（茶学专业论文）苦丁茶化学成分和加工工艺研究.pdf

辑江大学疆攀靛论文 摘要 本文综述了苦丁茶的民间利用历史及植物涤源分类情况、蕃丁荼内含成分 灏定方法戳及研究迸震、麓丁茶活连磁究逶鼹。本研究敬瑟江省黉髑市大时冬 青苦丁荣( i l e x l a t i f o l i at h u n b )原料，研究了蒋丁茶加工工艺，同时利用h p l c 、 g c m s 、分光光度计、色差计、连续蒸馏萃取装鼹( s d e ) 等仪器，分析了大叶 冬青骜了茶含套夔主要鼹攀或分；建立了h p t c 灏定苦丁茶孛黄鬻炎赣凌芦了懿 测定方法；同时研究了添加单宁酶对苦丁荣祭汤浸出物化学成分的影响。研究 结果袭明： 1 测罔h p l c 分辑溅露菠丁茶中芦丁的食瀑，撼皮素徽量或痰鬃。按照实验 条件，芦丁和槲皮素出峰时间分别是3 2 5 m i n 、3 9 5 2 m i n 。经过统计分析得到 芦丁古恩和响应峰面积之问存在高度相关性。该方法芦丁和槲皮索添加回收率 分别达到9 8 。3 6 和9 8 8 5 ，相对标准差分别为1 0 1 和1 ，0 2 ，芦丁和擞皮 素浓度与h p l c 峰葱积鹣绫往捐关系数大予0 + 9 9 。表疆该溪定方法快速简便， 具有较高的准确度和精确度。 2 。本实验以衢州地区冬青科冬青属大叶冬青( 月黜 a t j f o l i at h u n b ) 鲜叶 惫藤粒，经萎蠲、蒸汽蒙渗，揉捻、缀形、予嫖毒褥予茶。缝合薅蕊枣评霾蔷 丁荼内含成分测定，找到了有利于提高苦丁茶外形和品质的较佳加工工艺组合。 试验取得了良好结果，制成的扁圆形苦丁茶色泽绿润，匀齐，香气、滋味俱佳。 3 。采霜s d e ( s i m u l t a n e o u sd i s t i l l a t i o na n de x t r a c t i o n ) 连续帮取装置萃取苦 丁茶褥气成分，以g c m s ( h p 6 8 9 0 5 9 7 3 ，嶷捷伦公司，威尔髑顿，美国) 分 析香精油组分。分析结果液明：苦丁茶香气成分共鉴定出5 4 种化合物，占香精 油总琢粳浆6 6 ，3 2 。秘类矮多的是烯( 2 0 释) ，其次醇( 8 秽) ，菇外醛、醌、 浙江大学硕士学位论文 酯备有5 种。鉴定出的5 5 种香气成分中含量较高的宵芳樟醇( 2 4 1 0 2 ) 。 4 使瘸不羁鬃摹宁酶，不霹是毽时阂对善丁茶承提数物亮度秘位学成分瓣荟舞究 表明，添加o 0 1 0 0 2 单宁酶后苦丁茶茶汤亮度墩高，在p h 6 0 条件下添加 酶，处理茶溺时闻3 0 m i n 4 5 m i n ，酶解效采最好 浙江大学硕士学位论文 a b s t r a c t t h ef o l ku t i l i t yh i s t o r yo fk u d i n g c h aa n dc o m p o n e n t sd e t e r m i n a t i o na n dt h e i r b i o c h e m i c a la c t i v i t i e sw e r er e v i e w e dh e r e t h ep r o c e s s i n gt e c h n i q u e sa n dc h e m i c a l c o m p o n e n t so fi l e xl a t i f o l i at h u n bw e r es t u d i e d t h em e t h o df o rd e t e r m i n i n gr u t i n a n dq u e r c e t i nb yh p l cw e r ee s t a b i l s h e d e f f e c to ft a n n a s ea m o u n t sa n dt r e a t m e n t t i m eo nt h eq u a l i t yo fl l e xl a t i f o f f 口t h u n bi n f u s i o nw e r ed i s c u s s e dt o o a l lt h e r e s u l t sw e r es h o w e da sb e l o w 1 t h ew a yf o rd e t e r m i n i n gr u t i na n dq u e r c e t i nb yh p l ci sr e l i a b l e r e t e n t i o n t i m eo fr u t i na n dq u e r c e t i na r e3 2 5 m i na n d3 9 5 2 m i l l ，r e s p e c t i v e l y t h er e c o v e r i e s o f r u t i na n dq u e r c e t i nw e r e9 8 3 6 a n d9 8 8 5 ，r e s p e c t i v e l y t h er d a t i v es t a n d a r d d e v i a t i o n so fr u t i na n dq u e r c e t i nw e r e1 0 1 a n d1 0 2 ，r e s p e c t i v e l y ；a l lo ft h e c o r r e l a t i o nc o e f f i c i e n t sb e t w e e nt h ec o n c e n t r a t i o no fr u t i na n dq u e r c e f i na n dt h e h p l cr e s p o n s ea r e a sw e r eh i 曲e rt h a no 9 9 ，w h i c hi n d i c a t e dt h a tt h em e t h o dw a s s i m p l e ，r a p i da n da c c u r a t e 2 i l e xl a t i f o l i at h u n bf r e s hl e a v e sf r o mx u z h o ud i s t r i c t ( z h e j i a n gp r o v i n c e ) w e r e ， p r o c e s s e db ys t e a m i n gs k i l l i n g ，w i t h e r i n g ，r o l l i n g ，s h a p i n ga n dd r y i n g a c c o r d i n gt o t h et a s t i n ga n dd e t e r m i n i n gr e s u l t so fm a d ek u d i n gt e a ，t h er e a s o n a b l ep r o c e s s i n g p a r a m e t e r sw e r ee s t a b l i s h e d 3 t h ea r o m ao fm a d e k u d i n g t e ai n f u s i o n w a sm e a s u r e db ys i m u l t a n e o u s d i s t i l l a t i o na n de x t r a c t i o n ( s d e ) e q u i p m e n t t h e ，r e s u l t sc a n l eo u tt h e r ew e r e5 4 t y p e sc o m p o n e n t si nt h es o l u t i o n ，6 6 3 2 o fa l lw e r ec o m p o s e do f2 0t y p e sa l k e n e ， 8t y p e sh y d r o x y lc o m p o n e n t s ，f i v ek i n d so fa l d e h y d a s ，5k i n d so fk e t o n e sa n df i v e 浙江大学硕士学位论文 e s t e r s l i n a l o o ls h o w e dt h eh i g e s tc o n t e n t ，w a s2 4 ：0 2 4 t h ee f f e c t so fd i f f e r e n td o s a g e so rd i f f e r e n tt r e a t i n gt i m eo ft a n n a s ea c t i v i t yo n t h et r a n s p a r e n ta n dc h e m i c a lc o n t e n t so fk u d i n gt e as o l u t i o nw e r es t u d i e d t h e r e s u l t ss h o w e dt h a to 0 1 0 0 2 d o s a g eo ft a n n a s ew a sm o s ts u i t a b l ef o rt h e s o l u t i o nt r a n s p a r e n t t h ec a t a l y s i so ft a n n a s ef o rt h et e ai n f u s i o nq u a l i t yw h e np h 6 0 ，a n dt r e a t i n gt i m e f r o m3 0 m i nt o4 5 m i nw a st h eb e s t k e y w o r d s ：k u d i n g c h a ；l l e xl a t i f o l i at h u n b ；m t i n ；p r o c e s s i n gt e c h n i q u e ；a r o m a ； p r o c e s s i n gp a r a m e t e r s ，t a n a n s e ，c o m p o u n d s _ i i l 江大学硕士学位论文 第一章文献综述 1 1 若丁荼的民闫利糯掰史及植物资源分布 1 1 1 我国苦了茶铡熙历史 我国开发利用苦丁茶历史悠久，据专家们考证，我国开发利用苦丁茶至少 有2 0 0 0 年静掰史。运在东汉对袋书静糯器录裁己记载：“南方有瓜卢术， 亦似蒜，至苦涩”可见当时的广东、广职等地就殴相当普遮盛行饮用藩丁 茶了。据查，我国历史文献中有大艇关于苦丁茶的记叙，特别以广东省为最多。 妇豢i e 鞠浇漆远著袁越志( 5 5 7 5 8 9 ) 鼗：“龙矧蔡蠢皋卢，一名蹑卢，畸 似茗，土人谓之过罗或曰物罗”。后来唐代陆羽著茶经( 7 6 5 7 8 0 年著) 、 明代方以智著通雅( 1 6 4 1 年箸) 、清代李调元著南粤笔记( 1 7 7 7 年蔫) 等郝提到苦丁茶，可见我国开发利用苦丁茶历史悠久。苦丁茶的称谓也不一样， 明代以前称皋卢、瓜卢、过罗、无罗，明代以后称登、苦登、箭登茶“3 。目前 多豁蕾丁、著丁茶、塞丁茶，焉套湾裂豫一时茶，爨本豫多罗耱，瑟秘缓秘马 来趟弧称茶王。我国“茜丁茶”资源物种的多样性。谮丁茶是我国民间用作传 统代茶饮料或中草药的一大类植物的统称。事实上，蒋丁茶在我国存在严霾的 异物同名和嗣物冥名现象他“。如袭1 1 所示：e l 前至少有1 2 科2 3 个属的摄物 作为苫丁茶饮用。 袭1 一i 苦t 茶及其癸蠢秘蒙弼邈嚣1 3 ，4 t a b l e l 一1p r o d u c t i o nd i s t r i b u t i o na n dc o n s u m p t i o nd i s t r i c t so f k u d i n gt e a 科名种名分布及使用地区 广琢、海毒、广末、云南、福 a 。盏啪茶冬青c 胁觑讲咖础筹；饕篙茹篇 嚣嚣l 遗区。 2 大时冬青( 1 l e xl a e 庙池t h u n b ) 浙江、湖南、福建、广硒 游灏大学硕士学位论文 3 枸骨( l c o r n u t al i u d l ) 菠苏、溉江、安敲、河辩以 及秦岭以南其他备销区 术樨科o l e a c e a e4 序梗女贞( l i g u s t r u m p e d u n c u l a r e r e h d ) 5 日本毛叶女贞( l j a p o n i c i u m t h u n b v a r p u b s c e n sk o i d z ) 四川 贵州 鞫翊、云毫、赛翊、孛鬻放华 6 紫茎女变( l p u r p u r a s c e n sy c y a n g ) 零省区、辽宁、潺恕、出透， 陕西、甘肃 7 兴山蜡树( h e n , y l h e m s l 1 8 女贞( l l u c i d u m a r 】 9 牛矢粟( o s m a n 旃埘辨群趣姗掰糟蹿甜 h a y a t a ) 四川、云南、广两 四川 广疆、海南、广东、云南、福 建、湖南( 南部) 、秘棱嚣积 终5 万富，产晶远镑卡死个嚣 际和地区。 b 。r 紫a g 草辩i n a c e 1 3 厚壳树( 踟妇蛳如r 口觚z ) n a k a i ) 广西、云南、河南、山东 1 4 滇厚朴( e c o r y l i f o l i ac h w r i g h t ) 越南、贵州、詈”1 、湖北、河 蘩辩c o m p o s r a e1 5 台湾甍苣( l a c t u c at ai w a n i a n am a x i m ，) 四川等 一鬟粟辩 1 6 苦建了，草s 幽拯妇醒孤m z 。 由乐平瘦审一带後翔 r a p a v e r a e e a c e 一 蔷薇一”三哺棠( 姚肭。i d i f ( r e 9 0 1 ) 删湖黼鲫票0 爹圾常宁 1 8 石楠( 肼d 咖抽s e r r u l a t a l i n d l ) 贵州赤水、镇远部分人饮蹦 。，妻三苎! 。 i 9 月月清( 拯# 溆静妇蕊。 费州石阡等地饮用 矗舡娃f a 害躺 山荼科t 如一”2 帙嚏v f 歉t y m a 皋r o 擘p t w t l ? a ( 要v 8 a f 哆k u t u 嘲s i s 警硝全国务笑毒萎霎篙芋虢 线 l兀”采珊t e 最j 2 浙江大学硕士学位论文 1 1 2 冬青属苦丁茶的研究进展 目前，苦丁茶以冬青科“苦丁茶”研究最多，而且也最具影响力，其次为 木犀科。其他各个科无论就其饮用价值还是药用价值而言，在国内外的影响都 较小。在冬青属植物中，被称为“苦丁茶”并广为使用的植物主要有枸骨( i l e x c o r n u t al i n d l 1 、大叶冬青( i l e xl a t i f o l i a t h u n b ) 、五棱冬青( i p e n t a g o n a s k c h e n e x f e n ge tc e l i a n g ) 、以及苦丁茶冬青( l k u d i n g c h ac j t s e n g ) 、以 及在安徽民间特别是大别山一带饮用的霍山冬青口1 ( l h u o s a n e n s i sy h h e ) 。枸 骨除作为园林植物( 绿篱或盆景) 在我国有极少量人工栽培外，目前仅在江苏、浙 江、安徽等地局部地区采摘野生的枸骨叶与茶叶共焙制作苦丁茶，至今尚未发 现人工连片种植枸骨作为饮料植物或药用植物的事例。因枸骨在形态上的显著 特征( 叶片顶端有硬而尖的刺齿3 个，叶片两侧各有坚硬刺齿1 3 个) ，茶学 界或农学界对其物种名称( 1 c o r n u t al i n d l ) 的认定至今没有任何争议或混淆。 霍山冬青是2 0 0 2 年才发表的新种，目前对其保健作用、药用功效以及分布地域 为代茶饮料使用等基本情况尚缺乏详细的报道。大叶冬青在浙江、江苏、上海、 安徽、湖北等地民间被作为苦丁茶饮用，近年已有大叶冬青苦丁茶的注册产品 上市，而且在浙江新昌、磐安、金华等县市己开始由基地化的大面积人工栽培。 由于大叶冬青与苦丁茶冬青是近缘种，因而其形态特征、保健作用及药用功效 多有相同或相似。五棱冬青是俸宇星 6 1 等人于1 9 9 8 年发表的新种，其显著特点 是主茎或分枝l 3 年生部位具五条锐棱角，叶中脉于叶背呈锐骨状凸起。该物 3 浙江大学硕士学位论文 种主要分布于广西境内，当地居民有将其种苗混杂于苦丁茶冬青的种苗中在生 产上种植。此外，在湖南( 湘西南) 、贵州( 绥阳) ，以及遇难( 西畴) 等地亦 有发现和分布i ”。 1 2 苦丁茶化学成分研究进展 1 2 1 氨基酸、维生素和微量元素等成分的研究进展 刘祖生、梁月荣等 7 1 分析研究了苦丁茶中苦丁绿细茶和苦丁红茶中游离氨基 酸的组成和含量，并与茶叶中游离氨基酸组成和含量作出比较。研究结果如表1 2 所示，苦丁茶与茶叶在游离氨基酸组成的种类数上相似，但主要成分和含量方面 差异很大。茶叶的游离氨基酸总量为3 0 1 6 ，为苦丁茶鲜叶的1 5 倍，绿细茶的5 0 倍和红细茶的2 4 倍。在氨基酸组成上，苦丁茶最高为组氨酸，其次为天门冬氨酸 丝氨酸、苏氨酸和谷氨酸，茶氨酸含量很低，在鲜叶中仅占游离氨基酸总量的1 3 。 而茶叶中的茶氨酸，高达1 1 7 9 9 1 0 0 9 ，占茶叶游离氨基酸总量的3 8 ，其次为 谷氨酸、精氨酸和组氨酸，三者共占游离氨基酸总量的4 2 6 。与苦丁茶相比较 组氨酸，天门冬氨酸、苏氨酸和丝氨酸四种氨基酸总和仅占茶叶游离氨基酸的 4 1 ，其比例不到苦丁茶鲜叶比例( 9 2 5 ) 的一半。说明两种植物各有不同的氮素 代谢类型，组氨酸可能是苦丁茶的特征性氨基酸。 表1 2 游离氨基酸含量 t a b l e1 - 2c o n t e n t so ff r e ea m i n oa c i d s ( m g 1 0 0 蓟 浙江大学硕士学位论文 郁建平等分析了贵州苦丁茶鲜叶及成品中氨基酸、维生素和微量元素。发 现苦丁茶鲜叶及成品茶中有1 7 种游离氨基酸、1 8 种水解氨基酸，未检出茶氨 酸，在鲜叶及成品苦丁茶中，总黄酮含量较高，没有检出咖啡因。结果如所示 无论游离氮基酸还是水解氨基酸、谷氨酸含量均为最高，其次为天冬氨酸、游 离氨基酸中谷氨酸占成品苦丁茶总游离氨基酸的2 2 0 6 ，蛋氨酸含量均为最 低。在游离氨基酸中未检出蛋氨酸。在成品苦丁茶水解氨基酸中蛋氨酸只占总 量的o 3 9 。由此可见，贵州苦丁茶氨基酸含量较齐全。作为茶叶的特征氨基 酸茶氨酸，在苦丁茶鲜叶及成品中均未检出，这说明贵州苦丁茶植物与茶 叶植物具有不同的氮代谢类型”。 表1 3 贵州苦丁茶茶氨基酸含量( 单位：m g 1 0 0 9 ) t a b l e1 - 3c o n t e n t so f t h e a n i n ei ng u i z h o uk u d i n g ( m g i o o g ) 浙江火学硕士学位论文 1 2 2 维生素分析 杨远庆【9 1 等对贵州苦丁茶维生素含量进行了分析，结果为：维生素c 1 1 6 m g l o o g ，维生e1 9 4 m g 1 0 0 9 ，维生素b 10 0 5 m g 1 0 0 9 ，维生素b 2 0 3 m g 1 0 0 9 ，维生素a 含量极低。而郑玉聪旧1 等人测定茶叶中维生素c 的含量 为6 2 3 m g 1 0 0 9 ，贾林艳等 i t l 测定茶叶中维生素b 2 的含量约为3 ，为苦丁茶 种b 2 含量的1 0 倍。 1 2 3 微量元素分析 苦丁茶中含有多种人体必需的微量元素，目前研究发现苦丁茶中含有的微 量元素主要有c a ，m g ，f e ，m n ，b ，z n ，c u ，s r ，c o ，c r ，p b ，s e ，m o ， g e ，c d ，k 等元素 8 , 1 2 , 1 3 , 1 4 15 1 。梅光烈1 6 1 研究表明茶叶中无机微量元素最少有 4 2 种，其中必需常量及大量元素有n a 、p 、c 1 、k 、c a 、h 、c 、o 、n 、s 等 一6 浙江大学碳0 7 学位论文 1 0 种：必需微量元素有m g , m n 、f e 、b 、s i 、z n 、m o 等8 种，痕量元素有 b r 、r u 、s r 、g e 等4 静。 1 2 a 黄酮类化台物的研究 黄酮类化合物广泛存在于自然界中，已知的黄酮类物质有近8 0 0 种，是广 泛分毒手蕊物组织缀藏中戆一类末溶瞧惫索。鬻为浅黄至秃魏，矮兔鳝臻整黄 色。具有多种生理活性。其母核结构为2 一苯基苯并吡喃( 结构如图卜1 所示) 。 7 6 54 翻1 ，12 - 笨鏊苯劳哦臻 f i g 1 12 - b e n z o p y r a n 在植物申黄酮类物质多与糖结合形戏赣酮萤类秘黄酮醇蛰类。苦t 茶中含 有多种黄酮类化合物，主要有杨梅苷( m y r i c e t i n ) 、槲皮素( o u e r c e t i n ) 、山 蘩酚( k a e m p e r 0 1 ) 、芦t ( r u t i n ) 蟊j t 荼素类秘矮，结鬃式翔圈1 2 掰示： 蕊 6 图1 2 苦丁茶赞酮类结构式 f i g1 - 2f l a v o n es t r u c “l r eo f k u d i n g c h a 杨梅营( m y r i c e t i n ) ：r l = r 2 = r 3 - - o h 0 醛 融 辑江大学颤七学位论文 槲皮豢( q u e r c e t i n ) ：r l = 飓= o h ，l h = h 山萘酚( k a e m p f e r 0 1 ) ：r i ：0 t f ，r z = r f h 芦t ( r u t i n ) ：r l = 蓬管，i z = 0 i t ，r 赢i 儿荣索主要结构如图1 3 所示， c “m b 肆皤g ：m 释“ 卿m 。 q 蜘 睡掣b o g n 口l $ 掣删目b 鲋b 0 m 黜h n t 划r m v l a i h 耐i a * n 一3 q 甜m e m 蒯1 日w n ，埘m e t h 酬i a 悱3 口目 6 t h “0 鞭0 * # h 0 0 f 删碟n # b d t t m m d h 0 b t 让3 嘴l 。0 h r a 8 e 各c ，妄辩扭h 箍2 = - 8 珏k f 甜# ：艇鼯；盎 8 i t 口3 碟s r ，m f 8 ：u ：23 神r ， o hr 扛h 8 1 l z 3 出i i h hr 2 = h b + 盘孓t f a n gi r p h 躐荤尝黧嚣器“ 口r 。：o r 扣h 鞍黔0n 删 尸“ 、o 耻。 者鼍9 一 鲫8 “多 ”晒，“ o h0 m 钾m n 。众碴。 ：t 。 h “矿、，b i u 文 v l 工。” 0 hi t 艚l “ 圈l 一3 ，l 茶索络构 f i gt - 3s t r u c t u r e so f c a t e c h i n s 据梁月荣等研究发现苫丁茶中有少量的表儿茶素( e c ) 、表没食子酸没食 子酸酯( e g c g ) 和表儿荣索没食子酸酯( e c g ) 。 1 2 5 香气、挥发油磷究 y a m a g u e h i 等( 1 9 8 1 ) 川首次在绿茶香气中鉴定了萘和1 ( 娥2 一) 甲基苯， t h u t o m a 等又在另外煦凡琴中苦t 茶中检出黎类 1 7 , 1 8 , 1 。随着现代色谱技术的飞速 一8 一 浙江大学硕士学位论文 发展和提取技术的多样化，人们已经从茶叶中发现了6 0 0 多种香气成分”驯。按 绿茶加工方法制成的苦丁茶成品，滋味醇浓微苦，回甘力强，先苦后甜，香气 纯正，略有花香，不同类型的苦丁茶，其性状及成品的风格风味特性有明显的 差异，香气滋味也不同。戴素贤等1 8 】在苦丁茶中分出1 4 5 种香气成分，并鉴定 出了9 1 种化合物，含量较高的化合物有：十六碳酸、9 ，1 2 一十八碳二烯酸、1 , 2 一 苯二甲酸二异辛酯，1 , 2 一苯二甲酸双( 1 一甲基) 庚酯，邻苯二甲酸二辛酯，1 - 甲基 - 4 - ( 1 甲基乙烯基) 环己烯，丁基一轻基甲苯，7 , 1 0 ，1 3 一十六碳三烯酸甲酯，1 , 2 - 苯 二甲基二庚酯和2 - 香豆酮。按照化学结构分类，酯类化合物有1 3 种，酸类4 种，酮类1 3 种，醛类1 0 种。 杨小生等2 2 】对广西冬青科冬青属苦丁茶( 比xk u d i n g c h ac ，如g 嘲的挥发油 成分进行了提取和分析鉴定，得出8 6 种成分，其中链状脂肪族化合物( 烷烃， 醇，醛，酾，羧酸及酯) 相对含量较高，其次为酚类和芳香化合物，较少的为倍 半萜等成分。 周欣等”1 对贵州苦丁茶木犀科的p t 本毛女贞( l i g u s t r u mj a p o n i e u m t h n b v ar p “b e s c e sk o i d z ) 的挥发油成分进行提取，并采用四极杆质谱进行分 析，鉴定出了7 0 种化合物，占挥发油含量的6 8 1 ，萜类化合物、链状脂肪簇化 合物、酚类和芳香化合物以及内酯类化合物，含量依次降低。高级脂肪酸及其 衍生物具有润肠、止泻作用；低级的脂肪醇，醛，酮，酯和小分子芳香酯具有 芳香味：酚类化合物具有清除自由基等作用：a 、b 不饱和内酯类化合物大多 具有一定的抗肿瘤活性，通过对苦丁茶挥发油香气含量和有效成分的分析评价， 为综合开发利用苦丁茶资源提供了部分实验依据“】。 9 浙江夫学疆士学锰论文 1 2 6 三龌及皂甙类化学成分研究 文永掰等秘3 从苦丁茶中分离鉴定了一静鞭五环三萜内醣，a 番橱滕，叠一 谷甾醇和岛苏酸。欧阳明安铸研究了广东产苦丁茶冬青的化学成分，分离出1 0 个三萜化台物和1 9 个薪三旗愈甙。”。 1 3 善了茶生物活蛙翳究遴震 苦丁茶活性研究主要集中在心血管、抗氧化作用、降血脂作用、降血糖、增 强免疫功能、抗应激、抗疲劳、抗菌、以及微墩元素的保健及药用功能、拮抗支 气管乎游虢豹峻壤终爱， 美及毒瑾终爱等。 1 3 1 对心血管疾病的作用 王扁春等2 7 1 用民族药蕾丁茶制药，每天服用1 8 3 6 9 ，分三次口服，连服 2 令胃，避行心盘管疗效黪鼹察，缓票显示著丁茶对冬絮毫盘压郡蠢降抵嫠惩， 同时可减低血过氧化脂质，抗动脉粥样硬化、降低红细胞压积从而改善血液流 变学状态，及对心脑血管病头晕、头痛、胸闷、乏力、失眠等均脊较好的疗效。 王惑骥等2 8 1 螫探讨过落了荼皂甙物质对藤钵兔盎管静作趣，发域1 6 5p l 静若丁装皂瞢类物质( k d c t s ) 可对抗重滔石酸去甲弩上腺素注射液( n e ) ， c a c l 。所致的血管收缩，但对k c l 所致的兔主动脉收缩无明显影响。 1 3 。2 挽氧化作用 糖彪等珏孵对两广遣送豹冬青稀苦丁茶进行研究，发现汽承及繇援物在各秘 试验浓殿对体外大鼠肝组织过氧化均有一定的抑制作用，且水提物殿强，并在 一定浓度内呈量效关系，这也提示了用水浸泡苦丁茶饮用是科学的服用方法， 1 0 浙江大学硕士学位论文 苦丁茶有抗炎作用，而炎症是自由基使脂质过氧化所致。结果表明苦丁茶有较 强的抗氧化作用，可解释其抗炎原理。 陈国珍等。”以云南昭通茶的苦丁茶为原料，提取其水溶性苦丁茶总苷及3 种配糖体，对肝微粒体脂质过氧化的大鼠、自由基损伤的小鼠模型进行灌胃 分2 5 k g d 1 和5 0k g d - 两个剂量，结果表明三种配糖体显著降低微粒体脂质 过氧化产物m d a 水平，延长l d l 氧化修饰的延迟时间，总苷能显著降低小鼠血 清及肝脏m d a 升高水平。很多研究结果表明，机体自由基损伤参与多种疾病的 病理过程，如炎症、免疫失调、动脉粥样硬化、恶性肿瘤等，与机体衰老也有 密切关次。据推测，以上化合物的抗氧化活性与其结构上的酚羟基有关，还可 能与其所含糖基有关。 0 k a w am o ”也对中国云南省的淡紫女贞进行了研究，在其甲醇提取部分得到 了g 种成分，并对这些成分进行了抗氧化研究，发现其中含3 5 个糖苷单位的 化合物可能有助于调节b p p t t 基的还原活性，为淡紫女贞中的抗氧化成分。 1 3 3 降衄脂作用 向华林等m 埔沸水将冬青科冬青树植物苦丁茶泡煮制成2 0 ，4 0 ，8 0 ( w v ) 浓度的溶液，对s d 大鼠灌胃1 5 天，每天1 次，剂量为2 ，4 ，8 e g k g ， 实验结果表明，苦丁茶降低高脂血症的甘油三酯( t g ) ，血清总胆固醇( t c h ) 及低密度脂蛋白( l d l ) ，同时能提高高脂血症大鼠h d l l d l 比值，证实其有 一定的降脂作用。 陈建华等”对贵州黔南民间药苦丁茶进行研究，研究采用同本大耳兔建立 高脂血症模型，发现苦丁茶对实验性高脂动物模型的血清血总脂( t l ) 、总胆固 醇( t c h ) 、及过氧化脂质( l p 0 ) 均有降低作用。 浙江大学硕士学位论文 申梅淑等。”采用冬青科植物枸骨和大叶冬青的叶，制成0 8 k g l 的苦丁茶 煎液，对w i s t a r 大鼠进行灌胃观察，剂量为0 5 m l d ，分两次服用，发现苦丁 茶对高脂血症的发生具有良好的预防作用。 潘慧娟等。“以浙江苦丁茶大叶冬青水煎液，制成为0 5 k g l 生药，以s d 大 鼠血清为研究对象，以4 9 k g 剂量进行灌胃，每天1 次，连续4 周，发现苦丁 茶显著降低了s d 大鼠血清和肝脏脂质的含量，使大鼠肝脏肿和脂肪湿重下降， 是一种较好的减肥产品。 1 3 4 降血糖作用 屈立志等3 采用大鼠肾上腺素高血糖模型，取苦丁茶大叶冬青水煎液浓缩 至i g m l 生药，给药量为1 0 m l k g ，采用皮下注射的方法观察其降血糖作用，结 果发现苦丁茶大叶冬青有对抗大鼠急性血糖升高的作用。 1 3 5 增强免疫功能、抗应激、抗疲劳作用 董艳等 3 7 , 3 8 1 采用苦丁茶冬青制成的含生药0 5 k g l 和1 k g l 的水煎液，对 小鼠灌胃o 4 m l 只，分2 次给药，连续7 天，进行体液免疫和细胞免疫功能的 测定，结果发现苦丁茶煎液具有增强小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能，提高白细 胞血空斑数目的作用。同时发现苦丁茶有提高小鼠耐缺氧，耐低温和运动耐受 能力的作用。 1 3 6 抗菌作用 蒋建敏掣3 9 1 采用苦丁茶大叶冬青8 0 。c 水浴提取部分对常见细菌的m i c 进 行了测定研究，分别为：甲链球菌1 2 5 m g m l ，肺炎球菌2 5m g m l ，乙链球菌 2 5m g m l ，白喉杆菌5 0m e d m l ，痢疾杆菌5 0m g m l t 金黄色葡萄球菌1 0 0m g m l 1 2 辩汪夫学硕士学经谂文 绿脓杆菌1 0 0m g m l ，大肠杆菌1 0 0m g m l ，卡他球菌2 0 0m g m l 。蓿丁茶灌服 能明慰掇高大肠杆菌、痢痰杆菌、肺炎杆菌及己链球菌感染小鼠的存活率。 1 3 。7 徽爨元素豹傈健及骛麓动能 张铸勉等4 0 谰原子吸收光谱法测定了冬脊科冬青属苦丁茶中锌、铜、锰、 铁、钙、镁、锶、钴、锂、铷、钾、镍的含量，发现其中锌、铜、锰、镁、铷、 铁、键麴含量跑萁窀茶逮缀多，锾是入薅必爨豹徽量元素，是入髂审糖氮酸、 超氧化物歧化酶( s o d ) 等多种酶的重要组成部分，具有抗化学致癌作用；缺 锰时癌肿瘤的发病率高：锌嫩是人体必需的微量元素，使上百种酶的活性中心， 又是获潞豢静或分，是维持生惫歪零瑟动的关键因子；镊耪铁参与建囊，疑饮 食中不断补充铜和铁对造飙，活血化瘀叹及防治贫血病有较大作用；钾和镁在 保护人体心血管，预防心脏病等方面有重要作用；铷对人体神经生理和感情障 碍有鬣骚l 乍用，可防治中老年人的记忆力衰邋秘老年性痴呆多年的实践证 弱，警丁茶豹诸多操毽功熊与德含有丰富豹有益予入傣靛微量元素是密切穗关 的。 1 3 g 接抗支气管平滑肌的收缩作用 瓣建敏等4 1 诈了太时冬青对繇鼠立髂气管平滑弧毂缩功能影响的研究：发 现o 3 3m g m l 的苦丁茶水煎液能明显降低c a c l 2 的量效曲线，并使曲线右移。 1 0 。2 1m g m l 的苦丁茶水煎液对a c h 和h i s 3 1 0 击m m o l l 。引起的气管平滑肌 救缚蠢骥曩豹遂转终弱。 1 3 9 毒理学研究 激锨等4 2 1 以苦丁茶原理饲养家兔，每只每天早晨喂l o g 苦丁祭，6 0 天后通 1 3 一 浙江大学瑗士掌佼论文 过检查发现家兔出现间质性肾炎的病理学改变，表明长期用苦丁荣饲养家兔可 导致闻矮性驽炎，但其致瘸襁理和致病成分尚未清楚。 稿诲实波等躬1 对苦丁茶大时冬青的永提物佟了小鼠的急性粪瞧作用和大鼠 长期繇憔作用研究。结果表明小鼠对苦丁茶水摄取物的最大耐受赞为1 6 8 9 k g ， 属于无毒性级，服用安全。在大鼠的9 0 天长期毒性实验中，苦丁茶对大鼠的生 长发霄、造盎功麓、盘滚奎纯臻菰等均无不熬彩晌。 1 4 本研究的意义和目的 豳内苦丁茶种植面积和产业化开发近几年得到快速发展，广磴、湖南和海 毒等答郄寿大瑟积耱建，麓丁茶夔产翌往秀发，莓裂是竣瓣熬秀发磷究遣楚在 快速发展阶段，肖文军等“”研究过苦丁茶、绞股蓝、乌龙茶组合生产苦丁茶饮 料工艺，生产出的苦丁茶饮料口感、稳定性都很好。北京市营养源研究所已经 研究完成苦丁荼嚣饮瓣生产技术。鼗江省露大爨野生大时冬青l t e xl a t i f o l i a 撮“n b ) 凝源，人工培育繁酸技术成熟，野生桶人工培育静檀数量已经初具趣模， 但苦丁茶加工方法还停留猩手工加工阶段，一般由当地农民手工究成。缺乏指 导，技术匮乏，生产出来的膝量差；苦丁茶饮料积其他产品的开发研究也还处 在秘步酴段。 本研究意义及目的在于：1 ) 在苦丁茶加工过程中引进加工机械，并研究苦 丁茶最能加工工艺参数，为蒋丁茶工厂化生产提供技术参数。2 ) 全颐分析大叶 冬毒( 1 t e xt a a f o t g at h u n b ) 豫学残分，特爨跫瑟久薅毒益残努e 嗣辩援供餮量蓍 丁茶晶质的化学方法。3 ) 初步研究添加单宁酶对苦丁茶品质的敬善研究，为苦 丁茶饮料的开发提供基础研究。 一1 4 浙江大学硕士学位论文 第二章h p l c 测定苦丁茶芦丁、槲皮素方法的研究 浙江省有大量野生大叶冬青资源，浙江大学梁月荣、刘祖生等研究了浙江 省大叶冬青苦丁茶( i l e xl a t 洳l i at h u n b ) 中的游离氨基酸、多酚类与咖啡碱和维 生素c ，发现苦丁茶中含有1 6 种游离氨基酸“，少量的表儿茶素( e c ) 、表没 食子儿茶素没食子酸酯( e g c g ) 和表儿茶素没食子酸酯( e c g ) ，咖啡碱的含 量为0 0 2 2 8 0 0 4 3 6 ，维生素c 含量为3 1 2 1 4 5 6 0 m g 1 0 0 9 ”。而有文献 报道苦丁茶中黄酮类物质高于茶叶，其中芦丁、杨梅酮和槲皮素是茶叶的1 6 1 4 7 倍，研究表明芦丁、槲皮素具有多种生理活性，使一类重要的有机化合物。 芦丁在临床上用于防治脑溢血和高血压，并对脂肪肝有去脂作用“。芦丁是 种天然的抗氧化剂，能有效清除活性氧自由基“、羟基自由基“，芦丁和一些 金属离子形成的配合物，具有更多的生物活性，在人体生物体内清除自由基作 用 5 0 , 5 1 , $ 2 , 5 3 o 槲皮素及其衍生物是植物界分布最广的黄酮类化合物，无显著毒性。 槲皮素能对抗自由基、直接抑制癌细胞和对抗致癌促、癌因子，有效发挥抗癌 防癌；能络合或捕获自由基防止机体脂质过氧化反应：在抗菌、抗病毒、抗炎、 抗过敏、防治糖尿病并发症方面也有较强的药理活性。因此，这类物质对癌症、 衰老、心血管等退变性疾病的治疗和预防有重要意义，具有较大的开发价值。”。 芦丁和槲皮素的测定方法目前主要是分光光度法和高效液相色谱法( h p l c 法) ，陈辉强等旧等研究了用h p l c 测定苦丁茶中芦丁的方法，结果图谱分离效 果较差。 本试验目的是建立高效液相法测定苦丁茶中芦丁、槲皮素的含量方法。 1 5 浙江大学硕士学位论文 1 5 材料与方法 1 5 1 主要试剂 纯度9 8 芦丁( r u t i n ) 和槲皮素( q u e r c e t i n ) 标准品为南京青泽医药科技开发 有限公司提供；色谱纯甲醇为天津市四友生物医学技术有限公司生产；分析纯 冰乙酸是成都光年化学试剂厂出品；高纯水；其他试剂均为分析纯。 1 5 2 主要仪器设备 l c 一2 0 1 0 高效液相色谱仪，色谱柱为c l c o d s ( m ) 柱，5um ，2 5 0 4 6 m m ( 日本岛津公司) ；数显恒温水浴锅( 国华电器有限公司) ；磁力搅拌器( j e 卜m a y l t d ) ；电子天平a e 2 0 0 ( 梅特勒一托利多仪器有限公司) ；无机系和有机系 0 4 5 u m 滤膜。r 0 m b 一1 0 b 高纯水机( 杭州永洁达膜分离设备厂) 。 1 5 3 样品处理 鲜叶取自衢州地区野生苦丁茶树，经过1 2 0 高温蒸汽杀青( 浙江衢州上 洋茶机厂6 c s q d5 0i 型汽热杀青机) ，适当揉捻( 浙江衢州上洋茶机厂) 后， 仿珠茶炒干机( 浙江衢州上洋茶机厂) 中炒成扁圆形，烘干后取样。样品适当 粉碎后取3 9 ，加水1 5 0 m l ，沸水浴浸提4 5 m i n ，过滤定容至2 5 0 m l ，过0 4 5 1 a m 膜 后滤液直接用于h p l c 分析。 芦丁、山奈酚标准品分别用高纯水溶解配制成浓度分别为：芦丁0 5 1 m g m l 、 槲皮素0 5 4m g m l ，过0 4 5 1 j m 膜后滤液直接用于h p l c 分析。 1 5 4 色谱条件选择 色谱柱为5pm ，2 5 0 x 4 6 m mc l c o d s ( m ) 柱( 日本岛津公司) 。用2 0 0 8 0 0 n r n 分光光度计对各标准样品进行扫描，以最大吸收系数e 值和最大吸收波 一1 6 浙江大学硕士学位论文 长为依据，确定h p l c 检测波长，芦丁、槲皮素分别在2 5 5 r t m , 2 5 4n l t l 有最大 吸收，h p l c 检测波长选择2 5 5n m 。 芦丁和槲皮素采用h p l c 测定，梯度洗脱。流动相为a ：水：乙酸( 9 8 ：2 v v ) ，流动相b ：甲醇：乙酸( 9 8 ：2 ，v v ) ：芦丁洗脱梯度为1 5 b 到4 0 b ， 3 0 m i n ；4 0 b 到7 5 b ，1 0 m i n ；槲皮素洗脱梯度7 5 b 到8 5 b ，5 m i n ：流速 均为1 0 m l m i n ，检测波长2 5 5 n m ，进样量1 0ul 。 1 5 5 方法精确度与范围测定 标准样品在3 2 条件下，分别进样5u 1 、1 0 u 1 、1 5 u 1 、2 0 u 1 、2 5 u 1 。以 单一芦丁和槲皮素标样分别进样3 次，以峰面积变化计算方法精确度。以一份 苦丁茶茶汤为样本，过o 4 5 u m 膜供h p l c 分析，在另一份中分别加入不同量芦 丁和槲皮素标样，过0 4 5 p m 膜后供h p l c 分析，测定方法回收率。 1 6 结果与分析 实验结果表明，在2 5 5 n m 下标准样品h p l c 图谱分离效果较好，芦丁出峰 时间3 2 5 m i n 。槲皮素出峰时间为3 9 5 m i n ( 如图2 3 ) 。线性范围分别在2 2 5 1 0 2 0 pg 和5 4 0 1 3 5 ug 内，回收率分别为9 8 3 6 ( n = 3 ) 、9 8 8 5 ( n = 3 ) 。 标准差r s d 分别为1 0 1 和1 0 2 。 1 6 1 芦丁、槲皮素分离图谱 芦丁和槲皮素标准图谱如图2 1 所示。因芦丁和槲皮素的出峰时间不同， 混合标样分离效果如图2 3 所示。 1 7 浙江大学顶= e 学位论文 i 图2 1 芦丁标准样品图谱 f i g2 - 1c h r o m a t o g r a mo f a u t h e n t i cr u t i ns t a n d a r d 图2 2 槲皮素标准样品图谱 f i g2 - 2c h r o m a t o g r a mo f a u i h e n f i cq u e r c e f i ns t a n d a r d 图2 3 芦丁和槲皮素标样分离图谱 f i g2 - 3c h r o m a t o g r a mo f a u t h e n t i cr u t i na n dq u e r c e t i ns t a n d a r d 1 6 2 方法精确度检验 芦丁、槲皮素溶液分别进样5u1 、1 0ul 、1 5u 1 、2 0 ul 、2 5ul ，- 进行h p l c 浙江大学硕士学位论文 检测，得到芦丁、槲皮素的含量( x ) 与h p l c 响