（有机化学专业论文）罗汉果蛋白酶的提取分离、特性及应用研究.pdf

中文摘要 本论文分别运用文献计量的方法对罗汉果和蛋白酶在国内的研究与进展进 行了分析，阐明了罗汉果和蛋白酶的研究对国民经济的发展所起的重大作用，并 指出了现有研究工作的不足之处和今后的发展方向。 论文首次对从鲜罗汉果中发现的一种新型植物蛋白酶一罗汉果蛋白酶展开 研究，通过对其提取分离工艺的探讨，理化性质和催化动力学的研究，及应用其 进行大豆蛋白水解研究，获得了该蛋白酶的各项性能参数和许多有关应用方面的 有价值信息，为今后进一步开展该酶的研究与改造、生产与应用奠定了理论基础。 在提取分离过程中，我们依次用乙醇沉淀法、单宁沉淀法和超滤法对罗汉果 蛋向酶进行提取工艺研究。利用d e a e s e p h a r o s ec l 6 b 离子交换层析，对罗汉 果蛋白酶进行了进一步纯化。同时对纯化酶进行了部分性质研究。 实验结果表明，超滤提取法得到的产物品质最好，活性最高。纯化产物通过 等电聚焦电泳检查，只显示一条带。酶的比活力为达到4 4 7 5 9 1 0 4 u g ，与超滤 法提取的粗酶相比，纯化倍数为1 8 7 ，酶活力回收率为5 9 4 。 罗汉果蛋白酶的等电点为d h 8 5 5 ；最适反应p h 为7 2 和1 0 8 ，最适反应温 度为6 0 ：在低于4 0 。c ，且酶在p h 值为7 0 8 0 或9 5 1 0 2 之间，6 0 m i n 内，酶活性几乎保持不变；对酪蛋白的k 值为0 0 7 2 9 m m o l l ；该蛋白酶活性可 被e d t a 、半胱氨酸激活；h g c l 。对罗汉果蛋白酶具有抑制作用。 罗汉果蛋白酶可应用于水解大豆蛋白制备大豆肽。水解的最佳条件是酶和底 物之比为5 o 、温度6 0 、p h 值为9 0 、大豆蛋白浓度5 ，水解时间为1 h 。 关键词：罗汉果蛋白酶提取分离性质水解大豆肽 v i i i a b s t r a c t i nt h i sp a p e rt h ed o c u m e n t so fs i r a i t i ag r o s v e n o r ia n dp l a n tp r o t e i n a s ep u b l i s h e d i nt h er e c e n ty e a r si nc h i n aw e r ea n a l y z e db ya p p l y i n gt h em e t h o d so fd o c u m e n t m e t e r o l o g y b ye v a l u a t i n gt h ed o c u m e n t a lt y p e s ，p u b l i s h i n gy e a r s ，s u b j e c tf i e l d sa n d s oo n ，t h es t u d i e so nt h es i r a i t i ag r o s v e n o r im a dp l a n tp r o t e i n a s ew e r es u m m a r i z e da n d t h ec u r r e n ts t a t u sa n dd e v e l o p i n gd i r e c t i o nf o rl a t e rr e s e a r c hw e r ea l s op o i n t e do u t an e wp l a n te n z y m ei ns i r a i t i ag r o s v e n o r i iw a sf i r s td i s c o v e r i e da n ds t u d i e di n t h i sp a p e r , d u r i n gt h ee x p e r i m e n t s ，t h es t u d i e so nt h ec o n d i t i o n so fe x t r a c t i n ge n z y m e ， t h ec h a r a c t e r so fp u r i f i e de n z y m ea n de n z y m ek i n e t i cp a r a m e t e r s ，a n da p p l i c a t i o no f h y d r o l y z i n gs o y b c a ni s o l a t e dp r o t e i n sw e r em a i n l yc o n c e r n e da b o u t t h r o u g ht h e s e m e t h o d s ，w eg o tt h ed a t ao ft h ee n z y m e sc h a r a c t e r sa n dm u c hu s e f u li n f o r m a t i o n a b o u ta p p l i c a t i o n t h e s er e s u l t sc a np r o v i d et h e o r e t i c a lf o u n d a t i o nf o rf u r t h e rs t u d y a n di n d u s t r i a lu s eo ft h i sk i n do fe n z y m e d u r i n gt h es t u d i e so ne x t r a c t i o na n di s o l a t i o n ，t h r e e k i n d so fm e t h o do f e x t r a c t i n gb ya l c o h o l ，t a n n i n ，a n du l t r af i l r a t i o n ( u f ) w e r ei n t r o d u c e da n dc o m p a r i e d a n dt h ep r o t e a s ew a sp u r i f i e db yd e a es e p h a r o s ec l - 6 bc h r o m a t o g r a p h y a tt h e s a m et i m e ，t h ep r o p e r t i e so ft h ep u r i f i e dp r o t e a s ew e r es t u d i e d t h er e s u l t ss h o w e dt h a tt h ee n z y e mo b t a i n e db yu l t r a f i l t r a t i o nh a st h eb e s t q u a l i t ya n dh i g ha c t i v i t y a n d as i n g l eb a n dw a sf o u n di nt h eg e lo fi s o e l e c t r i c f o c u s i n g w i t ht h e p u r i f i e dp r o t e a s e i t ss p e c i f i ca c t i v i t y w a s3 4 7 5 9 x 1 0 4 u g ，i t s p u r i f i c a t i o np l o i d yr e a c h e d1 8 7f o l dc o m p a r i e dw i t ht h ec r u d ee n z y e mo b t a i n e db y u l t r af i l r a t i o n ，a n dt h er e c o v e r yr a t i oo f e n z y m ea c t i v i t yw a s5 9 4p e r c e n t i t si s o e l e c t r i cp o i n td e t e r m i n e db yi s o e l e c t r i cf o c u s i n gw e r ef o u n dt ob ep h 8 5 5 t h eo p t i m u mp hw a s7 2o r1 0 ，8 ，a n dt h eo p t i m u mt e m p e r a t u r ew a s6 0 。c i tw a s r e l a t i l v e l ys t a b l ea tt e m p e r a t u r eb l o w4 0 。ca n da tp hv a l u sr a n g i n gf r o m7 0t o8 0 o r 9 5 1 0 2 i t sk mv a l u ef o rc a s e i nw a s0 0 7 2 9 m m o l f l t h ee n z y m ec o u l db e a c t i v a t e db yc y s t e i n ea n de d t a ，a n di n a c t i v a t e db yh g c l 2 t h ep r o t e a s ec a nb e u s e df o r t h ep r e p a r a t i o no fs o y b e a np e p t i d e st h r o u g h h y d r o l y z i n gs o y b e a ni s o l a t e dp r o t e i n s t h eo p t i m u nh y d r o l y s i sc o n d i t i o no fs o y p r o t e i nw a ss e tu pa sf o l l o w ：6 0 0 c ，p h 9 0 ，s u b s t r a t u mc o n c e n t r a t i o n5 o ，p r o p o r t i o n o fe n z y m et os u b s t r a t u m5 0 h y d r o l y s i st i m el h t h em i x e d p e p t i d e so fd i e n z y m e h y d r o l y s i sh a dc o m p a r a t i v e l yl i g h t e rb i t t e m e s sa n dt a s t e dw e l l k e yw o r d s ：s i r a i t i ag r o s v e n o r i ( s w i n 9 1e ) c j e f f r e y ；e n z y m e ；e x t r a c t i o n i s o l a t i o n ；b y d r o l y s a t e ；s o yp e p t i d e x 表格目录 第一章文献综述l 1 文献计量分析揭示我国罗汉果研究现状及发展趋势2 表卜1 一l罗汉果文献在各学科中的分布3 表卜卜2 罗汉果文献的年限分布4 表卜卜3 罗汉果文献在期刊中的分布5 表l 一卜4 刊载罗汉果文献期刊的集中与离散6 表卜卜5 罗汉果文献在各化学成分研究中的分布6 表卜卜6 罗汉果文献作者人数7 表卜1 7 罗汉果主要研究机构7 表卜卜8 刊载罗汉果文献期刊分析8 2 文献计量分析揭示我国植物蛋白酶研究现状及发展趋势1 2 表卜2 一l 植物蛋白酶文献检索方式1 3 表卜2 2 不同植物蛋白酶文献在不同研究领域的分布1 4 表卜2 3 三种主要植物蛋白酶在应用研究层次上的分布情况1 6 表1 - 2 - 4 植物蛋白酶文献的年限分布1 7 表1 - 2 - 5 植物蛋白酶文献在期刊中的分布1 8 表1 - 2 6 刊载植物蛋白酶文献期刊的集中与离散1 9 表卜2 7 植物蛋白酶研究期刊的分析1 9 表1 2 - 8 作者发文量统计分析2 0 第二章罗汉果蛋白酶的提取方法比较2 3 表2 - 1 不同浓度单宁溶液的配制2 6 表2 2 三种提取方法的比较3 5 第三章罗汉果蛋白酶的分离及特性研究3 7 表3 1 罗汉果蛋白酶纯化结果4 4 表3 2 不同反应p h 值对罗汉果蛋白酶活性的影响4 5 表3 3 不同反应温度对罗汉果蛋白酶活性的影响4 6 表3 4 温度对罗汉果蛋白酶稳定性的影响4 7 表3 5p h 对罗汉果蛋白酶稳定性的影跑4 8 表3 - 6e d t a 对罗汉果蛋白酶活性的影响4 9 表3 7 半胱氨酸对罗汉果蛋白酶活性的影响4 9 表3 8h g c l 。对罗汉果蛋白酶活性的影响5 1 v 图形目录 第二章罗汉果蛋白酶的提取方法比较2 3 图2 - i 乙醇浓度对提取物质量的影响2 9 图2 2 乙醇浓度对提取物酶比活的影响2 9 图2 3 乙醇浓度对提取物总活力的影响2 9 图2 4 单宁浓度对提取物质量的影响3 0 图2 - 5 单宁浓度对提取物酶比活的影响3 0 图2 - 6 单宁浓度对提取物总活力的影响3 0 图2 7 操作压力对酶比活的影响3 1 图2 - 8 操作压力对膜通量的影响3 1 图2 9 操作温度对酶比活的影响3 2 图2 1 0 操作温度对膜通量的影响3 2 图2 1 i 罗汉果汁浓度对膜通量的影响3 3 图2 1 2 果汁用量对酶超滤的浓缩度的影响3 3 图2 1 3 反复超滤对果汁酶比活的影响3 4 第三章罗汉果蛋白酶的分离及特性研究3 7 图3 1 蛋白质含量测定的标准曲线4 0 图3 2d e a e $ e p h a r o s ec l 一6 b 柱层析图谱4 3 图3 3 罗汉果汁的h p l c 图谱4 3 图3 - 4 超滤物的h p l c 图谱4 3 图3 5 柱层析纯化物的h p l c 图谱4 3 图3 - 6 罗汉果蛋白酶的等电聚焦图谱4 4 图3 7 罗汉果蛋白酶的最适反应p h 值测定4 5 图3 8 罗汉果蛋白酶最适反应温度的测定4 6 图3 9 罗汉果蛋白酶的热稳定性4 7 图3 一1 0p h 对罗汉果蛋白酶稳定性的影响4 8 图3 1 1e d t a 对罗汉果蛋白酶活性的影响4 9 图3 1 2 半胱氨酸对罗汉果蛋白酶活性的影响5 0 图3 1 3h g c 2 。对罗汉果蛋白酶活性的影响5 l 图3 一1 4 米氏方程双倒数图5 2 第四章罗汉果蛋白酶水解大豆蛋白研究5 6 图4 - 1 酶量对大豆蛋白水解的影响5 9 图4 2p h 值对大豆蛋白水解的影响6 0 图4 3 温度对大豆蛋白水解的影响6 l 图4 4 大豆蛋白浓度与水解度关系6 2 v i i 广西师范大学倾士研究生学位论义 第一章文献综述： 文献计量分析分别揭示我国罗汉果、植物蛋白酶的 研究现状及发展趋势 摘要：采用文献计量学的方法，对我国近年来在刊物上发表的罗汉果研究 文献和植物蛋白酶的研究文献分别进行统计分析，对我国罗汉果和植物蛋白酶的 文献类型、年代分布及研究内容等方面进行了计量分析研究，分别揭示了我国罗 汉果专业和植物蛋白酶专业的研究现状和发展趋势。 关键词：罗汉果植物蛋白酶文献计量分析研究现状发展趋势 r e v e a l i n gc u r r e n ts t a t u sa n dd e v e l o p m e n tt r e n di nr e s e a r c h e s o ns i r a i t i ag r o s v e n o r i ia n dp l a n tp r o t e i n a s ei nc h i n a r e s p e c t i v e l yb ym e t r o l o g i c a la n a l y s i s a b s t r a c t ：b ya p p l y i n gt h em e t h o d so fl i t e r a t u r em e t r o l o g y ，t h el i t e r a t u r e so f s i r a i t i ag r o s v e n o r i ia n dp l a n tp r o t e i n a s ep u b l i s h e di nt h er e c e n ty e a r si nc h i n aw e r e a n a l y z e dr e s p e c t i v e l yi nt h i sp a p e r a n dt h ec u r r e n ts t a t u sa n dt h ed e v e l o p m e n tt r e n d i nr e s e a r c h e so ns i r a i t i ag r o s v e n o r i ia n dp l a n tp r o t e i n a s cw e r ea l s oi n t r o d u c e db y s t u d y i n gt h ed o c u m e m a lt y p e s ，p u b l i s h i n gy e a r s ，s u u j e c tf i e l d se t c k e yw o r d s ：s i r a i t i ag r o s v e n o r i i ( s w i n g le ) c j e f f r e y ；p l a n tp r o t e i n a s e ；l i t e r a t u r e ； m e t r o l o g i c a la n a l y s i s ；c u r r e n ts t a t u s ；d e v e l o p m e n tt r e n d 广西师范大学硕士研究生学位论文 1 文献计量分析揭示我国罗汉果研究现状及发展趋势+ 1 i 引言 罗汉果是葫芦科( c u c u r b i t a n c e ) 罗汉果属植物 s i r a i t i ag r o s v e n o r i i ( s w i n g l e ) c j e f f r e y 的成熟果实，是广西著名的特有植物及大宗经济作物，主 产于广西桂林地区，是我国传统出口商品之一“5 1 。罗汉果性凉味甘，无毒，有 润肺止咳、凉血滑肠之功效，对慢性气管炎、急慢性咽喉炎和急慢性扁桃体炎等 疾病疗效显著”1 。罗汉果被收载于1 9 7 7 、1 9 8 5 、1 9 9 0 、1 9 9 5 、2 0 0 0 年中华人民 共和国药典，国家卫生部、中医药管理局将其列入第一批既是食品又是药品的品 利t 名单。 自上世纪6 0 年代以来，国内外许多学者对它进行了深入研究。目前对罗汉 果的研究与开发主要集中在糖苷上。2 ，其中罗汉果糖苷v ( m o g r o s i d ev ) 是糖苷 中主要甜味成分，占总糖苷量的3 0 4 0 ，其甜度约为蔗糖甜度的2 6 5 3 4 4 倍。 | l i 于罗汉果糖苷具有甜度高、口感纯正、热量低、无毒副作用等特点，是糖尿病、 肥胖症等患者最理想的天然甜味剂与保健品，也是儿童预防龋齿的最佳食品添加 剂之。且最近发现这种甜味物质还可能具有抗衰老、防肺结核与抗癌的作用， 故引起了国内外医药界的青睐1 3 。 罗汉果除国内药用外，每年均大量出口创汇，远销港澳、东南亚和r 本、加 拿大、美国等地。近年来以罗汉果为基料的罗汉果系列中成药产品及高级饮料产 品，深受国内外消费者的欢迎，这就更增加了罗汉果的需求量。故作为罗汉果主 产地的广西，必须根据市场需求的增加，有计划地大力发展生产，积极开展综合 利用，以满足出口和国内的需要，这是我国当前罗汉果生产上的当务之急。 为进一步做好罗汉果科研和生产上的情报服务和研究我国罗汉果专业的发 展动态，笔者对我国近年出版的有关罗汉果研究文献的类型、年限分布、刊物分 确i 、作者情况及等方面进行计量分析研究，目的是通过对罗汉果研究文献情况分 析，加深对罗汉果研究现状及罗汉果开发利用方面的了解，探求我国罗汉果研究 发展的主要特点和所处现状，为今后罗汉果发展趋势做出客观f 确的判断。 此文为2 0 0 4 年8 月中旬所写，并发表丁广西热带农缈的2 0 0 5 年第二期上。 广西师范人学硕i 研究生学位论文 1 2 文献收集 罗汉果有关的文献由清华同方中文期刊全文数据库并以“罗汉果为关 键词或题名检索所得。经统计，共收集了1 9 8 0 年至今的中文划于u 上关于罗汉果 的文献1 9 6 篇，这些文献反映了我国罗汉果研究的主要成就和趋势。其内容包括 一般性研究、基础研究、栽培研究、经营与资源研究、病虫害研究、经济与产品 研究。 1 3 文献分析 1 3 1 罗汉果总文献量的分析 1 9 8 0 年至今，共检索罗汉果文献1 9 6 篇，年平均罗汉果文献量为8 2 篇， 仪2 0 0 4 年前半年就达到3 4 篇。其所涉及的学科分别进行了统计分析下表： 表1 一i i 罗汉果文献在各学科中的分布 基础研究栽培研究 经营资病虫害经济与产品 般 源研究研究研究 性生 化良扦组人 栽 经 资 经综 中 总 研物 学 遗 生 种插 ； r 培营源痫虫济合 计 成 传 态技育培授 技 管 调 害害 价 利 医 究 学药 分 术曲- 养粉 术 理查值用 文献量 ( 篇) 2 4 8 3 8 2 34 5 9 l1 3 1 3 1 71 4 7 43 l 3 1 9 6 各学科 总文献 2 45 l3 23 02 l3 81 9 6 带( 篇) 分支学 科文献 量l l i 学 j 5 7 7 4 53 9 5 91 2 5嘬6墨l3 1劬6啦3匝77皿3 】n 5乩6z 9 科文献 量 学科文 献最占 总文献 1 2 22 6 01 6 31 5 31 0 71 9 4 量 次序513462 广两帅范大学碗十刮f 究生学位论文 由表看出，罗汉果基础研究在各个分支学科研究中占比例最大，而其中化学 成分研究占其7 4 5 。这说明我国罗汉果研究仅是刚刚起步，偏重于基础研究： 其次是经济与产品研究，占1 9 4 ，其中综合利用就有3 1 篇，在此类研究中高 达8 1 6 ，说明罗汉果具有重要的开发利用价值。从这些综合利用的文献内容来 看，主要是应用罗汉果的高甜度和无热量的特性来生产各种各样的食品添加剂： 有关栽培研究的文献在所查到的总文献中，所占比例也较高，达1 6 3 ，仅次于 经济与产品研究文献，其中栽培技术占其4 0 9 ，说明我国罗汉果生产技术已形 成一个完整的系统配套体系。 1 3 2 罗汉果文献的年限分布 表1 一卜2 罗汉果文献的年限分布 、年限 1 9 8 0 1 9 8 9 年1 9 9 0 1 9 9 9 缸2 0 0 0 2 0 0 4 丘 次 文献 所占比 学科 文献文献 文献 序 次序次序 次序 ( 篇)例( ) ( 篇)( 篇)( 篇) 基础研究 1 012 1】2 01 5 l 2 6ol 栽培研究 72941 6 33 21 6 33 一般性研究 05761 7 22 4 1 2 25 经济与产品2 341 921 633 81 9 4 研究 经营与资源 4 431 031 6 33 0 1 5 3 研究 病虫害研究 4385g42 l1 0 76 文献总最 2 87 49 41 9 61 0 0 0 ( 篇) 所占 1 4 33 784 7 9 由表l ，1 2 的统计结果表明，1 9 8 01 9 8 9 年共发表罗汉果文献2 8 篇，占总 文献量的1 4 r 3 。1 9 9 0 1 9 9 9 年共发表7 4 篇，占总文献量的3 7 - 8 。2 0 0 0 年以 后是我国罗汉果科技发展的高峰时期，2 0 0 0 年及以后共不够5 年就发表文献9 4 篇，占了顶峰，占1 9 8 0 年以来查到的文献量的1 7 3 。究其原因，是近年来国 4 广西师范大学硕i 研究生学位论文 家和地方不断加强农业建设，促进农业结构调整的结果，也是罗汉果的经济价值 同益被国r n ； b 所认识并开始广泛丌发和利用的结果。特别是近年来广西壮族自治 区在罗汉果生产和罗汉果科研上作了较大投入，从而推动了罗汉果科研的发展。 司时，目前全国上下对中药产业化发展的认同，使罗汉果科研又掀起了一个新高 潮，使罗汉果文献量又得以剧增。 1 3 3 罗汉果文献的主要期刊 笔者收集了1 9 8 0 年至今分布在1 0 5 种期刊中的罗汉果文献1 9 6 篇，其中有 7 0 种期刊刊载罗汉果文献1 篇，刊载4 篇以上的期刊仅1 0 种，其余是刊载2 3 篇的期刊。为了便于进行罗汉果文献检索和重点利用刊有罗汉果文献的期刊，笔 者研究了刊载罗汉果文献的期刊( 见表卜卜3 ) 。 表l 一1 3 罗汉果文献在期刊中的分布单位：篇 柑桔 期刊名称 广 食广广中药农 与亚 广西 广西农村 西口口 热带 农业 西 西 研究家所占比 轻工 百事总计 植科园植与信顾例( ) 果树科学 业 通 年限物 学 艺保息问 信息 】9 8 01 9 8 9 年1 33o0o0jooo1 72 4 3 1 9 9 0 - - 1 9 9 9 正4301o22ol11 42 0 0 2 0 0 0 2 0 0 4 证25 8 56214333 95 5 7 总计 1 91 l 8 6644444 7 0 1 0 0 o 次序 1234455555 表卜1 - 3 列出了1 0 种载有4 篇以上罗汉果文献的期刊，它占总期刊数的9 文献数占总数的3 5 7 。由于没有与用文摘法和引文法所确定的期刊作比较分析， 所得出的结果可能有片面性。为了尽量避免片面性，笔者对刊载罗汉果文献期刊 的集中与离散进行了分析( 见表1 一卜4 ) 。 由表1 - l - 4 看出，千u 载罗汉果文献4 篇以上的期刊有1 0 种，它占期刊总数的 9 ，5 ，其文献量为7 0 篇，占总文献量的3 5 7 ，这说明罗汉果文献在期刊中分 布面较广，也说明表l l 一3 分析的结果是正确的。如果罗汉果研究者仅检索了所 列出的1 0 种期刊，是不会全面地了解罗汉果事业发展的现状和总趋势。由表1 1 4 看出，说明罗汉果文献的离散性较大，刊载罗汉果文献2 篇以上的期刊有3 5 种， 占期刊总数的3 3 3 ，其文献量为1 2 6 篇，占总文献量的6 4 3 ，这说明罗汉果 文献大体集中在3 5 种以上的期刊 。因此，随着罗汉果研究的深入，罗汉果研 究者应每年至少检索4 0 种以上的期刊，方能对罗汉果研究现状有一概括的了解。 】3 4 罗汉果化学成分研究文献分布 由于罗汉果的化学基础研究不断得- n ；自n 强，此方面的文献从研究内容来看， 大概情况( 见表1 1 5 ) 。 表卜卜5 罗汉果文献在各化学成分研究中的分布 从表可以看到，大部分罗汉果化学基础研究主要集中在糖苷方面，占了3 8 篇巾的2 2 篇，占其文献数的5 7 9 ，说明目前罗汉果化学基础的研究主要还停 留在传统的研究上，很大程度是由于罗汉果糖苷具有甜度高、口感纯诈、热量低、 无毒副作用等特点，其开发利用价值目益受到人们关注。 从所收集论文来看，其它化学成分研究所占比例不多，很多成分还不是很清 楚，只是进行了一些较肤浅的研究，还不能对它们进行进一步的分离纯化、结构 鉴定和功能分析等研究。这与论文研究更多集中于马上见经济效益有关。研究单 广两师范人学硕士研究生学位论文 位或个人看重的是近期经济效益，而不是一些经济效益周期比较长的基础研究， 造成了研究的不均衡性。 1 3 5 罗汉果文献作者 1 3 5 1 从单篇论文作者人数来看，有下表1 - 1 6 的情况 表1 1 6 罗汉果文献作者人数 作者人数为一人的文献所占比例达到4 6 4 ，而2 人和2 人以上只达到 4 0 0 ，说明原来的研究还是比较简单，不是很深入，只是一般的信息整理或一 些简单的研究。但随着对罗汉果研究的开展和深入，这种情况已开始发生改变， 合作的趋势越来越明显，专业的互相渗透越来越突出，很多合作者都是来自不同 的院校或者研究院所，象以前，光靠某一个人或者某一个领域的研究者已经很难 再做出更深入的研究，必须依靠各专业研究者的共同合作，_ 才能做出更重要的研 究成果。 1 3 5 2 从论文作者所在的机构来看，文献量排在前三位的是广西植物研究 所、广西师范大学、和广西大学这三个单位，发表的文献的情况( 见表卜1 _ 7 ) 。 表1 1 7 罗汉果主要研究机构 从表卜卜7 可看出，作为罗汉果研究的三个主要机构都是广西的，这主要是 广西师范大学硕上研究生学位论文 由于罗汉果是广西特色植物，其它地方很少有罗汉果出产。另外，从表还可以看 出，作为罗汉果的主要研究机构之一的广西植物研究所，在八十年代对罗汉果所 作的研究相对比较多，但进入九十年代以来，该机构对罗汉果的研究已极大减少， 明显失去了原有的对罗汉果研究先入为主的优势。而广西师范大学和广西大学 这两所大学综合实力不断提高，科研力量不断增大的结果。特别是广西师范大学， 在组织培养和化学成分这两块前沿阵地上，基础扎实，表现突出，今后还会有不 断加强的趋势。 1 3 6 刊载罗汉果研究文献的期刊分析 将收集到的1 9 6 篇罗汉果研究文献的刊物根据级别分为现两类：核心期刊为 第l 类，其它刊物为第2 类。在各类刊物内统计出：各类刊物文献量占总量的百 分数。具体统计见表卜卜8 ： 表卜1 8 刊载罗汉果文献期刊分析 统计表明，第1 类和第2 类期刊刊载的文献量分别占3 5 7 和6 4 3 3 ， 在核心期刊上发表的罗汉果文献相对较少，说明该研究领域的研究水平和研究成 果的影响力仍有待更大的提高。上述两类型刊物的差别，可为今后开展研究、发 表文章起导向作用，也为各类读者和单位订购刊物、检索文献提供依据。 1 4 罗汉果研究的特点 1 4 1 罗汉果应用价值高，研究内容广，涉及学科多。罗汉果是我国著名的 传统中药，能治疗咽喉炎等疾病，其提取物也可以作为食品添加剂。但到目前， 除对罗汉果糖苷研究比较多外，尚缺乏深入广泛的研究。由表l 可看出，罗汉果 的研究涉及到遗传学、植物学、生物学、医药保健等多种学科，内容广泛，项目 广西帅范大学硕上研究生学位论文 繁多。因此，必须投入一定的人力、物力和财力，经过较长时间的努力，才会有 丰硕的研究成果。 1 4 2 同学科内研究不平衡。由表l 可看出，在栽培研究中，栽培技术文 献量为1 3 篇，占本学科文献量的4 0 6 ；组织培养的文献仅9 篇，占2 8 1 。但 栽培技术的文献水平大多比较浮浅而且还存在很多重复。组织培养是目前我国罗 汉果栽培研究的一个主要方向，是罗汉果丰产研究的主要方向。但决定罗汉果丰 产和品质的良种技术的研究在同学科中却相对较少。在经济与产品研究中，丌发 利用研究多，但经济价值的研究的很少，罗汉果资源利用还存在着较大的浪费现 象。在化学成分研究中，对糖苷的研究所占比例大，而对其它有效成分一一蛋白 质、黄酮等的研究相对较少，这必然会影响罗汉果的综合开发利用。 1 4 3 罗汉果研究内容有待进一步扩大和深入。由表2 看出，我国罗汉果研 究的文献量自1 9 8 0 年以后逐年递增，2 0 0 0 年至今文献量为9 4 篇，占总文献量 的4 7 9 。这说明我国罗汉果研究已有了一个良好的开端，但从文献内容上来看， 多在低水平上重复，解决关键性问题少。这是今后在研究方向上应注意的问题。 1 5 小结与建议 通过对上述罗汉果文献的计量分析可知，罗汉果研究偏重于基础研究和应用 研究，研究方向是对的。近年来罗汉果文献量逐年增加，逐步掀起罗汉果研究的 高潮，这说明罗汉果重要的经济价值已同益得到人们的认识和关注，对罗汉果的 研究也曰趋重视，逐步形成一个庞大的研究力量。在研究内容虽已展开和逐步深 入，不少研究成果也在不同程度上得到应用，但仍需加大力度，增加投入，加强 基础研究。当前，应进一步发掘良种资源，快速繁殖良种苗，迅速推广速生丰产 栽培技术，扩大罗汉果栽培面积。另外，加强化学基础研究，进一步丌展综合研 究和开发利用的研究，在我国罗汉果主产区建立生产和研究基地，把资源优势转 化为商品优势，进而转化为经济优势，这对加速我国罗汉果产业化发展，促进地 方经济建设是十分重要的。 9 广两师范大学硕十研究生学位论文 1 6 主要参考文献： 1 1 中华人民共和国卫生部药典委员会编中华人民共和国药典 m 北京：化学t 业出版社， 1 9 7 7 ：3 4 8 ：1 9 8 5 ：1 8 1 ：1 9 9 0 ：1 8 4 2 中国药材总公司编中国中药资源志要 m 北京：科学出版社。1 9 9 6 ：7 4 8 3 江西新医学院编中药大辞典 m 上海：上海科技出版社，1 9 8 6 ：1 3 5 6 4 广西壮族自治区卫生厅编广西中药志第二辑 m 南宁：广西壮族自治区人民山版社， 1 9 8 3 ：1 9 5 5 范继善主编实用食品添加剂m 天沣：天津科学技术出版社，1 9 9 3 ：3 1 8 6 钟仕强罗汉果历史的真伪 j 中药通报，1 9 8 4 ，9 ( 6 ) ：1 0 7 路安民，张志耘中国罗汉果属植物 j 广西植物，1 9 8 4 9 4 ( 1 ) ：2 7 8 李荫昆广西特产药物罗汉果 j 中草药，1 9 8 0 ，j 1 ( 8 ) ：3 6 8 1 9 钟树权罗汉果的用途 j 中药材，1 9 8 5 ，( 4 ) ：4 9 1 0 周良才，张碧玉罗汉果品种资源调布研究和利用意见广西植物，1 9 8 1 ，l ( 3 ) ：2 9 1 1 h a y a s h i b a r a 日本公开特许公报，1 9 8 1 ，1 4 5 6 2 ( c 1 a 2 3 l 1 1 2 2 ) 1 2 加茂贵妃日本公开特许公报，1 9 7 9 ，1 4 5 6 2 ( c l a 2 3 l 1 2 2 ) f 1 3 竹本常松日本公开特许公报，1 9 7 8 ，3 4 9 6 6 ( c l a 2 3 l 1 1 2 2 ) 1 4 竹本常松，在原重信，中岛正，等罗汉果成分研究( i ) j 药学杂志( 日) ，1 9 8 3 ，1 0 3 ： 1 1 5 1 1 5 竹本常松，在原重信，中岛正，等罗汉果成分研究( 1 i ) 叩药学杂志( 日) ，1 9 8 3 ，1 1 0 3 ： 1 1 5 5 1 6 竹本常松，在原重信，中岛正，等努贴尉扮腕( i t i ) 叫药；鳍惑( 日) ，1 9 8 3 ，1 0 3 ：1 1 6 7 1 7 】c h l e e l n t e n s es w e e t e n e rf r o ml o h a n g u o ( m o m o r d i e a g r o s v e n o r i i ) j e x p e r i e n t i a ，1 9 7 5 ， 3 1 ：5 3 3 1 8 jm a t s u m o t ok e ta 1 m i n o r c u c u r b i t a n eg l y c o s i d e sf r o mf r u i t so f s i r a i f i ag r o s v e n o r i i ( c u c u r - b i t a c e a e ) 【j 】c h e m p h a r mb u l l ，1 9 9 0 ，3 8 ( 7 ) ：2 0 3 0 【1 9 】k a s a ir e ta 1 s w e e tc u c u r b i t a n eg l y c o s i d e sf r o mf r u i t so f s i r a i t i as i a m e n s i c ( c h i z i l u o h a n 0 广西帅范大学颂卜研究生学位论文 g i l 0 ) ac h i n e s ef o l km e d i c i n e j a g r i cb i o c h e m ，1 9 8 9 ，5 3 ( 1 2 ) ：3 3 7 4 2 0 h c m a k a p u g a y ，e ta 1 h i g h p e r f o r m a n c el i q u i dc h r o m a t o g r a p h i ca m a l y s i so f t h em a j o r s w e e tp r i n c i p l eo f l o h a n k u of r u i t s i j a g r i c f o o dc h e m ，1 9 8 5 ，3 3 ：3 4 8 2 1 李雁群，王文生，千策罗汉果中皂甙的分离与测定 j 食品科学，1 9 9 3 ，5 ：6 6 2 2 常珙，陈迪华，斯建勇，等罗汉果中总皂甙的含量测定 j 中国中药杂志，1 9 9 5 ，2 0 ( 9 ) ： 5 5 4 2 3 斯建勇，陈迪华，常琪，等罗汉果中三萜甙的分离和结构测定 t 植物学报，1 9 9 6 ，3 8 ( 6 ) 4 8 9 l 2 4 斯建勇，陈迪华，常琪，等广西特产植物罗汉果根的化学成分研究 j 药学学报，1 9 9 9 ， 3 3 4 ( 1 2 ) ：9 1 8 2 5 王雪芬，卢文杰，陈家源，等罗汉果根化学成分的研究( i ) 【j 中草药，1 9 9 6 ，2 7 ( 9 ) ：5 1 5 2 6 干雪芬，卢文杰，陈家源，等罗汉果根化学成分的研究( i i ) j 中草药，1 9 9 8 1 2 9 ( 5 ) ： 2 9 3 2 7 徐位坤，需丽珊，李仲瑶罗汉果嫩果中一个苦味成分的分离和鉴定 j j “西植物，1 9 9 2 ， 1 2 ( 2 ) ：1 3 6 2 8 王亚平，陈建裕罗汉果化学成分的研究e j 中草药，1 9 9 2 ，2 3 ( 2 ) ：6 1 广西师范人学硕上研究生学位论文 2 文献计量分析揭示我国植物蛋白酶研究现状及发展趋势 2 1 引言 酶的种类很多，在高等真核生物的每个细胞中包含的蛋白质约5 0 0 0 0 种，其 中主要的是酶。在人类历史上，酶的应用虽很早就己经开始，而且同益广泛，但 至今已知的只有数千种酶，已认识清楚并得到应用的还十分有限。蛋白酶 ( p r o t e i n a s e 或p r o t e a s e ) 是自然界酶族中的一种，是催化肽键水解的酶类的总 称，不同的蛋白酶水解蛋白质时，所作用的肽键种类不同。由于蛋白酶共同的特 点是反应专一性强，作用条件温和，可在常温常压下控制反应朝着有益方向进行， 并有经济高效、无毒、无臭、无副作用等优良特性，因而广泛用于食品、医药、 化工等领域，其中以食品工业中的用量比较大，应用范围也日益广泛，倍受人们 的关注“。 蛋白酶的来源丰富，广泛存在于各种动物、植物、微生物巾，目前开发应用 的蛋白酶有动物蛋白酶、植物蛋白酶、微生物蛋白酶其中在食品中开发利用的 植物蛋白酶主要有木瓜蛋白酶( p a p a i n ) ，菠萝蛋白酶( b r o m e l i n ) ，生姜蛋白酶 ( z i n g i b a i n ) ，无花果蛋白酶( f i c i n ) 等”1 。很多蛋白酶是胞外酶，容易提纯，分 子较小，功能简单，因而在酶学中蛋白酶的研究较早也最深入，对它的化学结构 和高级结构以及它的动力学、作用机制等的研究一直处于领先地位，是一个比较 成熟经典的研究领域。1 。但相对于动物蛋白酶、微生