（药理学专业论文）氨基胍对大鼠急性心肌缺血损伤的影响.pdf

目录 川1 1 1 1 1 1 i | 1 1 l i l i l 洲i l i l l 洲 y 19 0 0 5 5 8 中文摘要1 英文摘要5 英文缩写1 0 研究论文氨基胍对大鼠急性心肌缺血损伤的影响 引言l l 第一部分急性心肌缺血大鼠一氧化氮一氧化氮合酶的变化 前言1 2 刖舌”一一”l z 材料与方法1 2 结果1 4 附图“”“”一“1 6 附表- 2 l 讨论2 3 j 、结”一一一一”“一“”一一一一2 4 参考文献2 4 第二部分氨基胍对大鼠急性心肌缺血损伤心肌组织氧化应激的影响 前言2 6目l j 舌”2 6 材料与方法2 6 结果2 8 附图”2 9 附表3 3 讨论3 5 以、结”“”3 6 参考文献3 6 第三部分氨基胍对大鼠急性心肌缺血损伤心肌组织细胞凋亡的影响 前言3 7日舌3 7 材料与方法8 7 结果4 1 附图- 4 2 附表4 6 讨论4 7 j 、结一”。一4 8 参考文献4 8 结论”4 9 综述一氧化氮在大鼠急性心肌缺血损伤中的研究进展5 0 致谢5 7 个人简历5 8 中文摘要 氨基胍对大鼠急性心肌缺血的影响 摘要 心肌缺血是指心脏的血液灌注减少，导致心脏的供氧减少，心肌能量 代谢不正常，不能支持心脏正常工作的一种病理状态，严重威胁人类的身 心健康，因而对于缺血心肌保护作用的研究一直是研究者们关注的课题。 大量动物实验及临床实验均表明，氧自由基在心肌缺血损伤的发生发展中 起着十分重要的作用，清除氧自由基可促进缺血后心肌功能的恢复和减轻 缺血心肌损伤的作用。而细胞凋亡是心肌缺血损伤发病机制的又一重要环 节之一。 一氧化氮叫i t r i co x i d e ，n o ) 作为体内的一种重要化学递质和细胞内信 号分子，一直倍受医学界的广泛关注。人们对其在体内各种生理和病理过 程中的调节作用进行了大量的研究，发现n 0 具有舒张血管、调节血压、 抑制心肌重构及血小板聚集、保护心肌血管内皮细胞等多种功能；病理状 态下，n o 还与多种心血管疾病的病理损伤及修复有关。近年来许多研究结 果表明，n o 在心肌缺血再灌注损伤中起着十分重要的作用，但关于n o 在心肌缺血中的作用，仍然是一个尚存争议的问题。本研究旨在通过建立 大鼠急性心肌缺血动物模型，观察缺血心肌中n o 含量和n o s 活性的变 化，探讨n o s 抑制剂氨基胍对急性心肌缺血损伤的影响及其作用机制。 第一部分急性心肌缺血大鼠一氧化氮一氧化氮合酶的变化 目的：观察大鼠急性心肌缺血过程中n o n o s 的变化。 方法：健康雄性s d 大鼠( 2 7 0 2 0 9 ) 共8 0 只，随机分为1 0 组假手 术l h 组：假手术3 h 组：假手术6 h 组：假手术9 h 组：假手术1 2 h 组；缺血1h 组；缺血3h 组；缺血6 h 组；缺血9 h 组；缺血 1 2 h 组，每组各8 只。大鼠麻醉后连接心电图电极，记录术前i i 导联心电 图，消毒手术区域，结扎冠状动脉左前降支2 分钟后再次记录心电图的变 化，以s t 段较术前抬高o 1 5 m v 以上作为模型成功，假手术组只穿线不 结扎。分别于1h 、3h 、6h 、9h 和1 2h 后p o w e r l a b 8 s 多导生理仪记录 各组大鼠缺血末左室收缩峰压( l v s p ) 、左室舒张末压( l v e d p ) 、左室压力 变化速率( 士d p d t m a x ) 、计算左室发展压( l v d p ) ，经颈总动脉取血并迅速 中文摘要 开胸取心脏，采用硝酸还原酶法检测血清中n o 的含量，一氧化氮合酶 o s ) 分型试剂盒检测心肌组织中i n o s 和c n o s 的活性。 结果： 1 假手术组大鼠l v e d p 、士d p d 舡n a 、l v d p 在缺血后l h 1 2 h 之间 无明显变化。与假手术组比较，缺血1 h 时大鼠上述各项指标均无明显变 化，缺血3 h 时士d p d t i i l a x 、l v d p 明显降低( 尸 o 0 5 或尸如0 1 ) ，l v e d p 明显升高( 尸 o 0 1 ) ；此后随着缺血时间的延长，缺血6 h 、9 h 和1 2 h 时l v d p 、 士d p d t m a x 明显降低，l v e d p 明显升高( p o 0 5 或尸 o 0 1 ) 。 2 假手术组大鼠血清中n o 含量和心肌组织c n o s 、i n o s 活性在缺 血后1 h 1 2 h 之间无明显变化。与假手术组比较，缺血l h 时大鼠血清中 n o 含量和心肌组织c n o s 、i n o s 活性无明显变化，缺血3 h 时大鼠血清 n o 含量升高，随缺血时间延长逐渐升高，在9 h 达到高峰( p 0 0 5 ) ；缺 血3 h 时大鼠心肌组织i n o s 活性升高，c n o s 活性降低( p o 0 5 ) ，随缺 血时间延长，i n o s 活性逐渐升高，在6 h 达到高峰( p o 0 5 ) ，而c n o s 活性逐渐降低，在9 h 达到低谷( p o 0 5 ) 。 小结：大鼠缺血l h 时心肌组织未出现明显损伤，缺血3 h 至1 2 h 时均 存在组织损伤，并引起内源性n o 含量及n o s 活性的变化，提示n 0 n o s 体系可能参与急性心肌缺血的病理生理过程。 第二部分氨基胍对大鼠急性心肌缺血损伤心肌组织氧化应激的影响 目的：观察氨基胍对大鼠急性心肌缺血的影响并从氧化应激方面探讨 其作用机制。 方法：健康成年雄性s d 大鼠( 2 7 0 2 0 9 ) 共2 4 只，随机分为3 组，每 组8 只，分别为i 假手术组；i i 缺血组i i i 缺血+ 氨基胍( a g ) 组( 1 0 0m g l ( g ) 。 用1o 的水合氯醛3 0 0 m 酣呜麻醉大鼠，结扎冠状动脉左前降支，记录心 电图的变化，缺血+ a g 组( 1 0 0m g l ( g ) 于缺血6 h 时腹腔注射a g ，缺血组 注射等容量的生理盐水，假手术组只穿线不结扎。各组大鼠均于缺血9 h 时经颈总动脉取血迅速开胸取心脏。采用硝酸还原酶法检测血清中n o 的 含量，采用n o s 分型试剂盒检测心肌组织中c n o s 、i n o s 的活性；测定 心肌组织中超氧化物岐化酶( s o d ) 活性、丙二醛( 加a ) 含量以及谷胱甘肽 过氧化物酶( g s h p x ) 活性和血清中乳酸脱氢酶( l d h ) 的活性。 中文摘要 结果： 1 与假手术组大鼠比较，缺血组大鼠血清中n o 含量和心肌组织中 i n o s 活性明显升高( 尸 0 0 1 ) ，c n o s 活性明显降低( p o 0 1 ) 。与缺血组大 鼠比较，缺血+ a g 组大鼠血清中n 0 含量和心肌组织i n o s 活性明显降低 ( 肚o 0 1 ) ，c n o s 活性也有所降低，但无显著性差异。 2 与假手术组大鼠比较，缺血组大鼠心肌组织中s o d 活性明显降低 ( 尸 o 0 1 ) ，m d a 含量明显升高( p o 0 1 ) 。与缺血组比较，缺血+ a g 组大鼠 心肌组织中s o d 活性明显升高( 氏o 0 1 ) ，m d a 含量明显降低( 氏o 0 1 ) 。 3 与假手术组大鼠比较，缺血组大鼠心肌组织中g s h p x 活性明显降 低( 尸 o 0 1 ) ，血清中l d h 活性明显升高( p o 0 1 ) 。与缺血组比较，缺血+ a g 组大鼠心肌组织中g s h p x 活性明显升高( 尸 o 0 1 ) ，血清中l d h 活性明显 降低( 尸 o 0 5 ) 。 小结：氨基胍对大鼠心肌缺血损伤有一定的保护作用，抑制i n o s 活 性，减少n o 的生成，降低m d a 的含量和l d h 的活性，提高s o d 和 g s h p x 活性可能是其重要的作用机制。 第三部分氨基胍对大鼠急性心肌缺血损伤心肌组织细胞凋亡的影响 目的：观察氨基胍对大鼠急性心肌缺血组织细胞凋亡的影响。 方法：健康成年雄性s d 大鼠( 2 7 0 2 0 9 ) 共2 4 只，随机分为3 组，每 组8 只，分别为i 假手术组；i i 缺血组；i i i 缺血+ 氨基胍( a g ) 组( 1 0 0m g l ( g ) 。 用1 0 的水合氯醛3 0 0 m 刚蛞麻醉大鼠，结扎冠状动脉左前降支，记录心 电图的变化，缺血+ a g 组( 1 0 0m g l ( g ) 于缺血6 h 时腹腔注射a g ，缺血组 注射等容量的生理盐水，假手术组只穿线不结扎。各组大鼠均于缺血9 h 时经颈总动脉取血迅速开胸取心脏。采用原位末端标记法( n 肥l ) 检测心 肌细胞凋亡率，免疫组化法测定b c l 2 、b a x 蛋白的表达，船染色观察 心肌组织形态学变化。 结果： 1 与假手术组大鼠比较，缺血组大鼠心肌细胞凋亡率、b a ) ( 表达阳性 细胞数百分率明显升高( 尺o 0 1 ) ，b c l 2 表达阳性细胞数百分率明显降低 ( 尸 o 0 1 ) 。与缺血组比较，a g 组大鼠心肌细胞凋亡率、b a x 表达阳性细 胞数百分率明显降低，b c l 2 表达阳性细胞数百分率明显升高( 尸 o 0 5 ) ；t 1 1 e l v i ) pa n d d p d t m a xw e r es i g n i f i c a n t l yd e c r e a s e da n dt h e l v e d pw a sm a r k e d l yi n c r e a s e da t3h o u ra r e ri s c h e m i a ( 户 o 0 5 ，尸 o o1 ) ， d u r i n g6h o u rt o12h o u ra r e rl i g a t i n gl a d c t h ec a r d i a cf u n c t i o np a r a m e t e r s w e r es i g n i f i c a n t l yd e c r e a s e dc o m p a r e dw i t ht h o s eo fs h 锄g r o u p( p 0 0 5 ， p o 0 1 ) 2 i ns h a n lg r o u p ，t 1 1 ec o n t e n to fn oi ns e m ma n dm ea c t i v i t i e so fi n o s a n dc n o si nr n y o c a r d i u mw e r en o ta l t e r e d 行o m1h o u rt o12h o u r c o m p a r e d w i mm o s eo ft 1 1 es h 锄g r o u p ，n l ec o n t e mo fn oi ns e r u mw a si n c r e a s e da t3 h o u ra r e ri s c h e m i aa n d w a sp e a k e da t9h o u ri 1 1r a t s ( p o 0 5 ) a t3h o u ra r e r i s c h e m i a ，m e 枷v 埘o f i n o si nm y o c a r d i u mt i s s u ew a si n c r e a s e d ，w h i l e 也e a c t i v i t yo fc n o si nm y o c a m i u mw a s d e c r e a s e dc o m p a r e dw i t l lm a to ft 1 1 e s h 锄铲o u p ( p o 0 5 ) t h ei n o sa c t i v 埘w a sp e a k e da t6h o u r ( p o 0 5 ) ，w h i l e 6 英文摘要 c n o sa c t i v i 锣w a su n c e a s i n g l yd e c r e a s e dt or e a c ht h et r o u 曲a t9h o u ra f e r i s c h e m i ai nr a t s ( p o 0 5 ) s u m m a n r ：t h ec o n t e n to fn oi ns e m ma n dt h ea c t i v i t i e so fi n o sa n d c n o si nm y o c a r d i u mw e r en o ta l t e r e da t1h o u ra f t e ri s c h e m i ai nr a t s d u r i n g 3h o u rt ol2h o u ra r e rm v o c a r d i a li s c h e m i at h ec o n t e n to fn oi ns e n j ma n d t h ea c t i v i 时o fi n o si nm y o c a r d i u mw e r em a r k e d l yi n c e r a s e d i tc o u l db e c o n c l u d e dt h a tn o n o ss y s t e mm a yb ep l a yai m p o r t a mr o l ei 1 1t h e p h y s i o p a t h o l o g i cp r o c e s so f a c u t em y o c a r d i a li s c h e m i ai nr a t s p a r t2e f f e c t so fa m i n o g u a n i d i n eo nt h er e a c t i o no fo x i d a t i v es t r e s si n a c u t em y o c a r d i a l i s c h e m i ar a t s o b j e c t i v e ：t bs t u d yt h ee f f e c to fa m i n o g u a n i d i n eo na c u t em y o c a r d i a l i s c h e m i aa n de x p l o r ei t sp o s s i b l em o l e c u l 甜m e c h a n i s m s 丘o mm er e a c t i o no f o x i d a t i v es t r e s si nr a t s m e t h o d s ： t w e n t ) r - f o u rm a l e r a t sw e r e r a n d o m l yd i v i d e di n t o t 1 1 r e e g r o u p s ( n 一8 ) s h 锄铲o u p ；i s c h e m i a 铲o u p ；i s c h e m i a + a m i n o g u a n i d i n e ( a g ) 铲o u p ( 1o o m l 唱) t h el e ra n t e r i o rd e s c e n d i n gc o r o n a r y ( l a d c ) w a sl i g a t d e d ， 、t l i l ei tw a sn o t1 i g a t e di ns h 锄g r o u pr a t s a g ( 1o o m g k g ) w a sa d m i n i s t r a t e d a t6h o u ra r e ri s c h e m i ai ni s c h e m i a + a gg r o u pr a t s t h er a t sw e r ek i l l e da t9 h o u ra r e ri s c h e m i a t h ec o n t e mo fn 0a n dt h ea c t i v i t yo fl d hi ns e r u m ，t h e a c t i v i t i e so fi n o sa n dc n o si nm y o c a r d i u mw e r er e s p e c t i v e l yd e t e c t e d t h e a c t i v i t i e so fs o d ，g s h p xa n dt h ec o n t e n to fm a l o n d i a l d e h y d e ( m d a ) i n m y o c 2 u r d i a l t i s s u ew e r em e a s u r e di nr a t s r e s u l t s ： 1 t h ec o n t e n to fn oi ns e n l mw a si n c r e a s e da 舭ri s c h e m i a ，i n o s a c t i v 时i nm y o c a r d i a lt i s s u ew a ss i g n i f i c a n t l yi n c r e a s e d ( p o o1 ) ，w h i l ec n o s a c t i v i 够w a sd e c r e a s e di ni s c h e m i ag r o u pc o m p 2 u r e dw i t hm a to ft h es h 咖 伊o u pi nr a t s ( p o 0 5 ) c o m p a r e dw i t l lt 1 1 0 s eo fi s c h e m i ag r o u p ，t h ec o n t e n to f n oi ns e r u ma n dm ea c t i v i t yo fi n o sw e r ed e c r e a s e di ni s c h e m i a + a g g r o u p ，b u tm ea c t i v 时o fc n o sw a s n o ts i 鲥f i c 眦1 ya l t e r e di nr a t s 2 。i ni s c h e m i ag r o u p ，m ea c t i v i t i e so fs o da n dg s h p xw e r es i g n i 矽一 c a m l yd e c r e a s e d ，t 1 1 ec o n t e n to fm a l o n d i a l d e h y d e ( m d a ) i nm y o c a u r d i a lt i s s u e 7 英文摘要 a n dm ea c t i v i t yo fl d hi ns e m mw e r e s i g n i f i c a n t l yi n c r e a s e d ( p o o1 ) c o m p a r e dw i t ht h o s eo fs h a mg r o u p c o m p a r e dw i t ht h o s eo fi s c h e m i a 鲈o u p ， t h ea c t i v i t i e so fs o da 1 1 dg s h p xw e r es i g n i 6 c a n t l yi n c r e a s e d ，t h ec o n t e n to f m d ai nm y o c a r d i a l t i s s u ea n dt h ea c t i v i t yo fl d h i ns e r u mw e r es i g n i f i c 觚t l y d e c r e a s e di ni s c h e m i a + a g g r o u p ( p 0 0 5o rp o o1 ) s u m m a r y ： i tc o u l db ec o n c l u d e dt h a t 锄i n o g u a n i d i n eh a sab e n e f i c i a l m y o c 莉i a lp r o t e c t i o na g a i n s t 出ei s c h e m i ai n j u 巧i nr a t sb y 锄e l i o r a t i n gt 1 1 e m n c t i o no fm y o c 2 u r d i u mt i s s u e ，u p r e g u l a t i n gm ea c t i v i t i e so fs o da n dg s h p x a n dd o w 珈汜g u l a t i n gt 1 1 ec o n t e n to fm ：d aa 1 1 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c l u s i o n s ： 1t h ec o n t e n to fn oi ns e r u ma n dt h ea c t i v i t i e so fi n o sa n dc n o si n m v o c a r d i u mw e r en o ta l t e r e da t1h o u r 姬e r i s c h e m i ai nr a t s d u r i n g3h o u rt o 12h o u ra r e rm y o c a r d i a l i s c h e m i at h ec o m e n to fn o i ns e r u ma i l dm ea c t l v 时 o fi n o si nm v o c a r d i u mw e r em a r k e d l yi n c e r a s e d i tc o u l db ec o n c l u d e d m a t n o n o ss y s t e mm a yb ep l a yai m p o r t 锄tr o l ei nt h ep h y s i o p a m o l o g i cp r o c e s s o fa c u t em y o c a r d i a l i s c h e m i ai nr a t s 2i tc o u l db ec o n c l u d e dt h a ta n ：l i l l o g u a n i d i n eh a sab e n e 矗c i a lm y o c a r d i a l p r o t e c t i o na g a i n s tt h ei s c h e m i ai n ju 巧i nr a t sb ya m e l i o r a t i n gt h e 如n c t i o no f m y o c a r d i u mt i s s u e ，u p r e g u l a t i n g t h ea c t i v i t i e s0 fs o d 锄dg s h - p x a n d ( 1 0 w n r e g u l a t i n gt h e c o n t e n to fm d 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l o p e d p r e s s u r e l v e d pl e rv e n t r i c u l a re n dd i a s t o l i cp r e s s u r e s o d s u p e r o x i d ed i s m u t a s e g s h p 又 g l u t a t h i o np e r o x i d a s e 左室收缩压 左室发展压 左室舒张末压 超氧化物歧化酶 谷胱甘肽过氧化酶 m d a m a l o n d i a l d e h y d e丙二醛 t l 订怔lt e n n i n a ld e o x y n u c l e o t i d y lt r 肌s f e r a s e 原位末端标记法 l d h a g m e d i a t e dd t l mn i c k e dl a b e l i n g l a c t a t ed e h y 出o g e n a s e a m i n o g u a n i d i n e 乳酸脱氢酶 氨基胍 研究论文 氨基胍对大鼠急性心肌缺血的影响 引言 近些年来，心脑血管疾病的发病率呈不断上升的趋势，其中心肌缺血 的发病率非常高，其最主要、最常见的病因是冠状动脉狭窄，使心脏的血 液灌注减少，导致心脏的供氧减少，心肌能量代谢不正常，不能支持心脏 正常工作。长期心肌缺血可以转变为心肌梗塞，亦可能逐渐演变为心肌纤 维化，出现心脏增大，发生心律失常或心力衰竭，亦可能猝死，严重威胁 人类的健康。目前关于心肌缺血损伤的可能机制包括：内皮功能紊乱、自 由基损伤、炎症反应、线粒体功能障碍、细胞凋亡和细胞内钙超载等。大 量动物实验及临床实验均表明，自由基在心肌缺血损伤的发生发展中起着 重要作用，清除自由基可促进缺血后心肌功能的恢复以及结构的改善，减 轻缺血处心肌的损伤。细胞凋亡是心肌缺血损伤发病机制的重要环节之 一，心肌缺血过程中发生物质代谢改变，氧自由基产生过多等，这些均可 能引起细胞凋亡的发生。 n o 作为体内的一种重要化学递质和细胞内信号分子，一直倍受医学 界的广泛关注。人们针对这种独特气体分子在体内各种生理和病理过程中 的调节作用进行了大量的研究，发现n o 具有舒张血管、调节血压、抑制 心肌重构及血小板聚集、保护心肌内皮细胞等多种功能；病理状态下，n o 还与多种心血管疾病的病理损伤及修复有关。许多结果表明，n 0 在心肌 缺血再灌注损伤中起着十分重要的作用，但关于n o 在心肌缺血状态下的 作用仍是一个尚存争议的问题。本研究旨在通过建立大鼠急性心肌缺血动 物模型，观察心功能、n o 含量及n o s 活性的变化，并探讨n o s 抑制剂氨 基胍对急性心肌缺血损伤的影响及其作用机制。 研究论文 第一部分 急性心肌缺血大鼠内源性一氧化氮及一氧化氮合酶的变化 上-j- 刖菁 急性心肌缺血是发病率很高的缺血性心脏疾病，因为心肌缺血是冠 心病( c 皿) 急性发作的基本病理表现，i 临床上主要发展为急性心绞痛以 及心肌梗塞，严重者可危及到患者的生命f l 】。目前大量研究证实n o 参与 了心肌缺血再灌注损伤的发生，对缺血再灌注损伤的心肌起到一定的保 护作用，但其与急性心肌缺血相关性的研究尚有争议。本研究拟采用复 制急性心肌缺血大鼠模型，观察内源性n o n o s 体系在缺血不同时间的 动态变化，以了解其在急性心肌缺血过程中的作用。 l 材料 1 1 药物和试剂 一氧化氮试剂盒 一氧化氮合酶试剂盒 考马斯亮兰试剂盒 其余均为国产分析纯试剂 1 2 仪器 八道生理记录仪p o w e r l a b 8 s 电动匀浆器s i l e n t c r u s h e rm 低温高速离心机 分析天平m e l 凡e r a h 2 4 0 a e 2 4 0 型分析天平 7 2 2 分光光度计 恒温水浴箱 s h a c 恒温振荡器 材料与方法 南京建成生物工程研究所 南京建成生物工程研究所 南京建成生物工程研究所 澳大利亚a di n s t n l m e n t 公司 德国h e i d o l p h 公司 德国e p p e n d o r f 公司 瑞士梅特勒公司 上海精密科学仪器有限公司 上海第三分析仪器厂 余姚市东方电工仪器厂 常州国华电器有限公司 研究论文 1 3 实验动物 健康雄性s p r a g u e d a w l e y ( s d ) 大鼠，体重2 7 0 2 0 9 ，由河北省实验 动物中心提供。 2 模型制备及动物分组 2 1 大鼠心肌缺血模型制备 将大鼠用1 0 水合氯醛3 0 0 m g l ( g 腹腔注射麻醉，取仰卧位固定，