变 化。还对肝脏是否有有炎症细胞聚集和浸润进行观察。脂肪变性：低倍视野下，无 脂肪变性为0 级；脂肪变性 75 为4 级。 2 1 大鼠血液生化检测结果 2 结果 4 上海交通大学博士学位论文 表一门冬氨酸氨基转移酶a s t ( i u l ) 统计结果 平均值标准差 高脂一组 1 2 8 0 0 0 5 5 2 6 5 高脂二组 1 5 1 1 2 56 4 5 6 7 高脂三组( 基础饲料后) 9 7 0 0 0 2 7 2 7 6 对照组 1 8 7 7 5 09 9 0 2 3 f = 2 6 4 ，p = o 0 6 9 2 组间差异无统计学意义 表二丙氨酸氨基转移酶a l t ( i u l ) 统计结果 平均值标准差 高脂一组 6 5 5 0 03 4 3 4 2 高脂二组 ，1 4 6 5 0 01 2 9 6 8 6 高脂三组( 基础饲料后) 3 0 8 7 52 6 4 2 对照组4 9 7 5 03 9 3 8 0 f4 2 4 ，p = 0 0 1 3 7 高脂二组与高脂三组( 基础饲料后) 之间差异有统计学意义，t 一2 5 2 p = o 0 2 4 4 表三碱性磷酸酶( i u l ) 统计结果 平均值标准差 高脂一组 1 4 2 5 0 04 6 9 7 1 高n - 组 1 3 1 0 0 04 2 6 3 1 高脂三组( 基础饲料后) 1 4 3 8 7 55 5 8 5 0 对照组 2 6 0 8 7 54 9 8 5 8 f1 2 4 3p 0 0 0 1 高脂二组与对照组之间差异有统计学意义，t = - 5 6 0 ，p 0 0 0 1 5 上海交通大学博士学位论文 表四y 一谷酰胺转肽酶( i u l ) 统计结果 平均值标准差 高脂一组3 6 2 52 2 6 3 高脂二组 3 2 5 00 7 0 7 高脂三组( 基础饲料后) 3 5 0 00 7 5 5 对照组2 7 5 01 4 8 8 f - - 0 5 7p = 0 6 3 9 6 各组间差异均无统计学意义 表五甘油三酯( m m o l l ) 统计结果 平均值标准差 高脂一组0 4 0 20 1 5 9 高脂二组一0 5 4 0 0 2 0 7 高脂三组( 基础饲料后) o 7 1 10 3 4 7 对照组0 2 7 60 0 9 7 f = 5 6 0p - - 0 0 0 3 9 、 高脂二组与对照组之间差异有统计学意义，t = 3 2 5 ，p = 0 0 0 8 7 高脂三组( 基础饲料后) 与对照组之间差异有统计学意义t = 3 4 0 。p = 0 0 0 4 3 表六胆固醇( m m o l l ) 统计结果 平均值标准差 高脂一组4 1 6 60 7 2 3 高n - 组 5 9 2 52 2 0 9 高脂三组( 基础饲料后) 1 0 6 80 2 6 0 对照组 0 7 1 3o 1 9 9 f = 3 6 5 2p 0 0 0 1 高脂二组与高脂三组( 基础饲料后) 之间差异有统计学意义，仁- 6 1 7 ，p 0 0 0 1 6 、 上海交通大学博士学位论文 高脂二组与对照组之间差异有统计学意义，仁6 6 4 ，p 0 0 0 1 表七高密度脂蛋白( m m o l l ) 统计结果 平均值标准差 高脂一组 1 8 2 80 2 6 9 高n - - 组1 1 1 0o 2 3 3 高脂三组( 基础饲料后) 0 7 2 60 2 7 1 对照组 0 7 5 8 0 3 8 4 f2 4 0 7 p 0 0 0 1 高脂二组与高脂一组之间差异有统计学意义，仁5 7 0 ，p 0 0 0 1 高脂二组与高脂三组( 基础饲料后) 之间差异有统计学意义，t - - - 3 0 3 ，p = 0 0 0 9 2 高脂二组与对照组之间差异有统计学意义，眈2 1 。p = 0 0 4 8 3 表八低密度脂蛋白( m m o l l ) 统计结果 平均值标准差 、 高脂一组3 2 4 50 7 3 0 高脂二组 5 0 5 3 2 6 2 2 高脂三组( 基础饲料后) 0 4 9 5o 1 9 9 对照组 o 3 2 10 0 6 7 上海交通大学博士学位论文 表九 sd 大鼠的体重指数( b m i ) 统计结果 平均值 标准差 高脂一组 5 5 4 90 4 0 2 高脂二组6 2 1 60 4 1 5 高脂三组( 基础饲料后) 6 1 0 00 2 0 3 对照组 5 3 4 9 0 1 7 2 f1 3 9 3p 0 0 0 1 高脂二组和高脂一组之间的差异有统计学意义，p - - 0 0 0 5 7 ，仁- 3 。2 6 、高脂二组和对照组之间的差异有统计学意义，p 0 0 0 1 ，t = 5 4 6 高脂三组( 基础饲料后) 和对照组之间的差异有统计学意义，p 0 0 0 1 ，t = 7 9 5 一 表十 sd 大鼠的肝脏湿重统计结果 平均值标准差 高脂一组1 2 5 8 l 0 6 5 0 7 高脂二组 1 2 2 4 21 4 1 3 高脂三组( 基础饲料后)1 0 4 4 1 0 9 6 3 对照组 9 0 5 30 4 3 5 f = 2 4 4 7p 0 0 0 1 高脂二组和高脂三组( 基础饲料后) 之间的差异有统计学意义，p = 0 0 1 1 2 ，t = - 2 9 8 高脂二组和对照组之间的差异有统计学意义， p 0 0 0 1 ，t - - - 6 1 0 高脂三组( 基础饲料后) 和对照组之间的差异有统计学意义，p = 0 0 0 4 2 ，t = 3 7 1 8 上海交通大学博士学位论文 表十一 sd 大鼠的肝指数统计结果 平均值标准差 高脂一组 3 7 8 10 1 9 0 高脂二组 3 2 7 7o 2 5 1 高脂三组( 基础饲料后) 。 2 8 0 5 0 1 5 9 对照组 3 0 4 90 0 7 8 f = 4 2 4 6p 0 0 0 1 高脂一组与高脂二组之间的差异有统计学意义，p = 0 0 0 0 6 ，t - - - - 4 5 4 高脂二组与高脂三组( 基础饲料后) 之间的差异有统计学意义，p = o 0 0 0 8 ， t - - - - 4 4 8 高脂二组与对照组之间的差异有统计学意义，p = o 0 2 81 ，t = 2 4 5 2 3 大鼠组织病理学检查结果 对照组sd 大鼠的肝脏外观呈酱红色，边缘锐利，质地柔韧而富有弹性，被膜光 滑，无结节，触摸切面有细颗粒状。模型组大鼠腹部脂肪组织丰富，肝脏轻度脂肪 变性的肝脏质地饱满，颜色略淡，肝缘略变钝：重度脂肪变性的肝脏体积最大，颜 色浅黄，切面油腻感( 见图5 8 ) 。所有sd 大鼠模型的肝脏脂肪变性组织病理学光镜 下的分级标准：低倍视野下，脂肪变性l 级为 75 u 3 。对照组大鼠肝脏光镜下显示，肝小叶完整， 肝细胞呈多边形，围绕中央静脉呈放射状；肝窦清晰，肝索排列整齐，肝小叶汇管 区基本结构清楚显示。模型组大鼠肝细胞体积较对照组不同程度增大，细胞质内含 有大小不等脂滴( 脂肪空泡) ，较大的脂滴将肝细胞核挤向一侧，肝细胞内小脂滴数 目不等。还可见肝细胞水肿变性和空泡样变性。本实验模型组大鼠的肝小叶的结构 基本存在，未见肝细胞灶状坏死，汇管区无明显的炎症细胞聚集和浸润，只见散在 少许单核细胞。以上组织病理学提示，本实验组的脂肪肝sd 大鼠模型的肝脏出现 脂肪变性，并未达到非酒精性肝炎的阶段。 9 上海交通大学博士学位论文 图5 大鼠解剖，对照组肝脏外观幽6 大鼠肝脏轻度脂肪变性，外观颜色变淡 图7 肝脏脂肪变性明显，外观偏黄，切面 图8 肝脏湿重称量 手感油腻 3 讨论 现在脂肪肝模型的建立主要有体外和体内造模两种，体外造模在国内外研究不 多，主要用于在细胞水平进行脂肪肝发病机制以及干预治疗的研究。体内脂肪肝动 物模型可以分为自发或诱发遗传突变引起以及后天获得性脂肪肝模型两大类，后者 通常由食物或药物处理造模。我们常以后天获得性脂肪肝模型为研究对象，目前已 经建立了包括酒精性和非酒精性以及其他脂肪性肝病等多种模型，主要用于探索脂 肪肝发病机制、药物筛选和诊断方法的评价等的研究。实验动物有大鼠、小鼠、家 兔、家鸭、小猪等，一般以大鼠、小鼠常用。酒精性脂肪肝动物模型就是利用酒精 对肝脏的直接的毒性造成肝脏的损害。用雄性w i s t a r 大鼠，通过不同浓度的白酒或 l o 上海交通大学博士学位论文 酒精进行灌胃或腹腔注射，1 2 周就可成功复制酒精性脂肪肝模型。其特点是造模 时间短，脂肪肝明显。但是其不符合大多数人脂肪肝形成的自然过程，而且灌胃较 为繁琐。由于不同的脂肪肝的发生机理各异，所造模型也不尽相同，目前已知临床 发病率较高的非酒精性脂肪肝主要为高脂血症性脂肪肝和肥胖性脂肪肝。高脂血症 性脂肪肝和肥胖性脂肪肝模型是给幼年大鼠喂高胆固醇、高脂肪饲料，可以引起高 脂血症，并可有肝脏脂肪变瞳3 。文献报道的方法较多，包括直接给大鼠喂改良的c m d