（分析化学专业论文）蛋白质和核酸与小分子的相互作用及其分析应用的研究.pdf

山东大学博士学位论文 摘要 蛋白质和核酸是生命科学与生物化学中两类最重要的生物大分子。蛋白质 担负着各种生理功能，从整体上维持生物体新陈代谢活动的进行，是生物性状 的直接表达者，而核酸是揭示生命遗传与变异的主要物质。因此，深入研究小 分子物质与蛋白质和核酸的作用机理，特别是建立蛋白质以及核酸快速、简便 的分析方法，对分子水平上阐明生命的奥秘等方面具有重要的意义，是当前生 物分析化学研究的前沿和热点。 本论文以分析化学，生物化学与生物物理为研究背景，利用荧光技术、光 散射技术、吸收光谱技术、圆二色谱技术、小角散射技术、核磁共振技术、扫 描电镜和压电传感器等手段研究了小分子与蛋白质、核酸的作用机理，建立了 蛋白质以及核酸快速、准确、简便、灵敏而选择性的分析方法。论文共分五个 部分。 论文的第一部分评述了蛋白质和核酸发光探针的基本原理、研究进展和发 展趋势，以及小分子物质与生物大分子相互作用的研究手段等，共引用文献1 9 2 篇。 论文的第二部分中，在两个激发波长下，研究了m o r i n - a 1 3 + - 表面活性剂蛋 白质体系的荧光增强效应。研究发现在阴离子表面活性剂s d b s 和阳离子表面活 性剂c t a b 存在下蛋白质都能增强m o r i n - a 1 3 + 的荧光。同时实验了m o r i n - a 1 3 + s d b s b s a 和m o r i n a 1 3 + - c t a b b s a 体系的荧光增强效应的最佳实验条件，建 立了b s a 的浓度与体系的荧光强度之间的线性方程，并将该效应应用于蛋白质 的检测中。在m o r i n o a l 3 + - s d b s - 蛋白质体系中，检测b s a 、h s a 和e a 的线性 范围分别为0 0 1 0 - 1 3 0 1 l g m l 、0 0 5 0 - 1 2 0 1 j g m l 、o 0 4 0 - 1 2 0 1 1 9 m l ( 4 2 0 n m 激 发) 和0 0 0 7 0 1 2 0 p g m l 、0 0 0 8 0 1 5 0 1 n g m l 、o 0 2 0 - 1 5 0 1 g m l ( 2 8 0 n m 激 发) ，检出限分别为5 0n g m l 、1 6n g m l 、1 8n g m l ( 4 2 0 r i m 激发) 和2 0 n g m l 、5 6n g m l 、1 2n g m l ( 2 8 0 n m 激发) ；在m o r i n - a 1 3 + - c t a b - 蛋白质体系 中，4 2 0 n m 和2 8 0 n m 激发波长下，检测b s a 、h s a 和e a 的线性范围分别为 0 0 0 5 0 - 2 0 0 1 u g m l 、o 0 2 0 1 5 0 p g m l 、0 0 4 0 - 1 3 0 1 u g m l 和0 0 0 3 0 - 2 0 0 1 j g g m l 、 0 0 0 6 0 - 2 0 0 p g m l 、o 0 1 0 - 1 8 0 p g m l ，检出限分别为2 6 n g m l 、1 4n g m l 、1 6 n g m l 和0 7 0 n g m l 、4 1n g m l 、5 6n g m l ，显然，2 8 0 n m 激发下的灵敏度较 儿 山东大学博士学位论文 高。由此建立了灵敏检测蛋白质的新方法，并且在实际样品的测定中取得了令 人满意的结果。本部分成果已经发表在l u m i n e s c e n c e 和t a l a n t a 上。 在第二部分中，我们以m o r i n a 1 3 + - c t a b b s a 体系为代表还研究了m o r i n a l h - 表面活性剂- b s a 的作用机理，提出了其相互作用模型。研究表明，在 m o r i n - a 1 3 + c t a b - b s a 体系中，带负电的b s a 通过分子自组装作用吸附带正电 荷的a l ”的羟基络合物在其表面上，带正电的a 1 3 + 羟基络合物又能结合带负电荷 的m o r i n ，从而形成m o r i n - a 1 3 + - b s a 复合物。而该复合物的表面是带负电荷的， 又能通过静电作用结合阳离子表面活性剂c t a b 形成一个大的b s a a 1 3 + - m o r i n c t a b 具有层状结构的超分子聚集体，而a 1 3 + - m o r i n 被夹在b s a c t a b 之间， 它们之间的作用力包括静电引力、氢键、疏水作用和范德华力。研究认为，体 系的荧光增强主要有两个原因，一是b s a 和c t a b 为m o f i n a 1 3 + 提供了适宜的 疏水环境，另一个原因是b s a 和m o f i n 之间的能量传递作用。由f s r s t e r 能量转 移理论计算指出，舢3 + 在能量传递过程中起到了重要作用，不但拉近了给体和受 体之间的距离，而且为能量传递提供了更加通畅的通道。而c t a b 在体系中的 重要作用是：一方面和b s a 一起为a 1 3 + - m o r i n 络合物构成了低极性和高粘度的 疏水微环境，从而减少了与水分子的碰撞降低了能量损失：另一方面缩短了 b s a 和m o f i n 之间的距离，从而提高了能量转移效率，增强了荧光量子产率。 此部分成果已经发表在c h e m i c a lp h y s i c a ll e h e 体和b i o e h i m i e 上。 论文的第三部分研究了在s d b s 和蛋白质存在下，阳离子染料a o 二聚体的 形成和解聚过程，借此提出了灵敏的蛋白质荧光光度法。本文还研究了a o s d b s b s a 体系的荧光增强效应及其作用机理，并且提出了一个作用模型。研 究表明，s d b s 是促进a o 形成h - 聚集体的非常有效的阴离子表面活性剂，导致 其荧光猝灭。而向a o s d b s 体系中加入b s a 后，b s a 和s d b s 相互作用生成 带负电的类似胶束的聚集体，破坏了a o 二聚体赖以形成的条件使其发生了解 聚，从而使体系的荧光又显著增强，但是并没有达到a o 单体的荧光强度，故此 时a o s d b s b s a 体系中即有a o 单体又存在a o a o 二聚体，并且这些带正电 的a 0 单体和二聚体通过静电引力和疏水作用被增溶在b s a s d b s 形成的带负 电的类似胶束的聚集体中，形成一个大的聚集体。这里，体系荧光增强的原因 有三个：( 1 ) a o a o 二聚体的解聚；( 2 ) b s a 和s d b s 提供了具有小的极性 i i i 山东大学博士学位论文 和大的微粘度的疏水环境；( 3 ) 2 8 0 n m 激发时，b s a 和a o 之间存在能量转 移。本部分成果已经发表在l u m i n e s c e n c e 和j o u r n a lo fc o l l o i da n di n t e r f a c e s c i e n c e 上。 在论文的第四部分研究中，研究了在中性条件下，m o r i n 能够选择性地识别 双螺旋核酸中的鱼精子d n a ，从而建立了选择性检测鱼精子d n a 的荧光新方 法，检出限达到了1 0 。o g m l 。还研究了m o r i n 与f s d n a 的相互作用，发现 m o r i n 与f s d n a 之间主要为沟槽式结合，还存在着分子间作用力。因为体系微环 境的变化( 即极性的减小和微粘度的增大) 从而使体系荧光大大增强；通过研 究m o r i n 与f s d n a 之间的相互作用机理，推测m o r i n 可能结合在f s d n a 的富含 a ( 或c ，a 和c ) 碱基的沟槽部位。所以桑色素将成为选择性测定鱼精子d n a 的良好荧光探针。 论文的第五部分是利用液隔压电传感器实时监测了蛋白质明胶在石英表 面上的吸附过程。研究表明，明胶在石英晶体表面的早期吸附过程可以用一 个包括吸附、脱附和从可逆吸附向不可逆吸附转化等三种基元步骤的模型来 描述。本文提出一种较为简单的吸附模型，并用迭代计算方法求出明胶在石 英表面吸附的吸附速率常数、脱附速率常数和转化速率常数。本部分成果已 经发表在j o u r n a io fc o l l o i da n di n t e r f a c es c i e n c e 上。 本论文的主要特点和创新点： i 研究发现了桑色素金属配合物一表面活性剂一蛋白质体系的荧光增强效 应，建立了高灵敏的蛋白质定量测定方法。选择了阴阳离子两种表面活性剂并 且在两个激发波长下对蛋白质进行了测定，检出限达到了纳克水平。 2 详细研究了m o r i n a 1 3 + - c t a b b s a 体系中相互作用机理，提出了相互作 用模型。在体系中聚阴离子b s a 通过自组装作用吸附带正电荷的a 1 3 + 羟基络合 物在其表面上，然后又结合m o r i n 和c t a b 形成一个大的b s a a 1 3 + - m o r i n c t a b 具有层状结构的超分子聚集体，而a 1 3 + - m o r i n 被夹在b s a c t a b 之间。利用 f 6 r s t e r 能量转移理论详细研究了体系中能量传递过程，计算出了给受体之间的 距离。并且指出了金属离子在能量传递过程中的重要作用，即通过“固定桥” 的作用为能量传递提供了有效的通道。 山东大学博士学位论文 3 详细研究了在s d b s 和蛋白质存在下，阳离子染料a o 二聚体的形成和解 聚过程，并且提出了一个作用模型。指出了由于s d b s 与a o 能产生“芳环堆积 效应”，因而它是促进a o 形成h 聚集体非常有效的阴离子表面活性剂。 4 研究发现m o r i n 能够选择性地识别双螺旋核酸中的鱼精子d n a ，从而建 立了灵敏而简单的选择性检测鱼精子d n a 的荧光新方法，检出限达到了1 0 。o g m l 。同时还探讨了作用机理。 5 提出了明胶在石英晶体表面的早期吸附过程可以用一个包括吸附、脱 附和从可逆吸附向不可逆吸附转化等三种基元步骤的模型来描述，并用一种 迭代的计算方法，求出明胶在石英表面吸附的吸附速率常数、脱附速率常数 和转化速率常数。 关键词：蛋白质桑色素金属离子吖啶橙表面活性剂核酸荧光增强 效应压电传感器 v 山东大学搏士学位论文 a b s t r a c t p r o t e i n sa n dn u c l e i ca c i d sa r ei m p o r t a n tb i o m o l e c u l e so fl i f es c i e n c ea n d b i o c h e m i s t r y p r o t e i n sa r et h ec a r r i e ro fm a n yp h y s i o l o g i c a lf u n c t i o n s ，a n da r ea l s ot h e d i r e c te x p r e s s e ro fp h y s i o l o g i c a lc h a r a c t e r s ；w h e r e a sn u c l e i ca c i d sa r et h ep r i m a r y m a t e r i a l si ns h o w i n gt h eh e r e d i t ya n dv a r i a t i o no fl i f e i ti sv e r yi m p o r t a n tf o r r e s e a r c h e r st oe x p o u n dt h es e c r e t so fl i f e ，t od e v e l o pn e wf u n c t i o n a l i z e dm e d i c i n et o s u r m o u n tm a n yd i f f i c u l td i s e a s e s w h 址w es h o u l dd oi st of u r t h e rp e n e t r a t et h e i n t e r a c t i o nm e c h a n i s mb e t w e e ns m a l lm o l e c u l e sa n dp r o t e i n so rn u c l e i ca c i d s ，t o d e v e l o pr a p i da n dc o n v i n c ea s s a yf o rp r o t e i n sa n dn u c l e i ca c i d s t h i sp r o j e c ti st h e f o r w a r dp o s i t i o na n dh o tp o i n ti nb i o c h e m i c a la n db i o p h y s i c a lr e s e a r c h e s b a s e do nt h er e s e a r c ho fa n a l y t i c a lc h e m i s t r y ，b i o c h e m i s t r ya n db i o p h y s i c s ，t h i s t h e s i ss t u d i e dt h ei n t e r a c t i o nm e c h a n i s mb e t w e e np r g t e i na n ds m a l lm o l e c u l e s ，a n d n u c l e i ca c i da n ds m a l lm o l e c u l e su s i n gt h er e s e a r c ht e c h n i q u e si n c l u d i n gf l u o r e s c e n c e ， a b s o r p t i o n ，r l s ，c d ，s a x s ，n m r , s e m ，t e m ，a f ma n dq c m s o m er a p i d ， a c c u r a t ea s s a y sw i t hh i g hs e n s i t i v i t ya n ds e l e c t i v i t yw e r ed e v e l o p e df o rp r o t e i na n d n u c l e i ca c i d t h em a i nc o n c l u s i o n sa r el i s t e da sb e l o w ： i nt h ef i r s ts e c t i o n ，w es u m m a r i z et h eb a s i ct h e o r ya n dp r o g r e s so fl u m i n e s c e n t p r o b e sf o rp r o t e i n sa n dn u c l e i ca c i d s ，a n dc o m m e n to nt h ee x p e r i m e n t a lt e c h n i q u e st o i n v e s t i g a t et h ei n t e r a c t i o nb e t w e e nb i o m a c r o m o l e c u l e sa n ds m a l lm o l e c u l e s 1 9 2 r e f e r e n c e sa r ec i t e dh e r e i nt h es e c o n ds e c t i o n ，a tt w oe x c i t a t i o nw a v e l e n g t h s ，f l u o r e s c e n c ee n h a n c e m e n t e f f e c ti nm o r i n - a 1 3 + s u r f a c t a n t - p r o t e i ns y s t e mw a sr e p o r t e dh e r e f r o mt h er e s e a r c h ， w ef o u n dt h a tp r o t e i nc o u l de n h a n c et h ef l u o r e s c e n c eo fm o r i n - a 1 ”i nt h ep r e s e n c eo f a n i o n i cs u r f a c t a n ts d b so rc a t i o n i cs u r f a c t a n tc t a b d i f f e r e n te f f e c t sw e r et e s t e do n t h ef l u o r e s c e n c ei n t e n s i t yo ft h em o r i n a 1 3 + s d b s - b s aa n dm o r i n - a 1 + - c t a b b s a s y s t e m s ，a n du n d e rt h eo p t i m u mc o n d i t i o n s ，t h ec a l i b r a t i o ng r a p hf o rp r o t e i n sw e r e o b t a i n e d i nm o r i n - a 1 3 + - s d b s - p r o t e i ns y s t e m ，t h ee n h a n c e di n t e n s i t yo ff l u o r e s c e n c e i si np r o p o r t i o nt ot h ec o n c e n t r a t i o no f p r o t e i n si nt h er a n g eo f 0 0 1 0 1 3 o f g m la n d o 0 0 7 0 - 1 2 o i _ t g m lf o rb s a o 0 5 0 - 1 2 0 i _ t g m la n d0 0 0 8 0 - 1 5 0 1 1 9 m lf o rh s aa n d 0 0 4 0 - 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1 5 0 1 x g m la n d o 0 0 6 0 - 2 0 0 i _ t g m l ，0 0 4 0 1 3 o l x g m la n d0 0 1 0 18 0 1 x g m l ，a n dt h e i rd e t e c t i o nl i m i t s a r e1 4 n g m la n d4 1 n g m l ，1 6 n g m la n d5 6 n g m l ，r e s p e c t i v e l y i ti sa p p a r e n tt h a t t h es e n s i t i v i t ya t2 8 0 n me x c i t a t i o nw a v e l e n g t hi sh i g h e rt h a nt h a ta t4 2 0 n me x c i t a t i o n w a v e l e n g t h b a s e do ni t ，t h en e wm e t h o do fs e n s i t i v ed e t e c t i o np r o t e i ni se s t a b l i s h e d i t sr e l i a b i l i t yi sv a l i d a t e db yd e t e c t i n gt h eh s ai nh u m a nb l o o da n dt h ee ai ne g ga n d t h e i rr e s u l t sa r es a t i s f a c t o r y ( t h i sw o r kw a s p u b l i s h e di nl u m i n e s c e n c ea n dt a l a n t a ) i nt h es e c o n ds e c t i o n w ea l s os t u d yt h ei n t e r a c t i o nm e c h a n i s mo fm o r i n a 1 3 + s u f f a c t a n t b s at a k i n ge x a m p l ef o rm o r i n a 1 3 + - c t a b b s a ，e s p e c i a l l yt h ei n t e r a c t i o n a n dt h ef l u o r e s c e n c ee n h a n c e m e n te f f e c tm e c h a n i s m a n dt h ei n t e r a c t i o nm o d e l 谢m m u l t i l a y e rs t r u c t u r ew a sp u t t e df o r w a r di n d e t a i lb yu s i n gm u l t i - t e c l m i q u e s a n dt h e e n e r g yt r a n s f e rt h e o r yw a si n t r o d u c e di nt h i ss t u d yt oo b t a i nm o r ei n f o r m a t i o no nt h e f l u o r e s c e n c ee n h a n c e m e n to ft h i ss y s t e m f r o mt h es p e c t r ao fa b s o r p t i o n , f a r - u vc d ， r l sa n ds a x sc u r v e s i ti sf o u n dt h a tp r o t e i nc a nb i n dw i t ha i ”m o r i na n dc t a b t h r o u g hs e l f - a s s e m b l i n g f u n c t i o n w i t he l e c t r o s t a t i c a t t r a c t i o n ，h y d r o g e nb o n d ， h y d r o p h o b i ci n t e r a c t i o na n dv a n d e r w a a lf o r c ee t c ，a n df o r m sas u p e r m o l e c u l a r a s s o c i a t i o nw i t hm u l t i l a y e rs t r u c t u r e ，i nw h i c hm o r i n a 1 3 + i sc l a m p e db e t w e e nb s a a n dc t a b a n da c c o r d i n gt of l u o r e s c e n c es p e c t r a , i tc a nb es e e nt h a tm o d nm a i n l y i n t e r a c t s 、v i t l lt r y p t o p h a nr e s i d u e so fb s a a c c o r d i n gt op y r e n ep r o b e f l u o r e s c e n c e p o l a r i z a t i o n ，f l u o r e s c e n c el i f o t i m ea n df 6 r s t e r st h e o r y ，t h ef l u o r e s c e n c ee n h a n c e m e n t o fm o r i ni sc o n s i d e r e dt oo r i g i n a t ef r o mb o t ht h eh y d r o p h o b i cm i c r o e n v i r o n m e n t p r o v i d e db yb s a a n dc t a b ，a n dt h ei n t e r m o l e c u l a re n e r g yt r a n s f e rb e t w e e nb s aa n d m o r i n ，i nw h i c ha i + p l a y sa l lv e r yi m p o r t a n tr o l ef o rt h er a i s eo fe n e r g yt r a n s f e r e f f i c i e n c yb e c a u s ei tn o to n l ys h o r t e n st h ed i s t a n c eb e t w e e nb s aa n dm o r i nb u ta l s o p r o v i d e sa ne f f e c t i v ec h a n n e lf o rt h ee n e r g yt r a n s f e rf r o mb s at om o r i n ；w h e r e a s c t a bi n t h i s s y s t e mh a st w of u n c t i o n st h a to n ei sd e c r e a s i n gt h ep o l a r i t yo ft h e s y s t e ma n di n c r e a s i n gt h em i c r o v i s c o s i t yo f t h es y s t e mt o g e t h e r 晰t l lb s a r e s u l t i n gi n p r e v e n t i n gt h ec o l l i s i o n 、v i t l lw a t e rm o l e c u l e s t h eo t h e ri ss h o r t e n i n gt h ed i s t a n c e b e t w e e nb s aa n dm o r i n t h e r e f o r e ，c t a bc a nc n h a n t et h ef l u o r e s c e n c ei n t e n s i t yo f v i l 山东大学博士学位论文 m o e i n a i ”c o m p l e x ( t h i sw o r kw a sp u b l i s h e di nc h e m i c a lp h y s i c a ll e t t e r sa n d b i o c h i m i e ) i nt h et h i r ds e c t i o n ，t h ef o r m a t i o na n dd e p o l y m e r i z a t i o no fa od i m e ri nt h e p r e s e n c eo fs d b sa n db s a a r es t u d i e d b a s e do nt h i s ，an e wf l a o r i m e t r i cm e t h o do f d e t e r m i n a t i o no fp r o t e i nw a sd e v e l o p e d i nt h i sw o r k ，i n t e r a c t i o nm e c h a n i s mw a s s t u d i e du s i n gm u l t i t e c h n i q u e s i ti sc o n s i d e r e dt h a ts d b sc a np r o m o t et h ef o r m a t i o n o fa od i m e r ，r e s u l t i n gi nt h eq u e n c h i n go ft h ef u o r e s e e n c eo fa o ，w h e r e a sb s ai s a d d e di n t oa o s d b ss y s t e m ，b s aa n ds d b sc a ni n t e r a c ta n df o r mt h en e g a t i v e m i c e l l el i k ec l u s t e rc o m p l e xw i t h “a r o m a t i c r i n gs t a c k i n g ”，w h i c hd e s t r o y st h e f o r m a t i o nc o n d i t i o n so fa od i m e ra n dm a k e ss o m ea od i m e r sr u mi n t om o n o m e r ， r e s u l t i n gi nt h ef l u o r e s c e n c ee n h a n c e m e n to fa o - s d b ss y s t e m f u r t h e r m o r e ，i ti s p o s s i b l et h a tt h ep o s i t i v ea oa n dr e s i d u a la od i m e ra r ed i s s o l v e di n t ot h en e g a t i v e b s a s d b sc l u s t e rt h r o u g he l e c t r o s t a t i ca n dh y d r o p h o b i cf o r c e sa n df o r mal a r g e a s s o c i a t i o n h e r e ，t h ef l u o r e s c e n c ee n h a n c e m e n to fa o - s d b sh a st h r e er e a s o n s ：( 1 ) t h ed e p o l y m e r i z a t i o no fs o m ea od i m m e r ；( 2 ) t h eh y d r o p h o b i cm i c r o e n v i r o n m e n t p r o v i d e db yb s aa n ds d b s ；( 3 ) t h ei n t e r m o l e c u l a re n e r g yt r a n s f e rb e t w e e nb s a a n d a o ( t h i sw o r kw a sp u b l i s h e d 伽l u m i n e s c e n c ea n dj o u r n a lo fc o l l o i da n d i n t e r f a c es c i e n c e ) i nt h ef o u r t hs e c t i o n ，i tw a sf o u n dt h a tm o r i nc a ns e l e c t i v e l yr e c o g n i z ef s d n ai n d o u b l e s t r a n dn u c l e i ca c i d s b a s e do nt h i s an e ws e n s i t i v ea n ds e l e c t i v em e t h o do f d e t e r m i n a t i o no f 窍d n aw a sd e v e l o p e d a n di t sl i m i to fd e t e c t i o ni s 1 0 q o g m l f u r t h e r m o r e ，t h ei n t e r a c t i o nm e c h a n i s mb e t w e e nm o r i na n df s d n aw a sa l s os t u d i e d a n dt h em e c h a n i s ms t u d yi n d i c a t e st h a tt h e r ea l eg r o o v eb i n d i n ga n dm o l e c u l a rf o r c e s b e t w e e nm o r i na n df s d n a t h ef l u o r e s c e n c ee n h a n c e m e n to fm o r i ni sc o n s i d e r e dt o o r i g i n a t ef r o mt h eh y d r o p h o b i cm i c r o e n v i r o n m e n ti n c l u d i n gs m a l lp o l a r i t ya n dl a g e r m i c r o v i s c o s i t y a c c o r d i n gt ot h ei n t e r a c t i o nm e c h a n i s mb e t w e e nm o r i na n df s d n a i ti s p o s s i b l et h a tm o r i nm a yc o m b i n eo nt h ep a r t sw i t hm o r ea ( o rc ，aa n dc ) b a s e si n g r o o v eo f f s d n a a n db ea g o o df l u o r e s c e n c ep r o b e i nt h ef i f t hs e c t i o n ，t h ea d s o r p t i o nb e h a v i o ro fg e l a t i no n t oaq u a r t zs u r f a c ew a s m o n i t o r e dv i aa ne l e c t r o d e - s e p a r a t e dp i e z o e l e c t r i cs e n s o r ( e s p s ) ，w h e r et h eq u a r t z c r y s t a ls u r f a c ei si nad i r e c tc o n t a c t 、v i 协t h el i q u i dp h a s e i ti ss h o w nt h a tt h ea d s o r p t i o n o fg e l a t i no nq u a r t zs u r f a c ec a nb ed e s c r i b e db yam o d e li n v o l v e st h er e v e r s i b l e v 1 1 1 山东大学博士学位论文 a d s o r p t i o n ，d e s o r p t i o na n dt r a n s f o r mf r o mr e v e r s i b l es t a t et oi r r e v e r s i b l eo n e b yu s i n ga p r o g r e s s i v ea p p r o a c hc o m p u t i n gm e t h o d ，t h er a t ec o n s t a n t sw e r ee s t i m a t e d 。 t h ec h i e f c h a r a c t e r i s t i e so f t h i st h e s i sa r ea sf o l l o w s ： 1 w ef i n da n di n v e s t i g a t et h ee n h a n c e m e n te f f e c to fm o r i n a 1 3 + s d b s b s aa n d m o r i n - a 1 3 + s d b s - b s as y s t e m s ，a n da p p l yi tt ot h ed e t e r m i n a t i o no fp r o t e i n s s e n s i t i v e l y f u r t h e r m o r e ，t w oe x c i t a t i o nw a v e l e n g t h sw e r eu s e di n t ot h es y s t e ma n d t h el i m i t so f d e t e r m i n a t i o nr e a c hn gl e v e l 2 i na d d i t i o n ，t h ei n t e r a c t i o nm e c h a n i s mo fm o r i n - a 1 3 + - c t a b b s as y s t e mw a s s t u d i e di nd e t a i l e s p e c i a l l y ，w ea l s op r o p o s e dt h ei n t e r a c t i o nm o d e lo ft h es y s t e m s m o r i n ，a i ”，c t a ba n db s af o r mas u p e r m o l e c u l a ra s s o c i a t i o n 埘t i lm u l t i l a y e r s t r u c t u r e ，i nw h i c hm o r i n - a 1 3 + i sc l a m p e db e t w e e nb s aa n dc t a bt h r o u g hs e l f - a s s e m b l i n g f u n c t i o nw i t he l e c t r o s t a t i c a t t r a c