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钟卫权：不同运动负荷对大鼠血浆纤溶系统的影响 中文摘要 人体内的纤溶系统功能是清除沉积于血管上的纤维蛋白溶解血凝块，维持 血流通畅。它与凝血系统和血小板的活性存在一种动态的平衡关系，它们之间这 种平衡关系的破坏，与多种疾病如商血压、冠心病、脑血栓、肾脏及肝脏疾病的 发生有关。本篇论文前一部分综述了纤溶系统所包含的各成员和它们的生理机制 以及与纤溶系统异常相关的疾病，运动与纤溶系统的关系及目前国内外研究的现 状。第二部分是实验部分，实验的e 1 的是通过对s d 大鼠分成四组进行8 周不同 负荷的游泳训练，观察运动对大鼠体内纤溶系统的影响，检测t - p a 和p a l 1 的活 性变化，从而根据实验的结果可以为健身运动提供一个理论依据。结果显示：经 过8 周的游泳训练，9 0 分钟和1 8 0 分钟组的大鼠体重与对照组比较差异非常显著 ( p o 0 5 ) ，1 8 0 分钟组的p a l 1 活性 升高3 3 ( p 0 0 5 ) i n1 8 0m i n u t e sg r o u pt h ep a l 一1i n c r e a s e db y3 3 ( p 0 0 1 ) s u m m a r y ：m o d e r a t ew o r k _ l o a da n de x c e s se x e r c i s em i g h ti n c r e a s et h ea c t i v i t yo f f i b r i n o l y s i ss y s t e m h i g hw o r k l o a dh a dc o n t r a r ye f f e c t t h i sm i g h t b ee x p l a i n e d b ym o d e r a t ee x e r c i s ec o u l d s t i m u l a t et h ee n d o t h e l i a lc e l l ss e c r e ta n dr e l e a s et - p a m o r e o v e r ，r e d u c et h ei n a c t i v a t i o no ft - p a b u tt h ee f f e c to f h i g hw o r k - l o a de x e r c i s ei s c o n t r a r y i k e y w o r d s ：t - p a ，p a l 一1 ，e x e r c i s e ，t r a i n i n g 塑里壑! 至旦重垫璺垄型查垦皇鲞堑堕墨竺堕墅堕王 符号说明表 p l a s m i n o g e n p l a s m i n o g e n a c t i v a t o r p l a s m i n o g e n a c t i v a t o ri n h i b i t o r p l a s m i n a p o p r o t e i n a t i s s u e p l a s m i n o g e na c t i v a t o r u r i n e p l a s m i n o g e na c t i v a t o r 纤溶酶原 纤溶酶原激活物 纤溶酶原激活物抑制物 纤溶酶 载脂蛋白a 组织型纤溶酶原激活物 尿激酶型纤溶酶原激活物 t h r o m b i n - a c t i v i t yf i b r i n o l y s i si n h i b i t o r 凝血酶激活的纤溶抑制物 t h r o m b o m o d u l i n凝血酶血栓调节蛋白 y o nw i l l e b r a n df a c t o r血管性假血友病因子 a m c h i d o n i ca c i d花生四烯酸 t h r o m b o x a n ea 2血栓素a 2 l i p o p r o t e i n ( a ) 脂蛋白a r e n i n a n g i o t e n s i ns y s t e m 肾索血管紧张素系统 e n d o t h e l i n内皮素 c a t e c h o l a m i n儿茶酚胺 n o r e p i n e p h i n e 去甲肾上腺素 d o p a m i n e 多巴胺 c o r o n a r yh e a r td i s e a s e 冠心病 a t h e r o s c l e r o s i s动脉粥样硬化 p r o t e i n c血浆蛋白c f i b r i nd e g r a d a t i o n p r o d u c t s 纤维蛋白降解产物 a d e n o s i n e 3 5 c y c l i cm o n o p h o s p h a t e 环磷酸腺苷 队眦儿州吼m删椰从隅胁盯队队觚k聊一 扬州大学硕士学位论文 1纤溶系统的生理机制 1 总论 纤溶系统即纤维蛋白溶解系统的简称。主要功能是清除沉积于血管上的纤 维蛋白溶解血凝块，维持血流通畅。此外，还参与组织修复，恶性肿瘤转移、 吞噬功能、排卵和胚胎植入过程。大量的临床研究证明，人体内的纤溶系统与 凝血系统和血小板活性存在一种动态的平衡关系，它们之间这种平衡关系的破 坏，与多种疾病如高血压、冠心病、脑血栓、肾脏及肝脏疾病的发生有关，并 且影响预后的效果。纤溶系统主要由纤溶酶原( p l a s m i n o g e n ，p i g ) 纤溶酶原激 活物( p l a s m i n o g e na c t i v a t o r ，p a ) 和激活物特异性抑制剂( p l a s m i n o g e na c t i v a t o r i n h i b i t o r , p a l ) 、纤溶酶( p l a s m i n ) 和纤溶酶抑制剂组成。p a 可以分成组织型和 尿激酶型2 种，p a i 有多种，它们是p a l 一1 、p a l 2 、p a l 3 和蛋白酶连接素， 纤溶酶抑制剂有a ：纤溶酶抑制剂n ：巨球蛋白和抑制物。一般认为纤溶作用有 p a 启动，p a 激活无活性的纤溶酶原形成纤溶酶。纤溶酶降解纤维蛋白使血栓溶 解，纤溶系统的抑制作用发生在p a l 1 抑制p a ，纤溶酶抑制剂抑制纤溶酶过程。 其激活过程见下图。 p l a s m i n o g e n 卜p l a s m i n f i b r i n o g e n 2 纤溶系统成员的分子结构和功能 2 一a n t i p l a s m i n c 4 i n h i t o r 2m a c r o g l o b u l i n d e g r a d a t i o np r o d u c t s ( f d p ) 钟卫权：不同运动负荷对大鼠血浆纤溶系统的影响 2 1 纤溶酶原 纤溶酶原( p l a s m i n o g e n ，p l g ) 又名纤维蛋白溶酶原( 血浆素原) 。天然的纤溶酶 原是一种分子量9 30 0 0 的b2 球蛋白，由单一多肽链组成，其分子中含有7 9 1 个氨 基酸，基因长5 2 5 k b 有1 9 个外显子和1 8 个内含子。它的n 端是谷氨酸，c 端是 天冬氨酸，有2 4 个双硫键，结构中含有5 个环饼( k r i n g l e ，k ) 状结构，第一个k 结构对赖氨酸有高亲和力，k d 值为9 i t m o l l 。这可能在与纤维蛋白的结合过程中起 重要作用。此外，研究发现纤溶酶原的第4 、5 k 结构与载脂蛋白a a p o p r o t c i n a ，a p o ( ) 】 有很多相似之处a p o ( a ) 的e d n a 分析是有3 7 个重复的4 k 结构。这些k 结构中 7 5 一8 5 氨基酸序列与纤溶酶原的4 k 结构相同。a p o ( a ) 的5 k 区中有9 0 与纤溶 酶原第5 k 的氨基酸序列相同。由于二者结构存在较多相似之处。故在与纤溶蛋白 原结合的过程中有竞争，从而抑制了纤溶活性。 纤溶酶原的激活是纤溶、细胞迁移、细胞外基质降解等多种生物过程的关键步 骤。激活分直接与间接两种。在t - p a 或u p a 直接作用下，纤溶酶原肽链从 a r 9 5 6 1 v a l 5 6 2 之间断裂，由二硫键相连的有活性的纤溶酶。s k ：s a k 与t - p a 、u p a 不同，它们不是酶，必须与p i g 以1 ：1 的分子比例结合成复合物后，才能激活其他 分子。当s k 与s a k 与p l g 形成复合物后，经过一定的分子内转变，暴露出活性位 点，激活游离的p l g 。不同的是s k p l g 复合物能抵抗以a p 的作用，因而血栓中的 p l g 被激活后能发挥高效的溶栓作用，而s k - p i g 复合物在循环中很快被a 2 一a p 所 中和。只有当其与赢凝块表面结合后，才能发挥高效特异的纤溶作用。 2 2 组织型纤溶酶原激活物( t i s s u e p l a s m i n o g e na c t i v i t y ，t - p a ) 2 2 1 t p a 的分子结构 t - p a 由5 2 7 个氨基酸组成，分子量大约为6 80 0 0 ，属于丝氨酸类蛋白酶。主要 由血管内皮细胞合成和贮存，并分泌入血液，其他组织虽然也能产生，却含量很少。 研究证实肝脏是t p a 的清除器官，且肝脏对它的清除是受体介导的过程，如低密度 脂蛋白受体相关蛋白( l r p ) ，甘露糖受体( m r ) 等 i - 4 。天然的t p ：a 含有1 4 个二 硫键，重链和轻链之间由二硫键相连，由3 个糖化基因长3 2 7 k b ，有1 4 个外显子 扬州大学硕士学位论文 和1 3 个内含子，定位与第8 号染色体，等电点p h 值7 8 8 6 ，在p h 5 8 - 8 0 溶液中 较稳定。t p a 的分子结构有单链( s i n g l e c h a i n ) 和双链( t w o c h a i n ) 2 种形式，单 链t - p a 不稳定，在纤溶酶等蛋白水解酶的作用下分解成有二硫键相连的双链t p a 。 t - p a 进入血液后有三种归途：一是执行纤溶系统的激活功能。二是被肝细胞受体识 别而被快速摄入降解。三是迅速被血浆中的p a l 抑制。由于t - p a 被肝快速降解丽使 其在血液中的半衰期很短( 约为5 分钟) 。如果血浆中p a l 1 的水平升高，t - p a 在 血浆中的半衰期可短于1 分钟。而t - p a 在血中与纤维蛋白结合在某种程度上可逃逸 搜p a l l 灭活。 t - p a 分子中的结构顺序是信号肽前体肽指状结构一上皮生长因子样区( e g f ) 结构一2 个k 结构及轻链。在k 2 区上有与纤溶蛋白高亲和力的结合位点，与纤维蛋 白有高度亲和力，故其对已形成的血栓有选择性的溶栓作用。目前，重组t - p a ( r e p a ) 已大量用于治疗急性心肌梗塞，但其在血循环中的半寿期只有4 5 分钟。近几年溶 栓药物的研究方向试图用基因工程改造t - p a 的结构，增强t - p a 对纤维蛋白的亲和 力延长其半衰期。 2 2 2 p a 的作用机理 单链p a 几乎以无活性形式释放入血，待血凝块形成后，产生的f b 沉积于血管 壁，促使血管壁内皮细胞释放t p a ，t p a 与f b 特异结合后，选择性的在纤维蛋白 表面活化纤溶酶原，纤维蛋白形成三元复合物，这种复合物不但增加t - p a 与纤溶酶 原的接触，也使激活的纤溶酶结合在复合物上，而不被d 2 抗纤溶酶灭活。目前， 对t - p a 的受体的研究还没有弄清楚。h a j j a r 曾发现鼠m h c l 肝细胞上存在一种分子 量约为5 0 0 0 0 0 的能与t p a 特异结合的受体蛋白，但这种蛋白与低密度脂蛋白受体 及以巨球蛋白相关。 2 3 尿激酶型纤溶酶原活化物( u r o k i n a s e t y p e ，u - p a ) u p a 有单链( s c u - p a ) 和双链( t c u p a ) 两种形式，他的一级结构的氨基酸顺 序近似t p a ，它们的同原性达5 0 。s c u p a 分子量5 40 0 0 。是一条含有4 11 个氨基 酸的单链糖蛋白，基因长6 4 k b 定位于第1 0 染色体上，1 1 个外显子和1 0 个内含子 钟卫权，不同运动负荷对大鼠血浆纤溶系统的影响 紧密地组织在一起，其半衰期长约3 - 6 r a i n 。在l 肾脏中合成，也存在于培养内皮细胞 中，在肝脏和肾脏中清除。它的蛋白水解活性很小。现在，己清楚s c u - p a 结构包 括1 个e g f 区，1 个k 区和1 个含丝氨酸蛋白酶活动中心区。u p a 的二级结构称 前尿激酶或单链尿激酶样纤溶酶原活化物。它对纤维蛋白无特异结合能力，故其溶 栓效果不如e p a ，但其资源丰富。不少研究者用基因工程技术试剂u k 与t - p a 的 嵌和体1 5 1 。目前，重组的s c u p a 已用于临床。 人类u 。p a 的受体是由3 1 3 个氨基酸。另外还包括2 2 个氨基酸的信号肽，它以 糖基磷脂酰肌醇锚的形式附着于细胞表面，有三个同源的结构域。其中，氨基酸末 端的结构域1 是u p a 的结合位点，可以和u 。p a 的g f d 区域结合。 2 4 纤溶酶原活化物抑制剂( p l a s m i n o g e n a c t i v a t o ri n h i b i t o r ，p a l ) 纤溶酶原活化物抑制剂是血液中纤溶系统的抑制剂之一1 6 l 。p a l 存在4 种类型， p a l 一1 、p a i 2 、p a l 3 和蛋白酶连接素。p a l 一1 最初定义为内皮细胞型p a i ，因为最 先在内皮细胞中被发现，以后人们又从血浆、血小板、肝细胞、胎盘、平滑肌细胞 等部位。p a l 1 在肝、脾中含量最高，在脑和心肌中含量很少。p a i 2 即胎盘型，一 般在怀孕时存在，p a l 是一种由3 7 9 个氨基酸组成的单链糖蛋白，分子量为5 20 0 0 。 p a i - 1 基因长约1 2 2 k b ，有9 个外显子和8 个内含予，定位于第7 号染色体长臂 ( 9 2 1 3 - 2 2 ) ，等电点4 5 5 5 。它与其他丝氨酸蛋白酶抑制剂( s e r p i n ) 具有同源性， 可能有相似的三级结构，因而又被认为是s e r p i n 家族中的一员，p a i 以一种活性 形式分泌入血浆中，但在正常的生理条件下，p a i 一1 与s 蛋白( s - p r o t e i n ) 或玻璃 体连接体蛋白( v i t r o n e c t i n ) 结合而成为一种有潜在活性的形式。血浆中的p a l 1 的含量甚微，正常人体血浆中p a i 1 水平在6 n g m l 至8 5 n g m l 。t - p a 与p a i - i 在血 浆中的分泌都有昼夜节律性。t - p a 的活性在清晨最地4 到下午达高峰，与之相反的 是，p a l l 的活性在清晨最高至下午和晚上处于最低值，其中p a l 1 的变化更显著。 p a i 1 分子中存在2 个与t - p a 结合的位点，即a t 9 3 4 6 m e t 3 4 7 和g l u 3 5 0 a s p 3 5 5 ， a t 9 3 4 6 是p a l - i 抑制活性所必须的。t p a 通过水解此肽键将p a l 1 c 末端上3 个氨 基酸释放下来【8 1 。g l u 3 5 0 - a s p 3 5 5 通过3 个带负电荷残基在分子表面形成的带负电 荷环，与t p a 分子表面的l y s 2 9 6 g l y 3 0 2 及a r 9 3 0 4 形成的带正电荷环对应，通过 扬州大学硕士学位论文 静电引力相结合。p a i 一2 与p a i 1 的氨基酸有3 8 同源。已从胎盘及u 一9 3 7 细胞中 提纯，它对u p a 的作用更强。p a i 3 属于0 2 球蛋白，虹浆含量为7 0 n m o l l 。分子 量5 70 0 0 ，由3 8 7 个氨基酸组成，p a l 一3 有灭活a p c 的作用。血浆中t - p a 与p a i 是代表纤溶活性的两个重要的指标。p a i 通过与t - p a 以l ：1 的比例结合调节纤溶 活性。纤溶活性降低意味着t - p a 合成减少或p a i 1 合成增加，以及p a i 1 的增加大 于t - p a 。在生理浓度下，人体内的纤溶活性由组织型纤溶酶原激活物( t - p a ) 和其 抑制物( p a i ) 调节。其中，p a l 分为两种类型即p a i 一1 和胎盘型( p a i 一2 ) 。p a i 存 在有活性和无活性两种形式。p a i 1 和p a l 2 抑制i - p a 的特性是相同的。而血浆中 p a l 活性主要由p a i 1 所表现，血管腔表面存在的t - p a 和队i 的平衡状态决定了纤 溶活性的高低。许多研究发现p a i 1 的活性在心绞痛、心肌梗塞等冠心病事件中均 有明显的升高。 2 5 纤溶酶和纤溶酶抑制剂 纤溶酶( p l a s m i n ) 是一种胰蛋白酶类的蛋白水解酶，由重链和轻链通过双硫键 连接形成，活性的中心在轻链部分，纤溶酶可水解纤维蛋白、f v 、f 、f x 、f x i 、 凝血酶、优球蛋白、胰蛋白酶和胰岛素等。在中性环境中活性最高。纤溶酶原经过 t - p a 和u p a 作用，纤溶酶原的精氨酸5 6 0 接氨酸5 6 1 部位断裂，形成纤溶酶。纤 溶酶作用于纤维蛋白和纤维蛋白原生成纤维蛋白降解产物( f d p ) 。体内f d p 很快 被网状内皮系统清除。根据研究结果表明，不周生物体内提取的纤溶酶对人的纤溶 酶原有活化作用。目前，人们已经从蚯蚓体内提取出一种蚓激酶的纤溶酶，并已经 利用与临床的治疗血栓的应用【9 】。蚓激酶溶解血栓的生化基础是水解纤维蛋白原， 它既可类似于纤溶酶直接降解纤维蛋白原，又可激活纤溶酶原形成纤溶酶，起到纤 溶酶原激活物的作用。此外，在蝮蛇、豆豉等生物中提取出纤溶酶类物质1 “。 纤溶酶抑制剂有：啦纤溶酶抑制剂( 2 p l a s m i ni n h i b i t o r ，a 2p i ) 、a l 抗胰蛋白酶 ( a l a n t i t r y p s i n ) 、2 巨球蛋白和2 抗凝血酶等，这些抑制剂都是糖蛋白。a 2 纤溶酶 抑制剂( a 2 p i ) 含c h 0 1 7 ，其中己糖占3 。9 0 0 ，氨基己糖3 7 ，生物半衰期约2 5 天， 血浆含量l g m o l f l 。它由4 5 2 个氨基酸组成，基因全长1 6 k b ，定位于第1 8 号染色体。 有1 0 个外显子和个内含子。a2 p i 的n 端有5 0 一5 2 个是其特有的。c 端的赖氨酸残 钟卫权：不同运动负荷对大鼠血浆纤溶系统的影响 基能增加其与纤溶酶原的亲和力，且与纤溶酶竞争结合纤溶酶原。此外，a 。p i 可 与纤维蛋白发生交联作用，影响纤溶酶原t - p a 吸附到纤维蛋白上去，调节着生理性 纤溶作用。近年来新发现的凝血酶激活的纤溶抑制物( t h r o m b i n a c t i v i t yf i b r i n o l y s i s i n h i b i t o r ，t a f i ) 是存在于血浆中的一j f 中蛋白酶原，经过凝血酶血栓调节蛋白 ( t h r o m b o m o d u l i n ，t m ) 复合物激活后，具有抑制纤溶系统活性的作用。1 3 1 人的 t a f i 为分子量6 00 0 0 的单链蛋白质与促羧基肽酶a 有9 0 的同源性。与大鼠的促 羧基肽酶b 有4 4 的同源性。在血浆中以酶原的形式存在，经凝血酶原，血栓复合 物将t a f i 的精氨酸9 2 丙氨酸9 3 处肽键水解后，t a f i 就转变为活化型的t a f in 。 t a f i 通过抑制g l u p l g 转化为l y s p l g 而抑制血凝块中p l 的活性，延长p l 触发 的纤溶过程。s a k h a r o v d 4 i 等发现在血浆凝块中含有3 。3 n i h 单位m l 凝血酶和l m g m l 可溶性t m 时，可使8 0 以上的t a f i 转化为活化的t a f in 。这种激活的作用还需有 c a ”参加。此外，研究还发现凝血因子x i v 和活化的蛋白c ，分别能够对t a f i 的激 活有调节作用。能够灭活活化的凝血因子v ( f va ) ，限制了凝血酶的形成而减少 t a f i 的激活。 3 纤溶系统的调节 3 1 凝血酶( t h r o m b i n a ) 凝血酶是一种损伤处血管内皮细胞产生的多功能蛋白酶，它是参与凝血过程各 个环节反应的关键酶，将纤维蛋白原转化成纤维蛋白，并与后者交联形成血栓。它 还能激活血小板，使其聚集并促进凝血。血液中的凝血酶通过活化t f a i ，活化的 t f a i 可以从被纤溶酶部分降解的纤维蛋白多肽链末端去除在纤溶酶原结合与活化 过程中起关键作用的赖氨酸残基，从而抑制纤溶酶原在血凝块表面的聚集和活化， 是血凝块不易被纤溶酶溶解。通过大量的研究目前有的学者提出了凝血酶下调纤溶 活性的新机制。其过程是，由外源性凝血途径产生的少量凝血酶，一方面在破损的 血管处水解纤维蛋白原，使之变为纤维蛋白形成血凝块以维持血管壁的完整性。另 一方面少量的凝血酶通过活化因子，启动内源性的凝血途径，该途径的正反馈式 循环，产生大量的凝血酶，在t m 的参与下活化血浆中的t a f i ，下调纤溶的活性， 扬州大学硕士学位论文 1 0 以防止血栓的过早溶解。凝血酶对血小板的活化是通过血小板上凝血酶受体起作 用。血小板上凝血酶受体有p a r l 、p a r 3 和p a r 4 。这些受体通过独特的机制而活化， 具有显著介导血小板受凝血酶刺激而活化的作用。受体活化剂引起血小板的分泌和 聚集雌“i 。用抗凝血酶受体的抗体能够阻甑凝血酶对血小板的激活1 人体内血小 板凝血酶受体主要是p a r l 和p a r 4 ，且p a r l 的量比p a r 4 高3 倍。p a r l 和p a r 4 活化后都通过磷酸肌醇信号途径发挥生物学作用。h e n s i k 等1 1 8 1 发现p a r i 活化可导 致血小板聚集，但却没有磷脂酰丝氨酸( p s ) 和磷脂酰乙醇胺( p e ) 暴露的明显增 加，而p a r l 活化却使凝血因子v 结合增加2 倍。总之，凝血酶通过p a r 介导一 个强血小板影响，导致血小板聚集和快速促凝化。血小板的聚集刺激内皮细胞释放 t - p a 影响纤溶系统的功能 3 2 纤维蛋白原( f i b r i n o g e n ) 纤维蛋白原( 地) 和血小板相互作用是血栓形成所必须的。纤维蛋白原存在于 血浆和n 颗粒中。是由三对不同的链构成的六倍体：a q ，bb 和y 。它们通过 一些二硫键共价连接。中心区包含所有6 个多肽链的n 端。分子的羟基端定位在两 个不同的d 区。纤维蛋白原分子上三个位点可能与血小板上纤维蛋白原受体相互作 用：a 链的n 端，y 链的c 端和aq 的a c 端。中心区的aq 和b 1 3 链n 端对凝 血酶水解敏感。凝血酶除去它们的纤维肽链a 和b ，因此引发纤维凝块的形成。纤 维肽链释放后，q 链新的n 端序列为甘一脯一精一颉。相关的四肽甘一脯一精一颉紧密的 与纤维蛋白原结合，因而抑制其与其他纤维蛋白受体相结合而发生聚集。y 链，一 段氨基酸残基序列( c 端末) 可能与纤维蛋白原受体相互作用。纤维蛋白原q 链的 羟基端( 精一甘一天冬) 涉及纤原与其受体的结合。这些序列之一可能是识别纤维蛋 白原受体的第二位点。 正常的血浆纤维蛋白原在c a ”浓度下，循环中圆盘状血小板上无纤维蛋白原的 受体。因此，只有当其受体暴露位点后，纤维蛋白原才可能与之结合。纤维蛋白原 活化血小板是特异的和饱和的，温度对结合无影响。而血液p h 值和钙离子或镁离 钟卫扳：不同运动负荷对大鼠血浆纤溶系统的影响 子的螯合物抑制纤维蛋白原与受体的结合。可能是二价阳离子与g p i i b 结合然后调 节其表面定向。每个活化的血小板可结合4 0 0 0 0 个纤维蛋自原分子。有标记的纤维 蛋白原可被e d t a 或过量的纤原( 未标记) 从受体上分离出来。然而定时间后， 纤维蛋白原的结合是稳定且不可逆的。 3 3 血小板 现已证明，血小板不仅是凝血与血栓形成的主要成分之，而且对纤溶的调节 具有重要作用。d e g u c h i 等的研究揭示了血小板的另一新功能，即通过与t p a 的相 互作用，而增强p i g 的活性；并将血小板的这种成分称为纤溶增强物 ( f i b r i n o l y s i s - p o t e m i a t i n gs u b s t a n c e ) 。由于这种增强物的作用需t p a 和p k 参与才 具有生物活性，说明其增强效应可能是通过加强t p a 对p i g 的活化而发挥作用。 血小板的纤溶增强物的作用机理可能与下列因素有关：血小板使结合在自身 表面的p i g 活化为p i ，从而促进了纤维蛋白的溶解。由于结合着p i g 的血小板被 纤维蛋白网罗于凝块内，有利于p i g 的活化及对纤溶蛋白发挥水解作用。 3 4 凝血栓蛋白 t s p 是血小板n 。颗粒分泌的一种多功能蛋白。分子量为4 5 00 0 0 。在凝血酶刺 激下，血小板分泌的蛋白质中，2 0 - 3 0 为t s p 。t s p 能与多年申大分子物质，如纤维 蛋白质、纤维连接蛋白，肝素、凝血酶、胶原以及血小板膜表面结合，对血管表面 的血栓有调节作用。近来，s i l v e r s t e i n 等将t s p 与p i g 一同温育，发现t s p 使p i g 活化为p i 的作用受到明显抑制；并观察到，t s p 能与p i g 以及一种称之为组织血浆 纤维蛋白溶解酶原激活物( n ) a ) 的物质形成三元复合物。正是由于这种复合物的 形成，p i g 由t p a 作用下生成p i 的过程为t s p 所抑制，结果使血管内纤维蛋白的 沉积增加。t s p p i g 的相互作用受p i g 分子中赖氨酸键位的调节。换言之，由p i ga 链的l b s 介导t s p 与p i g 的结合。若以1 0 m m o l le d t a 或赖氨酸使p i g 的l b s 饱 和，则可完全抑制上述复合物的形成。目前认为，t s p 可能是大分子物质的一种集 合部位，由于t s p 的存在，大分子的物质被局限于特殊的徽环境中。过量的p i g 对 t s p - p i g 的相互作用也有抑制效应。在血栓形成部位，t s p 可能作为种前调节物 扬州大学硕士学位论文 而加速局部纤维蛋白的形成，对p i g 的活化起抑制性调节作用。 3 5v o nw i l l e b r a n df a c t o r ( v w f l v w f 为一种大分子糖蛋白( 分子量位2 0 1 0 6 ) 由内皮细胞合成和贮存或在巨 核细胞内质网中通过二硫键结合成二聚体。巨核细胞中的v w f 被包装进入血小板 的a 颗粒中。循环中1 5 2 5 的v w f 来自血小板。当a d p 、胶原和凝血酶刺激血小 板时，o 。颗粒中的v w f 便可释放至血浆中与血小板膜上g p i b i x 亲和力较高。v w f 通过介导血小板黏附到暴露的血管内皮和促进血小板血栓在血管损伤部位形成而 参与止血过程。特别是有高剪切力存在的情况下，血小板通过v w f 单层覆盖在损 伤的内皮下层。在这里v w f 作为一个连接“桥”的功能。一端是内皮下成分，另 一端是血小板g p i b i x 。v w f 与g p i b i x 的相互作用引起血小板的活化。血管受损 后，血小板与内皮下层的粘附力对原发性止血及血液凝固的启动极为重要。近年研 究表明，伯一苏( b e r n a r d s o u l i e r ) 二氏综合症( 即巨血小板综合症) 患者的出血 倾向正是一种以血小板与内皮下层粘附障碍为特征的出血性疾病。p i 对v w f 有降 解作用。许多病理情况中，如弥漫性血管凝血( d i c ) 、肝脏疾患、慢性纤维性颤动 。病人多伴有出血倾向，而其病因常被认为p 1 水平升高( 因d i c 时可发生继发 性纤溶亢进和p i g 在肝脏中灭活机制减退) 。致使血浆中纤维蛋白原大量降解及f d p 增高所致。 3 6 血小板花生四烯酸( a a ) 细胞中的花生四烯酸一般不游离存在，而是以磷脂的形式酯化在细胞膜中。a a 具有强大的促血小板聚集的作用，其主要功能是通过血栓素a 2 ( t x a 2 ) 实现的。 动脉粥样硬化和血栓形成与a a 代谢紊乱有关。前列腺素是a a 代谢中的产物，是 血小板聚集抑制剂。近代研究表明，p i 对p g s 的代谢具有明显影响。s c h a f e v 等证 明p i 对血小板膜磷脂池中内源性a a 的释放有抑制的作用，甚至可以完全阻滞凝 血酶诱导的内源性a a 的释放：p i 可以抑制凝血酶和血栓素b 2 的产生。其中对前 者抑制明显。其机理可能是p i 抑制磷脂酶c 的作用较抑制磷脂酶a 的作用强有关。 此外，p i 还具有灭活血小板的磷脂酶或使膜磷脂中a a 前体耗竭的作用。可以使血 钟卫权：不同运动负荷对大鼠血浆纤溶系统的影响 小板聚积性降低。而在一些斑小板功能异常的疾病中。p i 的活性下降，使凝血加强。 3 7 蛋白c ( p r o t e i n c ，p c i 纤溶系统是肌体阻止血栓形成的重要系统。血浆蛋白c 作为体内一个主要抗 凝体系的成员，除有调节血凝系统外，对纤维蛋白溶解系统也起着主要的作用。许 多的研究已经证实p c 可通过促进组织型纤溶酶原激活剂释放和灭活纤溶酶原激活 剂抑制因子而增强体内的纤溶活性【2 ”。大量的研究资料证明急性心肌梗塞时( a m i ) 体内的凝血功能与纤溶功能处于失衡状态 2 2 , 2 3 1 。有人认为体内p c 缺乏是冠心病易 患因素之一，但也有不同的意见。王凌燕等通过大鼠实验性心肌梗塞时血浆蛋白c 和纤溶活性的变化发现，急性心肌梗塞时血浆p c 的活性明显下降，且与缺血时问 长短有关，随着缺血时间的延长，心肌缺血程度加重。同时，血浆p a l 活性明显 增强，t - p a 活性显著下降。说明急性心肌梗塞时由于p c 的活性下降，使血管内皮 细胞合成和分泌的t p a 减少，同时p c 对p a l 抑制作用的降低，另外p a i 还可以通 过抑制p c 的活性使肌体纤溶活性进一步下降。有实验证明缺血再灌注血浆t - p a 含 量增加，血浆中p c 的活性也有恢复【2 4 】。 3 8 脂蛋白q l i p o p r o t e i n ( q ) ，l p ( d ) 脂蛋白( o ) 由载脂蛋自a a p o 3 0 0 m g l ，k i c 便升高3 倍，8 0 的纤溶活性随之受抑。研究还 表明，l p ( q ) 可通过与p l g 激活物抑制剂( p a i - 1 ) 竞争性结合飑、肝素来调控纤 溶系统。p a i 对t p a 的抑制，在体内主要由f g 、肝素v i t r o n e c t i n 及l p ( a ) 等互相 反应介导，进而调控循环中p a i 活性水平。另外，还有学者发现，当l p ( n ) 与o 。 抗纤溶酶共存时，l p ( a ) 反而能促进血栓溶解。可能是因为l p ( a ) 对q 。抗纤溶酶 的抑制作用超过了对p l g 的作用所致1 2 8 】。 3 9 血管紧张素( r e n i n a n g i o t e n s i ns y s t e m r a s ) 国内外的实验都证明，血管紧张素升高血浆中p a l 1 的水平。而运用血管紧张 素i i 受体阻滞剂可以降低p a l 1 ，提高纤溶功能。阻9 1 研究发现血管紧张素i i 能够诱 导p a i 1 升高，并成剂量依赖性。l a r s s o n 发现短期注入a g i i 可以提高纤溶活性， 通过给两组实验者静脉滴注血管紧张素管紧张素i i 和安慰剂( 1 0 ，1 5 2 0 ) ，在实验 之前、进行中和实验后1 小时发现在滴注过程中t - p a 的活性和抗原升高，而p a l 一1 活性下降。p0 j 但是，通过运用血管紧张素转移酶的抑制剂也可以明显降低血浆中的 p a l 1 水平而不改变t p a 的水平。f 3 1 3 2 a c e 的抑制物和a g i i 受体( 1 型) 阻滞剂 在影响a g i i 的形式和缓激肽的生成方面是不同的。但是关于这种现象的机制还没 有搞清楚。可能是a g i i 通过a t l 受体作用于内皮细胞和其它血管细胞，调节机体 纤溶活性。而a c e 则除了使a i 转化为a g i i ，还有降解缓激肽的双重作用来调节 纤溶功能 3 1o 内皮素( e n d o t h e l i n ，e t ) 内皮素( e n d o t h e l i n ，e t ) 是广泛存在于心血管系统的一种调节肽，1 9 8 8 年由 日本学者y a n a g i s a w a 等从培养的猪主动脉内皮细胞上清液中分离纯化而获得的，是 目前所知的作用最强的血管收缩肽。它由2 2 个氨基酸组成，分子量大约是2 60 0 0 钟卫投：不同运动负荷对大鼠血浆纤溶系统的影响 左右。e t 主要由内皮细胞合成，平滑肌细胞也可合成释放e t 。以自分泌和旁分 泌的方式，参与器官组织血液循环的局部调节。它的受体广泛存在于血管、心脏、 神经组织、消化系统、生殖系统内分泌腺等。目前发现生物体内有e t - 1 、e t 2 和 e t 3 三种形式。其中以e t 1 的活性最强。e t 的大量释放是许多心血管疾病发生 发展的共同因素之一。现在有许多的临床和实验研究表明，体外的e t 具有抗血小 板聚集和激活凝血因子活化血小板的双重作用日3 1 ，而在体内则促进血栓的形成。k a j i 等【3 4 】通过体外实验发现e t 可抑制血管内皮细胞t p a 、p a l 的释放，并由此提出e t 可能是纤溶系统的重要调节因子参与止凝血系统疾病的发生。其原因可能是：e t 直接抑制血管内皮细胞t - p a 的释放，还可以通过使内皮细胞内c a 2 + 水平或c a m p 水平的升高，抑制凝血酶对内皮细胞的刺激作用，使t p a 的合成和分泌受抑 ”i 。 但起确切的机制还有待进一步的研究。 3 11 儿茶酚胺( c a t e c h o l a m i n e c a ) 体内的儿茶酚胺主要包括l 肾上腺素( e p i n e p h r i n e ，e ) 去甲肾上腺素 ( n o r e p i n e p h i n e ，n e ) 和多巴胺( d o p a m i n e ，d a ) 。它们在神经系统作为神经递质， 具有生物活性。b i g g s 等给健康人静脉注射肾上腺素，发现在给药2 0 分钟时，纤溶 活性升高最高。但把药直接滴入血中，却无此现象发生。首次证实了肾上腺素能刺 激血浆中纤溶的活性。还有学者认为内皮细胞是各种刺激引起p a 和凝血因子释 放的共同源泉。这些反应皆由肾上腺素能b 受体作介导的。我国学者朱广瑾用大鼠 下肢血管床作模型，观察到肾上腺素灌流液诱导血管内皮细胞释放p a 反应，经 s d s - p a g e 和纤维蛋白自显影( f i b r i na u t o g r a p h y ) 鉴定，释放的是属于t - p a 类激活剂。 这证实了外源性儿茶酚胺能激活纤溶系统。在体外人静脉的活检标本中观察到，生 理浓度的肾上腺素对纤溶活性的刺激最大，而药理浓度作用却不能看到进一步的作 用，表明在体内肾上腺素有直接激活纤溶的作用。f r a c a s s o 等从整体大鼠体内观察 到，心得安和n 肾上腺素受体阻断剂酚苄明共同作用时，由肾上腺素引起的纤溶活 性增高作用被阻断。说明p a 释放反应与a 受体的作用有关。近几年有学者提出儿 茶酚胺诱导大鼠的p a 活性升高，激活纤溶作用主要经由1 3 肾上腺素受体介导的， c a m p 增加途径，但其中可能以i 32 型肾上腺受体的介导更为重要。 扬州大学硕士学位论文 4 纤溶系统异常的相关疾病 4 1 血栓性疾病 流行病学数据表明，血栓性疾病血浆中纤溶活性降低是因为p a i 1 活性的升高， 而不是t - p a 活性的降低所致。机体形成血栓，血液往往表现为高凝状态。这不仅表 现为凝血的功能亢进，而且还与血管内皮病变、血小板和白细胞功能亢进等复杂因 素有关。b y b e r g 等研究了8 7 1 名平均年龄为7 0 岁的瑞典男性血浆p a i 一1 活性和胰 岛素、甘油三酯之间的关系，发现p a l 1 的活性与胰岛素水平成正相关。并认为胰 岛素和胰岛素原可通过减少p a l 1 的r n a 降解，增加其合成，达到增加p a i 1 蛋白合成及活性口。另外一些关于血脂和p a l 1 关系的研究证明，胆固醇增高，高 密度脂蛋白降低可使p a l 1 活性增高。s t i k o r a h m 等【硐发现v l d l 能刺激p a l 一1 的分泌。在高血糖、高脂血症的人群中，存在血浆p a l 1 水平升高，凝血功能亢进。 t a b b a a 等对脑梗死患者血浆t p a 水平测定发现，急性期t p a 水平下降，而在恢复 期t p a 水平明显升高。认为这是由于脑梗死急性期t p a 释放受损或被严重消耗所 致。l m d 矿e n 的研究也证明了此观点。其机制可能是：( 1 ) 血管壁发生病损时，暴 露出的内膜下组织可能激活血小板，使血小板a 颗粒释放大量的p a i 1 。凝血酶的 增加，也可刺激增生的平滑肌细胞分泌大量的p a i 1 。( 2 ) 血管损伤后，局部可以 生成许多细胞刺激素包括凝血因子、内毒素、肿瘤坏死因子、白介素等，炎性介 质的生成可